细菌截留验证指导程序

细菌截留验证程序和方案形成

应使用标准方法确证膜过滤器的微生物截留能力。然而，对于某种产品来说，仅证明缺陷假单胞菌在水溶液中被截留，而不是在特定产品中，不足以验证此产品的除菌过滤工艺。

为了确定正确的挑战测试方法，应将测试微生物直接接种在承载流体（产品或替代品）中以证明其生存性。微生物应以与挑战实验中使用的同等方式培养，以保留其生物形态特征和生理特征。用于生存性研究的测试暴露时间应该等于或超过实际工艺过滤时间。

当测试微生物在产品中的生存性已经完成测试，就应该形成挑战方法和方案了。细菌挑战实验的条件应模拟实际生产工艺。既然细菌挑战实验通常都在实验室里进行，那么方法的规模也应相应调整。通量应调整到每单位面积的流速，表示为基于滤芯表面积的形式(ml/min)/cm2。如果过滤过程按压差控制，则挑战实验压差至少等同于最大工艺压差。如果制订方案过程中遇到关于测试方法可接受性的问题，则建议联系相关管理机构以获取指导。图1列出了在为特定过滤器和产品/工艺组合选择合适的验证策略时需要考虑的关键步骤。

（1）非杀菌性的工艺和流体

直接在产品中接种测试微生物是测试除菌级过滤器微生物截留能力的首

选方法。当产品和工艺流体被证明在产品和工艺条件下没有杀菌效力的时候，这样是可行的。在这些工艺中，应使用足够浓度的挑战微生物在产品中接种，而且要在实际工艺条件下，包括时间、压差、流速和其它关键变量（例如温度），应尽量减少稀释，以避免不必要的产品改变。

（2）抑菌的/杀菌的/非分散的挑战流体

在杀菌性的产品中进行细菌截留测试，使得与验证相关的一些问题更难回答，例如：产品对过滤器有什么影响，产品对其中的生物菌落有什么影响。在杀菌性产品中或是在不利于微生物活性的条件（例如，温度上升）下进行的细菌截留测试不一定能得到正确的结果。

为了评估产品/工艺对过滤器的潜在影响，可以使用产品和实际的工艺条件，包括流速、压差、温度和时间，对过滤器进行预处理。这种预处理可在一个闭路系统中将产品循环通过测试过滤器或者单路通过测试过滤器，接着对滤

芯进行细菌挑战。（具体方法见下文实例分析部分测试方法修改的例子，这些修改被用于适应这种细菌挑战测试。）

F. 滤出液分析

对全部挑战滤出液的分析对确认除菌级过滤器截留细菌挑战的能力是必

要的。可以从安装在测试过滤器下游的合适的分析过滤器或膜片上直接通过，或者先收集滤出液在无菌容器中然后再用分析膜片过滤，两种方法均可。通常，使用0.45微米或除菌级膜片来收集缺陷假单胞菌菌或其它微生物污染挑战细菌。安装分析过滤器不应影响测试过滤器的预定压差。对滤出液部分取样的作法不足以验证除菌过滤，因为一小部分细菌可能已经穿过过滤器，存在于未取样和分析的滤出液中。

G. 结果判读

在阳性对照有效的情况下，三支测试过滤器都没有检测到挑战细菌的透过，则达到除菌级过滤器的接受标准。如果有一支被发现细菌穿过，但没有确认是什么原因引起的，那么在调查和风险评估后，可重新测试（例如，从失败膜所属批次中选三支过滤器）。如果可以找到导致测试失败的确定原因，那么疑问批次的过滤器应被重新检测。

H. 连续过滤

两个或多个过滤器在一起使用，以达到：

●确保滤出液是无菌的。

●至少一个过滤器通过完整性测试。

●到达最后一级过滤器的细菌浓度小于10 CFU/100ml。

这样的组合中，最后的最接近滤出液的过滤器，称为首要过滤器，另外一个或多个，为冗余过滤器，是对除菌过滤工艺的再次保障。

当怀疑发生细菌穿过除菌级过滤器的情况时，可以使用串联在一起的两个或多个过滤器滤器，实际为两个或者多个过滤器是作为一个除菌过滤单元在使用。在这样的工艺条件下，所有过滤器均要达到完整性测试接受标准。这种情况下的两个或多个过滤器的总称为组合过滤器。