高二生物酶活力的测定

合集下载

酶活力测定方法

空白和对照试验：空白试验：是指杂质反应和自发反应引起
的变化量，它提供的是未知因素的影响。空白值可以通过不加酶，或不加底物，或二者都加（酶预先经过失效处理）。
对照试验：是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要作为比较或标定的标准。
3）测定方法：
取样测定法：
酶变性剂：5% 三氯醋酸 3% 高氯酸其它酸、碱、醇类
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽图法和胰蛋白酶切ＲＰＨＰＬＣ肽图法。返回练习与思考
1．何谓：生化药物、生物技术药物、基因工程药物和生物制品？ 2．生化药物和基因工程药物各分哪几种？ 3．与化学合成药物的分析相比，生物药物的分析有何特点？
返回
加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进行直接连续检测。
检测方法：紫外-可见分光光度法旋光法荧光分光光度法电化学测定法酶偶联测定法离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定胰蛋白酶肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸）水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
2．酶活力测定法
1）基本原理：酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越高。

【高中生物】高中生物知识点：酶的制备和活力的测定

【高中生物】高中生物知识点：酶的制备和活力的测定酶的制备和活力的测定：酶活力（enzymeactivity）：也称为酶活性，是指酶在催化一定的化学反应时表现出来的能力，通常用酶促反应的速率即酶促反应过程中单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。

酶活力的高低会受温度、pH、激活剂等多种因素的影响。

酶的提取一般选择在低温和适合的pH下进行，有时还要加入酶的激活剂以提高酶活力。

例如，从植物材料中提取果胶酶就是在低温、偏酸性的提取液和NaCl作激活剂的条件下进行的。

一、制备果胶酶1、实验材料和器具：新鲜的水果或蔬菜；质量分数为10%的NaCl溶液，0.1mol/L冰醋酸；研钵，剪刀，漏斗，纱布或滤纸，烧杯，精密pH试纸，试管，酒精灯，离心机，榨汁机等。

2、果胶酶的制备：（1）将50g新鲜的水果或蔬菜洗净，在预冷的研钵内用剪刀迅速剪碎后研磨，边研磨边加入质量分数为10%NaCl溶液50mL，制成匀浆。

（2）漏斗中放置滤纸或5层纱布过滤匀浆液，收集滤液。

（3）以4000r/min的离心速率离心滤液15min。

注意使用同一规格的离心管，离心管内滤液的高度不超过离心管长度的2/3，离心前要确保在离心机中对称放置的离心管（内含滤液）的质量相等。

（4）离心完毕后，果胶酶主要存在于离心管的上清液中，迅速地将上清液倒入洁净的小烧杯内，用0.1mol/L冰醋酸将pH调至3～4，在0～4℃下保存备用。

二、观察果胶酶对苹果匀浆液的作用1、用榨汁机制作苹果匀浆液，将匀浆液置于90℃的恒温水浴中保温4min。

冷却后再过滤，收集滤液。

2、取两支试管，编号为1和2，分别加入30mL滤液，再向试管1中加入30mL保存备用的上清液，向试管2中加入经过90℃水浴保温4min后的上清液30mL，振荡摇匀两支试管，置于室温下。

3、观察两支试管中苹果匀浆液的澄清程度变化，并将结果记录在下表中。

项目苹果匀浆液/mL上清液/mL90℃水浴保温4min后的上清液/mL现象澄清时间试管1 （样品管）3030试管2 （对照管）3030知识点拨：注意事项：在温度、pH影响酶活性的实验中，始终都贯穿着对照原则，而在设置对照实验时最重要的是运用单一变量原则，其中的变量就是我们所研究的对象，所以在分析实验问题时，要紧紧抓住研究变量，把其他可能影响实验结果的变量变为常量，才能保证对照实验结果的严密性和准确性。

酶活性的实验报告

一、实验目的1. 了解酶活性测定的基本原理和方法。

2. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和激活剂对酶活性的影响。

二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一和可调节的特性。

酶活性是指酶催化反应的能力，通常用酶活力单位（U）表示。

在一定条件下，酶活力与反应速率成正比，即反应速率越快，酶活力越高。

本实验采用比色法测定酶活性。

在酶催化反应中，底物被转化为产物，同时产生一定量的有色物质。

通过测定有色物质的吸光度，可以计算出酶活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。

- 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。

- 抑制剂：碘化钠、氟化钠、氯化钠等。

- 激活剂：硫酸铵、氯化钙等。

- pH缓冲液：磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。

2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 恒温水浴锅- 移液器- 试管- 试管架- 秒表四、实验方法1. 酶活力测定：- 将酶和底物混合，置于恒温水浴锅中。