鸡蛋暗斑的研究进展
鸡蛋暗斑对蛋品质及抗氧化能力的影响
鸡蛋暗斑对蛋品质及抗氧化能力的影响董复成;李建慧;苏蕊;张雪;张可可;秦鑫;陈晨;王文玲;曹靖【摘要】[目的]研究鸡蛋暗斑对蛋品质及其抗氧化能力的影响.[方法]从饲喂同种日粮、饲养环境相同、同日龄褐壳蛋鸡同一批次所产的褐壳蛋中,用灯光照射法挑选出24枚典型正常蛋、24枚典型暗斑蛋进行试验,并分别对正常蛋和暗斑蛋进行蛋品质、蛋黄抗氧化指标的测定及比较.[结果]蛋品质比较:暗斑蛋与正常蛋相比,其蛋形指数、蛋壳强度、蛋重、哈氏单位、蛋白高度、鸡蛋等级、蛋黄颜色、蛋黄重、蛋壳重、蛋清重、蛋壳厚度、蛋黄比重、蛋壳比重、蛋清比重均差异不显著(P>0.05);暗斑蛋蛋壳颜色极显著深于正常蛋(P<0.01).抗氧化指标比较:暗斑蛋蛋黄的总抗氧化能力(T-AOC)显著低于正常蛋蛋黄的总抗氧化能力(P<0.05),暗斑蛋蛋黄的丙二醛(MDA)含量与正常蛋蛋黄的丙二醛含量相比差异不显著(P>0.05).[结论]与正常蛋相比,暗斑蛋的蛋壳颜色较深,总抗氧化能力较差.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2018(039)007【总页数】4页(P19-22)【关键词】鸡蛋暗斑;蛋品质;抗氧化能力【作者】董复成;李建慧;苏蕊;张雪;张可可;秦鑫;陈晨;王文玲;曹靖【作者单位】山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京 102442【正文语种】中文【中图分类】S831;TS253.7随着生活水平的提高，人们对于食品安全问题也越来越关注。
正常蛋与暗斑蛋的品质和蛋壳超微结构差异分析
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
正常蛋与暗斑蛋的品质和蛋壳超微结构差异分析
高金波，韩海霞，周艳，刘玮，刘杰，曹顶国，李福伟，雷秋霞
第 ８期 高金波，等：正常蛋与暗斑蛋的品质和蛋壳超微结构差异分析
１１３
５％的损 耗 率［１］。２０１８年，商 品 蛋 鸡 饲 养 总 收 益 约 ２９７．１３亿元。蛋鸡产业已经成为我国农业发 展的支柱产业，因此改善蛋品质、提高蛋壳质量对 于保障食品安全、推动蛋鸡产业发展具有重要意 义。
（山东省农业科学院家禽研究所 ／山东省家禽育种工程技术研究中心 ／山东省家禽疫病诊断 与免疫重点实验室，山东 济南 ２５００２３）
摘要：本研究旨在探明正常蛋与暗斑蛋的蛋品质和蛋壳超微结构方面的差异。以寿光鸡为研究对象，收 集正常蛋和暗斑蛋各 ６０枚，统计蛋品质和蛋壳超微结构等数据。研究结果显示，暗斑蛋的哈氏单位、蛋白高 度极显著低于正常蛋（Ｐ＜０．０１），蛋重显著高于正常蛋（Ｐ＜０．０５），蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋壳比率高于正常 蛋，但差 异 不 显 著 （Ｐ＞ ０．０５），蛋 形 指 数、蛋 黄 比 率 和 蛋 黄 颜 色 和 正 常 蛋 几 乎 没 有 差 异；暗 斑 蛋 的 乳 突 层 厚 度、有效层厚度显著高于正常蛋（Ｐ＜０．０５）。结果表明暗斑蛋与正常蛋在蛋品质和蛋壳超微结构方面存在 差异。
ＧａｏＪｉｎｂｏ，ＨａｎＨａｉｘｉａ，ＺｈｏｕＹａｎ，ＬｉｕＷｅｉ，ＬｉｕＪｉｅ，ＣａｏＤｉｎｇｇｕｏ，ＬｉＦｕｗｅｉ，ＬｅｉＱｉｕｘｉａ
（ＰｏｕｌｔｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ／ＰｏｕｌｔｒｙＢｒｅｅｄｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒｏｆ ＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ／ＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｏｕｌｔｒｙＤｉｓｅａｓｅｓＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｎａｎ２５００２３，Ｃｈｉｎａ）
鸡蛋暗斑的研究进展
鸡蛋暗斑的研究进展随着人们对鸡蛋营养价值的认识不断深入，鸡蛋的质量问题日益引起关注。
其中，鸡蛋暗斑是一种常见的质量问题，不仅会影响鸡蛋的美观度，还可能影响其食用安全和营养品质。
本文就针对鸡蛋暗斑的研究进展进行概述。
1. 鸡蛋暗斑的形成原因鸡蛋暗斑即为蛋壳表面出现的不规则、深浅不一的斑块，有时汇聚成斑点状。
据研究，鸡蛋暗斑的形成原因主要有以下几个方面：（1）饵料中添加褐垩质：褐垩质是一种天然有机酸，其在鸡蛋内部代谢后会形成酸性物质，使得鸡蛋清中的溶解物质发生沉淀和氧化，导致鸡蛋形成暗斑。
（2）饵料中添加大豆异黄酮：食用大豆等植物中含有的异黄酮类化合物，能够通过血液循环到达卵巢，干扰卵泡的发育和蛋泡的成熟，从而导致鸡蛋形成暗斑。
（3）运输和储存条件不佳：鸡蛋在运输和储存过程中，受到挤压、震荡、温度变化等因素的影响，会导致蛋壳表面形成暗斑。
2. 鸡蛋暗斑的危害及防治措施鸡蛋暗斑除了影响鸡蛋的美观度外，在食用安全和营养品质方面也有一定的影响。
饲料中添加的褐垩质和大豆异黄酮类化合物，会影响鸡蛋中其他营养物质的吸收和利用，从而降低鸡蛋的营养价值。
此外，鸡蛋暗斑也可能会隐藏着其他的食品安全问题，如寄生虫或细菌的污染。
因此，防治鸡蛋暗斑尤为重要。
一些防治措施如下：（1）改善饲料：合理添加抗氧化剂、抑菌剂和其他营养因素等，可以降低饲料中的褐垩质含量，有效减少鸡蛋暗斑的发生。
（2）改善鸡舍环境：保持鸡舍的干净整洁，充足通风，有利于鸡蛋的质量和安全。
3. 鸡蛋暗斑的检测方法针对鸡蛋暗斑的检测，目前常用的方法主要包括目视检测法、图像处理技术和非接触式光学传感器检测法等。
其中，目视检测法简单易行，但结果不够准确；图像处理技术可以将图像数字化、增强对比度等，提高检测的准确性和速度；非接触式光学传感器检测法可以快速、精准地检测鸡蛋表面的暗斑。
4. 结语综上所述，鸡蛋暗斑的研究已经取得了不少进展，但是，其产生机制尚不十分清晰，对其影响机制和防治措施的研究仍有待深入。
鸡蛋暗斑的研究进展
鸡蛋暗斑的研究进展鸡蛋暗斑是鸡蛋表面出现的一种不均匀雷纹和暗斑，其主要成因是鸡蛋长时间放置在热、潮、气密度不稳定的环境中，导致鸡蛋内的水分挥发，气隙内压力改变，所产生的蒸气在化学反应催化下形成的结果。
这种暗斑对鸡蛋的品质和营养价值都产生了一定的影响，并给鸡蛋市场销售带来了一定的困难。
近年来，科学家们开展了广泛的研究，试图探究鸡蛋暗斑的成因和预防措施。
1. 鸡蛋暗斑的成因(1) 水分和气密度不稳定：鸡蛋内的水分和气密度的不稳定是鸡蛋暗斑形成的主要成因。
持续高温或低温环境会导致鸡蛋内部压力改变，蒸气压力会增加或减少，这就可以为色素沉淀和色素聚集反应提供条件。
(2) 氧化反应：鸡蛋表面出现暗斑还可能是由于氧化反应引起的。
氧化反应主要是指鸡蛋表面的脂质物质被氧化，这也会导致鸡蛋蛋白变质，并进一步诱发蛋黄和蛋白质的反应，形成较大的暗斑面积。
(3) 细菌污染：细菌污染是引起鸡蛋暗斑的另一个重要原因。
鸡蛋表面受到污染后，细菌如Salmonella typhimurium就会产生鸡蛋表面沉积物质，其颜色会变成不同的色调，逐渐形成暗斑。
(1) 控制环境：由于水分和气密度的不稳定是鸡蛋暗斑形成的主要原因，环境控制非常重要。
保持存储鸡蛋的温度和湿度稳定，避免长时间（特别是在高温和潮湿的环境）贮存。
(2) 消除氧气：氧气是引起鸡蛋蛋白和蛋黄氧化的主要原因，因此消除氧气是预防鸡蛋暗斑的重要手段之一。
利用低氧气技术，可以减少氧气与蛋黄和蛋白反应，从而减缓鸡蛋暗斑的形成。
(3) 紫外线处理：紫外线能硬化鸡蛋表面的蛋壳对气体的渗透性，抑制蛋白化学反应进一步发生。
紫外线作用的时间应该控制在5分钟以内，过长的时间反而会加速鸡蛋暗斑的形成。
鸡蛋暗斑的产生影响了鸡蛋的质量，因此进行有效的预防和控制对于保障鸡蛋市场供求的平衡具有重要意义。
研究表明，通过科技手段来降低鸡蛋暗斑发生率，是最有效的预防方法之一。
随着科技的不断发展，相信在未来会有更多更有效的方法来解决鸡蛋暗斑问题。
鸡蛋壳暗斑成因
鸡蛋壳暗斑成因张铭容;叶劲松;李昕阳;张子丽;韩静静;王雨涵【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2016(032)005【摘要】通过对正常鸡蛋壳及暗斑鸡蛋壳中暗斑部、无斑部石灰质硬蛋壳的硬度、厚度、水分和蛋白质含量,以及壳下膜厚度、蛋白质含量进行测定,并结合其超微结构比较分析,对鸡蛋壳暗斑的产生原因进行初步探索.结果表明:与无斑组、正常组相比较,暗斑组的石灰质硬蛋壳硬度最小,含水量最大,差异极显著(P＜0.01),而无斑组和正常组无差别;3组之间石灰质硬蛋壳厚度没有差异,但暗斑组壳下膜厚度极显著低于无斑组和正常组(P＜0.01),无斑组壳下膜厚度显著低于正常组(P＜0.05);石灰质硬蛋壳的蛋白质含量无显著差异(P＞0.05),而暗斑蛋壳下膜蛋白质含量极显著低于正常蛋(P＜0.01).经扫描电镜对石灰质硬蛋壳的断面、内外表面及壳下膜的内外表面观察发现,与无斑组及正常组相比较,暗斑组的石灰质硬蛋壳及壳下膜整体表现出明显的质地疏松,且孔隙较多.通过对检测指标及超微结构图像的综合分析,初步判断鸡蛋壳暗斑的形成是由于壳下膜在暗斑位置厚度较薄,网孔较大,致使蛋内水分更易通过该膜渗透进入石灰质硬蛋壳,进而被石灰质硬蛋壳中该部分较多的缝隙所容纳,从而在宏观上形成暗斑.【总页数】6页(P38-42,90)【作者】张铭容;叶劲松;李昕阳;张子丽;韩静静;王雨涵【作者单位】四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014【正文语种】中文【相关文献】1.鸡蛋壳暗斑对鸡蛋贮藏性能的影响 [J], 张铭容;叶劲松;张子丽;李昕阳;王成程;蔡云琼2.优质低碳碳素结构钢丝表面暗纹和暗斑成因机制研究 [J], 邢献强;菅军伟3.Al-Mg-Si系铝合金型材表面暗斑成因分析 [J], 吴有伍4.“暗”藏玄机——解密暗斑蛋成因和营养改善措施 [J], 尹晓楠5.牛顿环中心暗斑成因的探讨 [J], 眭永兴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于转录组测序技术筛选影响蛋鸡产暗斑蛋候选基因的研究
㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(１２):１４３~１４９ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.１２.０１９收稿日期:２０２３－０２－２３基金项目:山东省家禽产业技术体系营养与饲料岗位项目(ＳＤＡＩＴ－１１－０７)ꎻ现代农业产业技术体系专项资金(ＣＡＲＳ－４０)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程项目(ＣＸＧＣ２０２２Ｄ０４)ꎻ山东省重点研发计划(农业良种工程)项目(２０２２ＬＺＧＣ０１３ꎬ２０２０ＬＺＧＣ０１３)ꎻ家禽绿色低碳高效健康养殖技术集成与协同推广项目(ＳＤＮＹＸＴＴＧ－２０２３－２４)作者简介:杜元军(１９９７ )ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事家禽健康养殖与动物营养代谢病与中毒病研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ＱＡＵｄｕｎｉ＠１６３.ｃｏｍ通信作者:陈甫(１９７９ )ꎬ男ꎬ教授ꎬ研究方向为动物营养代谢病与中毒病ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｆｕｃｈ＿ｑａｕ＠１６３.ｃｏｍ李福伟(１９７７ )ꎬ男ꎬ研究员ꎬ主要从事家禽育种与健康养殖技术研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｆｕｗｅｉ１２２４＠１６３.ｃｏｍ基于转录组测序技术筛选影响蛋鸡产暗斑蛋候选基因的研究杜元军１ꎬ２ꎬ韩海霞２ꎬ刘玮２ꎬ李大鹏２ꎬ雷秋霞２ꎬ周艳２ꎬ刘杰２ꎬ王杰２ꎬ李福伟２ꎬ陈甫１(１.青岛农业大学动物医学院ꎬ山东青岛㊀２６６１０９ꎻ２.山东省农业科学院家禽研究所ꎬ山东济南㊀２５０１００)㊀㊀摘要:本研究旨在利用转录组测序技术(ＲＮＡ－ｓｅｑ)筛选鸡十二指肠中与暗斑蛋形成相关的功能基因和信号通路ꎮ选取连续产暗斑蛋率低和连续产暗斑蛋率高的济宁百日母鸡各１０只分别作为对照组和暗斑组ꎬ采集十二指肠组织ꎬ测定钙代谢相关基因ｍＲＮＡ表达量ꎬ利用ＲＮＡ－ｓｅｑ技术对差异表达基因(ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘ￣ｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓꎬＤＥＧｓ)进行ＧＯ(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ)功能注释和ＫＥＧＧ(ｋｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓ)信号通路富集ꎮ结果表明ꎬ转录组获得高质量数据１０８.７５Ｇｂ且所有样本Ｑ３０>９７％ꎻ共筛选得到４７１个ＤＥＧｓꎬ其中３２７个上调ꎬ１４４个下调ꎬ随机选取７个ＤＥＧｓ进行实时荧光定量ＰＣＲ(ｑＲＴ－ＰＣＲ)验证ꎬ表达趋势与转录组测序结果基本一致ꎻＧＯ功能注释分析筛选到ＳＬＣ８Ａ３㊁ＳＬＣ２４Ａ４㊁ＳＬＣ９Ａ２等ＤＥＧｓ主要富集到线粒体钙离子稳态㊁钠离子跨膜转运和钙离子结合的过程ꎻＫＥＧＧ通路富集结果显示ꎬＧＳＴＴ１㊁ＧＳＴＯ２㊁ＧＳＴＡ３㊁ＣＬＤＮ２㊁ＣＬＤＮ１０等ＤＥＧｓ主要富集到细胞色素Ｐ４５０介导的外源物代谢通路㊁药物代谢－细胞色素Ｐ４５０㊁钙信号通路等ꎻ与对照组相比ꎬ暗斑组十二指肠钙结合蛋白(ＣＡＬＢ１)的ｍＲＮＡ表达量显著下降(Ｐ<０.０５)ꎮ综上ꎬ蛋鸡十二指肠中ＧＳＴＴ１㊁ＧＳＴＯ２㊁ＧＳＴＡ３基因的上调和ＳＬＣ８Ａ３㊁ＳＬＣ２４Ａ４等基因的下调是影响暗斑蛋形成的关键因素ꎬ钙信号通路在暗斑形成中发挥了重要作用ꎮ本研究为暗斑蛋的机理研究提供了基础材料ꎮ关键词:蛋鸡ꎻ蛋壳暗斑ꎻ十二指肠ꎻ差异表达基因ꎻ转录组测序中图分类号:Ｓ８３１.２:Ｑ７８㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)１２－０１４３－０７ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＫｅｙＣａｎｄｉｄａｔｅＧｅｎｅｓＡｆｆｅｃｔｉｎｇＴｒａｎｓｌｕｃｅｎｔＥｇｇＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＬａｙｉｎｇＨｅｎｓＢａｓｅｄｏｎＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤｕＹｕａｎｊｕｎ１ꎬ２ꎬＨａｎＨａｉｘｉａ２ꎬＬｉｕＷｅｉ２ꎬＬｉＤａｐｅｎｇ２ꎬＬｅｉＱｉｕｘｉａ２ꎬＺｈｏｕＹａｎ２ꎬＬｉｕＪｉｅ２ꎬＷａｎｇＪｉｅ２ꎬＬｉＦｕｗｅｉ２ꎬＣｈｅｎＦｕ１(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｎｇｄａｏ２６６１０９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＰｏｕｌｔｒｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＪｉｎａｎ２５０１００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｈｉｃｋｅｎｄｕｏｄｅｎｕｍｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ(ＲＮＡ￣ｓｅｑ).ＴｅｎＪｉｎｉｎｇＢａｒｉｈｅｎｓｗｉｔｈｌｏｗｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｌａｙｉｎｇｒａｔｅｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬａｎｄｔｅｎｏｎｅｓｗｉｔｈｈｉｇｈｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｌａｙｉｎｇｒａｔｅｗｅｒｅａｓｔｈｅｅｇｇｓｈｅｌｌｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｅｇｒｏｕｐ.ＤｕｏｄｅｎｕｍｓａｍｐｌｅｓｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄꎬａｎｄｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｃａｌｃｉｕｍｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ(ＤＥＧｓ)ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ.Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓ(ＤＥＧｓ)ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＮＡ￣ｓｅｑꎬａｎｄｔｈｅＧＯ(ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ)ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎ￣ｎｏｔａｔｉｏｎａｎｄＫＥＧＧ(ｋｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓ)ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｏｔａｌｄａｔａｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｗａｓ１０８.７５ＧｂꎬａｎｄＱ３０ｗａｓ>９７％ｉｎａｌｌｓａｍｐｌｅｓ.Ａｔｏｔａｌｏｆ４７１ＤＥＧｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔꎬｏｆｗｈｉｃｈꎬ３２７ｏｎｅｓｗｅｒｅｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄ１４４ｏｎｅｓｗｅｒｅｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ.ＳｅｖｅｎＤＥＧｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＰＣＲ(ｑＲＴ￣ＰＣＲ)ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬａｎｄｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｉｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｒｅｎｄｗａｓｂａｓｉｃａｌｌｙｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ.ＧＯｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎｎｏｔａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＳＬＣ８Ａ３ꎬＳＬＣ２４Ａ４ａｎｄＳＬＣ９Ａ２ｏｆｔｈｅｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒｆａｍｉｌｙｗｅｒｅｍａｉｎｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎｔｏｔｈｅｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃａｌｃｉｕｍｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓꎬｓｏｄｉｕｍｉｏｎｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｃａｌｃｉｕｍｉｏｎｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｅｓ.ＫＥＧＧｐａｔｈｗａｙｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＤＥＧｓｓｕｃｈａｓＧＳＴＴ１ꎬＧＳＴＯ２ꎬＧＳＴＡ３ꎬＣＬＤＮ２ａｎｄＣＬＤＮ１０ｗｅｒｅｍａｉｎｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎｔｏｔｈｅｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０￣ｍｅｄｉａｔｅｄｆｏｒ￣ｅｉｇｎｓｕｂｓｔａｎｃｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｐａｔｈｗａｙꎬｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｔｙ￣ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ꎬｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙꎬｅｔｃ.Ｃｏｍ￣ｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｄｕｏｄｅｎａｌＣＡＬＢ１ｉｎｔｈｅｅｇｇｓｈｅｌｌｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｅｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ(Ｐ<０.０５).Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎꎬｔｈｅｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＧＳＴＴ１ꎬＧＳＴＯ２ａｎｄＧＳＴＡ３ｇｅｎｅｓａｎｄｔｈｅｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳＬＣ８Ａ３ａｎｄＳＬＣ２４Ａ４ｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｄｕｏｄｅｎｕｍｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓｗｅｒｅｔｈｅｋｅｙｆａｃｔｏｒｓａｆｆｅｃｔ￣ｉｎｇｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｓꎬｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｍｉｇｈｔｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｓ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｃｍａｔｅｒｉａｌｓｆｏｒｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｒｅ￣ｓｅａｒｃｈｏｆｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｔｅｇｇｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＬａｙｉｎｇｈｅｎꎻＥｇｇｓｈｅｌｌｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｅꎻＤｕｏｄｅｎｕｍꎻＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓꎻＴｒａｎｓｃｒｉｐ￣ｔｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ㊀㊀蛋壳暗斑是一种蛋壳质量问题ꎬ主要在鸡蛋内容物㊁蛋壳结构和外界环境等因素相互作用下形成[１]ꎮ暗斑不仅影响蛋壳美观和鸡蛋品质ꎬ还影响鸡蛋的食用安全ꎬ降低其经济价值[２]ꎮ因此ꎬ探究蛋壳暗斑产生原因ꎬ降低暗斑率已成为现今养禽业亟待解决的关键问题之一ꎮ目前ꎬ有关暗斑蛋形成的研究主要集中在蛋鸡品系㊁鸡蛋储存时间与环境因素㊁蛋壳膜等方面ꎮ张名凯等[３]研究表明ꎬ同一蛋鸡配套系各品系之间的暗斑发生率存在显著性差异ꎮ付良等[４]研究表明ꎬ在鸡蛋产下２４ｈ内暗斑基本形成ꎮ暗斑的形成可能由蛋壳乳突层变异引起ꎬ暗斑区域的乳突密度相对较小ꎬ存在较大的乳突空隙ꎬ乳突层孔隙率提高可加快壳内水分散失ꎬ当散失速度超过蛋壳表面水分蒸发速度时ꎬ水分便停留在蛋壳中ꎬ促进暗斑形成[４－６]ꎮ刘继承等[７]研究发现ꎬ暗斑的形成可能与蛋壳膜变薄㊁壳膜蛋白质分泌不足有关ꎬ其造成的蛋壳厚度不均匀有利于暗斑蛋的形成ꎮ另外ꎬ蛋壳中的钙主要来源于十二指肠的吸收[８]ꎬ直接提高饲粮中的钙含量并不会起到提高蛋壳质量的效果ꎬ而增加肠道对钙的吸收效率却可以提高蛋壳质量[９－１０]ꎮ汪智云[１１]研究表明ꎬ日粮添加２０μｇ/ｋｇ２５－(ＯＨ)Ｄ３可提高十二指肠中ＣＡＬＢ１基因表达量ꎬ促进机体对钙的吸收ꎬ有利于蛋壳钙沉积ꎮ然而ꎬ暗斑蛋的形成是否与十二指肠功能基因存在关联尚不明确ꎮ本研究采用ＲＮＡ－ｓｅｑ技术对产暗斑蛋率高和产暗斑蛋率低的蛋鸡十二指肠组织进行转录组测序与比较分析ꎬ筛选与暗斑蛋形成相关的基因ꎬ以期为暗斑蛋形成的分子机制研究提供依据ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验动物处理与分组试验于２０２１年４ ６月进行ꎮ随机选择１００只２７６日龄同一批次的济宁百日母鸡(山东省农业科学院家禽所原种鸡场ꎬ山东省地方品种鸡活体源基因库)ꎬ编号后单笼饲养ꎮ每天９ʒ００收集鸡蛋ꎬ２０ħ㊁５％ＲＨ条件下储存ꎬ产后２４ｈ进行４４１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀照蛋ꎬ按照四级评分系统[１２]记录鸡蛋暗斑等级ꎬ连续检测３５ｄꎬ计算每只蛋鸡的暗斑蛋率ꎮ选择１０只连续产一级暗斑蛋率高的蛋鸡为对照组ꎬ１０只连续产四级暗斑蛋率高的鸡为暗斑组ꎮ１.２㊀ＲＮＡ提取及转录组测序试验至第４２天ꎬ将对照组和暗斑组的蛋鸡安乐死放血后解剖ꎬ取十二指肠中段组织１ｃｍꎬ用生理盐水清洗肠腔内容物ꎬ置于液氮中ꎻ采样结束后ꎬ所有样品于－８０ħ保存备用ꎮ采用ＴＲＬｚｏｌ法提取十二指肠组织总ＲＮＡꎮ应用ＮａｎｏＤｒｏｐＮＤ－１０００(ＮａｎｏＤｒｏｐꎬ美国)测定总ＲＮＡ含量与纯度ꎬ应用Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ２１００(Ａｇｉｌｅｎｔꎬ美国)和琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ的完整性ꎮ使用ｏｌｉｇｏ(ｄＴ) (ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒꎬ美国)磁珠纯化带有ＰｏｌｙＡ(多聚腺苷酸)的ｍＲＮＡꎬ将纯化的ｍＲＮＡ在高温条件下利用镁离子打断试剂盒(ＮＥＢＮｅｘｔ Ｍａｇｎｅｓｉ￣ｕｍＲＮＡＦｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎＭｏｄｕｌｅꎬ美国)进行片段化ꎻ将处理好的ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ并进行二链合成ꎬ转换成ＤＮＡ双链ꎬ在其双链ＤＮＡ末端补齐为平末端ꎬ并在两端加上Ａ碱基ꎬ与Ｔ碱基的接头进行链接ꎮ纯化后使用ＵＤＧ酶(ＮＥＢꎬ美国)消化二链ꎬ利用ＰＣＲ扩增构建ＲＮＡ文库ꎬ最后利用ＩｌｌｕｍｉｎａＮｏｖａｓｅｑＴＭ６０００(ＬＣ－ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ.ꎬ中国杭州)进行测序ꎮ１.３㊀测序数据的处理与分析原始数据以ｆａｓｔｑ文件格式存储ꎬ通过Ｃｕｔａｄａｐｔ软件过滤掉不合格的序列ꎬ获得高质量的有效数据(ｃｌｅａｎｄａｔａ)ꎮ使用Ｈｉｓａｔ２[１３]将过滤干净的数据与鸡参考基因组(Ｇａｌｌｕｓｇａｌｌｕｓ－５.０)进行比对和统计ꎮ根据Ｈｉｓａｔ２对比结果ꎬ使用Ｓｔｒｉｎｇｔｉｅ软件[１４]和ｇｆｆｃｏｍｐａｒｅ软件重构转录本ꎬ计算每个样本中所有基因的表达水平ꎮ在衡量基因表达量时ꎬ使用ＦＰＫＭ值作为基因表达量的衡量指标ꎬ统计基因在不同样本中的表达量ꎮ采用ＤＥＳｅｑ２软件进行分析ꎬ以差异倍数ＦＣȡ２或ＦＣɤ０.５(即ｌｏｇ２ＦＣȡ１)且Ｐɤ０.０５为标准ꎬ筛选差异表达基因(ＤＥＧｓ)ꎮ根据ＤＥＧｓ采用ＧＯ和ＫＥＧＧ进行富集分析ꎬ统计显著性标准设定为Ｐａｄｊ<０.０５ꎮ１.４㊀实时荧光定量ＰＣＲ(ｑＲＴ－ＰＣＲ)检测基因表达选取７个ＤＥＧｓ和４个钙吸收相关基因进行ｑＲＴ－ＰＣＲ检测ꎮ根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的鸡相关基因ｍＲＮＡ序列ꎬ用ＰｒｉｍｅｒＥｘｐｒｅｓｓ３.０软件设计引物ꎬ引物由生工生物工程(中国上海)股份有限公司合成ꎬ所用引物序列见表１ꎮ采用ＴＲＬｚｏｌ法提取十二指肠组织总ＲＮＡꎮ按照ＥｖｏＭ－ＭＬＶ反转录预混型试剂盒(艾科瑞ꎬ中国湖南)合成ｃＤＮＡꎬ以合成的ｃＤＮＡ为模板ꎬ按照ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰｒｏＴａｑＨＳ预混型ｑＰＣＲ试剂盒(艾科瑞ꎬ中国湖南)ꎬ采用２０μＬ体系ꎬ在实时荧光定量ＰＣＲ仪(Ｒｏｃｈｅꎬ瑞士)上进行扩增ꎮ反应条件为:预变性９５ħ３０ｓꎻ９５ħ５ｓꎬ６０ħ３４ｓꎬ４０个循环ꎮ以β－ａｃｔｉｎ为内参基因ꎬ应用２－әәＣｔ计算基因相对表达量ꎮ比较ＲＮＡ－ｓｅｑ的ｌｏｇ２ＦＣ和ｑＲＴ－ＰＣＲ的－әәＣｔ值ꎬ评估转录组测序数据的准确性ꎮ㊀㊀表１㊀ｑＲＴ－ＰＣＲ引物序列基因名称上游引物序列(５ᶄ－３ᶄ)下游引物序列(５ᶄ－３ᶄ)β－ａｃｔｉｎＧＡＡＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＧＣＧＴＡＧＣＣＴＴＣＡＴＡＧＡＭＧＳＴ１ＧＧＣＡＴＴＴＧＣＣＡＡＣＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＡＡＡＡＴＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＭＧＳＴ２ＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＴＧＡＴＴＧＣＡＡＡＡＣＣＡＴＣＣＴＧＣＧＡＮＱＯ１ＣＧＣＣＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＴＴＧＧＧＴＧＧＴＧＡＧＴＧＡＣＡＧＣＡＴＧＧＡＢＣＧ５ＣＣＴＣＧＣＴＣＡＧＡＡＣＴＣＴＴＣＡＧＧＣＧＡＧＴＴＣＡＣＧＴＴＣＣＴＴＧＣＴＴＣＡＢＣＧ８ＧＧＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＴＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＡＴＡＧＦ２ＲＧＡＣＣＣＧＴＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＣＧＧＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＡＡＴＡＣＣＣＡＧＴＴＦＡ２ＨＡＡＧＴＡＣＧＡＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＣＡＧＴＡＴＴＴＧＴＧＣＡＣＧＧＧＧＡＴＧＣＡＬＢ１ＴＴＡＡＡＴＣＴＧＣＧＴＴＧＣＴＴＣＣＡＴＡＣＡＧＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＴＡＡＣＴＲＰＶ６ＴＧＧＡＡＣＧＧＡＣＴＡＡＧＴＣＡＧＡＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＧＡＴＧＴＴＧＴＴＮＣＸ１ＡＧＣＴＴＧＧＴＧＧＣＴＴＣＡＣＡＡＴＣＣＴＴＣＧＴＴＣＴＣＣＴＣＴＣＧＧＡＴＧＰＭＣＡ１ｂＴＴＣＡＧＧＴＡＣＴＣＡＴＧＴＧＡＴＧＧＡＡＧＧＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＧＴＡＡＡＧ１.５㊀数据统计与分析采用ＳＰＳＳ２０.０软件进行数据统计分析ꎬ采用独立样本ｔ检验进行比较ꎮ结果以 平均值ʃ标准误 表示ꎮＰ<０.０５表示差异显著ꎬＰ<０.０１表示差异极显著ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀ＲＮＡ测序数据特征采用Ｉｌｌｕｍｉｎａ测序平台对暗斑组和对照组鸡的十二指肠组织进行转录组测序ꎮ如表２所示ꎬ最大样本产生７.８１Ｇｂ数据ꎬ最小样本产生５.７８Ｇｂ数据ꎮ各样本库中的ＧＣ含量在５０.００％~５４１㊀第１２期㊀㊀㊀杜元军ꎬ等:基于转录组测序技术筛选影响蛋鸡产暗斑蛋候选基因的研究５２.００％之间ꎬ所有样本Ｑ３０大于９７％ꎮ对照组和暗斑组的平均比对率分别为６５.００％和６２.８８％ꎮ以上数据特征说明ＲＮＡ－ｓｅｑ数据质量较好ꎬ满足数据库建设要求ꎮ㊀㊀表２㊀转录组数据及比对统计样品名高质量数据/ＧｂＱ３０/％ＧＣ含量/％总序列/ｂｐ比对序列/ｂｐ比对率/％Ｎ１７.０２９７.５５５２.００４６８２９８１６３７６８４５９５５７.５９Ｎ２６.８５９７.６９５０.５０４５６４０４６４４１１６２８３６６８.１８Ｎ３７.８１９６.７５５０.００５２０６２９３６４４８６９２１０６５.３９Ｎ４７.３０９７.６９５１.００４８６６４４９２４３１３７００８６７.２０Ｎ５７.１８９７.５４５１.００４７８４４９９６４０９１９１７２６２.７６Ｎ６６.２３９７.５８５１.００４１５４９４９４３７４００９０６６９.６４Ｎ７６.９４９７.７０５１.００４６２７４１００４０４３１６３５６４.２２Ｔ１６.４３９７.４７５１.５０４２８６３５７６３５４４８０６４５９.８８Ｔ２７.８４９７.７３５１.００５２２９３９４０４５４２７０５７６４.３４Ｔ３５.８８９７.６６５１.００３９２１７０５２３４４６６８４３６４.９３Ｔ４６.１７９７.７１５１.００４１１１７１９２３５３３０７９８６５.７８Ｔ５５.８９９７.５４５１.５０３９２７１８１６３３３４３０７６６１.９６Ｔ６５.７８９７.６３５１.００３８５０８３９６３２２６８６０９５７.４０Ｔ７７.５３９７.６５５１.５０５０２２４６２６４３１６５９４５６２.７４Ｔ８６.８４９７.４５５２.００４５６０４４２２３８６４６４５９６２.２９Ｔ９７.０６９７.５７５１.００４７０８６８８８４１６８０７２１６６.５８㊀㊀注:Ｑ３０为Ｐｈｒｅｄ数值大于３０的碱基占总体碱基的百分比(Ｐｈｒｅｄ:在碱基识别过程中通过一种概率模型计算得到ꎬ可准确预测碱基判别的错误率)ꎻＮ１ Ｎ７表示对照组７个生物学重复ꎻＴ１ Ｔ９表示暗斑组９个生物学重复ꎮ２.２㊀组间差异表达基因的筛选与验证转录组测序结果显示共有２３９１０个基因在鸡十二指肠表达ꎬ以差异表达基因Ｐɤ０.０５与ｌｏｇ２ＦＣȡ１为筛选标准ꎬ得到４７１个ＤＥＧｓꎬ其中３２７个上调ꎬ１４４个下调ꎮ为验证ＲＮＡ测序数据的准确性ꎬ随机选择了７个基因ꎬ采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法进行ｍＲＮＡ表达水平的验证ꎬ结果如图１所示ꎬ７个基因ｍＲＮＡ表达趋势与转录组ＲＮＡ－ｓｅｑ结果基本一致ꎬ表明测序结果可靠ꎮ图１㊀ｑＲＴ－ＰＣＲ验证转录组测序结果２.３㊀差异表达基因ＧＯ功能富集分析以Ｐａｄｊ<０.０５作为显著性富集的阈值对ＤＥＧｓ进行功能注释ꎬ最终筛选到２５９个ＧＯ条目ꎮ通过ＧＯ功能注释分析ꎬ筛选到ＳＬＣ８Ａ３㊁ＳＬＣ２４Ａ４㊁ＳＬＣ９Ａ２等ＤＥＧｓ主要富集到线粒体钙离子稳态㊁钠离子跨膜转运和钙离子结合的过程ꎬ其中与钙吸收代谢相关的差异表达基因ＧＯ功能富集通路见表３ꎮ㊀㊀表３㊀钙吸收代谢相关的差异表达基因ＧＯ功能富集分析结果ＧＯ登录号类别ＧＯ注释Ｐ值基因数ＧＯ:００５１５６０生物过程线粒体钙离子稳态０.０２２ＧＯ:００３５７２５生物过程钠离子跨膜转运０.０５４ＧＯ:０００５４３２分子功能钙ʒ钠反转运蛋白活性０.１２１ＧＯ:０００５５０９分子功能钙离子结合０.２８１７ＧＯ:００３１４０２分子功能钠离子结合０.１７１２.４㊀差异表达基因的ＫＥＧＧ富集分析以Ｐａｄｊ<０.０５作为显著性富集的阈值对ＤＥＧｓ进行信号通路富集分析ꎬ结果显示共有５６个ＤＥＧｓ富集到１８条通路中(图２)ꎮ其中ꎬＧＳＴＴ１㊁ＧＳＴＯ２㊁ＧＳＴＡ３㊁ＣＬＤＮ２㊁ＣＬＤＮ１０等ＤＥＧｓ主要富集到细胞色素Ｐ４５０介导的外源物代谢通路㊁药物代谢－细胞色素Ｐ４５０㊁钙信号通路等ꎮ所包含的与钙磷吸收代谢相关的信号通路见表４ꎮ６４１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀图２㊀差异基因ＫＥＧＧ富集性散点图㊀㊀表４㊀钙磷吸收代谢相关信号通路分析通路名称通路ＩＤＰ值基因数细胞色素Ｐ４５０介导的外源物代谢ｋｏ００９８００.００１７药物代谢－细胞色素Ｐ４５０ｋｏ００９８２０.００１４视黄醇的新陈代谢ｋｏ００８３００.００１０细胞粘附分子ｋｏ０４５１４０.００１３神经活性配体受体相互作用ｋｏ０４０８００.２４１２钙信号通路ｋｏ０４０２００.２６１０Ａｐｅｌｉｎ信号通路ｋｏ０４３７１０.４０５２.５㊀十二指肠钙吸收相关基因ｍＲＮＡ表达量由表５可知ꎬ暗斑组十二指肠ＣＡＬＢ１的ｍＲ￣ＮＡ表达量显著低于对照组(Ｐ<０.０５)ꎬＰＭＣＡ１ｂ㊁ＮＣＸ１㊁ＴＲＰＶ６的ｍＲＮＡ表达量与对照组相比无显著差异(Ｐ>０.０５)ꎮ㊀㊀表５㊀钙吸收相关基因ｍＲＮＡ表达量基因对照组表达量暗斑组表达量Ｐ值ＣＡＬＢ１１.０６ʃ０.０３ａ０.９０ʃ０.０５ｂ０.０２ＰＭＣＡ１ｂ１.００ʃ０.１４１.０５ʃ０.１３０.８０ＮＣＸ１０.０１ʃ０.０００.０１ʃ０.０００.３６ＴＲＰＶ６０.０４ʃ０.０１０.０３ʃ０.０１０.３８㊀㊀注:同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ无肩标字母的表示差异不显著(Ｐ>０.０５)ꎮ３㊀讨论与结论暗斑蛋的形成受多种基因调控ꎬ其遗传规律及分子机制比较复杂ꎬ利用转录组测序技术探究暗斑蛋的形成鲜有报道ꎮ为了进一步探索暗斑蛋的形成是否与肠道功能基因存在关联ꎬ本研究对连续产暗斑蛋和连续产非暗斑蛋鸡的十二指肠组织进行了转录组测序及比对分析ꎬ共筛选出４７１个ＤＥＧｓꎬ其中３２７个上调ꎬ１４４个下调ꎻ为保证测序结果的可靠性ꎬ在ｑＲＴ－ＰＣＲ验证的基础上ꎬ对ＤＥＧｓ进行ＧＯ功能注释和ＫＥＧＧ富集分析ꎬ筛选出与暗斑蛋形成有关的差异候选基因:ＧＳＴＴ１㊁ＧＳＴＯ２㊁ＧＳＴＡ３㊁ＳＬＣ８Ａ３㊁ＳＬＣ２４Ａ４㊁ＳＬＣ９Ａ２ꎻｑＲＴ－ＰＣＲ检测发现钙吸收相关基因ＣＡＬＢ１的ｍＲＮＡ表达量在产暗斑蛋鸡的十二指肠中显著降低ꎮ谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ａｌｐｈａ３(ＧＳＴＡ３)能够清除多种过氧化产物[１５]ꎬ谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｏｍｅ￣ｇａ１(ＧＳＴＯ１)可直接参与ＡＴＰ合酶的谷胱甘肽化从而缓解氧化应激[１６－１７]ꎮ本试验通过ＫＥＧＧ信号通路分析ꎬ发现差异基因ＧＳＴＡ３㊁ＧＳＴＴ１和ＧＳ￣ＴＯ２在细胞色素Ｐ４５０介导的外源物代谢通路和药物代谢－细胞色素Ｐ４５０通路中均上调ꎮＧＳＴＡ３在体内表现出过氧化物酶活性ꎬ其表达量的下调随氧化应激水平而变化[１８－１９]ꎮ因此ꎬ本研究中产暗斑蛋鸡的十二指肠可能存在氧化应激ꎬ导致肠道功能减退ꎬ从而影响了钙的吸收转运ꎮ溶质载体家族(ｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒｆａｍｉｌｙꎬＳＬＣ)蛋白是体内一类特别重要的跨膜蛋白ꎬ负责多种有７４１㊀第１２期㊀㊀㊀杜元军ꎬ等:基于转录组测序技术筛选影响蛋鸡产暗斑蛋候选基因的研究机物质之间的跨膜与运输[２０－２１]ꎬ而ＳＬＣ８Ａｓ是位于细胞顶端的高选择性Ｃａ２＋通道ꎬ在多种上皮细胞中构成Ｃａ２＋的内流通路ꎬ是Ｃａ２＋跨细胞转运的重要通道[２２－２３]ꎮ本研究ＧＯ功能注释发现ꎬ差异基因ＳＬＣ８Ａ３㊁ＳＬＣ２４Ａ４和ＳＬＣ９Ａ２在十二指肠组织中表达下调ꎬ主要富集在线粒体钙离子稳态㊁钠离子跨膜转运和钙离子结合的过程中ꎮ王盈童等[２４]在长顺绿壳蛋鸡ＳＬＣ８Ａ１基因外显子１１中发现３个ＳＮＰｓ位点ꎬ其中双倍型Ｈ２Ｈ３对提高蛋壳厚度和改善蛋壳强度均有显著影响ꎮ钙结合蛋白Ｄ２８ｋ(ＣＡＬＢ１)是钙转运的主要蛋白ꎬ在肠上皮细胞高水平表达[２５－２６]ꎬ参与钙离子在上皮细胞的主动转运ꎬ钙离子在顶膜附近与其结合后被转移至基底膜附近[２７]ꎮＣＡＬＢ１含量提高主要与软蛋进入子宫和蛋壳形成有关[２８－２９]ꎬ当钙的吸收增加ꎬ肠道中ＣＡＬＢ１的含量及其表达量增加ꎻ当蛋鸡产软蛋时ꎬ肠道内ＣＡＬＢ１含量降低一半ꎻ当蛋壳形成恢复后ꎬＣＡＬＢ１含量及ｍＲ￣ＮＡ表达水平显著增加ꎮ姜明君[５]研究发现ꎬ在产蛋高峰期前期ꎬ日粮添加０.３％ＮａＨＣＯ３会显著促进十二指肠内ＣＡＬＢ１的表达ꎬ增加钙在蛋鸡体内的沉积ꎬ从而增加蛋壳厚度ꎮ本研究发现ꎬ暗斑组十二指肠ＣＡＬＢ１的ｍＲＮＡ表达量显著低于对照组ꎬ表明暗斑组十二指肠上皮细胞转移钙的能力降低ꎬ进入血液的钙离子减少ꎬ从而减少了通过血液运输到子宫部的钙离子数量ꎬ促进暗斑蛋的形成ꎮ本研究从转录组水平上筛选到与暗斑蛋形成相关的差异表达基因ꎬ获得了差异表达基因的功能㊁分类㊁代谢途径和信号通路ꎬ发现肠道氧化应激影响了钙的吸收转运能力ꎬ促进了暗斑蛋形成ꎮ本研究结果可为下一步开展暗斑蛋相关基因及分子调控机理的研究提供参考依据ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀王德贺.鸡蛋暗斑的形成机理探索研究[Ｄ].北京:中国农业大学ꎬ２０１７.[２]㊀张铭容.鸡蛋壳暗斑形成原因及暗斑对鸡蛋贮藏性能影响的研究[Ｄ].雅安:四川农业大学ꎬ２０１６.[３]㊀张名凯ꎬ严华祥ꎬ邹晓庭ꎬ等.影响鸡蛋产生暗斑的因素研究[Ｊ].上海农业学报ꎬ２０１９ꎬ３５(６):７２－７６. [４]㊀付良ꎬ吴桂琴ꎬ孙从佼ꎬ等.鸡蛋壳暗斑成因研究[Ｊ].中国家禽ꎬ２０１９ꎬ４１(１５):６－１１.[５]㊀姜明君.笼养蛋鸡钙代谢对蛋壳质量的影响及其机制研究[Ｄ].泰安:山东农业大学ꎬ２０１５.[６]㊀高金波ꎬ韩海霞ꎬ周艳ꎬ等.正常蛋与暗斑蛋的品质和蛋壳超微结构差异分析[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０１９ꎬ５１(８):１１２－１１５.[７]㊀刘继承ꎬ高慧君ꎬ王利.蛋壳薄斑的成因[Ｊ].中国家禽ꎬ２００７ꎬ２９(１０):４９－５１.[８]㊀张亚男ꎬ王爽ꎬ阮栋ꎬ等.蛋壳形成的钙代谢机制及其影响因素[Ｊ].动物营养学报ꎬ２０２１ꎬ３３(３):１２０１－１２０７. [９]㊀ＣｈｅｎＹＣꎬＣｈｅｎＴＣ.Ｍｉｎｅｒａｌｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｌａｙｅｒｓａｓｉｎｆｌｕ￣ｅｎｃｅｄｂｙｄｉｅｔａｒｙｏｌｉｇｏｆｒｕｃｔｏｓｅａｎｄｉｎｕｌｉｎ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２００４ꎬ３(７):４４２－４４５. [１０]ＡｂｄｅｌｑａｄｅｒＡꎬＡｌ￣ＦａｔａｆｔａｈＡＲꎬＤａｓＧ.ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙＢａ￣ｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓａｎｄｉｎｕｌｉｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅꎬｅｇｇ￣ｓｈｅｌｌｑｕａｌｉｔｙꎬｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓｉｎｔｈｅｌａｔｅｐｈａｓｅｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１３ꎬ１７９:１０３－１１１.[１１]汪智云.２５－(ＯＨ)Ｄ３㊁维生素Ｃ㊁４ꎬ７－二羟基异黄酮对鸡蛋壳质量及钙代谢的影响[Ｄ].武汉:华中农业大学ꎬ２０２０. [１２]高绪莉ꎬ杨佳林ꎬ刘玮ꎬ等.暗斑蛋７ｄ内的变化规律及暗斑对蛋品质影响的研究[Ｊ].中国畜牧兽医ꎬ２０２１ꎬ４８(７):２３９７－２４０３.[１３]ＫｉｍＤꎬＬａｎｇｍｅａｄＢꎬＳａｌｚｂｅｒｇＳＬ.ＨＩＳＡＴ:ａｆａｓｔｓｐｌｉｃｅｄａ￣ｌｉｇｎｅｒｗｉｔｈｌｏｗｍｅｍｏｒｙｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓꎬ２０１５ꎬ１２(４):３５７－３６０.[１４]ＰｅｒｔｅａＭꎬＰｅｒｔｅａＧＭꎬＡｎｔｏｎｅｓｃｕＣＭꎬｅｔａｌ.ＳｔｒｉｎｇＴｉｅｅｎａ￣ｂｌｅｓｉｍｐｒｏｖｅｄｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｆｒｏｍＲＮＡ￣ｓｅｑｒｅａｄｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２０１５ꎬ３３(３):２９０－２９５. [１５]ＡｎｉｙａＹꎬＩｍａｉｚｕｍｉＮ.Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓｉｎｖｏｌｖｉｎｇａｎｅｗｆｕｎｃｔｉｏｎｆｏｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｐｏｒｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].ＤｒｕｇＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＲｅｖｉｅｗｓꎬ２０１１ꎬ４３(２):２９２－２９９.[１６]ＫｉｍＫꎬＫｉｍＳＨꎬＫｉｍＪꎬｅｔａｌ.Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓ￣ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｏｍｅ￣ｇａ１ａｃｔｉｖｉｔｙｉｓｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎａＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｏｄｅｌｏｆＰａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１２ꎬ２８７(９):６６２８－６６４１.[１７]ＭｅｎｏｎＤꎬＢｏａｒｄＰＧ.Ａｒｏｌｅｆｏｒｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｏｍｅｇａ１(ＧＳＴＯ１￣１)ｉｎｔｈｅｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｙｌａｔｉｏｎｃｙｃｌｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏ￣ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１３ꎬ２８８(３６):２５７６９－２５７７９. [１８]ＣｒａｗｆｏｒｄＤＲꎬＩｌｉｃＺꎬＧｕｅｓｔＩꎬｅｔａｌ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙꎬｏｖａｌｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓ￣ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＡ３ｋｎｏｃｋｏｕｔｍｉｃｅ[Ｊ].Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅ￣ｓｉｓꎬ２０１７ꎬ３８(７):７１７－７２７.８４１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀[１９]ＳｈｕｐｅＴꎬＳｅｌｌＳ.Ｌｏｗｈｅｐａｔｉｃｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓ￣ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｎｄｉｎ￣ｃｒｅａｓｅｄｈｅｐａｔｉｃＤＮＡａｄｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｕｍｏｒｉ￣ｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１ｉｎｎｅｗｂｏｒｎａｎｄｐａｒｔｉａｌｌｙｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｉｚｅｄｍｉｃｅ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００４ꎬ１４８(１/２):１－９. [２０]ＢａｉＸＹꎬＭｏｒａｅｓＴＦꎬＲｅｉｔｈｍｅｉｅｒＲＡＦ.Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂｉｏｌｏｇｙｏｆｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒ(ＳＬＣ)ｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｔｅｉｎｓ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕ￣ｌａｒＭｅｍｂｒａｎｅＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ３４(１/２):１－３２.[２１]ＤｖｏｒａｋＶꎬＷｉｅｄｍｅｒＴꎬＩｎｇｌｅｓ￣ＰｒｉｅｔｏＡꎬｅｔａｌ.Ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｃｅｌｌ￣ｂａｓｅｄａｓｓａｙｐｌａｔｆｏｒｍｓｆｏｒｔｈｅｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒｆａｍｉｌｙｏｆｔｒａｎｓ￣ｐｏｒｔｅｒｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２０２１ꎬ１２:７２２８８９. [２２]ＢａｒＡ.Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｌｂｉｎｄｉｎｉｎｔｈｅｃａｌｃｉｕｍ￣ｔｒａｎｓ￣ｐｏｒｔｉｎｇｏｒｇａｎｓｏｆｂｉｒｄｓｗｉｔｈｈｉｇｈｃａｌｃｉｕｍｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ[Ｊ].ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２００９ꎬ４６(４):２６７－２８５. [２３]ＧｌｏｕｘＡꎬＬｅＲｏｙＮꎬＢｒｉｏｎｎｅＡꎬｅｔａｌ.Ｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｌｃｉｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓｉｎｔｈｅｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ[Ｊ].ＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０１９ꎬ９８(１１):６００５－６０１８.[２４]王盈童ꎬ杨酸ꎬ谭元成ꎬ等.长顺绿壳蛋鸡ＳＬＣ８Ａ１基因多态性及其对蛋壳品质的影响[Ｊ].中国畜牧兽医ꎬ２０２２ꎬ４９(１２):４６８８－４６９６.[２５]ＣｈｉｂａＨꎬＯｓａｎａｉＭꎬＭｕｒａｔａＭꎬｅｔａｌ.Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ(ＢＢＡ) Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓꎬ２００８ꎬ１７７８(３):５８８－６００.[２６]ＡｗａｄＷＡꎬＨｅｓｓＣꎬＨｅｓｓＭ.Ｅｎｔｅｒｉｃｐａｔｈｏｇｅｎｓａｎｄｔｈｅｉｒｔｏｘｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｒｒｉｅｒｔｈｒｏｕｇｈａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ[Ｊ].Ｔｏｘｉｎｓꎬ２０１７ꎬ９(２):６０. [２７]ＢａｒＡꎬＳｔｒｉｅｍＳꎬＶａｘＥꎬｅｔａｌ.ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｌｂｉｎｄｉｎｍＲＮＡａｎｄｃａｌｂｉｎｄｉｎｔｕｒｎｏｖｅｒｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎｅａｎｄｓｈｅｌｌｇｌａｎｄｏｆｔｈｅｃｈｉｃｋ￣ｅｎ[Ｊ].ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙꎬＩｎｔｅｇｒａ￣ｔｉｖｅａｎｄＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ１９９２ꎬ２６２(５):Ｒ８００－Ｒ８０５.[２８]ＡｉｊａｚＳꎬＢａｌｄａＭＳꎬＭａｔｔｅｒＫ.Ｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｓ:ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｒ￣ｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＣｙｔｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ２４８:２６１－２９８.[２９]ＺｈａｎｇＣꎬＺｈａｏＸＨꎬＹａｎｇＬꎬｅｔａｌ.Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｌｌｅｖｉａｔｅｓｈｅａｔｓｔｒｅｓｓ￣ｉｎｄｕｃｅｄｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬｍｉｃｒｏｆｌｏｒａꎬａｎｄｂａｒｒｉｅｒｉｎｔｅｇｒｉｔｙｉｎｂｒｏｉｌｅｒｓ[Ｊ].ＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０１７ꎬ９６(１２):４３２５－４３３２.９４１㊀第１２期㊀㊀㊀杜元军ꎬ等:基于转录组测序技术筛选影响蛋鸡产暗斑蛋候选基因的研究。
活性维生素D3及锌、锰复合物改善水印蛋研究
活性维生素D3及锌、锰复合物改善水印蛋研究作者：张继良来源：《家禽科学》2020年第06期摘要：本试验旨在研究在产蛋鸡日粮中添加活性维生素D3及锌、锰复合物对蛋壳质量的影响。
试验材料含维生素D3复合物，可在肠道中经肠道消化酶水解获得活性维生素D3形式，直接驱动对钙、磷的吸收代谢及其他功能，而锌、锰微量元素具有改善蛋壳质量和缓减应激等作用。
试验结果显示，对照组蛋壳厚度为0.317mm，试验组蛋壳厚度为0.348mm，显著高于对照组（P<0.05）。
对照组蛋壳评分为1.82，试验组蛋壳评分为1.10，极显著降低（P<0.01）。
此外，试验组裂纹蛋和水印蛋分别为3.3%和26.7%，与对照组相比均大幅降低（分别为23.3%和48.7%）。
结果表明，蛋鸡产蛋料添加活性维生素D3及锌、锰复合物可显著提高蛋壳质量，改善水印蛋问题。
关键词：活性维生素D3;复合物;蛋壳质量;蛋壳评分;水印蛋鸡蛋是人们生活中优质蛋白质的主要来源，包含了胚胎生长发育的全部营养物质，且价格低廉[1]。
品质好的鸡蛋壳既能够显著降低鸡蛋在生产、运输、加工过程中由于蛋壳破损导致的经济损失，又能够提高种蛋的孵化率和经济效益。
随着近年来食品安全问题日益受到关注，消费者对鸡蛋质量要求也越来越高，对蛋壳质量好、品相好、色泽均匀、蛋品新鲜和味道鲜美的鸡蛋，需求也明显增加。
商品蛋蛋壳质量直接影响其在市场上的销售价格和销售周期，尤其对品牌鸡蛋的影响较大。
水印蛋又称为半透明蛋（Translucent egg），Hoist等在1932年提出，国内亦称为暗斑蛋、薄斑蛋等，蛋壳表面会呈现不同的水状条纹，在光照条件下呈现非常明显的暗斑[2]。
水印蛋普遍存在于褐壳、粉壳和绿壳等蛋鸡品种，严重影响鸡蛋品相，降低消费欲望，从而影响销售价格[3]。
目前，水印蛋已经成为蛋鸡行业最为关注的问题之一，给鲜蛋生产及种蛋孵化等方面带来巨大的损失，亦对食品质量安全造成威胁。
暗斑蛋的成因及应对方法2016(PDF)
暗斑蛋的成因及应对方法
一、鸡输卵管的结构：
1、漏斗部(infundibulum)
2、膨大部(magnm)：
3、峡部(isthmus)：
4、子宫部(uterus)：
5、阴道部(vagina)
二、鸡蛋品质构成及影响因素：
1、蛋黄：
2、蛋白：
3、蛋壳：
（一）、疾病对鸡蛋品质的影响：1、H9N2禽流感对鸡蛋品质的影响：
2、H9N2禽流感对蛋壳超微结构的影响：
（二）、不同饲养方式对鸡蛋品质的影响：
1、笼养与散养：
2、笼养、地面平养、散养：
（三）、饲料对鸡蛋品质的影响：
1、未脱毒棉籽油对生鸡蛋品质的影响：
2、铅、镉对生鸡蛋品质的影响：
（四）、鸡蛋物流过程中品质变化规律研究：1、不同储存温度对鸡蛋品质的影响，
2、温度波动对蛋品质的影响：
三、暗斑蛋的定义：
（一）、暗斑蛋的危害：
（二）、暗斑蛋与正常蛋蛋壳品质的比较
可能暗斑鸡蛋壳下膜蛋白质分泌不足导致。
（三）、
即水分是暗斑蛋壳形成的最直观原因，由于蛋壳的均匀度较差及蛋壳有裂纹及斑点，导致水分在局部区域的聚集。
（四）、。
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鸡蛋暗斑的研究进展
鸡蛋暗斑是指鸡蛋表面出现的黑色斑点。
这种现象主要是由鸡蛋内部物质的变化所引
起的，可能是由于内部的发育过程中出现疾病或者病原体感染所导致的。
对于鸡蛋暗斑的
研究进展，主要集中在以下几个方面：
一、鸡蛋暗斑的成因研究：
目前对于鸡蛋暗斑的成因研究主要集中在分析鸡蛋内部物质的变化和致病菌的侵入。
一些研究表明，鸡蛋内部物质的变化，如蛋白质的降解和氧化，以及脂质的氧化等，可能
是导致鸡蛋暗斑的原因之一。
一些病原菌如大肠杆菌和沙门氏菌等的感染也被证实与鸡蛋
暗斑的发生有关。
二、预防和控制鸡蛋暗斑的方法：
为了预防和控制鸡蛋暗斑的发生，科学家们提出了一些方法。
一方面，饲养和管理环
境对于预防鸡蛋暗斑的发生起着重要作用。
良好的饲养条件和健康的饲料有助于提高鸡蛋
质量，并减少鸡蛋暗斑的发生。
采取适当的储存和加工措施也有助于减少鸡蛋暗斑的数量。
在储存过程中要注意避免过高或过低的温度和湿度，以及避免鸡蛋受到挤压或震动等。
采
用合适的加工方法也可以减少鸡蛋暗斑的影响。
煮鸡蛋时要掌握好时间和温度，不要过久
过热，以免导致鸡蛋暗斑。
三、鸡蛋暗斑的食品安全问题：
鸡蛋暗斑不仅影响鸡蛋的品质，还可能对人体健康造成食品安全隐患。
一些研究表明，鸡蛋暗斑中可能寄生有病原菌，如沙门氏菌和大肠杆菌等，这些病原菌会引起食物中毒等
疾病。
在鸡蛋暗斑的研究中，食品安全问题也是重要的考虑因素。
对于鸡蛋暗斑的研究主要集中在成因研究、预防和控制方法的探索以及食品安全问题
的考虑。
随着科学技术的不断发展，相信对于鸡蛋暗斑的研究会取得更多的进展，为提高
鸡蛋质量和保障食品安全做出更大的贡献。