生化与分子生物学实验指导
生物化学与基础分子生物学实验
生物化学与基础分子生物学实验本实验旨在增进学生对于生物化学与基础分子生物学知识的理解，同时也希望借此机会增强学生的实验动手能力和实验数据分析能力。
本实验主要分为两部分，第一部分是生物化学实验，主要包括蛋白质的提取、纯化和酶促反应的研究。
第二部分是基础分子生物学实验，主要涉及DNA的提取、PCR扩增和凝胶电泳检测等。
一、生物化学实验1. 蛋白质的提取蛋白质的提取是研究蛋白质功能和结构的基础。
常用的蛋白质提取方法有机械破碎法、化学破碎法和生物学破碎法等。
本实验以细胞生物学破碎法为主要方法，即利用超声波或手工研磨等方法将细胞破碎。
其中，手工研磨可以选择石英砂或三氧化二铬等研磨介质。
破碎过程中需加入适量浓度等渗液和抑制剂，以防止蛋白质的降解和氧化。
2. 蛋白质的纯化蛋白质的纯化是进一步研究蛋白质结构和功能的关键。
常用的蛋白质纯化方法包括离子交换、凝胶过滤、透析、亲和层析和电泳等方法。
本实验以离子交换和凝胶过滤为主要方法。
其中，离子交换可利用正离子交换和负离子交换两种模式进行，考虑到蛋白质电荷状态的不同以及离子交换树脂的不同选择，从而使得目标蛋白质与其它蛋白质的区分度大大增加。
凝胶过滤则利用凝胶的孔径大小进行分离纯化。
3. 酶促反应的研究酶促反应是生物化学研究的重要组成部分，可以研究酶的特性、动力学以及酶对于特定底物和抑制剂的亲和性等。
本实验选择酶促细胞色素C氧化为模型反应。
反应中需要考虑诸多因素，如温度、pH、反应时间等，同时还需考虑反应体系中酶、底物和抑制剂的摩尔比例关系。
二、基础分子生物学实验1. DNA的提取DNA的提取是基础分子生物学实验的关键步骤，其目的是提高纯度和量。
常用的DNA提取方法有化学法、机械法、热平衡法和离心法等。
本实验以盐酸摇法为主要方法进行DNA的提取。
其中将细胞经过适当处理后加入盐酸和β-己糖苷酯，在恒温和摇动条件下分离得到DNA。
2. PCR扩增PCR是分子生物学中的核心技术之一，是一种复合酶链反应。
《生物化学与分子生物学实验》实验教学大纲
《生物化学与分子生物学实验》实验教学大纲课程名称：生物化学与分子生物学实验课程类别：必修课适用专业：生态学所属实验室：生物化学实验学时、学分：32学时1学分―、实验教学目的《生物化学与分子生物学实验》是和《生物化学与分子生物学》课程同时开设的实验课程，是理论教学的深化和补充，具有较强的实践性，是一门重要的技术基础课，可作为生物技术、生物科学、生态学专业学生的必修课。
通过实验教学，观察某些生化与分子生物学反应现象，使学生巩固和加深对生物化学与分子生物学基本知识和基本理论内容的理解，掌握生化与分子生物学实验的基本操作、实验原理及相关仪器的使用。
通过实践进一步培养学生的科学实验技能与严谨的科学态度，学生通过准确记录、科学分析并作出实事求是的实验报告能够加强提高自身观察问题、分析问题和解决问题的能力及设计和创新能力的培养。
二、实验教学要求本实验课程是生命科学本科实验教学的一个重要组成部分，在实验过程中要求学生自己动手，独立观察并完成实验报告，注重培养学生创新思维与能力。
实验通过学习滴定，比色，层析，电泳、PCR等生化与分子生物学相关基础实验技术，以及实验方法，操作技术，仪器的使用，来分析生物体中糖，蛋白质，核酸，酶等生化物质及代谢过程，培养学生具有初步的科学使用能力及严格的科学作风，掌握基本的生化与分子研究技能为深入各学科研究打下良好基础。
三、对学生的指导和要求（一）实验内容的安排实验课程内容涵盖了验证性实验、综合性实验，设计性创新性实验，在加强学生基本实验技能训练的同时通过设计创新性实验锻炼学生自己查找资料并结合所学基本知识进行实验设计，增加学生自身科研主动性，实验设置能够很好的培养学生的科研素养及动手能力。
(二)学生任务经过多层次的训练后，学生应达到下列要求：1•进一步巩固和加深对生物化学基本知识的理解，掌握生物化学实验的基本知识和基本操作技能。
如生物化学分离、制备、分析和鉴定技术。
2•提高观察问题、分析问题和解决问题的能力。
生化与分子生物学实验指导
⽣化与分⼦⽣物学实验指导⽣化与分⼦⽣物学实验指导-（)————————————————————————————————作者:————————————————————————————————⽇期:实验⼀氨基酸纸层析法⼀、实验⽬的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作⽅法。
⼆、实验原理纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是⽣物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常⽤技术,可⽤于蛋⽩质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法⼜称纸⾊谱法,是⽤滤纸为⽀持物,所⽤展层溶剂⼤多由⽔和有机溶剂组成,滤纸纤维与⽔的亲和⼒强,与有机溶剂的亲和⼒弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的⽔分是固定相,有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的,称上⾏法；由上向下移动的,称下⾏法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点),进⾏展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进⾏分配。
由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率⽤Rf 值表⽰：在⼀定条件下某种物质的Ｒf 值是常数。
Ｒf 值的⼤⼩与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只⽤⼀种溶剂展层,就不能将它们分开。
为此，当⽤⼀种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再⽤另⼀溶剂展层,从⽽达到分离⽬的,这种⽅法称为双向纸层析法。
氨基酸⽆⾊,可利⽤茚三酮显⾊反应,将氨基酸层析点显⾊作定性、定量⽤。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产⽣蓝紫⾊物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产⽣(亮)黄⾊物质。
三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪⼑、层析缸、⽑细管、电吹风、刻度尺、铅笔。
R ｆ=原点到层析斑点中⼼的距离原点到溶剂前沿的距离2试剂(1)氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0．5％)。
分子生物学实验指导
分子生物学实验指导(总45页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除分子生物学实验指导分子生物学实验课程的内容是从亚克隆一个基因直到最终表达出该基因产物的一个完整的科研项目。
以表达纳豆激酶为例，从已经克隆在pMD-18-T 载体上的纳豆激酶酶原基因上用PCR扩增出837bp的纳豆激酶成熟肽基因片段，与T载体连接后转入DH5菌中筛选鉴定，然后用双酶切下纳豆激酶成熟肽基因片段，插入带有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-Trx，在表达菌BL(21)DE3中诱导表达出纳豆激酶蛋白质并用SDS-PAGE鉴定。
整套实验围绕纳豆激酶基因的亚克隆、重组、转化、筛选直到表达这一研究顺序进行操作。
其间共涉及学习约11种基因操作的基本技术，我们按这些操作技术出现的先后顺序分别编为实验一至实验十一。
各个实验之间具有很强的逻辑性和连贯性，前一个实验的结果就是下一个实验的原料。
整套实验设计实际上是一个基因操作实验平台，随时能根据需要更改外源基因和表达载体或进一步扩充实验内容。
我们在每年的教学实践中会不断增加目的基因和表达载体的种类，以便于学生实验小组能够从事不同的项目，减少雷同，增加兴趣。
分子生物学实验的宗旨是让学生在独立实践操作中学习分子生物学的基本研究方法和体会分子生物学研究的严密逻辑和科研理念。
实验教学的组织方式是科研项目式管理，即在教师的总体指导下，在给定的实验材料和实验条件的基础上，让学生独立思考、自行规划实验流程、制定实验计划、准备实验材料、动手操作、整理和分析实验结果，最后完成实验项目，写出实验论文。
因此学生在实验前要认真预习实验内容，结合学过的分子生物学原理，弄懂每一步实验的目的和原理，了解实验的内容和总体实验方案，写出分子生物学大实验《开题报告》，交教师审阅和讨论修改后才能进入实验室操作。
在实验过程中，教师不干涉学生的实验安排和操作程序，仅以导师的身份对学生的实验操作进行现场巡回指导、回答学生的疑问、为学生示范一些高档实验仪器和软件的使用，提供公用的试剂（如酶）等，并对学生的每一步实验结果进行评价和把关。
生物化学与分子生物学实验指导书-方成.
实验五：血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（验证性；4学时）【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。
3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。
【实验原理】1．聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶，由丙烯酰胺（Acrylamide简写为Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，N¹-methylene-bisacrylamide，简写Bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）的作用下，聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链，相邻的两个链通过甲叉桥交联形成就具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。
为了加速聚合，在合成凝胶时还加入四甲基乙二胺作为加速剂。
聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。
用它作电泳支持物，对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少，也与分子大小有关。
凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。
一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%，此浓度称为标准凝胶浓度。
如果改变总胶浓度，也应相应改变Acr和Bis的比例。
2．不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值，孔径大小是否相同等，可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。
连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同，不连续系统则不同。
不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。
把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。
上层为样品胶，中间为浓缩胶，这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶，应用Tris-HCl 缓冲液，其pH6.7。
下层是分离胶，此层凝胶总浓度为7.5%，是小孔胶，也用Tris-HCl缓冲液，pH8.9。
上下电泳槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3。
由于凝胶的孔径和缓冲液的pH值不同，产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，使电泳的灵敏度、分辨率提高。
（1）浓缩效应：无论哪种电泳方式，要想得到良好的分离效果，电泳开始前必须使样品中各种成分同处于同一起跑线上。
生物化学与分子生物学教案
生物化学与分子生物学教案标题：生物化学与分子生物学教案一、课程简介生物化学和分子生物学是生命科学领域的重要学科，它们从分子水平研究生命的现象和本质。
本教案旨在帮助学生理解生物化学和分子生物学的概念、技术和方法，掌握生命体系内化学反应的原理和机制。
二、课程目标1、理解生物化学和分子生物学的基本概念，掌握生命体系内的重要化学反应。
2、理解基因、蛋白质等生物大分子的结构与功能，掌握基因表达的调控机制。
3、掌握生物大分子的分离、分析、鉴定技术，了解生物学研究的实验设计和方法。
4、培养学生的科学素养，提高其分析问题、解决问题的能力。
三、课程内容1、生物化学基础：介绍生命体系内的化学反应、能量转换、物质代谢等基本概念和过程。
2、分子生物学：介绍基因、DNA、RNA、蛋白质的结构与功能，基因表达的调控机制等。
3、生物大分子的分离与分析：介绍生物大分子的分离、纯化、分析、鉴定技术，如蛋白质分离纯化、氨基酸序列分析、DNA测序等。
4、实验技术：介绍生物化学和分子生物学实验的基本技术和方法，如基因克隆、DNA重组、基因敲除等。
5、实验设计：培养学生根据研究问题设计实验、分析实验结果的能力。
四、教学方法1、课堂讲解：教师讲解基本概念、理论和实验技术。
2、案例分析：通过具体案例分析，帮助学生理解生物化学和分子生物学的应用。
3、实验室实践：学生在教师指导下进行实验操作，掌握实验技能。
4、小组讨论：学生分组讨论，培养团队协作和沟通能力。
5、问题解答：鼓励学生提问，教师解答学生的疑问。
五、评估方式1、课堂表现：学生的课堂参与度、小组讨论表现等。
2、作业：学生完成课后作业，检验学习成果。
3、实验报告：学生在实验后提交实验报告，包括实验目的、过程、结果和分析。
4、期末考试：全面考察学生对课程内容的掌握情况。
六、教学资源1、教材：选用优秀的生物化学和分子生物学教材，如《生物化学原理》、《分子生物学》等。
2、参考书：推荐相关领域的参考书，帮助学生深入学习。
生物化学与分子生物学实验指导
生物化学与分子生物学实验技术湖南农业大学植物科学实验教学中心2007年4月生物秀—专心做生物！ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ易生物－领先的生物医药商务平台ｗｗｗ．ｅｂｉｏｅ．ｃｏｍ生物秀论坛－学术交流，资源共享，互助社区ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ／ｂｂｓ／目录实验一植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） (3)实验二醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验三水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定 (8)实验四水稻萌发及幼苗期淀粉酶和过氧化氢酶活性测定 (14)实验五植物组织中氨基转移反应及氨基酸的层析分离 (19)实验六不同作物不同发育时期过氧化物酶同工酶的比较分析 (21)实验七用SDS―聚丙烯酰凝胶电泳法测定蛋白质的分子量 (24)实验八植物基因组DNA的提取及含量纯度检测 (27)实验一植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：HO—CH—CH—OH CH—CH| | 浓H2SO4 || ||H—CH CH—CHO CH C—CHO + 3H2O| | △戊糖糠醛HO—CH—CH—OH CH—CH| | 浓H2SO4 || ||HO—CH2—CH CH—CHO HO— CH2—C C—CHO + 3H2O | | △OH OH O已糖羟甲基糠醛糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。
此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。
三、实验材料、仪器及试剂1．材料：白菜叶、柑桔2．仪器：分光光度计恒温水箱 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗 100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
分子生物学实验指导
实验一、动、植物组织总RNA的提取一、材料、试剂和仪器材料：动物组织，一次性塑料手套，200 μl、1000 μl吸头。
试剂：TRIzol总RNA提取试剂，氯仿，异丙醇，0.1％DEPC，75％乙醇（用RNase-free 水配制），RNase-free水。
仪器：烘箱，超低温冰箱，高速冷冻离心机，普通离心机，高压灭菌锅，微量取样器，研钵二、提取操作步骤1、匀浆处理：a、动物组织：以鼠肝脏RNA提取为例。
取新鲜或-70'C冻存组织，大约10-30 mg组织加1m1 TRIquick，用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
b、单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIquick裂解细胞，每10cm2面积加1ml TRIquick。
用取样器吹打混匀。
c、细胞悬液：离心收集细胞。
每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1 ml TRIquick。
d、血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，8，000-10，000 rpm离心1分钟。
彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。
每100-200 μl 血液收集的白细胞沉淀加入1 ml TRIquick。
2、将匀浆样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
如不连续进行实验，加入TRIquick的匀浆样品可在－70'C下保存1-2个月。
3、可选步骤：4℃12，000 rpm离心5-10分钟，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4、每使用1ml TRIquick向匀浆样品中加0.2 ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟，使其自然分相。
如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟代替。
5、4℃12，000 rpm离心10-15分钟。
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生化与分子生物学实验指导-（)————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ实验一 氨基酸纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析法(ｐａp ｅｒ c ｈro ｍａt ｏgr ａphy ）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。
纸层析法又称纸色谱法,是用滤纸为支持物,所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成,滤纸纤维与水的亲和力强,与有机溶剂的亲和力弱,因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相,有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的,称上行法；由上向下移动的,称下行法。
将样品点在滤纸上(此点称为原点),进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
由于它们的分配系数不同,不同氨基酸随流动相移动的速率就不同,于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf 值表示：在一定条件下某种物质的Ｒf 值是常数。
Ｒf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
只要条件(如温度、展层溶剂的组成）不变,Rf 值是常数,故可根据Ｒf 值作定性判断。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R ｆ值相同或相近,此时如只用一种溶剂展层,就不能将它们分开。
为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度,再用另一溶剂展层,从而达到分离目的,这种方法称为双向纸层析法。
氨基酸无色,可利用茚三酮显色反应,将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生(亮)黄色物质。
三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号)、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。
R ｆ=原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离2试剂(1)氨基酸溶液:赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液(各组分浓度0．5％)。
(2)展层剂：V[正丁醇（A．R.)］:Ｖ(80%甲酸):V（水）=15:3:2(3)显色剂:0．5g茚三酮溶于１00ｍＬ无水丙酮,贮存于棕色瓶中备用。
四、实验方法1.滤纸准备:选用新华1号滤纸，裁成5cm×2０cｍ的长方形,在距纸一端２cm处用铅笔轻轻划一基线,在线上每隔１cm作一记号，标出4个原点。
2.点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点（用量10~20uＬ），用吹风机稍加吹干后再点下一次，重复2～3次,点子直径不能超过３mｍ。
3.展层:将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸内盖展层缸进行展层，展层剂液面不能淹没原点基线,当溶剂上升至１5~20cm时,取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿线,把滤纸烘干。
4.显色:用喷雾器在滤纸上均匀喷上显色剂，用热风吹干，层析斑点即可显现。
5.结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状,并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离,计算各色斑的Rf 值，与标准氨基酸的Ｒf 值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。
五、实验结果及分析六、思考题影响氨基酸Ｒf值的因素有哪些?实验二甲醛滴定法测定氨基氮一、实验目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
二、实验原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：ﻩ－NＨ3是弱酸,完全解离时PH为１１-12或更高,若用碱滴定－NH3所释放的Ｈ＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10,很难准确指示滴定终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合,生成羟甲基化合物,使上述平衡右移,促使－NＨ3释放H+，使溶液的酸度增加,滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH９．0左右）。
因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
如样品为一种已知的氨基酸,从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。
如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液,则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。
但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度,随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时,表明水解作用已完全。
三、器材及试剂1.实验器材25ml锥形瓶;3mｌ微量滴定管;吸管；研钵。
2．实验试剂(１)3０0ml 0.05moｌ/Ｌ标准甘氨酸溶液准确称取３75mg 甘氨酸,溶解后定容至100ｍl。
（2)５00ml 0．02mｏl/L标准氢氧化钠溶液(3)20mｌ酚酞指示剂0.5％酚酞的5０％乙醇溶液。
(４）400ml中性甲醛溶液在50ｍl３6－３７％分析纯甲醛溶液中加入１mｌ０.5%酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
四、实验方法1、取３个２5 ml的锥形瓶，编号。
向１、2号瓶内各加入0.０5mol/L标准甘氨酸溶液2mｌ和水5ml，混匀。
向３号瓶内加入7 ml水。
然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂,混匀后各加2 ｍｌ甲醛溶液再混匀，分别用0．0２mｏｌ/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验两次,记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。
取平均值,计算甘氨酸氨基氮的回收率。
2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml,依上述方法进行测定,平行做几份,取平均值。
计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。
五、结果处理1.回收率计算：甘氨酸氨基氮回收率%= 实际测得量×100 加入理论量公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度,再乘以14.008。
2.氨基氮计算:氨基氮（毫克/毫升)= （V未－V对）×ＮNａOH×14．0082公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。
Ｖ对为滴定对照液(3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。
NＮａOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。
六、思考题为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—NH3+基上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？实验三蒽酮比色定糖法一．实验目的:１．学习分光光度法的基本原理2．学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法二．实验原理1．分光光度法基本原理:溶液中的物质在光的照射激发下,产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律。
2.朗伯-比尔定律Ａ＝ｌｇ(1/T）=ＫbcA：为吸光度,T:为透射比,是透射光强度比上入射光强度c:为吸光物质的浓度b：为吸收层厚度K：比例常数３．物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,起其吸光度A与吸光物质的浓度ｃ及吸收层厚度ｂ成正比。
4.蒽酮比色法蒽铜比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色,在6２0nm处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。
当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
对于特定的糖类，反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量,亦可用于测定葡萄糖含量。
三.实验试剂（1)蒽酮试剂:取0.２ｇ蒽酮溶于100ｍL 8０%(V/V）硫酸中,当日配制使用;(２)标准葡萄糖溶液(0.1mg/ｍL)：(可滴加几滴甲苯作防腐剂);（3）糖样品溶液。
四.实验步骤1．制作标准曲线:取干试管6支，依次加入标准糖溶液0，0．2，０.4,0．6，０.8,１．0 ml,并依次用蒸馏水补足体积到1mL,各管均加入蒽酮试剂4mＬ,沸水浴准确煮沸10min，室温放置10mｉn,用1号试管溶液调零，比色测定A620。
用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标,制作标准曲线。
管号ﻫ1＃2＃3#4#5#6#７#标准葡萄糖溶液(ml)０0.20.４0.60.8１．0蒸馏水(ml)１．00.８０.60.４0.20样品液／///／／ 1.02.样品含糖量测定:无蛋白糖溶液样品溶液稀释100倍，吸取1mL 置试管中，再加入４mL 蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量（ｍg/ml ）。
五、实验结果1.制作标准曲线2.计算样品中糖浓度六、思考题H ２S Ｏ4在实验中起什么作用？酪蛋白的制备一、实验目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为３5g ／Ｌ。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电(ml)置冰水浴中冷却5ｍin蒽酮试剂(m ｌ)4.０４．04.04.０4．0４.０4.0沸水浴中准确加热10min,取出,用自来水冷却，室温放置１0min A620nm糖溶液浓度(mg/ｍｌ)0 ０．０2 0.04 0．06 ０.08 0.１0 待测点为4．7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与仪器１. 材料新鲜牛奶2.试剂（1）．95％乙醇1200ｍL（2）无水乙醚１200ｍＬ（3）0．2mol/L pH4．７醋酸—醋酸钠缓冲液300ｍl先配A液与B液Ａ液:0．2mol／L醋酸钠溶液称NaＡC·3H2O ５4.44g，定容至2０00ml。
B液：0.2mｏl/L醋酸溶液,称优纯醋酸(含量大于９9.8％）12.0g定容至1０00mｌ。
取Ａ液1770mｌ,Ｂ液１230mｌ混合即得Ｐh4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
（4）乙醇—乙醚混合液乙醇：乙醚=1 ：１(V/Ｖ)3.仪器离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、操作步骤1.酪蛋白的粗提100ｍL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4．７的醋酸缓冲液100mL．用精密ｐH试纸或酸度计调ｐH至４．7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心1５分钟（3000 r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
2.酪蛋白的纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟(3000r/ｍin)，弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mＬ乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀２次，抽干。
（3）将沉淀摊开在表面上，风干;得酪蛋白纯品。
3.准确称重,计算含量和得率。
含量：酪蛋白ｇ/100 mＬ牛乳(ｇ%)式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、实验结果及分析六、思考题１、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么?考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量一、实验目的1.掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法2.熟练分光光度计的使用和操作方法。