血管生成实验步骤-实验方法完善版
血管生成实验步骤实验方法完善版
无论原发性肿瘤还就是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成。
这就是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展与扩散转移。
于就是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程,并且适合研究药物对这一过程的影响实验。
图一血管生成镜检图一、实验材料与实验方法1、实验材料2、实验方法:2、1实验流程介绍图二实验流程图(提前将Matrigel融化,铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中,待胶凝后,将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中,成管后使用显微镜观察。
)2、2耗材结构介绍图三血管生成载玻片纵截面示意图(Matrigel铺在下孔,细胞铺在Matrigel上,上孔充满培养基)2、3数据分析流程介绍图四实验结果收集与分析流程图(在特定的时间点采集图片,并且进行图像分析(Wimasis全自动分析)测量小管长度,成环数,细胞覆盖面积与结点。
之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。
)一、实验步骤1、准备基质胶1、实验前一天将Matrigel置于冰盒中,放入4。
C冰箱,使胶能过夜缓慢融化。
(注意:同样要准备一些4。
C预冷的枪头用于吸取Matrigel)2、开始实验前,将Matrigel始终保持放在冰盒中。
3、打开灭菌包装,取出ibidi血管生成载玻片。
4、每孔中加入10μl Matrigel。
注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
由于Matrigel流动性不强,并且有可能移液枪不准确,有可能打入10μl的胶,却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样,必然会影响到实验的成像结果。
如何判断就是否加入了合适体积的Matrigel:我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示,垂直透过每个孔瞧下面的格子纸,如果格子被缩小了,那么就说明胶没加满,格子被放大了,那么胶就加多了,格子没发生什么变形,这才就是刚刚加满下孔的状态。
肿瘤血管生成实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景肿瘤血管生成是肿瘤生长、侵袭和转移的关键环节。
肿瘤细胞通过诱导血管生成，为自身提供充足的氧气和营养物质，同时促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。
因此，研究肿瘤血管生成的机制对于开发新型抗肿瘤药物具有重要意义。
本实验旨在探讨肿瘤血管生成的相关机制，并通过体外实验验证相关理论。
二、实验材料1. 实验细胞：人肺腺癌细胞系A549、人脐静脉内皮细胞系HMEC-1、人肺腺癌细胞系A549-PDGF（过表达PDGF的细胞系）。
2. 实验试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、内皮细胞生长因子（ECGF）、血小板源生长因子（PDGF）、血管内皮生长因子（VEGF）抗体、兔抗人血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）抗体、免疫组化试剂盒、DAB显色剂等。
3. 实验仪器：CO2培养箱、倒置显微镜、细胞培养板、电泳仪、凝胶成像系统、荧光显微镜等。
三、实验方法1. 细胞培养：将人肺腺癌细胞系A549、人脐静脉内皮细胞系HMEC-1、人肺腺癌细胞系A549-PDGF分别接种于细胞培养板，置于CO2培养箱中培养。
2. 体外血管生成实验：将HMEC-1细胞接种于Transwell小室上室，下室加入含有VEGF、PDGF或ECGF的培养基，分别培养24小时。
观察小室下室中的血管生成情况。
3. 免疫组化检测：将A549细胞和A549-PDGF细胞接种于细胞培养板，待细胞生长至一定密度后，进行免疫组化检测VEGFR2表达情况。
4. 数据分析：通过观察小室下室中的血管生成情况，以及免疫组化检测结果，分析PDGF、VEGF对肿瘤血管生成的影响。
四、实验结果1. 体外血管生成实验：在VEGF和PDGF的刺激下，HMEC-1细胞在小室下室中形成明显的血管样结构，ECGF组细胞基本无血管生成。
2. 免疫组化检测：A549细胞中VEGFR2表达水平较低，而A549-PDGF细胞中VEGFR2表达水平显著升高。
五、实验讨论1. PDGF和VEGF均能促进肿瘤血管生成。
观察血管结构实验报告
一、实验目的1. 了解血管的基本结构；2. 掌握血管的分布特点；3. 分析血管的功能及其与结构的关系。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：人体血管切片、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子等；2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、解剖刀、解剖剪、解剖镊等。
三、实验方法1. 将血管切片置于载玻片上，用滴管滴加适量的生理盐水，覆盖盖玻片；2. 将载玻片置于显微镜下，观察血管的结构特点；3. 分析血管的分布特点、功能及其与结构的关系。
四、实验结果与分析1. 动脉（1）结构特点：动脉管壁较厚，由内向外分为内膜、中层、外膜三层。
内膜由内皮细胞构成，中层为平滑肌层，外膜为结缔组织层；（2）分布特点：动脉分布广泛，从心脏出发，分支成各级动脉，直至毛细血管；（3）功能：将心脏的血液输送到全身各部位，保证各组织器官的血液供应。
2. 静脉（1）结构特点：静脉管壁较薄，由内向外分为内膜、中层、外膜三层。
内膜由内皮细胞构成，中层为平滑肌层，外膜为结缔组织层；（2）分布特点：静脉分布广泛，与动脉伴行，收集全身各部位的血液，运送回心脏；（3）功能：将全身各部位的血液送回心脏，保证血液循环的连续性。
3. 毛细血管（1）结构特点：毛细血管管壁最薄，由单层内皮细胞构成，管腔极小，只允许红细胞单行通过；（2）分布特点：毛细血管分布广泛，遍布全身各组织器官；（3）功能：进行物质交换，将氧气、营养物质输送到组织细胞，将代谢废物、二氧化碳等物质运回血液。
4. 血管功能与结构的关系血管的结构与其功能密切相关。
动脉的厚壁和弹性有利于血液的快速输送；静脉的薄壁和较大的管腔有利于血液的回收；毛细血管的细小管腔和单层细胞结构有利于物质交换。
五、实验结论通过本次实验，我们了解了血管的基本结构、分布特点以及功能。
血管的结构与其功能密切相关，共同保证了血液循环的顺利进行。
六、实验讨论1. 动脉和静脉在结构上的区别是什么？答：动脉和静脉在管壁厚度、管腔大小等方面存在差异。
毛细血管生成研究中的实验工具技术与方法研究
毛细血管生成研究中的实验工具技术与方法研究介绍毛细血管是组成人体微循环系统的重要组成部分，是维持细胞生存的重要管道之一。
毛细血管生成（Angiogenesis）是一种生理学过程，维持组织的正常发育、生长和修复，但是它在某些病理状态下也会出现。
对毛细血管生成的研究，不仅能够揭示其生物学机制，而且对于心血管疾病、肿瘤等多种疾病的治疗也有重要的意义。
因此，建立适合的毛细血管模型，掌握一系列的研究实验工具技术和方法，对于毛细血管生成的研究至关重要。
现有的实验工具技术和方法1. 观察溶血性活性物质（heme oxygenase-1, HO-1）对于血管再生的影响为了评估HO-1对血管再生的影响，一种基于大鼠背部的血管再生实验已被开发。
在该实验中，研究人员将二氧化碳（CO2）加压冷冻器（Cryopen CO2）用于通过冻结以诱导皮肤血管的损伤。
以促进血管再生，分别使用皮下注入HO-1表达载体，再次用于诱导皮肤中血管的再生。
2. 使用转基因鼠进行胃黏膜毛细血管生成的研究通过使用转基因鼠进行胃黏膜毛细血管生成的分析，多个研究小组可成功地在转基因鼠中诱导黏膜毛细血管的直径增加，即毛细血管扩张，同时也发现有更多的毛细血管形成，表明转基因鼠中的毛细血管基因已被激活。
这些实验结果有助于进一步牵引出解释饮食和其他因素对于胃部物质吸收之影响的理论，并提示在诸如胃溃疡和消化系统疾病的治疗方面将有很大进展的空间。
3. 神经网络技术在毛细血管形成中的应用神经网络技术是一种基于模拟人脑运作方式的计算机技术，适用于模拟线性和非线性的时间序列，是一种广泛应用于预测、分类和聚类数据的技术。
最近，这种技术在毛细血管生成的研究中逐渐地应用了起来。
以血管内皮生长因子（VEGF）作为主要输入因子，采用神经网络技术构建了预测毛细血管生成的模型，并对其进行了验证。
实验结果显示，引入神经网络技术可以从VEGF的角度，准确地预测毛细血管生成的情况。
结论对于毛细血管生成的研究，需要掌握多种实验工具技术和方法，以便更好地对其生物学机制进行解析。
血管观察的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解血管的结构特点。
2. 观察血管在不同生理状态下的变化。
3. 掌握显微镜观察血管的方法。
二、实验原理血管是人体重要的循环系统组成部分，主要包括动脉、静脉和毛细血管。
动脉将血液从心脏输送到全身各组织器官，静脉将血液从组织器官输送回心脏，毛细血管则是血液与组织细胞进行物质交换的场所。
通过观察血管，可以了解其结构特点和生理功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：家兔心脏、兔耳、显微镜、载玻片、盖玻片、生理盐水、解剖刀、剪刀、镊子、滴管等。
2. 仪器：显微镜、解剖台、手术显微镜等。
四、实验步骤1. 家兔处死，解剖出心脏，将心脏放入生理盐水中，用剪刀剪开心脏，暴露心脏的四个腔室。
2. 将心脏置于解剖台上，用解剖刀小心剪开心脏的左侧和右侧心室，观察心脏的四个腔室及其内部结构。
3. 将心脏的左侧心室和右侧心室分别剪成小块，用生理盐水冲洗干净。
4. 取载玻片，滴加少量生理盐水，将心脏小块放置在载玻片上，用盖玻片覆盖。
5. 将载玻片置于显微镜下，观察心脏的血管结构。
6. 观察心脏的动脉、静脉和毛细血管，注意其分布、形态和颜色。
7. 改变显微镜的放大倍数，进一步观察血管的细节结构。
8. 记录观察结果。
五、实验结果1. 心脏的四个腔室分别为左心房、左心室、右心房和右心室。
2. 动脉壁较厚，静脉壁较薄，毛细血管壁最薄。
3. 动脉和静脉在心脏内部呈网状分布，毛细血管则深入组织细胞之间。
4. 动脉血管呈鲜红色，静脉血管呈暗红色，毛细血管呈半透明状。
六、实验讨论1. 通过观察心脏的血管结构，可以了解到动脉、静脉和毛细血管在心脏内的分布特点。
2. 动脉和静脉的形态和颜色差异，反映了它们在血液流动中的不同作用。
3. 毛细血管壁最薄，有利于物质交换，是血液循环的重要组成部分。
七、实验结论通过本次实验，我们成功地观察到了家兔心脏的血管结构，了解了血管在心脏内的分布特点及其在血液循环中的作用。
实验结果表明，血管是人体循环系统的重要组成部分，具有维持血液循环、保证组织细胞氧气和营养物质供应的重要功能。
血管微细结构实验报告
一、实验目的通过观察血管微细结构，了解血管壁的组成、形态和功能，为临床诊断和治疗提供理论依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜猪心脏、猪肾脏、猪肝脏等。
2. 实验仪器：显微镜、切片机、石蜡切片、染色液、载玻片等。
三、实验方法1. 标本制备（1）取新鲜猪心脏、肾脏、肝脏等器官，置于生理盐水中清洗，去除多余组织。
（2）将清洗干净的器官固定于10%福尔马林溶液中，浸泡24小时。
（3）将固定好的器官进行石蜡包埋，切片机切片，厚度约为5μm。
2. 染色（1）将切片放入95%乙醇中脱蜡，然后依次放入100%、95%、70%乙醇中水化。
（2）将切片放入苏木精染色液中，染色10-15分钟。
（3）水洗切片，放入1%盐酸酒精分化，染色2-3分钟。
（4）水洗切片，放入氨水返蓝，染色2-3分钟。
（5）水洗切片，放入伊红染色液，染色2-3分钟。
（6）水洗切片，放入95%、100%乙醇中脱水，然后用二甲苯透明。
3. 观察（1）将切片放置于载玻片上，滴加香柏油。
（2）使用显微镜观察血管微细结构，记录所见。
四、实验结果1. 动脉动脉管壁由内膜、中膜和外膜组成。
（1）内膜：由内皮细胞、内皮下层和内弹性膜组成。
内皮细胞呈扁平状，具有抗血栓形成的作用；内皮下层由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维；内弹性膜为弹性纤维构成的网状结构。
（2）中膜：由平滑肌纤维、弹性纤维和胶原纤维组成。
平滑肌纤维排列呈环形，负责调节血管直径；弹性纤维和胶原纤维赋予血管一定的弹性和韧性。
（3）外膜：由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维，负责连接血管壁与周围组织。
2. 静脉静脉管壁由内膜、中膜和外膜组成。
（1）内膜：由内皮细胞、内皮下层和内弹性膜组成。
内皮细胞呈扁平状，具有抗血栓形成的作用；内皮下层由结缔组织构成，含有丰富的胶原纤维和弹性纤维；内弹性膜为弹性纤维构成的网状结构。
（2）中膜：由平滑肌纤维、弹性纤维和胶原纤维组成。
平滑肌纤维排列呈环形，负责调节血管直径；弹性纤维和胶原纤维赋予血管一定的弹性和韧性。
内皮实验报告
实验目的：本研究旨在通过体外实验，探讨内皮细胞在不同条件下的生物学特性，包括细胞增殖、凋亡、迁移和血管生成能力，以期为内皮细胞在疾病发生发展中的作用提供实验依据。
实验材料：1. 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）2. DMEM培养基（高糖）3. 胎牛血清（FBS）4. 0.25%胰蛋白酶5. 细胞培养箱6. 倒置显微镜7. 流式细胞仪8. 实验试剂（如Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、血管内皮生长因子（VEGF）检测试剂盒等）实验方法：一、细胞培养与鉴定1. 将HUVECs接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 每2-3天更换一次培养基。
3. 利用免疫荧光染色法鉴定内皮细胞，观察细胞形态和内皮细胞标记物（如VE-cadherin）的表达。
二、细胞增殖实验1. 将细胞分为实验组和对照组。
2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。
3. 在不同时间点收集细胞，利用CCK-8法检测细胞增殖情况。
三、细胞凋亡实验1. 将细胞分为实验组和对照组。
2. 实验组给予不同浓度的肿瘤坏死因子α（TNF-α）处理，对照组给予等量DMEM 培养基。
3. 利用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡情况。
四、细胞迁移实验1. 将细胞分为实验组和对照组。
2. 实验组给予不同浓度的细胞外基质（ECM）蛋白处理，对照组给予等量DMEM培养基。
3. 利用Transwell小室检测细胞迁移能力。
五、血管生成实验1. 将细胞分为实验组和对照组。
2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。
3. 利用血管生成实验试剂盒检测细胞血管生成能力。
实验结果：一、细胞培养与鉴定成功培养出HUVECs，细胞形态为长梭形，细胞表面表达VE-cadherin。
二、细胞增殖实验VEGF处理组细胞增殖能力明显增强，与对照组相比，增殖率显著提高。
三、细胞凋亡实验TNF-α处理组细胞凋亡率显著升高，与对照组相比，凋亡率显著增加。
血管形成的测定方法(
血管形成的测定方法血管形成是从已经存在的血管床中通过内皮细胞增殖和迁移,以芽生或非芽生的方式生成新生血管系统的过程，与正常的生理过程(如伤口愈合、胚胎发育等)和许多病理过程(如肿瘤的生长和转移、类风湿性关节炎、脑和心血管等疾病)密切相关[1, 2]。
血管形成中的主要细胞是内皮细胞，它存在于所有的血管上，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建构成了新的毛细血管网。
除内皮细胞在血管发生过程起重要作用外，支持细胞(如肿瘤细胞、外周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞)、细胞外基质、血液细胞和体液成分也都与血管的发生有关。
因此，血管发生的测定非常复杂。
当今尚未有任何一种体外的实验方法能精确地模拟这一复杂的过程，但结合体外、体内血管形成的测定方法，可以有效地了解血管发生的作用机理。
本文介绍了当前体内外用来研究血管形成的一些基本方法和最新方法，并对这些方法的优缺点进行了深入探讨。
1 血管形成的体外测定方法体外测定血管形成的方法主要侧重于外源性抑制剂或刺激因子对内皮细胞的迁移、增殖和成管的作用。
对内皮细胞的测定，关键问题在于内皮细胞具有物种和器官的差异性。
内皮细胞表型的差异已在大血管衍生的内皮细胞(如人脐静脉内皮细胞)和微血管器官的内皮细胞(如人类皮肤毛细血管内皮细胞)中被证实[3, 4]。
在培养中，内皮细胞的活化状态、染色体表型、细胞表面抗原的表达和它们的生长特性都会发生改变，将失去体内生长的一些特性[3]。
另外，在体外，内皮细胞在静止环境、动态环境、结合不同的基质的情况下，它们的特征也不同，因此它并不能完全代表体内复杂的生理过程。
尽管用内皮细胞作为模型来研究体内血管发生具有很大的局限性，但体外测定方法具有快速、易定量、可重复性高等特点。
1.1 内皮细胞增殖测定法血管内皮细胞的增殖是血管发生的重要步骤。
目前，已有多种成熟的细胞增殖测定方法，如四氮唑盐还原法等。
[3H ] 胸腺嘧啶掺入法和细胞周期动力学检测法是两种主要的细胞增殖测定方法。
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无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。
因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。
于是体外的血管生成实验就能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。
图一血管生成镜检图
一.实验材料和实验方法
1.实验材料
2.实验方法：
2.1实验流程介绍
图二实验流程图
（提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。
）
2.2耗材结构介绍
图三血管生成载玻片纵截面示意图
（Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基）
2.3数据分析流程介绍
图四实验结果收集和分析流程图
（在特定的时间点采集图片，并且进行图像分析（Wimasis全自动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。
之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。
）
一.实验步骤
1、准备基质胶
1.实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。
C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。
（注意：同样要准备一些4。
C预冷的枪头用于吸取Matrigel）
2.开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。
3.打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。
4.每孔中加入10μl Matrigel。
注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶，却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样，必然会影响到实验的成像结果。
如何判断是否加入了合适体积的Matrigel：
我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示，垂直透过每个孔看下面的格子纸，如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满，格子被放大了，那么胶就加多了，格子没发生什么变形，这才是刚刚加满下孔的状态。
2、凝胶
1.盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。
2.准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。
3.将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。
4.将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。
5.等待同时准备细胞悬液。
3、铺细胞
加入细胞的量直接影响实验结果，所以在正式实验开始之前，要对不同类型的细胞和使用数量进行预实验。
获得最佳比例的细胞密度。
我们今天的实验使用HUVEC细胞，每孔种10000个细胞即可。
1.准备密度为2*105cells/ml的细胞悬液，充分混匀。
2.将胶已经凝固的ibidi血管生成载玻片从湿盒中取出。
3.每孔加入50μl的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶。
可以使用排枪。
4.同样用格子纸查看是不是加了足够量的液体，如果没有，加入无细胞的培养基，使上孔液体正好加满。
5.盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在Matrigel的表面。
4、采集图像并统计结果
可以按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度，覆盖面积，成环数，结点数进行测量和记录，并且对其进行统计分析
5、免疫荧光染色
根据需要，可以对成管结果进行免疫荧光染色。
小心的移除上孔内培养基，注意不要碰到胶或者细胞网络。
加入50μl用无血清培养基稀释的calcein (12.5 µl calcein stock 1 µg/µl)，使其终浓度
为 6.25 µg/ml (1:160)。
在室温下避光孵育30分钟。
使用PBS清洗三次，注意，PBS要缓缓加入上孔，以免冲击掉细胞。
使用 485 nm/ 529 nm进行免疫荧光成像。
实验优势
1.这个实验方法能节省更多基质胶，降低实验成本；
2.分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面，使成像效果更好。
图五成像对比
（左侧ibidi血管生成载玻片无凹液面，整个视野成像清晰；右侧96孔板有凹液面，中间清晰周围模糊。
）
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