常用生化检测项目分析方法及参数设置
生化分析仪参数设置
（八）底物耗尽限额设置。
有些仪器有自动选择线性功能，能自动 选择反应曲线上连续监测期内仍呈线性 的吸光度数据计算结果，使酶活性测定 的线性范围得以扩大，可以减少稀释及 重测次数。
（九）试剂吸光度上限、下限 和试剂空白速率设置。
每种试剂都有一定的空白吸光度范围， 试剂空白吸光度的改变往往提示着试剂 的变质，此时应更换合格试剂。 试剂吸光度上限为正向反应用，试剂吸 光度下限为负向反应用。
（三）：样品量与试剂量设置
3.1稀释水量。 添加样品稀释水是为了洗出粘附在采样 针内壁上的微量血清，减少加样误差， 添加试剂稀释水是为了避免试剂间的交 叉污染。所以两种稀释水应尽量减少， 以免被过量稀释。
（三）：样品量与试剂量设置
3.2最小样品量。 即分析仪进样针能在规定的误差范围内 吸取的最小样品量，随着技术的不断改 进，仪器的最小样品量逐渐减小，在样 品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的 情况下往往需采用分析仪的最小样品量 作为减量参数，从而使仪器的检测范围 上限得以扩大。
（一）：检测方法。
1.3比浊法。 自动生化分析仪一般只能做透射免疫比 浊分析，当光线通过一定体积的含免疫 复合物的溶液时，由于溶液中存在的抗 原-抗体复合物粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光的减少，测定的光通量和抗 原抗体复合物的量成反比。
（一）：检测方法。
比浊法常用于终点法测定,目前主要用于 血清特种蛋白的检测，如载脂蛋白、免 疫球蛋白等。
（一）：检测方法。
1.1终点法 1.1终点法又称为平衡法，是根据反应达 到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其 对光吸收强度的大小对物质进行定量分 析的一类方法，有一点终点法和两点终 点法两类。
生化分析仪的常用检测方法
生化分析仪的常用检测方法
生化分析仪以机械化的设备模仿代替以前的手工操作，它的应用提高了工作效率，减少了主观误差，具有灵敏、准确、快速、标准化等特点，成为医院检验科必备的检测设备。
按照生化分析仪的结构原理，生化分析仪可以分为管道连续流动式、分立式、离心式和干片式等几种，目前临床最常用的是分立式生化分析仪，其常用检测方法包括终点法、固定时间法和连续监测法。
终点法：
被测物质在反应过程中完全被转变为产物，即达到反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。
终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好
固定时间法：
指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算，称为固定时间法。
该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题。
连续监测法：
又称速率法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度变化值（ΔA/min）计算结果。
连续监测法的优点即是可以确定线性期并计算ΔA/min，根据此值再准确地计算酶活性，因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手工法。
通常情况下，全自动的生化分析仪是几种检测方法并存，如海力孚的HF240-300全自动生化分析仪检测方法就包括终点法、动力学法、免疫比浊发、固定时间发、双试剂法等，仪器检测范围宽泛，是基层医院首选的医疗设备。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法)、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法）、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法）、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等.以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用.2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗”O”、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法.二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改.各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好,存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测.1．试验名称试验名称(test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式) 方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
常用生化检测项目分析方法与参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
自动生化分析仪试验参数设置
COBAS常用波长：12个波段,从紫外线到红外线340~800nm
反应方向(Reaction Direction )
在一定反应时间内，吸光度是增大还是下降
表示方法
• • • • COBAS HITACHI OLYMPUS BECKMAN INC/DEC INC/DEC Reaction Slope Reaction Direction Reaction Mode
试剂量（Reagents Volume ）
最小反应体积 ：在仪器光度读数用于结果计算时，反应液液 面高度不低于光度计光径最小体积 ，保证仪器的正确读 数和计算，也是仪器测定精密度和经济性的指标之一 设定原则 在单试剂测定中：样本与试剂的总体积不得少于此参数 在双试剂测定中： R1与样本的反应读数不纳入结果计算：R1加液量可不考虑 此参数，如连续监测法； R1与样本的反应读数纳入结果计算：应考虑它对结果的影 响，用于两点终点法和带样本空白的速率法
• 不同仪器波长的表示方式
主波长 COBAS HITACHI OLYMPUS BECKMAN ABBOTT Wave(Main/ Wave(Main/ Wavelength pri Primary Wavelength Wavelength Primary 次波长 Sub) Sub) Wavelength sec Secondary Wavelength Wavelenght Secondary
试剂加入时间（Adding Time）
• 概念： COBAS和 HITACHI 第一试剂/第二试剂：试剂的成分的区别 R1/R2/R3/R4：试剂的加注时间，试剂一在样 本加入后即刻加入，试剂二可以在R2（1.5 分钟）或R3（5分钟）时加入
自动生化分析仪的分析参数设置
自动生化分析仪的分析参数设置自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。
它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率，适应了临床医学发展对检验医学的要求，然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础，也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。
并且目前大多数生化分析仪为开放式，封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数，因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。
1.试验名称常以项目的英文缩写来设置，如总蛋白设置为TP，白蛋白设置为ALB等。
2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等，根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。
2.1终点法又称为平衡法，是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法，有一点终点法和两点终点法两类。
一点终点法的特点是使用一种或两种试剂，当待测物与试剂反应达到终点时，测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度，该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多数方法都是一点终点法。
两点终点法也称固定时间法，如果是单试剂分析，当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰，其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1，一定时间后再读取A2，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。
如果是双试剂分析，选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外，还可消除内源性干扰物质的干扰，其分析过程是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
两点法、终点法、速率法
什么叫两点法、终点法、速率法?两点法：测定酶反应开始后某一时间内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量以求取酶反应初速度的方法。
终点法：通过测定酶反应开始到反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量，以求出酶活力的方法，亦称平衡法。
速率法：是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法，即连续监测法。
一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
（两点法）3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
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常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1 •终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷川法）、磷（紫外法）镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2 •固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3 .连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、丫谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4 •透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"0"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysis paramete ）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1 •试验名称试验名称（test code ）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2 .方法类型(也称反应模式) 方法类型(assay )有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
3 .反应温度一般有30 C、37 C可供选择，通常固定为37 C。
4. 主波长主波长(primary wavelength )是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。
5. 次波长次波长(secondary wavelength )是在使用双波长时，要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。
6 .反应方向反应方向(response direction )有正向反应和负向反应两种，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。
7.样品量样品量(sampling volum ) 一般是2 □十35卩」以0.1卩步进，个别分析仪最少能达到1.6 □。
可设置常量、减量和增量。
& 第一试剂量第一试剂量(first regengt volum ) 一般是20〜300 口,1以1 □步进。
9. 第二试剂量第二试剂量(seco nd rege ngt volum )一般也是20〜300 口,1以1 □步进。
10 .总反应容量总反应容量(total reacting volum )在不同的分析仪有一个不同的规定范围，一般是180〜350讥个别仪器能减少至120讥总反应容量太少无法进行吸光度测定。
11 .孵育时间孵育时间(incubate time )在终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间，在两点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。
12 .延迟时间延迟时间(delay time )在连续监测法中样品与反应试剂(第二试剂)混匀开始至连续监测期第一个吸光度选择点之间的时间。
13 .连续监测时间连续监测时间(continuous monitoring time )在延迟时间之后即开始，一般为60〜120s，不少于4个吸光度检测点(3个吸光度变化值)。
14 .校准液个数及浓度校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液(calibrator );线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液；对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。
每一个校准液都要有一个合适的浓度。
15 .校准K值或理论K值通过校准得到的K值为校准K值(calibrate coefficient )或由计算得出的K值为理论K值。
16 .线性范围即方法的线性范围(linearity range )，超过此范围应增加样品量或减少样品量重测。
与试剂/样品比值有关。
17 .小数点位数检测结果的小数点位数(decimal point digit )。
(二)备选分析参数这类分析参数与检测结果的准确性有关，一般来说不设置这类分析参数，分析仪也能检测出结果，但若样品中待测物浓度太高等，检测结果可能不准确。
1 •样品预稀释设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值，便可在分析前自动对样品进行高倍稀释。
2. 底物耗尽值底物耗尽值（substrate exhaust limit）在负反应的酶活性测定中，可设置此参数，以规定一个吸光度下降限。
若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。
3. 前区检查免疫比浊法中应用，以判断是否有抗原过剩。
将终点法最后两个吸光度值的差别（AA）设置一个限值，如果后一点的吸光度比前一点低，表示已有抗原过剩，应稀释样品后重测。
4 .试剂空白吸光度范围超过此设定范围表示试剂已变质，应更换合格试剂。
5.试剂空白速率连续监测法中使用，是试剂本身在监测过程中没有化学反应时的变化速率。
6 .方法学补偿系数用于校准不同分析方法间测定结果的一致性，有斜率和截距两个参数。
7 .参考值范围对超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示。
（三）某些参数的特殊意义1 .最小样品量最小样品量是指分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量。
一般分析仪的最小样品量是2 □，目前也有小至1.6 □的。
在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数，从而使分析仪检测范围（与线性范围不同）的上限得以扩大。
2 •最大试剂量方法灵敏度很高而线性上限低的检测项目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法测定，以往手工法操作时样品量10卩,试剂量4ml，这样试剂量/样品量比例（R/S ）为200 ,线性上限则为60g/L。
此法移植到分析仪上后，R/S却很难达到200，致使线性上限变低。
因此对这类检测项目最大试剂量非常重要。
3. 弹性速率在酶活性测定中，当酶活性太高，在连续监测期中已不呈线性反应时，有些仪器具有弹性速率（flexrate ）功能，能自动选择反应曲线上连续监测期中仍呈线性的吸光度数据计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。
如AST可从1000U/L扩展至4000U/L ,从而减少稀释及重测次数、降低成本。
4. 试剂空白速率当样品中存在胆红素时，胆红素对碱性苦味酸速率法或两点法测定肌酐有负干扰。
因为胆红素在肌酐检测的波长505nm有较高光吸收，而且胆红素在碱性环境中可被氧化转变，因而在肌酐反应过程中胆红素的光吸收呈下降趋势。
若在加入第一试剂后一段时间内设置试剂空白速率，因为此段中苦味酸尚未与肌酐反应，而胆红素在第一试剂的碱性环境中已同样被氧化转变，因而以第二试剂加入后的速率变化，减去试剂空白速率变化，便可消除胆红素的负干扰。
二、单波长和双波长方式（一）概念采用一个波长检测物质的光吸收强度的方式称为单波长（mo no-wavele ngth）方式。
当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用。
在吸光度检测中，使用一个主波长和一个次波长的称双波长方式。
当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。
（二）双波长的作用双波长（di-wavelength）测定优点是①消除噪音干扰；②减少杂散光影响；③减少样品本身光吸收的干扰。
从光源，到比色杯、单色器、检测器的整个光路系统中，均存在着随时间发生变化的不稳定的检测信号，即噪音，而双波长检测是同时进行的，两种波长检测产生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干扰。
当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，而干扰测定结果的准确性。
采用双波长方式测定可以部分消除这类干扰，提高检测的准确性。
（三）次波长的确定方法当被测物的主波长确定之后，再选择次波长。
如根据甘油三酯等干扰物吸收光谱特征，选择次波长，使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值，而被测物在主、次波长处的光吸收值应有较大的差异。
一般来说，次波长应大于主波长100nm。
以主波长与次波长吸光度差来计算结果。
（四）双波长的具体应用对于某些反应速度快且无法设置为两点终点法的分析项目，尤其是单试剂分析中，可以利用双波长的方式来部分消除样品本身的光吸收干扰。
目前用单试剂法测定的项目应用双波长的为血清总蛋白（双缩脲法）主波长500nm，次波长576nm ;血清白蛋白（溴甲酚氯法）主、次波长分别为600和700nm ;钙（偶氮砷川法）主、次波长分别为660、770nm ;磷（紫外比色法）主、次波长为340、405nm，镁（二甲苯胺蓝法）主、次波长为505和600nm。
三、单试剂和双试剂方式反应过程中只加一次试剂称单试剂方式，加两次试剂便为双试剂方式。
目前的生化分析仪大多可用双试剂方式分析，其优点是：①可提高试剂的稳定性，多数双试剂混合成单一工作试剂时，其稳定时间缩短；②能设置两点终点法，来消除来自样品本身的光吸收干扰；③在某些项目检测时能消除非特异性化学反应的干扰。
如血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及其它酮酸也可与试剂中的指示酶(乳酸脱氢酶)起反应，使结果偏高。
若先加入缺乏a-酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指示酶反应之后再加入含有a-酮戊二酸的第二试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸，而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD +能真正反映ALT的活性，从而消除以上副反应的影响。
四、测定过程的自动监测各种自动生化分析仪或多或少都具有对测定过程进行各种监测的功能，以便在没有人"监督"化学反应的情况下提高检测的准确性。
高档分析仪的监测功能更强。
1. 试剂空白监测每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质：如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因酚被氧化为醌而变为红色；碱性磷酸酶、「谷氨酰转移酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或硝基苯胺而变黄；有些试剂久置后变浑浊。
这些情况均可使空白吸光度升高。
丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应检测项目，其试剂在放置过程中空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降等。