中性红染色液(活细胞染色)使用说明
实验室常用染色液
他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。
刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。
三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。
苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。
被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。
常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。
单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。
常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。
（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。
它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。
1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
细胞染色方法
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的配制贮存液：70%酒精溶解，浓度100 μg/ml，配好后用锡纸包起来，避光，可在4摄氏度下长期保存。
使用浓度：贮存液用1xPBS稀释1000倍，最终浓度100 ng/ml。
10x PBS的配制80 g NaCl2 g KClg无水Na2HPO42 g无水KH2PO4加水到1000ml贮存液可根据需要用蒸馏水稀释荧光封片液mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm.注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。
上：正常绍鸭成纤维细胞核，下：凋亡核Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。
Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。
中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。
Lyso-Tracker Red呈红色荧光，检测时的最大激发波长为577nm，最大发射波长为590nm。
按照1:20000的比例稀释，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。
可用于家蚕脂肪体细胞autophage监测。
见李胜文章。
细胞生物学实验指导(12生工)
细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
结晶紫染色液配制及使用说明
编码
品名
规格
单位
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
10ml
瓶
GT79031-10ml
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
100ml
瓶
GT79032-100ml
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
500ml
瓶
GT79033-500ml
产品说明：
结晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把
500ml
100ml 苏木素伊红混合染色液(一 100ml
步法)
50ml 苏木素伊红混合染色液(一 500ml
步法)
3×50ml 改良 Harris 苏木素染色液 100ml
50ml 改良 Harris 苏木素染色液 500ml
100ml Mayer 苏木素染色液
100ml
100ml Mayer 苏木素染色液
500ml
(GillNo.3)
改良型石炭酸复红染液(苯酚品红 100ml Heidenhain 铁苏木素染色 3×
染液)
液
100ml
抗酸染色液（试剂盒）
50ml×3 天青石蓝苏木素染色液
2×50ml
吕氏碱性美蓝染色液（0.1%）
100ml 改良 MacConaill 铅苏木素 140ml
染色液
卢戈碘液（革兰氏染色）
7×50ml 茜素红 S 染色液(1%,pH4.2) 100mL
2*50ml 0.2%核固红染色液
100ml
2*100ml 改良 Lillie-Mayer 苏木素 100ml
染色液
常见细胞染色试剂简介
常见细胞染色试剂简介1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
它跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红（Congo red）刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
它能作染料，也用作指示剂。
它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。
用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。
在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。
刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速3、甲基蓝（Methyl blue）甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。
甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。
它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。
它的水溶液是原生动物的活体染色剂。
甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长久保存。
4、固绿（Fast green）固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。
固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。
它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
5．苯胺蓝（Aniline blue）是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。
此染料一般很难溶于水，也不易溶于酒精（1.5％）。
植物制片中可与番红合用，作为组织染色；也可作藻类植物染色。
因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。
6、苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）苏丹Ⅲ是弱酸性染料，不溶解于水，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。
常用70％酒精中的饱和溶液。
液泡系的活体染色
一块洋葱内表皮 中性红-詹纳斯绿B
30min
盖片观察
1.绘蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系的形态与分布 2.绘洋葱表皮细胞液泡系的形态与分布
中性红只将液泡系染成红色在细胞处于生活中性红只将液泡系染成红色在细胞处于生活状态时细胞质及核不被染色状态时细胞质及核不被染色成熟植物细胞的中央大液泡成熟植物细胞的中央大液泡植物细胞中央大液泡的演变过程植物细胞中央大液泡的演变过程一小块胸骨剑突一小块胸骨剑突中性红中性红10min10min吸去染液吸去染液加一滴加一滴ringerringer盖片观察盖片观察一块洋葱内表皮一块洋葱内表皮中性红30min30min盖片观察盖片观察1
液泡系的一般性质
动物细胞高尔基区的液泡主要功能是蛋白质的浓缩 与凝结，软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达 的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原 纤维等，因而液泡系发达。
植物细胞幼期，液泡很小，但随着细胞生长，液泡 长大。小液泡逐渐合并为大液泡，位于细胞中央， 占有大部分的细胞体积。植物细胞的大液泡主要成 分为水，起渗透调节作用。
液泡中溶解的溶质种类繁多，其来源与质膜、内质 网、高尔基器关系密切。
细胞的活体染色
活体染色是能使生活的细胞或组织特异性着色，但对活样品 又没有毒害作用的一种染色方法，其目的是显示生活细胞内 的某些结构，而不影响细胞的生命活动，也不产生任何物理、 化学变化，不会引起细胞死亡。并非任何染料均可用于活体 染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料， 且使用时需要配成稀淡的溶液。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red) 是活体 染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具 有专一性。 中性红只将液泡系染成红色，在细胞处于生活 状态时，细胞质及核不被染色 。
芽孢染色液配制及使用方法
北京华越洋生物提供QQ1733351176
芽孢染色液（试剂盒）
试剂盒组成：
染色液A：石炭酸复红染液
染色液B：碱性美蓝染色液
产品说明：
芽胞具有高度的折光性，外膜致密，渗透性低，着色和脱色均较困难。
在加热条件下进行染色时，染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料可被酒精脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染剂复染后，菌体和芽胞呈现出不同的颜色。
操作步骤：
1、制作一适当厚度的细菌涂片，自然干燥，通过火焰加热固定。
2、滴加适量染色液 A 于涂片上，在酒精灯上加热，使染液冒蒸汽但不沸腾。
必要时可续加染液以免干涸。
维持4-5 分钟。
3、待标本冷却后以95%酒精冲洗至无红色染液脱出为止，水洗。
4、滴加染色液B 复染约2-3 分钟，水洗至无染液脱出为止。
5、待干后油镜观察。
预期结果：
菌体呈蓝色，芽孢呈红色。
注意事项：
1. 供芽孢染色用的培养物应控制菌龄，要求大部分芽孢仍保留在菌体内为宜。
2. 加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破
裂，加热不够则芽孢难以着色。
3. 请穿实验服并戴一次性手套操作。
产地：国产
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提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。
储存条件：室温干燥保存，有效期 1 年。
关键词：芽孢染色液
芽孢染色液相关染色产品:
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实验室常用染色液
三、常用染料介绍（一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。
苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。
苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。
被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。
所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。
常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。
分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。
一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。
单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。
常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。
用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。
用洋红配成的溶液染色后能保持几年。
洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。
它们的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。
在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。
他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。
他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。
酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。
实验二、活体染色
活染注意问题
1、染料使用浓度： 中性红体外一般1/1000－1/3000，动物注 射可达1％－2％ 健纳绿：1/3000－1/5000 2、配染液用溶剂 尽量接近观察材料生活环境的液体
（二）植物叶肉细胞线粒体染色及观查
1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱）， 滴2滴0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、撕取小片植物叶下表皮，放入染液中压实； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察叶肉细胞中线粒体的形态、大小及分 布
肝组织詹纳绿染色及肝细胞线粒体观察
实验仪器用品
普通光学显微镜 小剪刀 圆头牙签 载玻片与盖玻片 胶头吸管
实验操作
（一）口腔粘膜上皮细胞詹纳绿染色 1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱），滴2滴 0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、用牙签钝头在自己口腔脸颊粘膜处用力刮取上皮 细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液中搅匀； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察口腔粘膜上皮细胞及其中染成蓝绿色的线粒 体，画图示线粒体形态及分布
1、剪取肝边缘较薄处组织1小块，放在凹玻片凹槽中， 用生理盐水反复浸泡冲洗以除去血液； 2、将凹玻片放在37℃恒温葙（为什么？），滴2滴 1/5000健那绿生理盐水液，注意不可将组织完全 淹没，使组织边缘染成蓝绿色即可，一般需2剖剪剪取 组织块边缘着色部位，放入生理盐水中，剪碎后压 片观察，画图示肝细胞及其中线粒体形态、分布。
活体染色常用染料
詹纳绿－线粒体（体外活染） 亮焦油紫－线粒体（体内活染） 中性红－液泡系（体内体外兼可） 次甲蓝－神经组织 尼罗蓝（Nile Blue）－原生动物大核
实验目的
了解常用活体染色剂及使用方法 通过活体染色了解细胞的结构和功能
线粒体超活染色
滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液
↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞
↓
刮下的粘液状物放到载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液） ↓ 盖上盖玻片，显微镜下观察
２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的
超活染色与观察
载玻片于37℃恒温水浴： 1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 洋葱鳞茎内表皮
实验六 线粒体和液泡系的超活染色与观察
一、实验目的
１、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态数量与分布； ２、学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理
细胞的各项活动所需要的能量，主要通过线粒
体呼吸作用来提供。
活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实
地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生 命活动的一种染色方法。
１滴 镊子撕取
染色10－15min，吸去染液，加Ringer溶液１
滴，盖上盖玻片，显微镜下观察。
染过色但没有染上的细胞
染色的细胞
线粒体
未染色细胞
洋葱鳞茎细胞线粒体
死亡的染色细 胞
3、植物细胞液泡系的超活染色与观察
取豆芽的根尖
↓用刀片纵切根尖
放入中性红染液滴中，染色5~10min
↓
吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检（镊子轻轻地下压盖玻片，使 根尖压扁利于观察）
处。
பைடு நூலகம்
作
业
1. 绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布，并简要分析
2. 绘示绿豆根尖液泡系的形态与分布
3、什么是活体染色？要想获得体外活体染色成功，我们应 注意哪些问题？
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
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中性红染色液（活细胞染色）使用说明
货号：G1310
规格：100ml/500ml
保存：2-8℃避光保存，1年有效。
产品简介：
中性红染色液(Neutral Red Staining Solution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成红色的染色液。
本染色液是用中性pH的等渗缓冲液配制，可直接用于活体细胞或组织的染色。
中性红染色液（活细胞染色）经过滤除菌，可以直接用于培养细胞的染色。
细胞核中的核酸呈酸性，因此细胞核会被染成红色。
由于溶酶体中也是酸性环境，因此溶酶体也可以被中性红染色液染成红色。
操作步骤：
1.样品处理
去除细胞培养液，用PBS、DPBS或Hanks等适当缓冲洗涤一次。
2.中性红染色
去除洗涤液，加入适量的染色液，确保充分覆盖细胞，染色2-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
用PBS、DPBS或Hanks等适当溶液洗涤1-2次后即可进行观察和拍照。
注意事项：
1.第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.中性红染色液长期存放会产生沉淀。
可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用过
滤或离心的方法去除沉淀后继续使用，不会影响使用效果。