血管生成实验步骤-实验方法完善版
血管生成实验步骤实验方法完善版
无论原发性肿瘤还就是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成。
这就是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展与扩散转移。
于就是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且适合研究药物对这一过程的影响实验。
图一血管生成镜检图一、实验材料与实验方法1、实验材料2、实验方法:2、1实验流程介绍图二实验流程图(提前将Matrigel融化,铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中,待胶凝后,将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中,成管后使用显微镜观察。
)2、2耗材结构介绍图三血管生成载玻片纵截面示意图(Matrigel铺在下孔,细胞铺在Matrigel上,上孔充满培养基)2、3数据分析流程介绍图四实验结果收集与分析流程图(在特定的时间点采集图片,并且进行图像分析(Wimasis全自动分析)测量小管长度,成环数,细胞覆盖面积与结点。
之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。
)一、实验步骤1、准备基质胶1、实验前一天将Matrigel置于冰盒中,放入4。
C冰箱,使胶能过夜缓慢融化。
(注意:同样要准备一些4。
C预冷的枪头用于吸取Matrigel)2、开始实验前,将Matrigel始终保持放在冰盒中。
3、打开灭菌包装,取出ibidi血管生成载玻片。
4、每孔中加入10μl Matrigel。
注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
由于Matrigel流动性不强,并且有可能移液枪不准确,有可能打入10μl的胶,却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样,必然会影响到实验的成像结果。
如何判断就是否加入了合适体积的Matrigel:我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示,垂直透过每个孔瞧下面的格子纸,如果格子被缩小了,那么就说明胶没加满,格子被放大了,那么胶就加多了,格子没发生什么变形,这才就是刚刚加满下孔的状态。
观察血管结构实验报告
一、实验目的1. 了解血管的基本结构；2. 掌握血管的分布特点；3. 分析血管的功能及其与结构的关系。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：人体血管切片、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子等；2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、解剖刀、解剖剪、解剖镊等。
三、实验方法1. 将血管切片置于载玻片上，用滴管滴加适量的生理盐水，覆盖盖玻片；2. 将载玻片置于显微镜下，观察血管的结构特点；3. 分析血管的分布特点、功能及其与结构的关系。
四、实验结果与分析1. 动脉（1）结构特点：动脉管壁较厚，由内向外分为内膜、中层、外膜三层。
内膜由内皮细胞构成，中层为平滑肌层，外膜为结缔组织层；（2）分布特点：动脉分布广泛，从心脏出发，分支成各级动脉，直至毛细血管；（3）功能：将心脏的血液输送到全身各部位，保证各组织器官的血液供应。
2. 静脉（1）结构特点：静脉管壁较薄，由内向外分为内膜、中层、外膜三层。
内膜由内皮细胞构成，中层为平滑肌层，外膜为结缔组织层；（2）分布特点：静脉分布广泛，与动脉伴行，收集全身各部位的血液，运送回心脏；（3）功能：将全身各部位的血液送回心脏，保证血液循环的连续性。
3. 毛细血管（1）结构特点：毛细血管管壁最薄，由单层内皮细胞构成，管腔极小，只允许红细胞单行通过；（2）分布特点：毛细血管分布广泛，遍布全身各组织器官；（3）功能：进行物质交换，将氧气、营养物质输送到组织细胞，将代谢废物、二氧化碳等物质运回血液。
4. 血管功能与结构的关系血管的结构与其功能密切相关。
动脉的厚壁和弹性有利于血液的快速输送；静脉的薄壁和较大的管腔有利于血液的回收；毛细血管的细小管腔和单层细胞结构有利于物质交换。
五、实验结论通过本次实验，我们了解了血管的基本结构、分布特点以及功能。
血管的结构与其功能密切相关，共同保证了血液循环的顺利进行。
六、实验讨论1. 动脉和静脉在结构上的区别是什么？答：动脉和静脉在管壁厚度、管腔大小等方面存在差异。
血管生成实验步骤-实验方法完善版
无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。
于是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。
图一血管生成镜检图一.实验材料和实验方法1.实验材料2.实验方法：2.1实验流程介绍图二实验流程图（提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。
）2.2耗材结构介绍图三血管生成载玻片纵截面示意图（Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基）2.3数据分析流程介绍图四实验结果收集和分析流程图（在特定的时间点采集图片，并且进行图像分析（Wimasis全自动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。
之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。
）一.实验步骤1、准备基质胶1.实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。
C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。
（注意：同样要准备一些4。
C预冷的枪头用于吸取Matrigel）2.开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。
3.打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。
4.每孔中加入10μl Matrigel。
注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶，却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样，必然会影响到实验的成像结果。
如何判断是否加入了合适体积的Matrigel：我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示，垂直透过每个孔看下面的格子纸，如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满，格子被放大了，那么胶就加多了，格子没发生什么变形，这才是刚刚加满下孔的状态。
【高中生物】血管生成实验及血管生成的分期与特征
【高中生物】血管生成实验及血管生成的分期与特征血管生成与血管生成试验血管生成是肿瘤发生过程中新血管的形成。
它是指从现有毛细血管和毛细血管后小静脉衍生的新毛细血管的生长。
肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。
由于肿瘤组织这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种微血管容易发生渗漏，因此肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。
越来越多的研究表明，良性肿瘤血管生成稀少，血管生长缓慢;而大多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。
体外实验方法tubeformationassay(血管生成)Springassay（血管再生）体外血管生成实验tubeformationassay细胞在基质胶上培养形成小管和淋巴结体外血管再生实验sproutingassay血管生成的阶段和特点新形成的毛细血管由内皮细胞和外皮细胞组民，这两种细胞有形成完整的毛细血管网的能力。
在体内，伴随促分化的信号转导，血管生成按内皮细胞激活、增殖、迁徙和管腔形成过程进行。
如缺氧等影响肿瘤细甩的内源性或外源性因素促发细胞因子的释放。
静止的内皮细胞受宿主或肿甩释放的细胞因子激活(ⅰ期)，特定的细胞增殖(ⅱ期)，并沿血管生成刺激源的纤维网络移动，形成排列细胞索(ⅲ期)，最后血管芽形成管腔样结构，细胞退出细胞周期后进入静止期。
通过细胞间起粘附接触作用的细胞内小泡的交联，最终形成明确的管腔(ⅳ期)。
细胞外基质的角度减少是新生血管浸润的重要组成部分，主要通过改变蛋白质水解酶之间的平衡来实现。
细胞外基质的蛋白水解和纤维蛋白溶解是表皮细胞的两大功能。
皮肤细胞也被认为与生长因子和抑制剂的产生有关。
细胞粘附受体通过与细胞外基质粘附蛋白（如胶原蛋白和纤维连接蛋白）的相互作用进入血管细胞。
血管微细结构实验报告
一、实验目的通过观察血管微细结构，了解血管壁的组成、形态和功能，为临床诊断和治疗提供理论依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜猪心脏、猪肾脏、猪肝脏等。
2. 实验仪器：显微镜、切片机、石蜡切片、染色液、载玻片等。
三、实验方法1. 标本制备（1）取新鲜猪心脏、肾脏、肝脏等器官，置于生理盐水中清洗，去除多余组织。
（2）将清洗干净的器官固定于10%福尔马林溶液中，浸泡24小时。
（3）将固定好的器官进行石蜡包埋，切片机切片，厚度约为5μm。
2. 染色（1）将切片放入95%乙醇中脱蜡，然后依次放入100%、95%、70%乙醇中水化。
（2）将切片放入苏木精染色液中，染色10-15分钟。
（3）水洗切片，放入1%盐酸酒精分化，染色2-3分钟。
（4）水洗切片，放入氨水返蓝，染色2-3分钟。
（5）水洗切片，放入伊红染色液，染色2-3分钟。
（6）水洗切片，放入95%、100%乙醇中脱水，然后用二甲苯透明。
3. 观察（1）将切片放置于载玻片上，滴加香柏油。
（2）使用显微镜观察血管微细结构，记录所见。
四、实验结果1. 动脉动脉管壁由内膜、中膜和外膜组成。
（1）内膜：由内皮细胞、内皮下层和内弹性膜组成。
内皮细胞呈扁平状，具有抗血栓形成的作用；内皮下层由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维；内弹性膜为弹性纤维构成的网状结构。
（2）中膜：由平滑肌纤维、弹性纤维和胶原纤维组成。
平滑肌纤维排列呈环形，负责调节血管直径；弹性纤维和胶原纤维赋予血管一定的弹性和韧性。
（3）外膜：由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维，负责连接血管壁与周围组织。
2. 静脉静脉管壁由内膜、中膜和外膜组成。
（1）内膜：由内皮细胞、内皮下层和内弹性膜组成。
内皮细胞呈扁平状，具有抗血栓形成的作用；内皮下层由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维；内弹性膜为弹性纤维构成的网状结构。
（2）中膜：由平滑肌纤维、弹性纤维和胶原纤维组成。
平滑肌纤维排列呈环形，负责调节血管直径；弹性纤维和胶原纤维赋予血管一定的弹性和韧性。
小管形成实验的原理和目的及操作流程
小管形成实验的原理和目的及操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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生物观察血管实验报告
一、实验目的1. 观察和了解血管的结构和功能。
2. 掌握使用显微镜观察血管的方法。
3. 理解血管在人体中的作用及其调节机制。
二、实验原理血管是人体循环系统的重要组成部分，包括动脉、静脉和毛细血管。
动脉负责将血液从心脏输送到全身各个部位，静脉则将血液从组织器官输送回心脏。
毛细血管是动脉和静脉之间的连接部分，负责物质交换。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠或家兔。
2. 实验器材：显微镜、解剖显微镜、剪刀、镊子、解剖盘、生理盐水、载玻片、盖玻片、染色液等。
3. 实验试剂：苏木精、伊红等染色剂。
四、实验步骤1. 动物解剖：将实验动物麻醉，进行解剖，暴露心脏、动脉、静脉和毛细血管。
2. 血管分离：用剪刀和镊子分离出心脏的动脉、静脉和毛细血管。
3. 染色：将分离出的血管用生理盐水清洗，然后用苏木精染色。
4. 制片：将染色后的血管剪成薄片，放置在载玻片上，滴加适量的生理盐水，覆盖盖玻片。
5. 显微镜观察：使用显微镜观察血管的结构和功能。
五、实验结果1. 动脉：动脉管壁较厚，分为内膜、中膜和外膜。
内膜光滑，中膜富含弹性纤维和肌肉纤维，外膜较薄。
动脉内血流速度快，血液富含氧气和营养物质。
2. 静脉：静脉管壁较薄，分为内膜、中膜和外膜。
内膜光滑，中膜肌肉纤维较少，外膜较薄。
静脉内血流速度慢，血液富含二氧化碳和代谢废物。
3. 毛细血管：毛细血管管壁最薄，由一层内皮细胞组成。
毛细血管内血流速度最慢，负责物质交换。
六、实验分析1. 动脉、静脉和毛细血管在结构上存在差异，这些差异决定了它们在血液循环系统中的功能。
2. 动脉负责将血液从心脏输送到全身各个部位，静脉负责将血液从组织器官输送回心脏，毛细血管负责物质交换。
3. 血管的功能受到神经和体液的调节，以维持血液循环的正常进行。
七、实验结论通过本次实验，我们观察到了动脉、静脉和毛细血管的结构和功能，了解了血管在人体中的作用及其调节机制。
实验结果表明，血管是人体循环系统的重要组成部分，对于维持血液循环的正常进行具有重要意义。
血管形成的测定方法(
血管形成的测定方法血管形成是从已经存在的血管床中通过内皮细胞增殖和迁移,以芽生或非芽生的方式生成新生血管系统的过程，与正常的生理过程(如伤口愈合、胚胎发育等)和许多病理过程(如肿瘤的生长和转移、类风湿性关节炎、脑和心血管等疾病)密切相关[1, 2]。
血管形成中的主要细胞是内皮细胞，它存在于所有的血管上，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建构成了新的毛细血管网。
除内皮细胞在血管发生过程起重要作用外，支持细胞(如肿瘤细胞、外周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)、细胞外基质、血液细胞和体液成分也都与血管的发生有关。
因此，血管发生的测定非常复杂。
当今尚未有任何一种体外的实验方法能精确地模拟这一复杂的过程，但结合体外、体内血管形成的测定方法，可以有效地了解血管发生的作用机理。
本文介绍了当前体内外用来研究血管形成的一些基本方法和最新方法，并对这些方法的优缺点进行了深入探讨。
1 血管形成的体外测定方法体外测定血管形成的方法主要侧重于外源性抑制剂或刺激因子对内皮细胞的迁移、增殖和成管的作用。
对内皮细胞的测定，关键问题在于内皮细胞具有物种和器官的差异性。
内皮细胞表型的差异已在大血管衍生的内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞)和微血管器官的内皮细胞(如人类皮肤毛细血管内皮细胞)中被证实[3, 4]。
在培养中，内皮细胞的活化状态、染色体表型、细胞表面抗原的表达和它们的生长特性都会发生改变，将失去体内生长的一些特性[3]。
另外，在体外，内皮细胞在静止环境、动态环境、结合不同的基质的情况下，它们的特征也不同，因此它并不能完全代表体内复杂的生理过程。
尽管用内皮细胞作为模型来研究体内血管发生具有很大的局限性，但体外测定方法具有快速、易定量、可重复性高等特点。
1.1 内皮细胞增殖测定法血管内皮细胞的增殖是血管发生的重要步骤。
目前，已有多种成熟的细胞增殖测定方法，如四氮唑盐还原法等。
[3H ] 胸腺嘧啶掺入法和细胞周期动力学检测法是两种主要的细胞增殖测定方法。
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无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。
于是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。
图一血管生成镜检图
一.实验材料和实验方法
1.实验材料
2.实验方法：
2.1实验流程介绍
图二实验流程图
（提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。
）
2.2耗材结构介绍
图三血管生成载玻片纵截面示意图
（Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基）2.3数据分析流程介绍
图四实验结果收集和分析流程图
（在特定的时间点采集图片，并且进行图像分析（Wimasis全自
动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。
之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。
）
一.实验步骤
1、准备基质胶
1.实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。
C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。
（注意：同样要准备一些4。
C预冷的枪头用于吸取Matrigel）
2.开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。
3.打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。
4.每孔中加入10μl Matrigel。
注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶，却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样，必然会
影响到实验的成像结果。
如何判断是否加入了合适体积的Matrigel：
我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示，垂直透过每个孔看下面的格子纸，如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满，格子被放大了，那么胶就加多了，格子没发生什么变形，这才是刚刚加满下孔的状态。
2、凝胶
1.盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。
2.准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。
3.将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。
4.将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。
5.等待同时准备细胞悬液。
3、铺细胞
加入细胞的量直接影响实验结果，所以在正式实验开始之前，要对不同类型的细胞和使用数量进行预实验。
获得最佳比例的细胞密度。
我们今天的实验使用HUVEC细胞，每孔种10000个细胞即可。
1.准备密度为2*105cells/ml的细胞悬液，充分混匀。
2.将胶已经凝固的ibidi血管生成载玻片从湿盒中取出。
3.每孔加入50μl的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶。
可以使用排枪。
4.同样用格子纸查看是不是加了足够量的液体，如果没有，加入无细胞的培养基，使上孔液体正好加满。
5.盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在Matrigel 的表面。
4、采集图像并统计结果
可以按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度，覆盖面积，成环数，结点数进行测量和记录，并且对其进行统计分析
5、免疫荧光染色
根据需要，可以对成管结果进行免疫荧光染色。
小心的移除上孔内培养基，注意不要碰到胶或者细胞网络。
加入50μl用无血清培养基稀释的calcein (12.5 µl calcein stock 1 µg/µl)，使其终浓度为 6.25 µg/ml(1:160)。
在室温下避光孵育30分钟。
使用PBS清洗三次，注意，PBS要缓缓加入上孔，以免冲击掉细胞。
使用485 nm/ 529 nm进行免疫荧光成像。
实验优势
1.这个实验方法能节省更多基质胶，降低实验成本；
2.分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面，使成像效果更好。
图五成像对比
（左侧ibidi血管生成载玻片无凹液面，整个视野成像清晰；右侧96孔板有凹液面，中间清晰周围模糊。
）
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。