相关序列扩增多态(SRAP)在农作物遗传育种中的应用

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用SRAP标记分析黄瓜品种遗传多样性及鉴定品种

用SRAP标记分析黄瓜品种遗传多样性及鉴定品种

通讯作者,h nxayn @nrvtm ze g i ig ec . o o
摘 要
利 用相 关序 列 扩增 多态 性( S
) 分子 标记技 术 对 3 不 同类 型 的黄 瓜 品种 进 行 了指纹 图谱 遗 传 5份
多态性 分析 , 3 从 8对 引物组 合 中筛选 出 3个 多态性 高 的引物 组合 , 3对 引物扩 增得 到 的图谱 可将 3 黄 此 5份
研 究 报 告
Re e r h Re r s a c po t
用 SA R P标 记 分 析 黄瓜 品种遗 传 多样 性及 鉴 定 品种
李 丽 - 郑 晓鹰 柳李 旺
1 京 市 农 林 科 学 院 蔬 菜 研 究 中 心 , 京 ,0 0 7 2南 京 农业 大 学 园艺 学 院 , 京 , 10 5 北 北 10 9 ; 南 209
瓜品种 完全 区分 开来 。 依据 S A R P指纹 图谱聚 类分 析结 果确 定 了品种 之 间的遗传 距 离 以及 鉴 别的难 易程 度 。 用SA R P分 子标记 技术 得 到 了两 个黄 瓜 品种 杂交 组合 F 与 亲本 的 指纹 图谱 中的鉴 别条 带 , 以用于 黄瓜 杂 。 可 交种 的纯度 检 测 。
关键 词 黄 瓜 , 指纹 图谱 , 种鉴 定, R P 品 SA
An l ss o n t v ri n d n i c t n o c mb rVa it sb ay i fGe ei Di e s y a d I e tf ai fCu u c t i o e re i y e
Kewo d C c b r C c msst u)Fn e r tIet ct no v r t sS AP y r s u u e (u u i ai s, ig ri ,dni ai f ai i , R m v p n i f o ee

SRAP

SRAP

名词解释
• 开放阅读框[open reading frame,ORF] 是结构基因(能 编码蛋白质的DNA或RNA)的正常核苷酸序列,不包含终 止密码子。从起始密码子到终止密码子的阅读框可编码完 整的多肽链。

94℃ 预变性5 min 94℃ 变性 1 min :; ,,
2005
2006
35℃ 复性 1 min
2007
30--35cycles
72℃ 延伸 1 min
94℃ 变 性1 min
50℃ 复性 1 min 72℃ 延伸1 min
72℃ 延伸 5 -10 min

研究芸薹属作物时开发出来的。 ⊙ 该标记通过独特的双引物设计 对基因的ORFs(Open reading frames 开放式阅读框)的特定 区域进行扩增
二、原理
针对基因外显子里GC含量丰富而启动子和内含子里AT含 量丰富的特点来设计两套引物对开放阅读框进行扩增。SRAP 分子标记中引物的设计是关键。
缺点
没有利用扩增区 域序列的任何信 息,产生的分子 标记是随机的分 布在染色体上
五、研究应用

遗传多样性分析
LOGO
种质资源鉴定 遗传图谱构建
基因克隆与基因定位

六、讨论与展望
●SRAP标记不但集中了 RAPD、SSR 和 AFLP 等常用 分子标记各自的优点,而且还弥补了这些标记所没有的 优点,如多态性高,稳定性高,重复性好, 操作简便等。




为什么两个引物的碱基数量不能相同?
三、技术流程
1 SRAP标记引物的设计
2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
SRAP-PCR 扩增

3 凝胶电泳分析 4 扩增产物检测与片段测序

相关序列扩增多态性标记技术(SRAP)及其在植物中的应用

相关序列扩增多态性标记技术(SRAP)及其在植物中的应用
显子 的 S A R P多态 性标 记 。
黄瓜 、 烟草、 花生、 西瓜、 小麦 、 甘薯和辣 椒等植物 中
也 得 到 了广 泛 的应用 。
1 SA R P标记技术 的概念 和原理
相关序列 扩增 多 态性 (euneRle m le Sqec et A pf - ad id i
A g2 0 u .列 扩 增 多 态 性
标 记 技 术 ( ) 其在 植 物 中的应 用 S A 及 R P
孙 瑞 李 袁
( 郑州铁路 职业 技术 学院 , 河南 郑 州 4 0 5 ) 5 0 2
【 要】 相关序列扩增多态性(eune e t m 1i o m rh m,R P 是最近发展起来的新型分子标 摘 Sqec- l e A pfdPl o i s A ) R ad i e y ps
上 各项技 术 的 不足 之 处 。近 几 年 来 ,R S AP技 术 在
“ C G 序列 , 目的是使 之特异结合开放 阅读 框 CG” 其 ( R s区域中的外显子 。研 究表 明外 显子 一般 处 O F) 于 富含 G C区域 , 拟 南 芥 2号 和 4号染 色 体 的全 如 序列 中, 外显子 C G比例分别为 4 . %和 4 .8 65 4 0 %, 而 内含 子 中则 为 3 .%和 3 .8 ; 21 3O % 而且 除 着丝 粒 区域有较低基 因密度外 , 因几乎平均分布在这 两 基 个 染 色体 上 。从 G n ak中随机选 择 2 eB n O个 B C序 A 列, 发现约 6 %的 C G 6 C G序列位于这些克隆 中的外 显子内。据统计 , 拟南芥约 1 基 因组外显子位 于 / 3 24 、 号染色体上。运用 C G C G序列就可特异扩增 出 包含这些组分的序列 。 当然 , 由于外显子序列在不同个体 中通常是保 守的 , 这种低水平多态性限制了将它们做为标记 的 来源。由于 内含子、 启动子和间隔序列在不同物种 甚至不同个体间差异很大 , 富含 A T的区域序 列通 常见于启动子和 内含子 中,R P中使用 的反 向引 SA 物 的 3端含有核心 A T , ’ A T 以特异结合富含 A T区。 由于个体 不 同 以及 物 种 的 内含 子 、 动 子 与 间 隔 区 启 长度不等 , 这就使得有 可能扩增出基于内含子与外

SRAP在大白菜遗传性状分析试验中的应用

SRAP在大白菜遗传性状分析试验中的应用

表 1 用于大 白菜遗传多样性分析的S A  ̄ 物序 列 RP l
引物 正向引物序N( 一 ) 5 3 引物 反向引物序 ̄ ( - ) l 3 J 5
e l re TG GTCCAA ACCGGATA e l GACTGCGTA C A m GAA T TA AT me TGAGTCCAA ACCGGAG C e 2 GA CT C 2 m G GTA CG ATTT C A G
me T 3 GA G CCAAA CCGGAAT e 3 T m GA C TGCGTACGAA T TGA C me T 4 GA G CCAAA CCGGA CC e 4 T m GA C TGCGTA C GA AT1r v GA m e TGA G 5 TC C AA CCGGAAG e 5 GA CTGCG A m TA CGAATTAA C me T 6 GA G CCAAA CCGGTAG T e 6 m GACTGCG ACGAATTGCA T m e TGAGTCCAA A CC 7 GGTTG e 7 m GACTGCGTACGAA T TA T G
p .) H8 0,加水溶解,然后定容至 lO ( O m1 酚多加 1 VP 。 %P )
() TB 25x E缓 冲 液 : T i5g 硼 酸 2 .g 0 5 l rs4 , 7 5 , .mo/
12 主要 器材 设 备 .
() Tc 0 热循 环仪 ;() 1A 4 l 2DYY一1型 电脑三恒 多 用 电 2
摘 要 :研 究利 用s A 分子 标 记 ,结 合 测序 板 电泳 和 银 染 染 色技 术 ,对 遗 传 关 系较 近 的 大 白 菜 自交 系进 行 多态ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ性 RP
分析 ,结果分辨率 高,清晰度好 。8 引物共检 测到3 8 对 2 个位点 ,其 中2 5 8 个为 多态性位点 ,多态性 比率 达8 .8 62 %,

利用SSR和SRAP标记分析花椰菜自交系的遗传多样性

利用SSR和SRAP标记分析花椰菜自交系的遗传多样性

i n t r o d u c t i o n a n d u t i l i z a t i o n o f c a u l i l f o we r g e r mp l a s m r e s o u r c e s b y s i mp l e s e q u e n c e r e p e a t ( S S R )a n d s e q uபைடு நூலகம்e n c e —
a n d r e p e a t a b i l i t y we r e s e l e c t e d f r o m 4 8 S S R p i r me r s nd a 4 8 S RAP p r i me r s . A t o t a l o f 4 7 b a n d s we r e g e n e r a t e d b y ou f r S S R p i r me r s , i n c l u d i n g 3 9 p o l y mo r p h i c b a n d s , wi t h a n a v e r a g e o f 8 3 . 0 % p o l y mo r p h i s m. F o r u S R AP p r i me r s
白交 系进 行 了遗 传 多样 性 分 析 ,分 别 从 4 8对 S S R引 物 、 4 8对 S R AP引物 中各筛 选 出 4对 有效 引物 。4对 S S R 引物 扩 增 的 总条 带数 为 4 7个 , 多 态性 条 带 为 3 9个 , 平均 多态 性 比率 达 8 3 . 0 %; 4对 S R A P引物 扩增 的 总条 带数 为 8 6个 , 多态性 条 带 为 5 1 个, 平 均 多态 性 比率 为 5 9 . 3 %, 该 结果 显 示花 椰菜 自交系 间具有 较 丰 富 的遗 传 多样 性 。U P G MA聚类 分 析揭示 了花 椰菜 自交系 的熟 期与其 遗传 差异 相关 。 关 键 词 花 椰菜 , 自交系 , S S R , S R A P , 遗传 多样 性

分子标记技术

分子标记技术

分子标记技术摘要:分子标记技术就是利用现代分子生物学基础分析DNA分子特性,并借助一些统计工具,将不同物种或同一物种的不同类群区分开来,或者将生物体的某些性状与DNA分子特性建立起来的关联关系,已广泛应用于植物遗传与育种研究的众多领域,包括遗传图谱的构建、遗传多样性分析、物种起源与进化、品种资源与纯度鉴定、分子辅助育种等多个方面,具有重大作用。

关键词:分子标记技术原理RFLP RAPD SSR AFLP EST SNP TRAP 分子标记技术应用引言分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA 水平遗传多态性的直接的反映。

与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比,DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性状无连锁;检测手段简单、迅速。

随着分子生物学技术的发展,DNA分子标记技术已有数十种,广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。

一.常用分子标记原理分子标记技术的种类根据不同的核心技术基础,DNA分子标记技术大致可分为三类: 第一类以Southern杂交为核心, 其代表性技术为RFLP;第二类以PCR 技术为核心,如RAPD、SSR、AFLP、STS、SRAP、TRAP等;第三类以DNA序列(mRNA 或单核苷酸多态性)为核心,其代表性技术为EST标记、SNP标记等。

理想的分子标记应达到以下的要求:①具有高的多态性;②共显性遗传;③能够明确辨别等位基因;④分布于整个基因组中;⑤选择中性(即无基因多效性);⑥检测手段简单、快速;⑦开发成本和使用成本尽量低廉;⑧在实验室内和实验室间重复性好。

目前,没有任何一种分子标记均满足以上的要求,它们均具有各自的优点和不足。

SRAP标记技术在植物基因分型中的应用

SRAP标记技术在植物基因分型中的应用随着生物技术的逐渐发展,人们对植物基因分型的需求也越来越高,因为植物基因分型可以让我们更好地研究和利用植物的遗传资源。

在这方面,SRAP标记技术是一种非常有效的方法,下面我将围绕这个主题展开讨论。

什么是SRAP标记技术SRAP是Sequenced-Related Amplified Polymorphism的缩写,即序列相关扩增多态性。

这种技术是利用PCR扩增DNA的方法,通过引物在基因组DNA的不同区域进行扩增,得到具有多态性的DNA条带。

与AFLP和RAPD等分子标记技术相比,SRAP标记技术具有高效、快速、经济和重复性好等特点,在植物研究和品种鉴定中应用广泛。

SRAP标记技术的优点1. 高效:SRAP标记技术擅长鉴定植物种内和种间遗传变异,能够在一次PCR 反应中产生多个多态性DNAband。

2. 经济: SRAP标记技术是一种低成本的分子标记技术,通常只需要一对引物就可得到可重复结果。

3. 重复性好:SRAP标记技术产生的结果很稳定,扩增的带谱重复性好,可重复性高,因此可用于不同实验室和不同时期的研究。

4. 可靠性强:SRAP标记技术可靠性高,主要是因为其引物是针对连续序列扩增出来的,提高了扩增和分析的精度和准确性。

SRAP标记技术的应用1. 植物种质资源鉴定:SRAP技术能够在拟南芥、水稻、玉米、葡萄等植物种质资源鉴定中快速可靠地检测到基因组水平的单倍型多样性和分子附属变异,有助于提高种质资源的利用价值和保存。

2. 植物遗传进化研究:SRAP标记技术可以通过研究不同地理分布区域的植物DNA序列变异情况,了解植物种群的时空演化、适应性进化、基因流动和遗传多样性等,为保护和利用自然资源提供有力的分子生态学依据。

3. 植物杂交种鉴定:SRAP技术也被广泛应用于植物杂交种的筛选,由于其具有高效、准确、经济等特点,可用于不同植物之间的杂交亲缘关系鉴定和分子标记辅助育种。

分子标记SRAP实验报告

分子标记SRAP实验报告1. 引言分子标记是现代生物技术研究中的关键方法之一。

它可以通过扩增特定的DNA 序列,从而在种群遗传学、进化生物学、基因定位等方面提供有力的支持。

SRAP (Sequence Related Amplified Polymorphism)是一种新颖的分子标记技术,通过对相邻序列的扩增产物进行光谱分析,实现对DNA的多态性研究。

本实验旨在探究SRAP技术的可行性和应用价值。

2. 材料与方法2.1 实验材料- 植物样本:从绿色植物中收集新鲜叶片样本,保持样本的完整性和活性。

- 试剂:Tris-HCl缓冲液、EDTA、SDS、DTT、RNA酶A、异丙醇、等温酶I、DNA聚合酶、dNTP作为PCR反应的试剂。

- 仪器设备:离心机、PCR仪、凝胶电泳装置。

2.2 实验步骤1. DNA提取:将植物样本加入到400 μl Tris-HCl缓冲液中,加入100 μl 2% CTAB和10 μl 20 mg/ml RNA酶A,反复翻转均匀混合。

在65C水浴中孵育35分钟,加入1 ml 等温酶I和20 μl 10% SDS,并在37C水浴中孵育30分钟。

加入50 μl DTT,轻轻倒放翻转均匀后,在65C水浴中孵育30分钟。

加入500 μl 24:1等温酶I: P/C(φ=1)混合液,轻轻倒置混合。

沉淀离心,上清液移至新离心管,并加入等体积的异丙醇,轻轻翻转混合。

2. PCR扩增:将DNA样品加入PCR反应管中,配制成PCR反应液。

设置合适的PCR反应条件,进行PCR扩增。

3. 凝胶电泳:制备1%琼脂糖凝胶,并将PCR产物和DNA分子量标记物一同加入凝胶槽中。

进行电泳,观察扩增片段的大小和形态。

4. 光谱分析:将电泳结果照相,并进行光谱分析。

记录每个扩增片段的出现频率和多态性信息。

3. 结果与讨论通过以上步骤,我们成功获取了植物样本的DNA,并进行了SRAP-PCR扩增。

在凝胶电泳结果中,观察到了多个扩增片段,且大小和形态各异。

利用InDel_标记鉴定汴早九号大白菜杂交种纯度

中国瓜菜2023,36(12):33-38收稿日期:2023-10-24;修回日期:2023-11-27基金项目:河南省重点研发专项(221111110100)作者简介:冯健起,男,副研究员,研究方向为大白菜遗传育种与栽培。

E-mail :**************大白菜(Brassica rapa )是起源于我国的一种重要传统蔬菜,在平衡稳定我国“菜篮子”中起着重要作用。

随着我国城镇化的发展以及蔬菜多元化的需求,大白菜的消费倾向于优质、小型、软叶率高的品种,汴早九号正是以此为目标选育出来的新品种,2018年该品种在农业农村部完成非主要农作物品种登记,编号为GPD 大白菜(2018)410957,适合黄淮海流域推广种植,已在河南、河北、安徽、山东等地推广,田间高抗病毒病,抗霜霉病以及软腐病。

种子纯度是种子主要的质量指标,在农业生产中,种子纯度不合格易造成巨大的经济损失[1]。

目前,杂交种的纯度鉴定通常采用田间形态学、蛋白质电泳和DNA 分子标记鉴定法。

田间形态学鉴定法存在诸如周期长、易受环境影响、重复性差等问题,其准确性难以把握[2]。

而分子标记技术因不受组织特异性及外界环境的影响,且具有鉴定准确、快速、重复性强等特点,已成为检测作物杂交种纯度真实且可靠的方法[3]。

钟开勤等[1]利用相关序列扩增多态性SRAP (Sequence-Related Amplified Polymorphism )标记技术,快速且准确鉴定福春1号大白菜的纯度。

宋顺华等[4]采用扩增片段长度多态性AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism )技利用InDel 标记鉴定汴早九号大白菜杂交种纯度冯健起1,王培云1,蔡亚平2,丁聪1,王惠云3,生园园1(1.河南省开封市农林科学研究院河南开封475004;2.河南省开封市种业发展中心河南开封475004;3.河南省开封市农业农村发展服务中心河南开封475004)摘要:为了准确高效地鉴定大白菜汴早九号杂交种的纯度,从已公布的基于大白菜全基因组开发的32对InDel 核心引物中筛选获得了InDel 引物BrID90029,在汴早九号父母本间呈互补带型且易辨别。

利用SRAP分析东北地区甜菜品系遗传多样性


少种 质资源 , 遗传 基础 狭窄 , 而且我 国 的甜菜育 种多 数仍然 依赖 于植株 表型 性状 的选择 及一 些生理 生化 指标 的测 定 . 很少 从分 子标 记的遗 传层 面进行 深入研 究 , 使育 种水平 提 高缓慢 。为 了培育 出适合 黑龙 江省 的更 致
为高 产 、 抗病 、 高糖 的甜 菜新 品种 , 免遗 传基础 过 于狭窄 可能造 成 的危害 , 必要 对东北 地 区的甜菜 资 源进 避 有 行 亲缘关 系 和遗传 多样性 分析 。 年来 , 国有关甜 菜 的遗传 多样性 和分子 标记 育种 的研究 已有 所进展 。 近 我 路
中 国 糖 Cr p fChi na
第 2期
文章 编 号 : 0 7 2 2 ( 0 0)2 0D 4 0 10 — 6 4 2 1 0 —H — 5 o
利用 S A R P分析东北地区甜菜品系遗传多样性
王 芊 ,则 z王 忠 茂 吴 东z陈 丽 华 z , ,
的线粒体 D A和叶绿 体 D A进行 R P N N A D分析表 明.甜菜 不育系 和保持 系 的叶绿 体 D A之 间不存 在差异 . N 而 在线粒体 D A之 问存在 丰富 的多态性 。目前 分子标 记技术 主要包括 A L R L S A S R、 A D、 S N F P、 F P、R P、S R P I R S
少 王华 忠等[  ̄ Z5 41 - 应用 S A R P分 子标记 分析 了 4 9个甜 菜材料 的遗传 多样性 . 并对 S A R P引物 组合进 行 了筛选 以及 甜 菜 S A — C R P P R反 应 体 系进 行 了优 化 本 试 验对 9 4份 东北 地 区甜 菜 品 系材 料 和 6个 国外 品种 进 行 SA R P分 子标 记分析 . 8 从 8对 引物组 合 中筛选 出有 效 引物组 合 3 3对 . 可以有 效地 对甜 菜进 行分 子标 记分类 和 亲缘关 系分析 . 为指导种 质资源 引进 . 杂交 组合亲 本选择 和分子标 记辅助 选择 育种等 提供科学 依据 。
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相关序列扩增多态(SRAP)在农作物遗传育种中的应用
2.1遗传多样性研究
遗传多样性是指物种中不同个体遗传变异的总和。

遗传多样性的研究是植物种质资源保护、品种改良和开发利用的基础。

分析种质资源的遗产多样性,探讨遗传基础和亲缘关系,为种质资源的利用提供理论基础。

何凤发等[12]随机选用了27对SRAP引物对44份马铃薯(Solanum tubero-sum)资源进行遗传多样性分析,有23对引物可产生104条多态性条带,平均每对引物产生4.5个多态性条带,表明SRAP标记有较高的多态性比率,多态性丰富,可用于马铃薯遗传多样性的分析。

李晓慧等[13]采用SRAP分子标记对西瓜(Citrullus lanatus)进行遗传多样性分析,8对引物组合共产生多态性条带37条,平均4.7条,每对引物平均多态性比率为28.675%,结果表明SRAP标记具有较高的多态性,适合于分析西瓜等遗传差异小的物种。

2.2标定基因
标定基因对于后基因组学的研究和作物育种具有重要意义。

育种工作的目的就是实现品种改良,品种改良的实质就是对目的基因进行选择并实现优异基因集成的过程。

因而实现目的基因的快速定位、提高其选择效率,是加快育种进程的关键。

农作物的一些重要性状都是由一个或多个基因决定的。

如果能够找到与目的性状相关联的基因或是找到与目的基因连锁的分子标记,在杂交育种时就可以有目的地选择亲本,并且对于子代可以快速地鉴定,提高育种效率。

在甘蓝型油菜(Brassica napus)的育种过程中,选择黄色籽粒是一个重要的任务。

Fu等[14]利用SRAP分子标记对在不同环境中生长的2个重组品系的杂交品种进行分析,发现了19个数量相关性状基因,其中一个主要的基因与标记EM11ME20/200相邻,通过比较基因组学分析发现这个重要的QTL基因两侧的标记序列与拟南芥第5条染色体中定位于At5g44440基因和At5g49640基因间的一个重要的QTL基因的两侧序列有高度的同源性。

产量性状是复杂的数量性状,对油菜产量性状进行分析,可确定其在染色体上的位置及其遗传效应,可以探讨油菜杂种优势产生原因,提高育种中对产量性状优良基因型选择的效率。

Chen等[15]对油菜的双单倍体群体和F2群体进行SRAP分析,发现了与6个生产性状相关的QTL基因,包括植株高度、最低有效分枝的高度、主花序长度、角果长度、有效分枝数和角果密度,在某些染色体的区域中有多个性状的QTL,与观察到的部分表型性状的相关性是一致的,表明QTLs的紧密连锁是相关性遗传的基础。

燕麦是人们常用的谷物,但是现在在谷物生长的土壤中经常会含有一些重金属物质,如镉。

镉是非必需的重金属,在低浓度时对细胞就是高毒性的,而植物自身有一套机制可以负责镉的解毒,并控制镉的含量,但是对于同一种植物的不同品种可能由于遗传因素的原因,它们的镉含量是有差异的,因此培育低镉含量的植物是育种的重要目标,试图找到与低镉含量连锁的分子标记,作为表型选择的依据。

在对燕麦(Avena sativa)的分析中运用混合群分离分析,发现了4个与镉含量相关的分子标记:1个SRAP,2个RAPDs,1个REMAP,这4个标记同属于一个连锁群,代表着与谷物镉含量密切相关的质量性状位点[16]。

2.3构建遗传图谱
遗传图谱是确定基因或DNA标志在染色体上的相对位置和遗传距离,是研究基因组遗传与变异的重要手段。

衡量遗传图谱质量的一个重要标准是标记分布的均匀程度,而标记类型是影响连锁群上的标记均匀分布与否的重要因素之一。

李媛媛等[17]利用SRAP、SSR和AFLP 3种分子标记技术对甘蓝型油菜进行遗传分析,构建了1张包含21个连锁群的遗传图谱,其中涉及137个SRAP标记、143个SSR标记和118个AFLP标记,图谱长1949.8 cM。

在此研究中,虽然SSR和SRAP标记在图谱上呈间隔分布,并且在所有21条连锁群上,仅N7连锁群上的标记分布不均匀,但SSR标记仅分布于非编码区,并且开发费时费力;AFLP标记与SRAP标记相比,AFLP标记操作复杂,需要经过酶切、连接等步骤,成本较高,并且AFLP容易密集分布,在研究中约有1/2的AFLP标记仅分布在4条连锁群上。

因此,相比之下SRAP更适合于图谱构建。

Sun等[18]利用1 634对SRAP引物组合对双单倍体甘蓝型油菜群体作图,共产生了13 551条SRAP条带,构建的遗传图谱中基本上每1 cM就有8.45个SRAPs,比物理图谱中每100 kb出现1个标记的频率更高,是一张高密度的遗传图谱,这表明单一的SRAP标记对构建遗传图谱是适合的。

2.4品种鉴定
由于育种工作的大力推广与开展,几乎每个农作物中都培育了很多品种,有些品种从形态上看较为相似,并且也存在同物不同名的现象。

为了有效地区分这些品种就必须建立分子鉴别机制。

王燕等[19]利用15个引物组合对番茄(Cyphomandra betacea)11个主要品种以及1个近缘野生种进行种质鉴定的SRAP分析,双引物组合me8/em8-1与me6-1/em14-1可以区分所有供试材料,表明SRAP可有效用于番茄品种资源鉴定。

Hao等[20]利用24对SRAP引物组合对芍药属(Paeonia)的29份栽培品种进行研究,这29份品种分别属于不同组,有14个为芍药组植株,有13个为牡丹组植株,还有2个芍药组和牡丹组的杂交植株,扩增共产生了197条带,其中187条多态性条带。

扩增条带结果显示,用独特的扩增条带和特殊的引物组合鉴定芍药栽培品种是有效的,可以用35条SRAP条带把14个芍药栽培品种两两相互区分,并且还通过Me8/Em8和Me8/Em1这2对引物组合把芍药和牡丹样品全部分离。

3展望
综上可以看出,SRAP标记已被应用到农作物研究的很多领域,是一种简单有效的分子标记。

与其他分子标记相比,由于SRAP标记扩增对象是基因组中的开放阅读框,可以体现开放阅读框区域的多态性,也可更好地解释物种性(下转第82页)
(上接第80页)
状差异的原因。

对研究中获得的SRAP差异片段可以测序,把它转化成SCAR(sequence characterized amplified region)标记,这将更加有利于种质资源的筛选鉴定工作。

总之,相信随着检测手段的精确度不断提高和分析方法的逐步改进,SRAP标记会更加完善、更为广泛地用于物种分子遗传水平的研究。

4参考文献
[1] 邓丽琴,祝朋芳,陈长青.试论常规育种与分子育种的研究应用[J]. 杂粮作物,2004,24(5):280-281.
[2] LI G,QUIROS C F. Sequence-related amplified polymorphism(SRAP),A new marker system based on a simple PCR reaction:its application to mapping and gene tagging in Brassica[J]. Theor Appl Genet,2001(103):455-461.
[3] 陈峰,张洁夫,陈松,等.甘蓝型油菜隐性核不育基因的SRAP标记[J].江苏农业学报,2007,23(4):283-288。

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