平板计数法
平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析
FOODEXPERIMENT平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析■文丨张嬪夭津市工业微生物研究所有限公司、夭津量信检验认证技术有限公司品污染的微生物主要是细菌•通过对食品微生物菌落总数进行检测，能够掌握食品受污染程度。
而平板计数法与纸片法均能够对食品微生物菌落总数进行检测，对二者进行比较分析，能够为菌落计数标准方法的调整提供思路。
一、实验方法比较准备平板计数琼脂培养基和菌落总数测试片，并准备饼干、蛋糕以及两份质控样品。
具体实验如下：1•平板计数法。
（1）培养基的配制。
对培养基进行高压灭菌，再放入恒水温的浴锅中，并按照标准要求将水温保持在46°C O（2）样液的制备将准备好的待测样品原液与质控样品进行10倍稀释.充分混匀后制备为1:10的样品匀液。
（3）质控样品的制备。
吸取4mL的生理盐水水化西林，彻底溶解后将溶液移除，并反复清洗容器内壁，回收的清洗液即是质控样品。
使用微量移液器对其进行吸取，9mL的稀释液应吸取lmL的样品匀液，混合制备为1:100的样品匀液。
（4）使用平板计数法对食品微生物菌落总数进行检测时要保证环境的无菌性，主要步骤是：使用ImL灭菌吸管吸取菌液稀释液，放置在平皿内，加入ImL 的无菌生理盐水，注入平板计数琼脂，再将其摇匀，静置冷却凝固后，将平板翻转，在36°C±1°C的温度下静置培养48h±2h o2.纸片法。
在使用纸片法对食品微生物菌落总数进行检测时，同样需要制备培养基和样液’在对培养基进行制备时，主要将测试纸片静置，直到其恢复常温；在制备样液时，与平板计数法相同，故不作赘述。
使用纸片法对食品微生物菌落总数进行检测的主要步骤是：使用ImL灭菌吸管吸取菌液稀释液，分别放置在测试纸片上.将纸片进行覆盖，以同样的条件对其进行培养。
二、实验结果比较在分别使用平板计数法和纸片法对食品微生物菌落总数开展检测实验后，主要采取SPSS17.0对两种实验结果进行分析，“Z-比分数”对其进行评价。
菌落总数计数方法
菌落总数计数方法菌落总数计数是一种常见且重要的实验方法，用于评估菌落的数量和密度。
菌落总数计数方法有多种，常见的包括平板计数法、薄层计数法、过滤膜计数法等。
下面将详细介绍这几种方法的原理和步骤。
平板计数法是最常见的菌落总数计数方法之一。
它的原理是将待测菌液均匀涂布在含有固体营养培养基的平板上，通过菌落的生长扩散形成可见的单个菌落，再通过对菌落进行计数并乘以稀释倍数，最后得到待测菌液的菌落总数。
具体步骤如下：1. 准备固体培养基。
根据所要检测菌落的要求，选择适当的培养基并准备好。
固体培养基一般含有琼脂或明胶等物质，可以提供营养物质和支持菌落的生长。
2. 制备合适浓度的菌液。
将待测菌种培养在含有适宜营养物质的液体培养基中，利用培养箱或摇床进行恒温、恒湿的培养，待菌液呈现合适浓度时即可使用。
3. 稀释菌液。
根据待测菌液的预估浓度，将适量的菌液和无菌生理盐水按一定比例进行稀释，以获得合适浓度的菌液。
4. 涂布菌落。
取一定数量的稀释后的菌液，利用灌注器或鱼鳞划线法将菌液均匀涂布在固体培养基的平板上。
为了保证菌液的均匀分布，可以采取旋转、摇动等方法。
5. 培养菌落。
将涂布好的平板置于恒温、恒湿的培养箱中进行培养。
根据菌种的不同，一般在30-37的温度下培养24-48小时。
6. 计数菌落。
在培养好的平板上，通过肉眼或借助显微镜仔细观察菌落的形态、大小、颜色等特征，并使用菌落计数器或放大镜进行计数。
根据菌落的密度和分布情况，可以选择在整个平板上计数，或者在特定区域计数后进行推算。
7. 乘以稀释倍数。
由于菌液在进行稀释时常用不同倍数的生理盐水进行稀释，所以在计算菌落总数时需要将计数结果乘以稀释倍数，以获得准确的结果。
薄层计数法是另一种常见的菌落总数计数方法。
它的原理是将含有待测菌液的液体培养基均匀地倒入培养基皿中，使其能够覆盖整个底面。
待液体凝固后，菌落会在培养基表面生长，并且可以通过视觉或显微镜观察和计数菌落。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
大肠菌群检测中平板计数法主要操作要领
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
平板计数法
平板菌落计数法样品的稀释固体和半固体食品：以无菌操作取25g样品,放入装有225 mL生理盐水的无菌均质杯内,于8000 ～10000r/min均质1min～2min,制成1:10样品匀液，或放入225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中,充分混匀，制成1:10的样品匀液。
用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10的样品匀液1 mL加到装有9 mL PBS的稀释管中，充分混匀制成1：100的样品匀液。
制备十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选择2～3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取1mL样品均匀加入两个无菌平皿内。
同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
及时将15~20ml冷却至46℃平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱内保温）倾注平板，并转动平皿使其混合均匀。
琼脂凝固后，将平板翻转，置36±1℃培养48±2h。
水产品30±1℃培养72±3h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生成的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（4mL），凝固后翻转平板，进行培养。
菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（（CFU）表示。
选取菌落数在30~300之间、无蔓延菌落生成的平板计数菌落总数。
低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表一个平板的菌落数。
大肠菌群检测(平板计数法)
平板菌落数的选择
选择菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
什么样的菌落必须要做证实试验
一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型菌落不符合的菌落。 另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本
36℃±1 ℃ 18h ~24h
挑选10个菌落分别 接种到BGLB
VRBA琼脂
配方(g/L): 蛋白胨:7.0; 酵母粉:3.0;乳糖:10.0;3号胆盐:1.5;中性红:0.03;结晶紫:0.002;氯化 钠:5.0; 琼脂:15.0;pH 7.4±0.1,25℃ 其中蛋白胨提供氮源；酵母粉提供生长促进因子和Ｂ族维生素；乳糖提供碳源， 大肠菌群发酵乳糖，产生酸性物质；３号胆盐是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏 阳性菌；结晶紫也是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌和一部分革兰氏阴性 菌；中性红是一种指示剂，在酸性条件显红色，碱性条件下显无色。氯化钠维持 细菌生长时的渗透压。琼脂是一种凝固剂。
10倍系列稀释
选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板
36℃±1℃
18~24h
计数典型和可疑菌落
注：VRBA(结晶紫中性红胆盐 琼脂)又称为：VRB或VRBL
BGh
报告结果
平板计数法操作
菌落数在15-150之 间的平板,计数典型
和可疑菌落
典型菌落为紫红色周围有 红色胆盐沉淀环，0.5mm
来大肠菌群的定义是发酵乳糖，但由于样品含有的其他糖类混入了培养基，使 得不能分解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长出红色菌落，所以需要进行 证实实验。
结果报告
经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘 以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。
医学：实验土壤中细菌总数的测定-平板计数
本实验的应用前景
本实验所采用的平板计数法具有广泛的应用前景，可 用于研究不同环境条件下土壤中细菌总数的变化规律。
通过深入探究土壤中细菌总数与环境因素之间的关系， 可以为农业生产、土壤保护和土地资源可持续利用提 供科学依据。
实验误差分析
随机误差
由于随机因素引起的误差，如取样不均匀、计数 误差等。
系统误差
由于实验方法、仪器或操作不当引起的误差，如 培养基质量、培养条件等。
误差来源分析
分析误差的来源，提出相应的改进措施，以提高 实验的准确性和可靠性。
结果可靠性评价
重复性检验
通过重复实验，比较实验结果的一致性和稳定性。
可信度评估
03
CHAPTER
实验步骤
土壤样品的采集与处理
1
ห้องสมุดไป่ตู้
采集具有代表性的土壤样品，并记录采样点的环 境信息。
2
将采集的土壤样品进行筛选和研磨，去除其中的 石块和杂质。
3
将处理后的土壤样品进行称重，记录其质量。
土壤样品的稀释与接种
根据土壤样品的质量， 计算所需的稀释液量。
将稀释后的土壤样品 接种到培养基中，确 保均匀分布。
制备菌悬液
将处理后的土壤样品与无 菌水混合，制备成菌悬液。
稀释菌悬液
将菌悬液进行适当稀释， 使每个菌落来源于一个细 菌。
接种培养
将稀释后的菌悬液接种到 培养基上，放入恒温培养 箱中培养。
掌握平板计数法测定土壤中细菌总数的操作步骤
计数菌落
培养一定时间后，观察并计数培养基 上的菌落数。
结果计算
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
MPN法和平板计数法是微生物检测中常用的方法，用于对水样或
其他样品中的微生物数量进行估算。
这两种方法都是基于微生物在特
定条件下的繁殖规律而设计的。
MPN法（Most Probable Number）是一种间接计数法，适用于微
生物含量较低的样品。
它基于微生物在液体培养基中的繁殖规律，通
过观察培养液的变化来估算微生物的数量。
具体操作时，样品通过稀
释系列，分别接种到多个培养管中，并根据培养管内是否有微生物生
长来判断MPN。
平板计数法是一种直接计数法，适用于微生物含量较高的样品。
它通过将样品均匀地涂布在含有固体培养基的平板上，使其中的微生
物形成可见的菌落。
然后，通过数个平板上的菌落数量，可以估算样
品中微生物的数量。
这种方法的优点是操作简单，但对于微生物数量
较低的样品不太适用。
MPN法和平板计数法的适用范围略有不同。
MPN法通常用于对含
有微生物数量较低的样品进行估算，例如食品、饮用水等。
平板计数
法则常用于对微生物含量较高的样品进行计数，例如污水、土壤等。
选择合适的方法取决于待测试样品的特性以及所需的灵敏度和准确性。
综上所述，MPN法和平板计数法是常用的微生物检测方法，通过
对微生物繁殖规律的研究来估算样品中微生物的数量。
两种方法各有
优势，适用范围有所不同，应根据实际需要选择合适的方法进行微生
物检测。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
平板计数的实验原理
平板计数的实验原理
平板计数法是一种实验室中常用的微生物计数方法，其原理是将待测微生物悬液均匀地铺在已知面积的平板上，通过培养基培养和观察，计算出在平板上生长的微生物菌落的数量。
平板计数法的具体操作步骤如下：
1.准备好含有适当营养物质的培养基，如大肠杆菌专用营养琼脂（LB）培养基。
2.将待测微生物悬液通过适当的稀释方法，制备出不同浓度的悬液。
一般要制备出大约3个数量级的浓度，即10^-5、10^-6和10^-7等。
3.将每一个稀释液用吸管吸取一定量，滴在分别标号好的平板上。
然后用灭菌的玻璃棒将悬液铺平，使液体均匀分布在平板上，使得每个平板上菌落的大小和形态的变化均匀。
4.将培养皿倒置放在培养箱中，进行恰当的孵育，使其在适宜的环境中生长繁殖。
具体的条件由不同微生物的生长需求而定。
5.观察每个平板上的微生物的生长情况，计算出每个平板上菌落的数量。
6.利用平均数等方法，计算出每毫升原液中微生物的数量。
平板计数法的优点是简单易行，操作方便，能直接观察和计数微生物的数量，结果比较准确。
不过，平板计数法并不适用于细胞形态、大小、生长速度和密度不同的微生物。
此外，平板计数法所得到的是可生长的菌落形式和数量，不能反映微生物在液体中的真实数量。
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稀释平板计数法
实验目的
学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容
用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材
酿酒酵母菌悬液
马铃薯培养基
1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤
1．无菌器材的准备
(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备
(1) 编号
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。