银杏叶提取物总黄酮的提取分离及工艺的研究
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银杏叶提取 黄酮类化合物提取工艺过程分析
银杏叶提取黄酮类化合物提取工艺过程分析
银杏黄酮有强烈的清除细胞内自由基的作用，能降低细胞的氧化代谢，对脑和四肢动脉血流失调引起的一系列心脑血管疾病有明显和独特的疗效。
传统银杏黄酮提取工艺过程分析如下：
在浸提、过滤工序，传统银杏黄酮提取工艺耗用大量的有机试剂、操作复杂，设备昂贵，试剂损耗较大，直接用水提取，具有成本低廉、提取工艺简单的特点。
在抽滤工序，过滤介质精度低，且属于死端过滤，滤液质量不稳定，会带入较多的杂质，且收率较低。
改进后的银杏黄酮提取工艺过程：
原料→预处理→浸提→过滤→陶瓷膜过滤→卷式膜浓缩→色谱分
离→浓缩→干燥→银杏叶提取物成品
采用管式陶瓷膜系统可直接将高温的浸提液进行错流过滤，得到澄清透明的水提液，将抽滤和离心分离二道工序合二为一。
根据色谱分离对水提液浓度的要求，可以采用卷式有机膜系统进行浓缩，并可对树脂洗脱液做进一步浓缩，从而大大降低了生产成本，提高了收率。
其浓缩液再进行减压浓缩，真空低温干燥。
银杏叶中黄酮类化合物的提取和制剂工艺研究
银杏叶中黄酮类化合物的提取和制剂工艺研究银杏叶是一种常见的中药材，具有多种药理作用，其中黄酮类化合物是其主要有效成分之一。
因此，提取和制剂工艺的研究对于银杏叶的开发和利用具有重要意义。
一、黄酮类化合物的提取工艺1.溶剂提取法溶剂提取法是目前应用最广泛的提取方法之一。
常用的溶剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
其中，乙醇提取法是最为常用的一种方法。
其具体操作步骤为：将银杏叶粉末加入乙醇中，浸泡一定时间后，过滤得到提取液，再用旋转蒸发仪将溶剂蒸发，得到黄酮类化合物。
2.超声波提取法超声波提取法是一种新兴的提取方法，其优点是提取效率高、提取时间短、操作简便。
其具体操作步骤为：将银杏叶粉末加入水中，用超声波处理一定时间后，过滤得到提取液，再用旋转蒸发仪将溶剂蒸发，得到黄酮类化合物。
3.微波辅助提取法微波辅助提取法是一种快速高效的提取方法，其优点是提取效率高、提取时间短、操作简便。
其具体操作步骤为：将银杏叶粉末加入水中，用微波处理一定时间后，过滤得到提取液，再用旋转蒸发仪将溶剂蒸发，得到黄酮类化合物。
二、黄酮类化合物的制剂工艺1.胶囊剂胶囊剂是一种常见的制剂形式，其优点是服用方便、剂量准确、稳定性好。
其制剂工艺为：将黄酮类化合物与辅料混合均匀，填充进胶囊中，再进行封口，即可制成胶囊剂。
2.片剂片剂是一种常见的制剂形式，其优点是服用方便、剂量准确、稳定性好。
其制剂工艺为：将黄酮类化合物与辅料混合均匀，压制成片状，再进行包衣，即可制成片剂。
3.口服液口服液是一种常见的制剂形式，其优点是服用方便、剂量准确、吸收快。
其制剂工艺为：将黄酮类化合物与辅料混合均匀，加入适量的溶剂，搅拌均匀后进行过滤、灭菌，即可制成口服液。
总之，银杏叶中黄酮类化合物的提取和制剂工艺研究对于银杏叶的开发和利用具有重要意义。
在提取工艺方面，溶剂提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等均有应用；在制剂工艺方面，胶囊剂、片剂、口服液等均是常见的制剂形式。
未来，随着科技的不断进步，银杏叶中黄酮类化合物的提取和制剂工艺也将不断完善，为人们的健康保驾护航。
银杏叶中黄酮的提取分离及测定1
四、实验步骤
3、测定：
(1)标准曲线的绘制： 精确称取芦丁标准样品50.0mg，置 于50mL烧杯中，加少量70%乙醇使之完全溶解，转入50mL容 量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，摇匀，得1.0mg/mL的芦 丁标准溶液，再分别吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL芦 丁标准溶液置于 50mL 容量瓶中，按照下述方法配置显色溶液； 各 加 70 % 乙 醇 使 成 2 5mL ，然 后分别加入 5%N a N O2 溶液 1.5mL ，摇匀，放置 6min 后，再加 10%Al （ NO3 ） 3 溶液 1.5mL,摇匀，放置6min后，加NaOH溶液20mL,最后用蒸馏水 稀释至刻度（ 50mL ），摇匀，放置 15min 后，以不加芦丁的 试剂为空白，用紫外光分光光度计测定510.0nm处的吸光度。 以浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得到回 归方程。
四、实验步骤
1、粗提物： 称取干燥和粉碎的银杏叶粉末 50克，装入索氏提取器 的滤纸套袋中，在500ml圆底烧瓶内加入250ml60%乙醇， 用65-80℃水浴加热。连续提取3h左右，等叶子颜色变浅 可停止加热。待在虹吸管内冷凝液刚落下时，立即停止加 热，改成旋转蒸发器，减压蒸去溶剂即得棕黑色的银杏浸 液-液萃取法： 在500mL烧杯中，将银杏浸膏粗产物 加250mL去离子水，搅拌均匀，再将此溶液转移至分液漏 斗中，用 60mL 二氯甲烷萃取三次，取下层液，合并萃取 液。用无水NaSO4干燥。用旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，蒸 馏剩余物为黄酮提取物。经干燥后称重，计算产率。
三、化学药品及仪器
1、化学药品 乙醇（20%、60%、70%） 二氯甲烷 无水硫酸钠 氢氧化钠溶液（0.5mol/L） 盐酸溶液（0.5mol/L） 银 杏叶粉末
正交试验优选银杏叶总黄酮提取工艺
样品的制备
含量测定
精密称取银杏叶提取250mg， 以20 mI 甲醇溶解，并定 容到 50 mI 容量瓶中，滤 过，备用。
精密吸取上述银杏叶提取 物样品5 mI，置25 mI 容 量瓶中，用甲醇并定容， 按标准曲线制备的方法测 定吸光度，计算含量
实施方法 ----正交试验设计
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 根据初步试验结果，参考有关文献并结合实际情况，选 用正交试验表安排试验，以提取溶剂乙醇的浓度、溶剂 用量（料液比）、提取时间（h）和提取次数为影响提取 物总黄酮含量的主要因素，每个因素取3 个水平，确立 因素水平表（见表l），取粉碎的银杏叶l00 g，以不同 浓度乙醇为溶剂，平行操作条件下，回流提取，合并提 取液，滤过，并测定计算总黄酮含量。
仪器与试药
• 仪器 UV -6010 紫外 -可见分光光度计（惠普上海分
析仪器厂）。
• 试药 银杏叶由广州市医药公司提供，经鉴定本品为银
杏科植物银杏 Ginkgo biIoba L. 的干燥全草；芦丁对 照品，中国药品生物制品检定所；其他试剂均为分析纯。
实施方法 ——银杏叶总黄酮的含量测定
标准曲线绘制 精密称取在 120 C减压干燥至恒重的芦丁 对照品 10. 0 mg ，加乙醇溶解，转入 50 mL 容量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（ 0. 2 mg/ mL），精密吸取该液 1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、 6. 0 mL ，分别置于 25 mL 容量瓶中，加水至 6 mL ，加 5%NaNO2 试液1. 0 mL，放置6 min，加10% Al（ NO3）3 试液 1. 0 mL，放置 6 min，加 10%NaOH试液10 mL，加 水至刻度，摇匀，放置 15 min 以相应试剂作空白，于 500 nm 处测定吸光度。以浓度（C）与吸光度（A）进行 线性回归，得回归方程为 A =0. 0043C +0. 0128 ， r = 0. 9998，（n = 6）。可见，在 1~6ug/ mI 浓度范围内 线性关系良好
银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
验 " 研究了浸取温度 $ 乙醇含量和固液质量比对黄酮类化合物提取率的影响 % 结果显示温 度是影响提取率的主要因素 " 最佳工艺为浸取温度 K8 Q " 乙醇的体积分数为 F8X 和固液 质量比 >YF "银杏叶中黄酮类化合物的浸出率可达到 V!U%X % 关键词 银杏叶 & 黄酮类化合物 & 乙醇 & 提取 中图分类号 5Z!%DU
银杏黄酮提取工艺及纯化研究一、引言银杏黄酮作为一种天然的活性成分，具有广泛的生物活性和药用价值。
由于其在保健品和医药领域的广泛应用，银杏黄酮的提取工艺及纯化研究备受关注。
本文将对银杏黄酮的提取工艺以及纯化过程进行探讨。
二、银杏黄酮的提取工艺2.1 原料准备在进行银杏黄酮的提取前，首先需要准备好优质的银杏叶。
选取新鲜的银杏叶，通过去杂、洗净等处理方法，获得干燥均匀的原材料。
2.2 提取方法2.2.1 传统提取方法传统的银杏黄酮提取方法通常采用溶剂提取的方式。
具体步骤如下： 1. 将粉碎后的银杏叶与适量的有机溶剂（如乙醇）进行浸提。
2. 在适当的温度下，反复搅拌并浸提一定时间。
3. 过滤提取液，获得含有银杏黄酮的溶液。
4. 通过浓缩、脱色等步骤，得到纯化的银杏黄酮。
2.2.2 新型提取方法近年来，一些新型的银杏黄酮提取方法也得到了广泛应用。
如超声波辅助提取、微波辅助提取等。
这些新型提取方法具有高效、省时等特点，在提取工艺中发挥着重要的作用。
三、银杏黄酮的纯化研究3.1 纯化方法3.1.1 水相反萃取法水相反萃取法是一种常用的纯化方法，其步骤如下： 1. 将含有银杏黄酮的提取液与适量的水进行充分混合。
2. 静置一段时间，使得银杏黄酮被水相萃取。
3. 分离水相和有机相，得到含有高纯度银杏黄酮的水相。
3.1.2 分子筛吸附法分子筛吸附法是一种利用分子筛材料对银杏黄酮进行吸附的方法。
具体步骤如下：1. 将含有银杏黄酮的溶液与分子筛进行接触。
2. 利用分子筛对银杏黄酮进行吸附。
3. 通过适当的溶剂洗脱等步骤，得到高纯度的银杏黄酮。
3.2 精制技术3.2.1 重结晶技术重结晶技术是一种常用的精制技术，通过溶解和结晶的过程，使得杂质与银杏黄酮分离。
其步骤如下： 1. 将纯化后的银杏黄酮溶解于适量的溶剂中。
2. 加热溶液，使银杏黄酮充分溶解。
3. 慢慢降低温度，促使银杏黄酮结晶。
4. 过滤结晶物，获得重结晶的银杏黄酮。
银杏叶黄酮的提取纯化工艺研究
1、实验材料
银杏叶：采集于健康无病虫害的银杏树，清洗干净后晾干备用。
Hale Waihona Puke 2、提取方法将清洗晾干的银杏叶粉碎成细粉，称取一定量的细粉加入到80%乙醇溶液中， 在60℃下进行回流提取，每次提取时间为1小时，提取3次。将提取液过滤，回 收乙醇，并加入适量水稀释至适当浓度备用。
3、纯化方法
采用大孔吸附树脂法进行纯化。将备用液通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱至洗 脱液接近无色，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并加入适量水稀释 至适当浓度备用。
参考内容
引言
银杏叶是一种具有多种生物活性的天然植物，其提取物中含有丰富的黄酮类化 合物，如儿茶素、黄酮醇、黄烷醇等。这些化合物具有显著的抗氧化、抗炎、 抗肿瘤等生物活性。因此，研究银杏叶总黄酮的提取纯化及其抗氧化性能具有 重要意义。本次演示旨在探讨银杏叶总黄酮的提取纯化方法及其抗氧化性能。
材料与方法
4、抗氧化性能测定
采用DPPH自由基清除法测定抗氧化性能。取适量纯化后的银杏叶总黄酮溶液与 等体积的DPPH溶液混合，室温下放置30分钟，在517nm处测定吸光度A1。同时 以无水乙醇为空白样品的吸光度A0进行对照。以Vc为阳性对照。根据公式：清 除率=（A0-A1）/A0×100%，计算银杏叶总黄酮对DPPH自由基的清除率。
结论
本研究成功地探索了一种高效提取纯化银杏叶总黄酮的方法，并对抗氧化性能 进行了研究。实验结果表明，采用80%乙醇回流提取和过大孔吸附树脂纯化可 以得到高纯度的银杏叶总黄酮，并且对DPPH自由基具有较强的清除作用。这一 发现为开发高效安全的抗氧化药物提供了新的思路和方法。
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银杏叶黄酮的提取纯化工艺研究
01 引言
03 研究目的 05 结果与讨论
银杏叶中总黄酮提取工艺研究
长。
０． Ｏ・
宋 ０ ． 督
Ｏｔ
２ １２ 标 准 曲 线 的 绘 制 分 别 配 制 ６种 芦 丁 标 ．．
０．
准溶 液 于 ５ ０ ｎ 波 长 下 测定 吸 光 度 ， １ ｍ 乙醇 的体 积分 数为 ６ 的试 剂为空 白参 比液 ， 验 数据 见 ０ 试
表 ２ 。
分 析纯 。
１ ２ 试 验 方 法 ．
大， 而水 又将 降低水 提 液表 面 张力 ， 摇 后产 生持 振
久性 泡沫 而影 响 分离 ， 们 则 采用 不 同浓 度 的 乙 我
主要有 ：
１２ １ 总黄 酮含 量 的测 定 ． ．
醇 水 溶 液 提 取 所 测 样 品 中 的 银 杏 叶 黄 酮 。 根 据 银 杏 叶 中 主 要 活 性 成 分 黄 酮 的 特 性 ， 照 药 舆 原 有 依 的 提 取 方 法 ， 用 加 热 回 流 提 取 ， 单 因 素 试 验 的 采 在 基础 上 ， 出 影 响 因素 主要 有 ： 醇 的体 积 分数 、 得 乙 温 度 、 液 质 量 浓 度 、 取 时 问 。 采 用 Ｉ （ 正 料 提 ３） 交 表 优 化 提 取 条 件 ， 点 考 察 上述 四个 素 ， 总 重 以
仪 器 ：２ ７ １型 分 光 光 度 计 、 氏 提 取 器 、 分 索 万
之 一 电子天 平 。
１ ２ ２ 试验 设计 黄 酮类 化合 物 的提取 、 离通 ．． 分
常 以 甲醇 或 水 为 主 要 提 取 剂 ， 由 于 甲 醇 其 毒 性 但
芦 丁标 准 品 ： 化试剂 ， 海试剂 二 厂 ； 生 上 乙醇 ：
酮 含量 。
银 杏 叶 ： ０ ９年 ９月 采 于 陕 西 杨 凌 ， 龄 为 ２０ 树 ｌ ， ０ａ 每次采 收 的银 杏叶 都及 时放 人 ６ 一７ Ｏ Ｏ℃ 的 干 燥箱 中 干燥 ２ ， 粉 碎 装 人 广 口瓶 ， 处 保 ４ｈ 经 暗 存， 供提 取 、 测定 黄酮 用 。 ，
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２ １２ 标 准 曲 线 的 绘 制 分 别 配 制 ６种 芦 丁 标 ．．
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准溶 液 于 ５ ０ ｎ 波 长 下 测定 吸 光 度 ， １ ｍ 乙醇 的体 积分 数为 ６ 的试 剂为空 白参 比液 ， 验 数据 见 ０ 试
表 ２ 。
分 析纯 。
１ ２ 试 验 方 法 ．
大， 而水 又将 降低水 提 液表 面 张力 ， 摇 后产 生持 振
久性 泡沫 而影 响 分离 ， 们 则 采用 不 同浓 度 的 乙 我
主要有 ：
１２ １ 总黄 酮含 量 的测 定 ． ．
醇 水 溶 液 提 取 所 测 样 品 中 的 银 杏 叶 黄 酮 。 根 据 银 杏 叶 中 主 要 活 性 成 分 黄 酮 的 特 性 ， 照 药 舆 原 有 依 的 提 取 方 法 ， 用 加 热 回 流 提 取 ， 单 因 素 试 验 的 采 在 基础 上 ， 出 影 响 因素 主要 有 ： 醇 的体 积 分数 、 得 乙 温 度 、 液 质 量 浓 度 、 取 时 问 。 采 用 Ｉ （ 正 料 提 ３） 交 表 优 化 提 取 条 件 ， 点 考 察 上述 四个 素 ， 总 重 以
仪 器 ：２ ７ １型 分 光 光 度 计 、 氏 提 取 器 、 分 索 万
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１ ２ ２ 试验 设计 黄 酮类 化合 物 的提取 、 离通 ．． 分
常 以 甲醇 或 水 为 主 要 提 取 剂 ， 由 于 甲 醇 其 毒 性 但
芦 丁标 准 品 ： 化试剂 ， 海试剂 二 厂 ； 生 上 乙醇 ：
酮 含量 。
银 杏 叶 ： ０ ９年 ９月 采 于 陕 西 杨 凌 ， 龄 为 ２０ 树 ｌ ， ０ａ 每次采 收 的银 杏叶 都及 时放 人 ６ 一７ Ｏ Ｏ℃ 的 干 燥箱 中 干燥 ２ ， 粉 碎 装 人 广 口瓶 ， 处 保 ４ｈ 经 暗 存， 供提 取 、 测定 黄酮 用 。 ，
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分光光度法
液相色谱法
总黄酮 吸收度（Ａ）
含量（％）
三对照品 单对照品 测定法（％） 测定法（％）
０．６５４０
３２．７０
２６．５６
２５．９１
０．６２３０
３１．０２
２５．２５
２５．６０
０．６５１０
３２．４０
２５．９６
２５．２０
０．８１５０
４０．７０
３２．０２
３１．８０
０．７７４０
３８．６０
２９．５０
２９．０３
文献中有采用紫外可见分光光度法［６￣７］，也有采用高效液 相色谱法来测定银杏叶总酮的含量［８￣９］。我们在实验中，分别 采用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对银杏叶提取
物总黄酮进行含量测定：ＵＶ 测得总黄酮平均含量 ３３．８７％， ＨＰＬＣ 以三对照品法测得为 ２６．５７％，ＲＳＤ＝２．１２％。经分析与 比较认为，紫外可见分光光度法作为一种简便、准确的质量 控制方法，可应用于工厂的实际生产工作中。 1、材料与仪器 １．１、材料
０．５６１０
２７．８２
２０．１５
２０．７５
·４１９·
黑龙江医药 Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．３ ２０１３
表 ２ 不同对照品测定银杏叶总黄酮含量结果
样本来源（６ 月中旬 三对照品
单对照品
采摘） 郑州 ４ 年幼苗 郑州 ３ 年幼苗 郑州 ２ 年幼苗 嵩县 ２０ 年以上 嵩县 ４ 年幼苗
２．２．１．２ 测定条件选择 以芦丁为对照品，取银杏叶提取物约 ０．０２ｇ 置于 １０ｍｌ
量瓶中，同上操作，以试液作空白，分别加入 ＮａＮＯ２ 溶液 （０．１－ ０．４ｍｌ），Ａ１ （ＮＯ３）３ 溶 液 （０．１－ ０．４ｍｌ） 和 ＮａＯＨ 溶 液 （０．５－ ４．０ｍｌ），测得的吸收度基本不变，说明黄酮类化合物与 三价铝离子形成的络合物是稳定的。在系统中分别加入芦丁
K ey wor ds：Ginkgo biloba Ｌ．； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ； ＨＰＬＣ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ； Ｒｅｆｉｎｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ．
银杏 Ginkgo biloba L．古代孑遗植物，其功效最早记载于 《神农本草经》，具有润肺、平喘、止咳等功效。系为银杏科银 杏属植物，又名公孙树，为我国特有树种。银杏叶为银杏的干 燥叶，其提取物中主要含有黄酮类化合物和二萜类化合物， 它们具有改善心脑血管循环、抑制血小板凝聚酶、抗菌、抗病 毒、抗癌等作用［１］。近年来有许多对银杏叶提取物的研究报道 ［２￣５］，为了充分开发我国丰富的银杏资源，探索一种操作稳定、 简便、有效成分提取完全、含杂质较少的工艺，我们以银杏叶 总黄酮的提取率为指标对银杏叶提取工艺和精制工艺进行 了深入的研究与探讨。旨在提高总黄酮的收率及产品的质 量。为工业化生产提供参考依据。
黑龙江医药 Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．３ ２０１３
·４１８·
阵列检测器，ＲＣＭＣ１８（８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱 （美国 Ｗａｔｅｒｓ 公司）；树脂柱（有机玻璃柱，高 ５５ｃｍ，上端直 径 １１ ｃｍ，下端直径 ８ｃｍ）；ＣＬ－ ２５ 型蠕动泵（北京宣武超滤设 备厂）；ＰＴＧＣ Ｐｒｅｐ 超滤柱（美国 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ 公司）。 2、实验方法与结果 ２．１、银杏叶提取物的制备
测定法（％） １．５０ １．７９ １．５８ ０．８５ １．５２
测定方法（％） １．５５ １．７４ １．５１ ０．８１ １．４７
２．３ 提取工艺条件的选择
２．３．１ 色谱条件
色谱柱：ＲＣＭＣ１（８ ８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱； 流动相：甲醇 － ０．４％磷酸溶液（５５：４５）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；进样
效液相色谱法对提取物中的银杏叶总黄酮进行含量测定，并相互比较。选择一种快速、简便、准确的方法，作为银杏叶总黄酮
含量测定的常用方法，并加以推广应用。同时以高效液相色谱法为测量手段，以总黄酮的收率为指标，对银杏叶的提取与精制
工艺进行研究和探讨，确定了提取溶剂、时间、次数及浓缩、干燥温度等提取工艺参数，比较了树脂吸附一次洗脱和二次洗脱
以及超滤与树脂吸附相结合的精制工艺对产品质量及银杏叶总黄酮收率的影响。结果满意。
关键词：银杏叶；总黄酮；分光光度法；高效液相色谱法；提取工艺；精制工艺
中图分类号：TQ461
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－ ２８８２（２０１３）０３－ ４１７－ ０４
Study on the Extraction and Separation of Total Flavonoids from Ginkgo Biloba L. Extract
银杏叶提取物样品制备：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ， 加甲醇 ２０ｍｌ 使其完全溶解，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，摇匀， 回流 ２ 小时，冷却，转入 ５０ｍｌ 量瓶中并用甲醇定容，过滤备 用。
银杏叶样品的制备：取银杏叶 １．５ｇ，在索氏提取器中用 甲醇提取 ８ 小时，６０℃以下浓缩至 １５ｍｌ，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，混匀，回流 ２ 小时，冷却，转入 ５０ｍｌ 容量瓶中并用甲醇 定容，过滤备用。 ２．２．２．３ 样品测定
含量 ２０ 倍的各种糖类如蔗糖、乳糖、葡萄糖，再测其收度，变 化也很小，说明糖类不干扰黄酮的测定。用试剂作空白消除 了显色前黄酮颜色的干扰。测试温度均为 ２５℃，以消除温度 对络合物稳性的影响。 ２．２．１．３ 样品的测定
精密称取银杏叶提取物约 ０．０２ｇ，置 １０ｍｌ 量瓶中加 ３０％ 乙醇溶液，按上述方法操作并用 ３０％乙醇定容，测定，用回归
·４１７·
黑龙江医药 Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．３ ２０１３
银杏叶提取物总黄酮的提取分离及工艺的研究
刘雪飞
哈尔滨奥霖药业有限公司（１５０３００）
摘 要：本文首先是银杏叶提取物的制备，我们采用 ７０％乙醇热回流提取工艺提取银杏叶，用紫外可见分光光度法和高
Liu Xuefei Harbin Aolin Pharmaceutical.,ltd （150300）
Abstr act: Ｔｈｅ Ginkgo biloba Ｌ． ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ７０％ ｅｔｈａｎｏｌ ｔｈｅｒｍａｌ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ G. biloba ｌｅａｖｅｓ． Ｗｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ G. biloba ｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ－ ｖｉｓｉｂｌｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ） ｔｏ ｆｉｎｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ａ ｒｅｇｕｌａｒ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ． Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ G. biloba ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＨＰＬＣ， ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ， ｔｉｍｅ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｙｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｏ ａｃｑｕｉｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ． Ｗｅ ａｌｓｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｓｉｎ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｉｎ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｇ． ｂｉｌｏｂａ．
方程计算总黄酮的含量，结果见表 １。
２．２．２ 高效液相色谱法 ２．２．２．１ 色谱条件
色谱柱：ＲＣＭＣ１８（８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱； 流动相：甲醇 － ０．４％磷酸溶液（５５：４５）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；进样 量：１０μ１；检测波长：３６０ｎｍ；柱温：２５℃。 ２．２．２．２ 样品的制备
量：１０μ１；检测波长：３６０ｎｍ；柱温：２５℃。外标法测定。
２．３．２ 样品的制备
银杏叶提取物样品制备：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ，
加甲醇 ２０ｍｌ 使其完全溶解，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，摇匀，
银杏叶（河南省银杏科学技术开发中心提供）；银杏叶提 取物 （河南鲁山县银杏叶提取厂和本实验室提供）；ＤＭ１３０ 树脂（山东齐鲁抗生素厂）；芦丁、槲皮素（中国药品生物制品 检定所）；山柰酚、异鼠李素（Ｓｉｇｍａ 公司）；甲醇、乙醇、丙酮 （为工业原料或分析纯）；其它试剂均为分析纯。 １．２、仪器
ＵＶ－ ４６００ 型紫外可见分光光度计 （瑞典 Ｐｈａｒｍａｃｉａ 公 司）；高效液相色谱仪，配备有 ６００Ｅ 型泵系统，９６６ 型二极管
（１）三对照品测定方法 银杏叶提取物酸水解后主要为 ３ 中甙元：槲皮素、山柰 酚、异鼠李素，按上述色谱条件可将这 ３ 种甙元完全分开，用 外标法进行含量分析，以 ３ 个对照品对 ６ 份银杏叶提取物和 ５ 份银杏叶样品进行测定，结果见表 １，表 ２。 （２）单对照品测定法 标准曲线：将浓度分别为 ０．００５、０．０１、０．０２、０．０４、０．０６、 ０．０７ｍｇ／ 的槲皮素对照品溶液分别进样，以面积（Ａ）对相应的 进样量 Ｑ（μｇ） 计算回归方程：Ａ＝３．８００×１０６Ｑ＋１．５５０×１０４， ｒ＝０．９９９８，槲皮素 ０．０５－ ０．７０μｇ 范围内呈良好的线性关系。 按上述方法对银杏叶提取物及银杏叶样品总黄酮含量 测定，峰面积乘以校正因子 ２．５１，再求出含量，结果见表 １， 表 ２。 精密度测定：取浓度为 ０．０２ｍｇ／ｍｌ 的槲皮素对照品溶 液，按上述条件重复进样 ６ 次，每次 １０μｌ 测得其精密度 ＲＳＤ＝３．２％（ｎ＝６）。 回收率测定：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ，加入槲皮素 对照品 ２ｍｇ，按上述方法测槲皮素的回收率，得平均回收率 为 ９７．９％，ＲＳＤ＝２．１２％（ｎ＝５）。 表 １ 分光光度法和液相色谱法测定银杏叶提取总黄酮 含量比较