呼吸道感染IgM九项联检试剂说明书终稿子
呼吸道九联检sop
呼吸道九联检操作程序呼吸道感染概述一、气管和支气管等咽喉呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、、上呼吸道感染常见的分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸系统，。
指鼻腔是急性上呼吸道感染、），tract infectionupper（acute respir 常见病因是呼吸道最常见的一种传染病咽或喉部急性炎症的概称。
，不仅性别职业和地区为病毒少数由细菌引起患者不分年龄。
、，、。
下呼吸道感染是最常见具有较强的传染性而且可引起严重并发症。
，肺炎支气管炎慢性支气管炎的感染性疾患包括急性气管——、，、、军团菌等微生物引衣原体由病毒支气管扩张等细菌支原体、、、，、治疗时必及时治疗的原则起其防治应遵循预防为主准确诊断，，、、须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
免疫荧光法介绍一、又称荧光抗体免疫荧光技术）technique（Immunofluorescence生物化学是标记免疫技术中发展最早的一种它是在免疫学技术、。
，很早以来就有一些学者和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
利用抗原抗体反应进行组织或试图将抗体分子与一些示踪物质结合，年首次采用荧光素进行标等于细胞内抗原物质的定位1941。
Coons 这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为记而获得成功。
用荧光抗体示踪荧光抗体技术technique）。
fluorescent（antibody 用已或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；这两知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合种方法总称免疫荧光技术，，用于检测或定也可以与其他蛋白质结合用于检测或定位各种抗原，，位抗体但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用所以人们习惯称，，为荧光抗体技术或称为免疫荧光技术用免疫荧光技术显示和检查。
，细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞或组织）（化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同还可进一步分做若干种。
，与放射免疫法相比荧光免疫法无放射性污染并且大多操作简便，，，便于推广该技术的主要特点是特异性强敏感性高速度快主。
呼吸道九联检技术手册
一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、非典型呼吸道病原体已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。
嗜肺军团菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是一种兼性细胞内致病菌，有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌科军团菌属多形态性的短小球杆菌。
其不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。
不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。
嗜肺军团菌无色，也非自身荧光，氧化酶与过氧化氢酶测试阳性，β-内酰胺酶阳性。
专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。
菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味，革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。
广泛分布于天然淡水环境或人工水域中，在阿米巴体内寄生，亦可感染人巨噬细胞，在其胞内繁殖和杀死人巨噬细胞，是引起军团菌病（军团菌肺炎）的重要病原体。
军团菌病在国内外时有爆发流行，中央空调冷凝塔水系统是引起军团菌病的主要传染源，病死率较高。
目前已知军团菌有48个种70多个血清型，其中嗜肺军团菌有15个血清型，血清型-1是引起社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体。
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测
近年来，随着人员在社会上的流动范围进一步扩大及频繁、现代化生活的享受及体育锻炼的减少、人口的老龄化、生活环境改变等因素所致，疾病发生的概率增加。
本文对呼吸道被九种病原体感染情况作一统计分析，并探讨其在人体感染后产生IgM抗体分布情况。
资料与方法2018年1月-2019年2月收治患者762例，年龄12～90岁，平均54.3岁。
标本采集：清晨空腹采集静脉血4mL，置于血清分离胶管(非可替)中，颠倒混匀3～5次，3000r/min，分离血清。
试剂与仪器：①试剂：郑州安图生物工程股份有限公司提供。
②仪器：免疫荧光显微镜、离心机。
检测方法：采用间接免疫荧光法(IFA)检测，按照试剂说明书进行，并用免疫荧光显微镜观察结果。
质量控制：质量控制10孔，除了嗜肺军团菌，载玻片上的所有抗原都是从细胞培养物中获得。
每1个病毒类病原体孔中都含1%～15%用甲醛灭活的感染细胞，无感染的细胞用丙酮固定。
九项呼吸道感染病原体IgM抗体阴性为正常，最后进行统计学分析。
结果762例九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测情况，结果全阴性582例，阳性180例，占检测数的23.6%。
阳性人群中男93例(51.7%)，女87例(48.3%)。
180例阳性结果，见表1和表2。
讨论嗜肺军团菌中人最容易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
据临床统计约10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起。
临床上军团菌感染主要有肺炎型和庞蒂亚克热型两种表现形式。
现代人们无论在单位工作，还是在自己家中和娱乐场所活动，由于大量空调的使用，加之对空调的消毒及清洁保养不到位，导致空调内产生大量的细菌，随空调的气流流动而传播给人们，易感人群易发病。
其中以军团菌较为常见。
军团菌肺炎潜伏期为2～10d，IgM抗体在感染后1周出现，并可持续存在3～6个月[1]。
肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，在季节交替时，易感人群容易发病。
特别是老年人，由于免疫力下降，也会导致肺炎支原体感染的机会增加。
呼吸道九联检操作规程-SOP
广州市医院检验科免疫室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2011年8月8日启用日期：2011年8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P001-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 1页批准页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床免疫检验操作规程文件NO.2版经实际运行，现予以批准通过，于 2011年 8月8日起生效并开始实施。
免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。
（NO.2版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。
任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。
2011年8月8日编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P003-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页呼吸道九联检操作规程1.项目中英文名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）2.实验原理与方法：2.1 原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。
用免疫荧光显微镜观察结果。
2.2 方法：间接免疫荧光法3.标本的要求：需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。
使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。
血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。
呼吸道病原体IgM九联检
呼吸道病原体 IgM 九联检
1、名称： 呼吸道感染病原体
IgM 九联检
2、项目简介、临床意义及收费标准：
检测项目
临床意义
适用
收
人群 费
肺炎衣原体 引起非典型性肺炎，其诊断主要依靠实验室诊断。
肺炎支原体 引起支气管炎、毛细支气管炎及间质性肺炎的重要病原体
呼 呼吸道合胞病毒 下呼吸道感染最重要的病因之 一。
呼
吸 吸 道
副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、 下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒。
Ⅲ型
道
感
感
染
染
嗜肺军团菌
社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体
病 病
原
原 腺病毒 居病毒性肺炎的第二位 体 体
筛
甲型流感病毒
病毒呈季节性流周期性行爆发，每年都会发生。
Ig
查
M
乙型流感病毒
引起乙型流行性感冒，每 3-6 年爆发一次。
九
联
Q 热立克次体 严重病例常发生大叶实变，慢性会并发肝炎和心内膜炎等。
检
3 、标本采取：
试管种类：分离胶 -促凝管（黄帽） ，静脉血 3ml 。
采取时间：每天 9 点之前送三层检验科微生物室。
特殊要求：无
所有 40
呼 吸 0
道 感 元
染 症
状 的
人群
4、检测时间、报告时间：
报告回送：现每周一、三、五出报告。
以后根据临床需求，出报告日期会有所调整。
5、注意事项：标本避免溶血、乳糜血、黄疸血等特殊标本。
6 、联系科室、电话：检验科微生物室(TeL ： 84205491) 。
呼吸道感染病原体抗体(IgM)九联检检测及应用(格式整齐)
医院医学
43
抗原抗体检测
IgM IgG
医院医学
44
病原体潜伏期 IgM抗体产生时间
病原体
潜伏期
嗜肺军团菌 肺炎支原体
2-10天 14-21天
IgM产生时间 1周左右 1周左右
Igm存在 时间 3-6个月
3-6个月
Q热立克次体 12-19天
2周左右
医院医学
7
嗜肺军团菌
LP是社区获得性肺炎的重要致病菌。在欧洲和 北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3，4位， ICU 重症社区获得性肺炎的第三位。
对人致病的LP有16个血清型，军团菌肺炎8O% 由LP1引起。
美国每年新发军团菌肺炎病例1万例，我国各 省市均有散发病例报告。
夏秋季为军团菌肺炎流行高峰季节，散发病例 全年均有发生。
Q热立克次体
感染后潜伏期12-39天，突然发作，伴 发热、剧烈头疼、寒颤、严重乏力。
Q热的诊断为临床和实验室检查结合。 建议使用氯霉素，四环素类抗生素治疗。
医院医学
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医院医学
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肺炎衣原体
衣原体是一类严格真核细胞内寄生，具有 独特发育周期，并能通过细菌滤器的原 核细胞型微生物。
医院医学
医院医学
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肺炎支原体
小龄儿童（〈5岁〉中肺炎支原体感染经常无 症状而消失或只导致轻度呼吸道感染。由于感 染后没有足够的免疫力存在，会出现需要长时 间康复期并不断加重的再感染（多次）。
医院医学
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肺炎支原体
支原体肺炎后遗问题是由于疾病的严重损害， 致使气道、肺组织的完全修复已不可能而造成 的，已逐渐引起人们的重视。后遗问题最严重 的是出现弥漫性肺间质纤维化、肺功能衰竭。 其他后遗问题还有反复呼吸道感染、支气管哮 喘等。
微生物检验九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测操作规范
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测操作规范
一、实验目的：检测九项呼吸道感染病原体IgM抗体
二、实验原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中抗体与吸
附在载玻片上的抗原发生反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步中，抗原-抗体复合物与荧光标记素标记的抗人球蛋白反应。
用荧光显微镜观察结果。
三、实验材料：1、试剂：磷酸缓冲液、吸附剂（羊抗人IgG）、结
合物（异硫氰酸荧光素）、封闭介质（甘油缓冲液）。
2、器料：载玻片（前九孔含有抗原，第十孔为质控孔）、盖玻片、37℃恒温箱、3000rpm离心机、荧光显微镜、湿盒。
四、实验步骤：1、配制PBS溶液：1瓶PBS加1L水溶解。
2、稀释血清样本：按1:1比例稀释血清样本，即15微升血清加入15微升PBS溶液中。
3、将30微升稀释后的血清样本加入150微升吸附剂，彻底混匀，离心3000rpm离心15分钟。
4、在载玻片上每孔加入15微升吸附剂处理后的血清（离心后的上清液）。
5、将载玻片放入湿盒，37℃温育60分钟。
6、用pbs溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
待载玻片完全干燥后，每孔加入抗人IgMFITC结合物15微升。
7、将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
8、用PBS溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
9、加适量封闭介质，盖上盖玻片。
10、尽快用荧光显微镜在100倍下观察结果。
五、实验结果：。
呼吸道感染IgM九项联检试剂使用说明终稿
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
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呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。
用免疫荧光显微镜观察结果。
【主要组成成份】除PBS外，所有试剂均可直接使用。
为了易于识别，所有试剂均有一个给定的编号。
在操作骤中，写明了每一步所使用试剂的编号。
1载玻片：10片（10孔/片），含有下列抗原：1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集）2. McCoy细胞中的肺炎支原体3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集）4. 肺炎衣原体（原生小体）5. HEp-2细胞中的腺病毒6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒7. LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒8. LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒9. LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型10. 质控孔。
除了嗜肺军团菌，载玻片中的所有抗原都是从细胞培养物中获得。
每一个病毒孔里都含有1%~15%用甲醛灭活的感染细胞，无感染的细胞用丙酮固定。
：1瓶，pH 7.2PBS粉末，用1L蒸馏水溶解。
阳性质控：500 µL阳性质控血清，含叠氮钠。
阴性质控：500 µL阴性质控血清，含叠氮钠。
标记的抗人IgM结合物：2 x 1.1mL，荧光素标记的抗人IgM磷酸缓冲液，含有伊文斯蓝、叠氮钠和蛋白稳定剂。
封闭介质：3mL，甘油缓冲液，含叠氮钠。
抗人IgG球蛋白（吸附剂）：1 x 1.5mL（羊抗人IgG，含叠氮钠）。
需要但未提供的材料：1.精确的微量移液器2.恒温培养箱3.蒸馏水4.24x60 mm盖玻片5.湿盒6.荧光显微镜以及制造商推荐的滤光片【储存要求及有效期】2~8℃储存。
不要使用超出标签上有效期的试剂。
未拆封的试剂盒2~8℃储存可稳定至标示有效期的月末。
拆封后试剂的储存试剂的稳定性及操作在无菌条件下操作试剂以防微生物污染。
仅使用试验所需量的吸附剂、PBS、质控血清和结合物溶液，剩余的试剂不要倒回瓶中。
PBS溶解后储存在2~8 ºC，如出现浑浊请勿使用。
对于试剂盒内试剂的不正确操作，VIRCELL, S.L.将不对其试验结果负责。
【适用仪器】荧光显微镜【注意事项】1. 仅用于体外诊断。
仅限专业人员使用。
2. 仅使用试剂盒内的组分，不要混用不同试剂盒或不同厂家的试剂组分。
只有PBS、吸附剂、封闭介质和载玻片可与其他批次VIRCELL IFA试剂盒通用，其它组分同批次可以混用。
3. 每步操作必须使用干净吸头，仅使用干净的耗材，最好是一次性使用的耗材。
4. 包装如有损坏请勿使用。
5. 切勿用嘴吸移液管加样。
6. 本试剂盒中的吸附剂、结合物和质控血清含有动物源性物质，质控血清还含有人源性物质。
尽管本试剂盒中的人血清质控品已经测试为HBsAg、HCV抗体和HIV抗体阴性，质控血清和病人样本仍应作为潜在感染性物质进行处理。
孔内包被的经灭活的嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q 热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型，也仍应视为具有潜在感染性并小心处置。
目前没有方法可以确保这些或其他感染性物质不存在，因此所有的材料应视为具有潜在感染性进行处置，应遵守当地关于临床废弃物处理的法规。
7. 结合物、吸附剂、封闭介质和质控品含有叠氮钠（浓度＜0.1%），避免接触酸和重金属。
8. 封闭介质含有甘油，请勿接触酸和暴露在高温下。
9. 伊文斯蓝（浓度＜0.1%）是一种致癌物。
请勿接触皮肤和眼睛。
万一接触到该溶液，用水彻底冲洗并到医院检查。
10. 仅按本说明书进行操作，不遵守规定的温育时间和温度会导致错误的结果。
11. 载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要小心操作防止发生。
12. 显微镜光学系统、光源条件和类型会影响荧光质量。
13. 不要将试剂不必要地放置在室温下过长的时间。
14. 每个载玻片只能使用一次。
不要分割，也不要再使用没有用过的孔。
15. 试剂盒里的玻璃组分破碎时可能伤及身体，小心处理。
16. 吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉淀出现。
【样本要求】需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。
使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。
血清样本采集后2~8 ºC 冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC ）保存。
不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM 。
不要使用高血脂或污染的血清。
若样本中含有微粒要离心使之澄清。
【检测方法】 *实验步骤1. 使用前，将所有试剂平衡至室温。
载玻片平衡至室温后再打开。
*实验前准备只有PBS 需要预先配制。
将试剂中的成分加入1L 蒸馏水中，摇匀直止完全溶解。
配好后储存在2-8ºC 。
2. 按1:1比例稀释血清标本，即25µL血清加入25µ需要稀释。
3. 用抗人IgG吸附剂处理稀释后的血清：将30µL稀释后的血清加入150µL吸附剂中，彻底混匀。
质控血清和不需吸附剂处理。
处理后的血清要离心除去沉淀，以防干扰检测。
4. 在载玻片的每孔中加15µL吸附剂处理过的血清。
在一个载玻片的每孔中加入15µL不稀释的阳性质控15µL不稀释的阴性质控5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。
6. 用的缓慢水流简单冲洗载玻片PBS直接冲入孔内）后，浸泡在PBS 中并放置在振荡器上轻轻摇动10分钟。
将载玻片在蒸馏水中简单蘸洗。
7. 载玻片自然风干。
8. 每孔加入15µL抗人IgM FITC结合物溶液9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
10. 重复6和7的洗涤步骤。
11. 每孔加1小滴封闭介质12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。
如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8ºC不超过24小时。
【内部质量控制】每一批产品在放行前都要经过更加严格的内部质量控制（Q.C.）的检验。
质控材料可溯源到经过内部确认的参考血清盘。
【有效性判断】每一次试验都应设立阳性和阴性质控，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应为：阳性质控：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核和胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性质控：军团菌、肺炎衣原体和立克次体没有荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
【检测结果的解释】阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核和胞浆出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体没有荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
如果所有细胞或第10孔出现荧光表明存在抗核或抗细胞抗体，不能判为阳性，应用其他方法进行检测。
当质控孔中无荧光时一定要查明原因。
由于非军团菌感染的病人中经常出现交叉抗体，阳性结果需结合临床症状综合评价。
建议做较高稀释度的检测来提高阳性预测值。
呼吸道感染IgG联检试剂（PNEUMOSLIDE IgG）更适合于筛查试验。
对于广泛流行的疾病，可能会在一个标本中出现几个阳性结果。
呼吸道感染IgM联检试剂（PNEUMOSLIDE IgM）由于其高度特异性，是一种非常适用的技术，因为IgM阳性不会超过3个月，但对重复感染灵敏度较低。
近期感染诊断的理想方法是同时使用呼吸道感染IgG联检试剂和呼吸道感染IgM联检试剂：IgM联检试剂适用于检测成人的第一个标本和儿童的第一、第二个标本，IgG联检试剂适用于检测成人的第二个标本。
与说明书中所列结果不同不能判为阳性。
在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时，在所有的情况下均不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。
在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后2—3个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。
【检验方法的局限性】1.本试剂盒用于检测人血清。
2. 建议用户仔细阅读和理解说明书，严格按照程序进行操作才能获得可靠的检测结果。