生化试剂性能评价方案
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
要有较为深入的临床分析
一、概述
临床生化检验试剂盒是临床检验中常用的分析诊断手段，它在患者的
血液、尿液等检测过程中起着重要的作用，是确诊疾病的重要依据。
临床
生化检验试剂盒性能评价试验是用来衡量检测试剂性能的一种测试，它既
能反映检测精度，又能反映检测灵敏度，而线性范围试验则是衡量检测范
围的一种测试，它是评价试剂性能评价试验中的重要环节。
二、线性范围试验基本内容
线性范围试验是测试临床生化检验试剂盒的灵敏度和准确性，以及观
察检测结果在一定范围内是否保持线性关系。
它要求用3-5个有代表性的
试剂浓度，在同一样本上进行测定，以比较其特定测定检验参数的灵敏度、准确性和线性关系参数，以及信度和敏感度。
线性范围试验的具体过程如下：
1）确定线性范围。
试验开始前，应该先完成样本应用的说明书，在
说明书中确定临床标准曲线的线性范围及其参数等内容；
2）测量样本。
根据所选定的标准曲线及其参数，用一种专门的试剂
盒测量3-5个不同浓度的样本，并观察检测结果是否符合线性范围试验的
要求；。
生化试剂性能评估及稳定性测试流程和方法-20091026
▪ 可通过合并多设备，多操作者，多批号试剂和 校准液及校准周期（如果适当）而减少，但这 通常增加精密度标准差。
精密度-基本要求
▪ 样品一定要稳定，且应与新鲜的临床病人标本性能接 近，稳定的冷冻混合血清是首选；
▪ 样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平处， 尽可能做两个水平的精密度实验；
分析干扰-干扰原液的制备
▪ 抗坏血酸、黄疸、脂血：分别称取一定量的抗坏血酸 纯品、胆红素纯品和内源性酯纯品溶于纯水（胆红素 溶于0.1 mol/L的NaOH溶液中 ）中，充分混匀后得到 干扰原液；
▪ 溶血：以新鲜全血自制溶血干扰物；收集普通全血标 本，充分离心；吸走上清液，加入5～10 mL的生理盐 水，适度摇动混匀清洗沉积细胞，离心，吸走上清液； 重复三次上述过程后离心收集沉淀，加入与沉淀等体 积的去离子水，混匀，室温静置10 min后置冰箱-20 ℃ 冷冻过夜，复融后充分离心，收集上清液，在血液细 胞分析仪上测试血红蛋白浓度，血红蛋白浓度应加去 离子水调整至100 g/L。
▪ FDA注册
➢ 21CFR820 ➢ FDA指南文件 ➢ 代理机构，文档审核，现场质量体系审核
测试主要内容-标准分类
国际标准（ISO） 欧盟标准（EN） 国家标准 行业标准 企业标准
测试主要内容-举例：欧盟协调标准
▪ 98/79 EC IVD指令 ▪ EN 13640 稳定性测试 ▪ EN13612 性能评估 ▪ EN 375 产品标识 ▪ EN 980 符号使用 ▪ EN 13641 传染性风险降低 ▪ ISO13485 质量控制 ▪ ISO14971 风险管理
测试主要内容-测试工作流程
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验
临床生化检验试剂盒性能评价试验线性范围试验线性范围试验是评价试剂盒在测量不同浓度样本时的测量范围。
通常情况下，试剂盒都会提供一个标称的测量范围，但实际使用时需要验证其测量范围是否准确、可靠，以确保测量结果的准确性和可比性。
线性范围试验的基本原理是通过在试剂盒标准样本中制备一系列不同浓度的样本，然后使用试剂盒对这些样本进行测量。
使用不同浓度的样本测量所得的结果应当在试剂盒标称的测量范围内，且具有线性的关系。
线性范围试验的步骤如下：1.准备试剂盒和标准样本：选择合适的试剂盒，并根据试剂盒说明书中的建议，准备一系列不同浓度的标准样本。
样本的制备应当精确、稳定，并与生化水平的变化有一定的相关性。
2.设置测量参数：根据试剂盒说明书中的要求，设置试剂盒所需的测量参数，如波长、反应时间等。
确保所设置的参数与说明书的要求一致。
3.测量标准样本：使用试剂盒对准备好的标准样本进行测量。
将每个标准样本均匀地分配到试剂盒提供的反应容器中，按照说明书中的步骤进行反应，并使用试剂盒提供的光度计或分析仪器进行读数。
4.绘制标准曲线：将试剂盒测量结果与标准样本的浓度进行对比，绘制标准曲线。
通常，标准曲线具有一条近似直线的形状，且通过原点。
5.判断线性范围：根据绘制的标准曲线，通过线性回归分析或相关统计分析的方法，确定试剂盒的线性范围。
一般情况下，线性范围可由标准曲线所覆盖的浓度范围来确定。
6.评价线性范围：根据试剂盒的应用领域和临床需要，评价试剂盒的线性范围是否满足要求。
如果线性范围过窄或过宽，可能会导致浓度超出测量范围，使结果不准确。
线性范围试验的结果报告应当包含以下内容：1.试剂盒的标称测量范围。
2.标准样本的浓度和对应的测量结果。
3.绘制的标准曲线图和线性回归方程。
4.试剂盒的线性范围和评价结论。
总之，线性范围试验是临床生化检验试剂盒性能评价试验中的一个重要内容。
通过验证试剂盒在不同浓度样本中的测量范围，可以确保试剂盒的使用可靠性和测量结果的准确性。
性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考)1 生化生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。
适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近0的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。
1.1 精密度1.1.1 标本准备及要求质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。
每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。
所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
1.1.2 方案1.1.2.1 方案1：对验证材料每天分析1批次，2个浓度，每个浓度重复测定4次，连续5天。
记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。
1.1.2.2 方案2：批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本20次。
记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）和批内变异系数CV（%）。
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本20次，同一批号室内质控品某一时间段（至少20天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。
1.1.3结果判断从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的1/4和1/3作为检测系统不精密度性能的的可接受标准（或用卫生部临检中心的允许总误差、卫生标准等），且又小于厂商提供的精密度性能指标，说明由实验室评价的检测系统的不精密度性能可接受，符合要求。
若大于判断限，检测系统的不精密度是否符合要示，应再进一步做统计学处理作出判断。
1.2 正确度1.2.1 卫生部临检中心室间质评含盖的项目，则以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。
临床化学试剂(盒)技术审评规范标准
临床化学体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范（2011版）根据《医疗器械注册管理办法》（国家食品药品监督管理局令第16号）的要求并结合临床化学体外诊断试剂(盒)产品的特点，为规范临床化学体外诊断试剂(盒)（以下简称试剂（盒））产品的技术审评工作，特制定本规范。
一、适用范围本规范适用于采用分光光度法原理，利用全自动、半自动仪器或分光光度计，在医学实验室进行临床化学项目定量检验所使用的体外诊断试剂(盒)。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）临床化学体外诊断试剂（盒）管理类别为Ⅱ类。
二、技术审查要点（一）试剂（盒）命名的原则试剂（盒）名称由三部分组成：第一部分：被测物质的名称；第二部分：用途；如测定试剂盒；第三部分：方法或原理。
例：葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）（二）试剂（盒）的结构组成试剂（盒）的组成形式：单试剂，双试剂，多试剂；试剂盒的性状：干粉或液体。
（三）工作原理试剂（盒）通过各自不同的反应原理，最终以比色、免疫比浊或速率方法在具有分光光度系统的仪器上，利用Lamber-Beer定律，即物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度（c）和液层厚度（b）间的关系的定律，对被测物质进行定量分析。
（四）产品适用的相关标准试剂（盒）适用以下相关标准：1．GB/T 191-2008 包装储运图示标志；2．YY/T 0316-2008 医疗器械风险管理对医疗器械的应用；3．YY 0466-2003 医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号；注：以上标准适用最新版本。
（五）产品的预期用途试剂（盒）的预期用途应体现为对临床样本成分的定量测量。
（六）产品的主要技术指标1、外观目测检查，符合生产企业规定的正常外观要求。
（一般要求试剂无杂质、无絮状物，外包装完整无破损）。
2、净含量用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。
3、试剂空白3.1 试剂空白吸光度用指定空白样品测试试剂（盒），在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度（A1）和约5分钟(T)后的吸光度（A2），A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合生产企业给定范围。
临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验方案
临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验方案线性范围试验旨在评价试剂盒在一定的浓度范围内是否能够提供准确、可靠的测量结果。
线性范围是指试剂盒能够正常工作的浓度范围，通常以
正常生理范围为基础进行选择。
试验方案包括以下几个步骤：
1.准备样本：选择一种或多种具有不同浓度的标准物质，可以是纯品、混合物或者浓度已知的样本。
确保选取的样本覆盖到试剂盒的线性范围。
2.样本加样：按照试剂盒使用说明书中的方法，将不同浓度的样本加
入到试剂盒提供的反应池中。
同时还可以加入一定浓度的质控品作为质量
控制。
3.反应：按照试剂盒使用说明书中的方法，将试剂盒放入适当的温度
和时间条件下进行反应。
4.测量：使用相应的测量仪器对反应后的样品进行测量。
注意，为了
减小误差，每个样本应重复测量多次。
5.数据分析：根据测量结果，绘制标准曲线。
标准曲线是通过浓度与
测定值之间的关系绘制的，其中浓度为横坐标，测定值为纵坐标。
可以使
用常见的回归分析方法进行数据处理，如线性回归或非线性回归。
6.评价：通过标准曲线的拟合度来评价试剂盒的线性范围。
通常使用
相关系数（R）和决定系数（R^2）来评估标准曲线的拟合度。
相关系数越
接近于1，表明试剂盒的线性范围越好；决定系数越接近于1，表明试剂
盒的拟合度越好。
线性范围试验是评价试剂盒性能的重要指标之一、通过此试验，可以
验证试剂盒在标准浓度范围内测定结果的准确性和可靠性。
同时，线性范
围试验结果还可以用于确定测定结果的限制范围，有助于指导临床医生进行判断和诊断。
生化试剂盒线性范围高值的简单评价方法
【 键 词 】 生化 试 剂 盒 ； 线 性 范 围 ； 高值 ； 评 价 方 法 关
Ｄ Ｉ １． ９ ９ｊｉ ｎ １７ —４ ５ ２ １ ． ３ ０８ 文 献标 志码 ： 文章 编 号 ：６ ２９ ５ （０ ２ １—６ ８０ Ｏ ：０ ３６ ／．ｓ ．６ ２９ ５ ．０ ２ １． ８ ｓ Ｂ １ ７—４ ５ ２ １ ）３１ ７—２ 临床 检 验 工 作 中 经 常 碰 到 需 要 对 新 试 剂 盒 进 行 考 察 的 问 题， 而线 性 范 围是 生 化 试 剂 的一 个 重 要 指 标 Ⅲ 。确 定 线 性 范 围 的 实 验 需 要 由 低 到 高 一 系 列 浓 度 的 样 本 ， 中高 浓 度 的样 本 一 其 般 是 通 过 临 床搜 集 或 者 通 过 普 通 浓 度 的 样 本 添 加 纯 物 质 来 获 得 ， 者 具 有 一 定 的难 度 ， 者 成 本 较 高 ， 且 获 得 起 来 也 未 必 前 后 而 方 便 。因 此 需 要 建 立 一种 方 法 ， 以简 单 有 效 地 对 试 剂 盒 的线 可
３ １ 方 法 确 认 和性 能 验 证 对 于 配 套 的 检 测 系 统 ， 验 室 在 ． 实 使用前应该对 Ｆ ＡＭＥ进行 性 能 验证 。 目前 大 多数 实 验 室 采 用
３ ４ 全 面质 量 控 制 除 此 之 外 ， 验 室 还 应 该 对 Ｆ ． 实 ＡＭＥ检 测 仪的各个环节严格把关 ， 确采集 、 正 处理 和保 存 标 本 和试 剂 ， 建 立 仪 器 的 标 准 操 作 程 序 和 常 规 的 质 量 控 制 程 序 ， 仪 器 检 测 的 对 相 关 人 员 进 行 培 训 ， 悉 仪 器 性 能 ， 解 常 见 问题 的 解 决 方 法 熟 了 和仪 器 的 日常 维 护 保 养 。对 仪 器 的 检 测 进 行 全 面 质 量 控 制 。
临床化学分析方法选择与评价
临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。
使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。
有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。
第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。
评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
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生化试剂性能评价方案 Prepared on 22 November 2020
生化试剂性能评价实验
实验目的
对某试剂在某全自动生化仪上进行全面的性能评价，以验证此试剂在生化分析仪器检测结果的可靠性以及临床适用性。
实验内容：
（1）准确度测定
（2）批内精密度测定；
（3）天间精密度测定
（4）可报告范围验证；
（5）相关性：与两种比例试剂检测结果的比对实验；
（6）参考范围验证：验证说明书标定的参考范围是否适用于本实验室，如不适用，则需要统计分析试验数据，并设定适合于本实验室的参考范围；实验耗材：
试剂、配套定标品、配套质控品
实验步骤：
首先将定标品和质控品溶解准备好，将参数设置好，并且用配套定标品定标，反测定标液的浓度，完成以上操作后，进行以下操作。
（1）准确度测定：
测定配套的正常值和病理值质控，分别测定三次，计算均值，参考质控参考说明书，计算偏倚，分析检测结果是否符合说明书标定的准确度标准。
偏倚=（均值-靶值）/靶值
接收准则：按照说明书要求
（2）批内精密度测定
分别测定配套正常值质控、病理值质控，各连续测定20次，分别计算均值、SD与CV%，验证试剂的批内精密度是否符合说明书标定的标准。
接收准则：按照说明书要求
（3）天间精密度测定
分别测定配套正常值质控，病理值质控，连续测定10天，每天测两次
（间隔至少2h），计算总的精密度，以CV%表示。
接收准则：按照说明书要求
（4）可报告范围验证
将高值病人标本采用生理盐水按照10/0、9/1、8/2、7/3、6/4、5/5、4/6、3/7、2/8、1/9、0/10的比例稀释，依次进行
接收准则：R=均值/理论值
R在之间可接收。
（5）相关性实验
选择50个函盖试剂线性范围的病人标本，分别用两种试剂进行测定（作比对的试剂最好是行业认可度高的品牌），每天测定5个病人标本，共测定10天，对测定结果进行相关性分析，计算其相关系数r，斜率b，截距a，分析两个检测系统的相关性。
接收准则：r≥
b接近于1
a接近于0
（6）参考范围验证：验证说明书标定的参考范围是否适用于本实验室，取120份健康人（健康人定义：无任何已知的良性或恶性疾病、外表正
常、无任何可见疾病症状的人）标本进行测定，计算符合说明书标定参
考范围的标本例数。
接收准则：R=检测值在引用参考范围内的个数/实验总数
R≥90％，则可接受。