HPLC操作规程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程液相色谱操作规程液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于制药、化学、食品、环境等领域。
为了确保实验结果的准确性和实验室安全，以下是液相色谱操作的一般规程，供参考。
1. 实验前准备- 检查液相色谱仪的状态，确保仪器正常运行。
检查流动相、样品、色谱柱等试剂和设备的有效性和存放条件。
- 清洗和准备色谱柱。
按照柱内包装说明进行操作，如需更换柱，要将原柱溶液彻底洗净，并严格按照规程存储。
2. 样品准备- 准备样品溶液，注意选用适合的溶剂，并控制样品的浓度在色谱柱适用范围内。
- 对于固体样品，要将其溶解在适当的溶剂中，使用滤膜过滤以除去杂质。
3. 仪器启动和操作- 打开液相色谱仪，确保仪器连接正常并处于待机状态。
- 打开软件，设置操作参数，如流速、检测波长、温度等，并校准仪器。
- 检查进样器和检测器的运行情况，确保它们的正常工作。
- 启动柱温箱并设置温度。
4. 进样和分离- 使用适当的方式进样，如自动进样器或手动进样器，并确保进样量适当。
- 设置适当的流速和柱温，开始分离实验。
- 注意记录实时的色谱图和数据。
5. 后处理和结果解释- 完成分离后，关闭液相色谱仪。
- 分析数据，包括峰面积、保留时间和峰高等，与标准曲线或其他样品对照进行比较。
- 解释和记录实验结果。
6. 清洗和保养- 分离结束后，进行色谱柱的清洗和保养。
根据柱的材质和要求，选择适当的清洗方法和溶剂，彻底清洗柱内的杂质，避免污染或损坏柱。
- 清洗完毕后，根据柱的要求存储或封存，以确保柱的使用寿命。
7. 实验室安全- 在实验过程中，注意个人防护措施，戴上实验手套、护目镜等。
尽量避免将试剂接触皮肤和眼睛，如不慎溅到眼睛或皮肤上应立即用大量清水冲洗。
- 坚持实验室清洁和卫生，在实验后及时清理实验台面、器材和废弃物，保持良好的工作环境。
液相色谱是一项繁琐的实验技术，需要严格遵守操作规程和实验室安全要求。
以上规程仅供参考，具体操作还需根据实验目的、仪器型号和试剂要求进行调整。
HPLC仪器操作规程.
HPLC仪器操作规程一.每个月该做的事情.我们是按照月份的变化来保存我们的每天检测结果的,如4月份的检测结果,就想建立个文件夹来专门保存,到了5月份,就想建立个文件夹来专门保存5月的检测结果.那我们就要建立个文件夹来专门对应.点开图标D-2000 Elite Administration.lnk,出现下图,点击图标后,出现下图在应用程序明里面填上你想建立的文件夹名,如:图里现在建立的文件夹名即为200907,再在驱动器里指定你想存储的位置,如,图里指定位置为D 盘下.建立好后,选点创建.然后关闭就可以了.二. 我们每天该做的事情.首先我们打开电脑,然后开仪器(开启的顺序是organizer>L2130>L2200>L2300>L2400,然后选点图标D-2000 Elite.lnk 出现下图点图标,出现连机状态,直接点 ,等画面出现为下图,表明连机成功.确认即可. 点图标,将泵开启.然后点图标,下图所示:点,再点,出现提示框这时,将排液阀打开(即在L2130上的一个白色的凸起旋钮,逆时针旋转90度,然后选择是, 泵开始排液,A B C D 四个管路一个个选点过去,每个管路排液2-5分钟.目前我们4个管路的液体分别为,A 是甲醇,B 是水,C 是乙腈,D 是流动相(未加入乙腈. 排液结束后,点关闭净化,将排液阀顺时针方向旋转关紧. 点,出现下图在里面,我们把流速设定为1ML/MIN,C为10%,D为90%.完成后,点.关闭窗口.再点图标,出现这个图标的意思是,我要选择我今天做的样品的结果存储在哪个文件夹下面,比如,现在是3月份, 我选择2009.03这个文件夹做为我的存储地方.双击即可.再点,出现下图目前里面有两个样品表,但每天的样品量是不同的,这就需要我们根据每天新的样品情况来编辑样品表.随便打开一个样品表,比如20090329-2,出现下图上面就是一个我们比较标准的一个进样表,前面3行,即无论是什么情况,都应该是有的,不允许改变.下面,就根据我们样品实际情况一一加入.注意:我们最后有个冲洗柱子的方法,不是每个进样表都需要有的,柱冲洗的方法需要被用到的时候是,我们每天这批样品检测结束后,没有样品需要被检测了,实验结束时候,才需要把这个柱冲洗的方法加入.设定结束后,我们将,起个我们当天的名字保存,如我们今天是2009年3月30日,我们就可以起20090330,如果我们当天不止一批样品,我们可以起成20090330-1,等下批可以起成20090330-2,等等.关闭窗口.将我们实验须检测的样品,一一放入我们编辑的对应位置.点,出现图,我们就可以选择一个我们刚刚编辑好的样品表打开了,比如,200090329-2是我们刚刚编辑好的,我就选择打开出现下图等白色基线走成一条直线,我们就可以进样了,这个时间基本需要45分钟-1小时左右,有时候可能半小时就行,线走直了后,我们还需要确认一个很重要的工作是,看看仪器的压力,就在上图显示,我们要确认我们的压力在6.5-8MPa 之间,如果超过或者少于都是不对的,要停下来检查,看看是不是流动相用完了,瓶子放错了,管路堵了等等.或电话联系工程师咨询.如果一切没问题,点,就可以开始检测了. 如果我们的检测需要过夜,那我们在点后,检测面会出现,点开,出现图选取使用静止,确认就可以.这样这个样品表被执行完后,可以自我关机.需要注意的是,这个自我关机,仅是关闭了泵,关闭了灯,关了柱温箱的加热,仪器的电源是并没有被关闭的.。
HPLC安全操作规程
液相色谱仪操作规程
1.检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道连接是否正常。
2.接通电源，依次开启高压输液泵和检测器的电源开关，待泵和检测器自检完成后，打开计算机，打开色谱工作站。
3. 参数设定：设定检测波长、流速和响应时间（一般分析可设置为1.0）。
4.用经过滤和超声的纯甲醇或纯乙腈冲洗管路，待基线稳定后即可更换成分析用流动相。
注意：使用的流动相需经过滤和超声，且更换流动相后，必须先打开放空阀，用大于3mL/min的流量,排尽系统管路中的气泡，然后关闭放空阀，调回流速，用流动相平衡色谱柱。
之后每更换一次流动相均需先按此上述操作进行排气工作。
5. 查看基线，待其走稳，即可进样分析。
注意：样品最好用流动相稀释到所需浓度，且经0.45μm的滤膜过滤后再进样分析，以免损坏仪器。
6. 待样品分析完毕，用纯甲醇或纯乙腈清洗仪器管路和色谱柱。
注意：如果流动相中含有缓冲盐，则先用含10%有机相溶剂作流动相清洗系统，同时用纯水清洗进样阀和泵头，最后用纯有机溶剂清洗系统管路和色谱柱。
7. 关机：先关闭色谱工作站，再关闭检测器和泵的电源开关。
HPLC 操作规程
HPLC操作规程1.溶剂：所用溶剂甲醇，乙腈，超声10 min，去除气泡。
水需要用0.45um水系滤膜过滤，再超声10 min，去除气泡。
溶剂中加入0.5%0的TFA。
2.样品准备：样品最好用梯度程序中初始的溶剂配比溶解，用0.45um滤器过滤后使用。
用纯甲醇也可以。
3.开机：打开A泵，B泵，和检测器，选择REMOTE状态，然后再打开电脑上的工作站界面。
（如果先打开工作站界面，再打开检测器，会造成谱图上横坐标显示的时间是真实时间的两倍。
如果这样，就关闭工作站界面再打开，即可）4.打开工作站界面HPLC LC 600 PLUS WorkStation先平衡: 运行开机平衡梯度程序，约30min。
第一次使用前柱子是100%甲醇，需要平衡到你要运行的梯度程序初始的溶剂比例，如MeOH/H2O=30/70。
5.设置梯度程序，统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。
泵参数设置，不需要设置；梯度程序，需要设置并保存自己的梯度程序；检测器设置，更改波长数值，点击Set。
6.进样：进样阀右边在上，注射进样品，然后扳下进样阀，右边朝下，完成进样。
仪器自动按照设定的梯度程序运行。
7.数据采集：打开工作站界面左上角文件下谱图处理。
数据统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。
8.冲柱子：测试完成后准备关机时，用纯甲醇8 ml/min，冲洗10min，平衡柱子，冲洗流路，最后柱子和流路里要充满有机溶剂。
9.关机：没有特殊要求注意事项：1.在使用含盐的流动相后，需用HPLC级的水冲洗管路和样池，然后再用甲醇（或5-10%甲醇水溶液）冲洗管路和样池。
这样可以避免堵塞液路，样池损坏，以及样池中零部件上微生物的生长。
避免无机盐对泵头的磨损，延长柱塞杆及密封圈的使用寿命。
2.保存的数据结果中不能保存method，所以对自己的化合物成熟的色谱条件要另外保存。
柱子使用说明1.新柱子活化新柱子用甲醇/乙腈/水封存，在运输过程中，柱子填料会变干。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。
其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。
最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。
其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。
此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。
在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。
此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。
首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。
其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。
最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。
HPLC使用操作和注意事项
HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。
在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。
以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。
-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。
2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。
-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。
-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。
-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。
-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。
3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。
-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。
-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。
4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。
-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。
-按照仪器的要求准备缓冲液。
5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。
-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。
-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。
6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。
-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。
-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。
除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。
-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。
2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。
-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。
3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。
-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
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HPLC操作规程
1.所需的流动相，应该用合适的0.45μm滤膜过滤。
2.样品溶液和标准溶液，也应该用合适的0.45μm滤膜过滤，滤膜也分为水相和有机相。
3.开机顺序：开泵，开检测器，进入色谱工作站。
4.泵的启动：用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（9ml/min)或用冲洗键PURGE 进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。
5 .将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需30分钟。
平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。
6. 检测器的开启：开启电源，选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15分钟方可用于分析测试。
7.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。
如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗。
如果清洗不了，可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。
8.分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用适当经过滤和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水然后用甲醇冲洗，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗30-60分钟，特殊情况应延长冲洗时间，粗的柱子流速控制在0.5ml/min以下,细柱控制在0.5ml/min以下。
9. 关机顺序：退出化学工作站，接着关检测器，最后关泵。
开机顺序刚好和关机顺序相反。
HPLC使用注意事项
1.含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过
夜，最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
2.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
3.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱
子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
7.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振荡边清洗，然后插入新的
流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
8.不要高压冲洗柱子，不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱
9.溶剂瓶中的砂芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头
变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；
10.操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
11.在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓
度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
12.装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
13.使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，
洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
14.如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯
甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。