ALDH2基因多态性检测
09 ALDH2基因检测标准操作流程
乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。
三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。
ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。
除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。
通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。
四、性能指标1. 最低检出限：20ng。
2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。
2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。
五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。
ALDH2基因分型与临床应用
ALDH2基因分型与临床应用ALDH2基因分型与临床应用引言：ALDH2（Aldehyde Dehydrogenase 2）基因是编码酶的基因，该酶主要负责醛类物质的代谢，包括乙醛的代谢。
ALDH2基因在人体中呈现多态性，根据其多态性的表现形式，可以将人群分为不同的基因型。
不同的ALDH2基因分型与临床应用相关性的研究使得我们对该基因的了解更加全面，在临床诊断和治疗中有着重要的意义。
本文将从ALDH2基因的分型与临床应用方面进行详细阐述。
1.ALDH2基因的多态性1.1 ALDH2基因的发现1.2 ALDH2基因的结构与功能1.3 ALDH2基因的遗传模式2.ALDH2基因分型的方法2.1 DNA测序分析2.2 PCR-RFLP法2.3 其他分子生物学方法3.ALDH2基因的主要分型3.1 ALDH21型（正常基因型）3.2 ALDH22型（缺陷基因型）3.3 ALDH23型（其他变异基因型）4.ALDH2基因分型与酒精代谢能力的关系4.1 酒精代谢能力的差异4.2 酒精相关疾病的发生风险4.3 酒精相关疾病的治疗和预防5.ALDH2基因分型与药物代谢的关系5.1 酮康唑（Ketoconazole）的临床应用5.2 樟脑（Camphor）的代谢过程5.3 其他药物的代谢与ALDH2基因分型的关联6.ALDH2基因分型在临床应用中的意义6.1 个体药物治疗的个性化6.2 酒精依赖症的防治6.3 其他与酒精和药物代谢相关的临床研究结语：通过对ALDH2基因分型与临床应用的综合研究，我们深入了解了ALDH2基因在人体中的作用和与相关疾病的关系。
ALDH2基因分型的检测和分析可以为临床诊断和个体化治疗提供重要依据。
未来，我们可以进一步探索ALDH2基因分型在其他领域的应用价值。
附件：本文档涉及的附件具体内容可参考所述研究论文或相关数据分析报告。
法律名词及注释：1.可选性：在合同、法律文件等文件中，指特定条款或规定不能被视为具有强制性，而仅是供各方选择使用的内容。
ALDH基因多态性检测
ALDH2基因多态性检测项目简介：ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶，是一种四联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。
目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4 四种，其中ALDH2最为重要。
在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
ALDH2基因位于人类第12号染色体，由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1)，催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。
在亚洲的黄种人群中， ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。
临床用药医生应考虑的因素：ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现：1、ALDH2与硝酸甘油治疗：硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。
但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。
近来发现， ALDH2与硝酸甘油转化为NO密切相关。
有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。
2、ALDH2与酒精性疾病：乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。
ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。
过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖，还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)。
乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与酒精相关疾病的研究进展
•综述与讲座•乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与酒精相关疾病的研究进展邱礼佳！,林贞葵！，陈慧怡！,李金花！,林梦琴!,梁少明！,刘伟"综述，郑桓！校审(1.肇庆医学高等专科学校，广东肇庆526000；2.6圳友一生物科技有限公司，广东深圳518115)摘要：酒与人类的生活密不可分，个体对酒精的敏感程度与其体内酒精代谢酶的活性有关即遗传基因有关*人体内乙醛脱氢酶2(ALDH2)的活性与人体饮酒后出现的各种不适症状之间存在关联*本文综述了乙醛脱氢酶2基因性及其相关疾病的发生机制*关键词：基因多态性；乙醛脱氢酶2(ALDH2)"疾病中图分类号:R446.1,R446.7文献标识码:A文章编号：1674-1129(2020)04-0611-04DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2020.04.002酒在中国人的宴席上有不可替代的作用,酒与人们的日常生活难解难分&适量的饮酒有助于促进人体新陈代谢，传承我国优良的酒文化&但现代人因学习压力或工作压力较大，不少人存在长期过度的酗酒或酒精依赖行，酒精有系的疾病发病率较叫等倒利用糖缺失性转铁蛋(CDT)、CDT/转铁蛋白(TRF)比助酒精性的8但人在2因性酒精的些疾病的发生。
人体饮酒，乙醇通过口腔、食道、胃肠道吸收,90%的过的吸收,过的代谢进入人体*卵的10%的乙醇则通过人体的呼吸作用、体代谢或其它方式排出身体[3]o1。
1ALDH21.1ALDH2的结构和存在部位人体内最常见的乙醛脱氢酶包括四种同工酶，即ALDH1-ALDH4,分不体上的因所编码。
ALDH2编码基因位于12号染色体(12q24.2),■有的因性叫ALDH2是一体，由基金项目:肇庆医学高等专科学校2019年度学生科技活动基金项目，编号2019XS04、2019XS05;广东省医学科研基金项目，编号A2018561作者简介:邱礼佳，男，199.年生。
硝酸甘油疗效基因检测
硝酸甘油疗效基因检测：ALDH2基因多态性硝酸甘油是治疗心绞痛的一线药物，一般来说在舌下含服5-10分钟之内症状缓解。
但中国汉族人含服硝酸甘油无效比例高达25%以上。
这主要是由于线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）基因突变而引起，对于携带该基因有突变的个体不应该把硝酸甘油当做救命药品。
因此通过检测ALDH2的基因型，可预知硝酸甘油的疗效。
另外，饮酒脸红的人也是因为此酶活性的降低或缺失，不能将酒精充分代谢，导致乙醛在肝脏内大量累积，引起酒精中毒，并且此类人群若服用硝酸甘油的效果可能不好甚至无效。
ALDH2是体内催化硝酸甘油生物转化的主要途径，其酯酶活性可以通过将硝酸甘油脱硝形成一氧化氮扩血管。
ALDH2第12个外显子发生一个碱基替换，即G突变为A，使其编码的蛋白质第504位氨基酸残基由谷氨酸转换为赖氨酸(Glu504Lys)，导致酶活性降低或缺失，使硝酸甘油无法产生一氧化氮，难以发挥药效。
rs671G突变为A对应的基因型分别为ALDH2*1/1，ALDH2*1/2，ALDH2*2/2。
突变型酶Lys504对硝酸甘油的催化活性较野生型Glu504严重下降，ALDH2*2/2 是ALDH2*1/1活性的 6–7%，ALDH2*1/2 是ALDH2*1/1活性的 8–15%。
在亚洲人群中，30%-50%的个体都携带有ALDH2*2突变。
因此，今后医生在临床使用硝酸甘油的过程中，建议先检测病人的ALDH2基因型，减少用药无效导致的意外死亡。
图1：冠心病示意图图2：ALDH2*2服药无效率占42.4% ，ALDH2*1携带者仅仅14.9%5 温馨提示：如果您有ALDH2基因突变，硝酸甘油对您无效，您需要改服其他药物，方案如下：硝酸异山梨酯（消心痛）舌下含服，或交替使用中成药麝香保心丸、速效救心丸或复方丹滴丸舌下含化。
如为了预防心绞痛发作，还可交替选用硝酸异山梨酯缓释胶囊（长效异乐定）每次1粒（50mg），一日一次口服。
09 ALDH2基因检测标准操作流程
乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。
三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。
ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。
除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。
通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。
四、性能指标1. 最低检出限：20ng。
2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。
2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。
五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。
人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析
对已知基因 DNA 片段再进行PCR特异扩增；
特异的引物配对可以扩增出某一特异基因型的片 段，根据扩增出来的DNA条带大小的差异，可以 分析基因型（纯合型、杂合型）
ALDH2引物
AL1 5’-TAG GAC ACT CAC AGT TTT CACAT C-3’ (78bp) AL2 5’-CTC TCA CAG TTT TCA CTT T-3’ (73bp) AL3 5’-AAG ATG TCG GGG AGT GG-3’
• 凝胶结构均匀，孔径较大， 可用来分离酶的复合物、核 酸、病毒等大分子物质。
• 透明度较好，可直接或干燥 成薄膜后进行染色。
• 不吸收紫外光，可直接利用 紫外光吸收法作定量测定
• 有热可逆性
缺点
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
➢ 引物浓度0.1-0.5 mol/L，浓度过高易导致模 板与引物错配，反应特异性下降
➢ Taq DNA聚合酶0.5-2.5 U/50 l，酶量增加使 反应特异性下降;酶量过少影响反应产量
➢ 四种dNTP浓度应相等 ➢ Mg2+ 是DNA聚合酶的激活剂，0.5 ～2.5mmol/L
基于PCR的扩增产物长度多态性 （PCR-APLP）
综合实验二
人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析
---PCR-APLP以及PCR 产物电泳鉴定及结果分析
综合实验
（一） 基因组抽提
（二） PCR-APLP
（三）
PCR产物电泳鉴 定及结果分析
ALDH2基因分型与临床应用
第二部分：ALDH2基因
ALDH2基因位于第12号染色体的12q24.2位置 全长43,438bp 共有15个外显子 编码由517个氨基酸残基组成的蛋白质。
ALDH2基因多态性 ALDH2基因多态性
ALDH2基因存在一个Glu504Lys 多态，第504位的谷氨酸被赖氨 exon12 酸替代会影响其酶活性， 42421G ALDH2*1 ALDH2的DNA序列
ALDH2 *2/*2纯合子，由于完全不能代谢酒精，尽量不要饮酒。
ALDH2 *1/*2杂合子，由于还是具有弱的ALDH2活性，最易形成习惯性的重度 饮酒者,尽量不要饮酒。
ALDH2 与酒精性肝硬化的关系
流行病理学表明，酗酒是慢性肝病的重要诱因，然而长期酗酒者中， 仅10%～20%发展为酒精性肝硬化(alcoholic liver cirrhosis, ALC)
ApoE 基因
ALDH2基因多态性对酶活性的影响
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
脱氢酶活性
ALDH2*1/*1
ALDH2*1/*2
ALDH2*2/*2
ALDH2基因多态性与乙醇代谢及相关疾病
一、 ALDH2 与乙醇代谢的关系 二、 ALDH2 与饮酒行为的关系 三、 ALDH2 与酒精性肝硬化的关系 三、 ALDH2 与其它疾病的关系
引物1 C 引物2 T
3’不相合继续不延伸
引物2
T
3’不相合继续不延伸
内参质控品：人类生长激素基因的保守片段设计内参
引物，内参扩增产物1009bp，存在每个引物孔中，且
在每次实验中运行，以保证反应体系正常。
该试剂盒可以检测出ALDH2*1, ALDH2*2型基因分型， 总共时约2h。
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ALDH2基因多态性检测
项目简介：ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶，是一种四
联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。
目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4 四种，其中ALDH2最为重要。
在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
ALDH2基因位于人类第12号染色体，由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1)，催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。
在亚洲的黄种人群中， ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。
临床用药医生应考虑的因素：
ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现：
1、ALDH2与硝酸甘油治疗：硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。
但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。
近来发现， ALDH2与硝酸甘油转化为NO密
切相关。
有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。
2、ALDH2与酒精性疾病：乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。
ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。
过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖，还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)。
ALD是长期、大量饮酒所引起的肝脏病变，已成为现代社会的主要健康隐忧之一。
研究显示，携带ALDH2 变异基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性。
虽然摄入人体的乙醇有90 %以上是在肝脏内完成代谢过程的，但其在摄入过程中与消化道上皮细胞的直接接触也不容忽视。
在饮酒人群中，尤其是重度饮酒者，由于其上消化道长期地与大量酒精直接接触，该区域出现癌变(食道癌、口咽癌等)的几率较高。
研究发现，ALDH2*2突变与饮酒人群患消化道癌的风险之间具有明显的联系。
此外，ALDH2*2显性突变与胃癌的易感性也存在一定的联系。
由此可见，ALDH2*2突变是增加区域性癌化几率的重要因素之一。
ALDH2基因多态性检测标本采集及出报告时间：病人抽静脉血2ml（用
EDTA-K2抗凝）送检验科分子生物诊断室，4个工作日出报告。
电话：8801063 手机：余宗涛65327 高波 64444
ALDH2基因多态性检测临床意义：
1、指导临床硝酸甘油的个体化差异用药剂量：虽然硝酸甘油是心绞痛急性发作的常规首选药物，但该药的临床疗效常因人而异。
中国汉族人群中，硝酸甘油含服无效的比例高达25%以上。
复旦大学、瑞金医院、华山医院等的一项研究显示：部分国人服用硝酸甘油治疗心绞痛无效的原因为线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因发生突变。
ALDH2*2携带者服用硝酸甘油无效风险大幅增加；ALDH2*2携带者在中国约占30-50%，比重大；建议患者在使用硝酸甘油前进行ALDH2基因检测，ALDH2*2携带者建议慎用或不用硝酸甘油，改用其它药物。
2、ALDH2与酒精代谢：①ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比，其发生肝癌的风险是正常人的3倍以上；②乙肝病毒携带者，如果又正好是ALDH2异常，其饮酒发生肝癌的危险性将升高52.17倍；③持续的过量饮酒导致肾的代谢压力过大，残留的酒精附着在肾细胞上，致使大量肾细胞处于休眠状态，会导致肾功能下降。
3、ALDH2与消化系统疾病：ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比，其发生食道癌的风险是正常人的12.95倍，出现口腔癌的风险则为11.72倍。
4、ALDH2与心血管系统疾病：ALDH2异常的冠心病患者，发生心肌梗死的相对风险也为ALDH2正常的3.42倍。
5、ALDH2与内分泌系统疾病：ALDH2异常的人发生II型糖尿病的风险是正常人的6.08倍。