实验三 蛋白质的两性反应和等电点的测定

实验三蛋白质的两性反应和等电点的测定

一、目的和要求

1.了解蛋白质的两性解离性质。

2.初步学会测定蛋白质等电点的方法。

二、原理

蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数的氨基与羧基成肽键结合，但是总有一定数量自由的氨基与羧基，以及酚基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样时两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的PH值称为该蛋白质的等电点（PI）。当溶液的PH低于蛋白质等电点时，即在氢离子较多的条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子；当溶液的PH高于蛋白质等电点时，即在氢氧根离子较多的条件下，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。

在等电点时蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。

三、试剂和器材

1.试剂

0.5%酪蛋白溶液；酪蛋白醋酸钠溶液；

0.04%溴甲酚绿指示剂；

0.02N盐酸；

0.1N醋酸溶液；

0.01N醋酸溶液；1N醋酸溶液；

0.02N氢氧化钠溶液

2.器材

试管及试管架；滴管；吸量管（

1、5ml）

四、操作方法

1.蛋白质的两性反应

（1）取1支试管，加

0.5%酪蛋白溶液20滴和

0.04%溴甲酚绿指示剂5-7滴，混匀。观察溶液呈观的颜色，并说明原因。

（2）用细滴管缓慢加入

0.02N盐酸溶液，随滴随摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的PH 接近与酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。

（3）继续滴入

0.02N盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，并说明原因。

（4）再滴入

0.02N氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，解释其原因。

继续滴入

0.02N氢氧化钠溶液，为什么沉淀又会溶液？溶液的颜色如何变化？说明了什么问题？

2.酪蛋白等电点的测定

（1）取9支粗细相近的干燥试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂。

加入每种试剂后应混合均匀。

试管编号9

蒸馏水（ml）

2.4

3.2—

1.60.8———

2.03.

03.51.

52.753.38—————

———加1N醋酸溶液入0.1N醋酸溶液—的0.01N醋酸溶液—试酪蛋白醋酸钠剂溶液最终PH

沉淀出现情况

4.02.

01.00.5—

————

2.51.

250.62

1.01.

01.01.

01.01.

01.01.

01.0

3.53.

84.14.

44.75.

05.35.

65.9

（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以—，+，++，

+++，++++符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个PH是酪蛋白的等电点？

（3）该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。

五、思考题

1.在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。

2.在本试验中，酪蛋白处于等电点时则从溶液中沉淀析出，所以说凡是蛋白质在等电点时必然沉淀出来。上面这种结论对吗？为什么？请举说明。