植物中蛋白质的测定优秀课件
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植物蛋白质组学ppt课件
3.4.1 蛋白质组数据库
蛋白质组包括大量的信息：蛋白质的序列信息、加工和修饰信息、表达 结构功能信息、与其他蛋白质形成复合物的信息。
蛋白质 数据库
拟南芥数据库 拟南芥蛋白数据库PAT 苜蓿数据库DOME
3.4.2 蛋白质鉴定分析软件
例如 ：2-DE成像分析软件：Melanie ,QUEST 蛋白质鉴定软件：MASCOT ,PROWL
（2）基因组的组成是固定的，蛋白质组的组成是动态的。 基因组在所有细胞中几乎都是相同的，与之不同，蛋白质组具有 很高的细胞和组织特异性。 基因组是相对稳定的，蛋白质组处于高度动态变化之中。
（3）细胞内蛋白质的拷贝数（108）远比基因拷贝数大（105）。
（4）基因可采用PCR扩增和自动测序，而蛋白质还没有这些技术。
蛋白质组学分为表达蛋白质组学和细胞图谱蛋白质组学。前者利 用各种先进技术研究蛋白质表达的整体变化,即研究在机体的生长发 育、疾病和死亡的不同阶段中,细胞与组织的蛋白质组分的变化;后者 主要通过分离蛋白质复合物系统地研究蛋白质间的相互作用
2.蛋白质组和基因组
蛋白质组和基因组的关系：它们在概念上有相关性，代表某一蛋白
5. 植物蛋白质组学研究的前景和挑战
植物蛋白质组学的研究与应用面临3个主要问题： 1.表达的整体分析以及蛋白质组编目
大规模整体性的分析蛋白质在某一个细胞或组织中的含量以及动 态表达是蛋白质组学的研究目标之一。 2.大规模的蛋白质功能研究 蛋白质最大的挑战是鉴定每一个蛋白质以及它们的异构体的功能， 一个较有前景的策略是通过酵母双杂交系统整体性研究植物蛋白 质之间的相互作用。 3.建立完整的蛋白质调控网络 建立蛋白质调控网，不仅可以提供蛋白质之间的相互关系的信息， 而且还可以和基因组学、转录组学、代谢组学等信息联系起来。
蛋白质含量的测定方法.PPT-
内容一般包括样品名称、送检单位、生产日期 及批号、取样时间、检验日期、检验项目、检验结 果、报告日期、检验员签字、主管负责人签字、检 验单位盖章等。
国家食品检验工职业鉴定
一、食品检验工的职业定义 使用检测设备，用抽样检查方式对粮油及制品、糕点糖
果、乳及乳制品、白酒、果酒、黄酒、啤酒、饮料、罐头食 品、肉蛋及制品、调味品、酱腌制品、茶叶等各类食品的感 官、理化、卫生及食品内包装材料等指标进行检验的人员 二、食品检验工的职业技能鉴定
二、检测结果的表示 1. 固体试样 固体试样中待测组分的含量，一般以质量分数（%）表示 当
待测组分含量很低时，可采用mg·kg-1 、μg·kg-1 表示
2. 液体试样 常用单位是 mol·L-1 、mg·L-1 、mol·kg -1
检测报告的编制
一、原始记录
原始记录必须真实、齐全、清楚，记录方式应 简单明了；原始记录本应统一编号、专用，用钢笔 或圆珠笔填写，不得任意涂改、撕页、散失；原始 记录应统一管理，归档保存，以备查验 二、检验报告
第一章 农产品检测基础
·农产品质量与检测
一、农产品的分类 在农业活动中获得的植物、动物、微生物及其
产品称为农产品，可分为食品原料类（如谷类农作 物的种子、果蔬产品、畜禽及其产品、水产等）和 非食品原料类（如棉、麻、丝、草等） 二、农产品的营养
食品原料类农产品的营养成分通常分为碳水化合 物、蛋白质和氨基酸、脂肪、维生素、有机酸、水 分及矿物元素
农产品中脂肪的检测
二、油脂酸价的测定 酸价是反映油脂质量的主要技术指标之一。
测定方法：热乙醇测定法，即试样溶解在热乙醇中， 用氢氧化钾或氢氧化钠水溶液滴定。
三、油脂碘价的测定 碘价的高低表示油脂中脂肪酸的不饱和程度。测
国家食品检验工职业鉴定
一、食品检验工的职业定义 使用检测设备，用抽样检查方式对粮油及制品、糕点糖
果、乳及乳制品、白酒、果酒、黄酒、啤酒、饮料、罐头食 品、肉蛋及制品、调味品、酱腌制品、茶叶等各类食品的感 官、理化、卫生及食品内包装材料等指标进行检验的人员 二、食品检验工的职业技能鉴定
二、检测结果的表示 1. 固体试样 固体试样中待测组分的含量，一般以质量分数（%）表示 当
待测组分含量很低时，可采用mg·kg-1 、μg·kg-1 表示
2. 液体试样 常用单位是 mol·L-1 、mg·L-1 、mol·kg -1
检测报告的编制
一、原始记录
原始记录必须真实、齐全、清楚，记录方式应 简单明了；原始记录本应统一编号、专用，用钢笔 或圆珠笔填写，不得任意涂改、撕页、散失；原始 记录应统一管理，归档保存，以备查验 二、检验报告
第一章 农产品检测基础
·农产品质量与检测
一、农产品的分类 在农业活动中获得的植物、动物、微生物及其
产品称为农产品，可分为食品原料类（如谷类农作 物的种子、果蔬产品、畜禽及其产品、水产等）和 非食品原料类（如棉、麻、丝、草等） 二、农产品的营养
食品原料类农产品的营养成分通常分为碳水化合 物、蛋白质和氨基酸、脂肪、维生素、有机酸、水 分及矿物元素
农产品中脂肪的检测
二、油脂酸价的测定 酸价是反映油脂质量的主要技术指标之一。
测定方法：热乙醇测定法，即试样溶解在热乙醇中， 用氢氧化钾或氢氧化钠水溶液滴定。
三、油脂碘价的测定 碘价的高低表示油脂中脂肪酸的不饱和程度。测
植物蛋白质的提取和含量测定(精品资料)PPT
〔Na2MoO4•2H2O〕及700毫升蒸馏
水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓
盐酸，充分混合，接上回流管，以小火 量剩余上清液的体积，参加等体积预冷丙酮，先用6mol/L的HCl调pH至6.
2%NaOH 30毫升。 〔先参加调成糊状，再用少量屡次地慢慢地参加〔边加边搅拌〕，室温下搅拌抽提10min，于4000r/min离心7min ,小心留取上清液， 弃脂层和沉淀，如上清液有漂浮物，再经过滤；
回流10小时，回流结束时，参加150克 6M HCl，1M HCl
5克硫酸铜〔CuSO4•5H2O〕溶解100毫升 1%酒石酸钾钠 〔KNaC4H4O6•4H2O〕中。 大豆蛋白主要是酸性蛋白，pI 4. 量剩余上清液的体积，参加等体积预冷丙酮，先用6mol/L的HCl调pH至6. Folin—酚试剂甲〔用前组分一: 组分二 = 50:1〕
及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟， 大豆蛋白主要是酸性蛋白，pI 4.
冷却后溶液呈黄色〔如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的2CO3和0.
以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色 大豆蛋白主要是酸性蛋白，pI 4.
分光光度计〔500nm〕，比色皿
植物蛋白质的提取和含量测定
一、实验目的
掌握大豆蛋白的提取及制备大豆蛋白 丙酮干粉的方法。
本实验先利用稀碱提取大豆蛋白， 再利用丙酮结合等电点溶解度最低原 理沉淀蛋白。 2. Folin-酚法测定蛋白质含量
酚试剂由两局部组成，试剂A为双 缩脲试剂，可与肽链发生显色反响， 试剂B中的磷钼酸和磷钨酸在OH-条
〔如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的
经过滤； 2. 留出上清液2毫升稀释50倍做含量
测定〔第二步〕 3.制干粉： 量剩余上清液的体积，参加等体
植物蛋白质含量测定（考马斯亮蓝法）
【仪器与用具】
分光光度计，10ml 量筒 1 支；研体；10ml 容量瓶 1 支；1ml 刻度吸管 3 支；10ml 具塞刻度试管 14 支。 【试剂】
（1）牛血清白蛋白 配成 1000μg/ml 和 100μg/ml；
（2）考马斯亮蓝 G-250：称取 100mg 考马斯亮蓝 G-250 溶于 50ml 90%乙醇中，加入 85%（W/V）磷酸 100ml，最后用蒸馏水定容至 1000ml。此溶液在常温下可放置一个月；
（3）90%乙醇；（4）磷酸（85%，W/V）。 【方法】
1.标准曲线的绘制
（1）0～100μg/ml 标准曲线的制作取 6 支试管，按表 28-1 数据配制 0～100μg/ml 血清白蛋白液各 1ml。 准确吸取所配各管溶液 0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中，加入 5ml 考马斯亮蓝 G-250 试剂，盖塞，反 转混合数次，放置 2min 后，在 595nm 下比色，绘制标准曲线。 表 28-1 配制 0～100μg/ml 血清白蛋白液
【原理】
考马斯亮蓝 G-250 测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G-250 在游离态下呈红色，当它与 蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在 465nm，后者在 595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0～ 100μg/ml），蛋白质－色素结合物在 595nm 波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定 量测定。蛋白质与考马斯亮蓝 G-250 结合在 2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物 在室温下 1h 内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。 在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg 蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定 植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有 Lowry 法和考马斯亮蓝 G-250 染料结 合法。本实验将分别介绍这两种方法。
蛋白质的研究方法优秀课件.ppt
就是利用SDS的这种结合在整个蛋白分子上，并使蛋白 完全变性的特性。
这样经过SDS变性的蛋白质在电场中完全按大小分离开。
蛋白质的研究方法优秀课件
18
非离子去污剂：
相对温和，一般不会使蛋白质变性。只是将蛋白质 分子从膜上溶解下来而已。
➢当[去污剂]＜其CMC值的时候，去污剂分子与膜蛋 白表面的疏水区域结合，使蛋白质在水溶液中溶解 而不聚集。 ➢当[去污剂]≧其CMC值的时候，去污剂分子将与膜 磷脂一起形成混合微团，膜蛋白以整合在微团中的 形式存在。
蛋白质的研究方法优秀课件
22
细胞碎片的去除——离心( centrifugation)
原理：悬浮在溶液中的两个或多个不同质量或密度 的颗粒（如细胞、细胞器、大分子复合体、或分子 等）沉降到试管的底部的速度是不一样的，质 量越大、或密度越高沉降的速度越快。
沉淀：固体性的细胞碎片和细胞器沉降到离心管的 底部形成；
蛋白质颗粒表面有一层水膜，也称水化层。水化层 的存在使蛋白质颗粒相互隔开，不会聚集成大颗粒 而沉淀。
蛋白质有两性解离性质。如果溶液的PH值偏离了PI， 所有分子都带相同电荷，又会进一步增进它们的分 散能力。
蛋白质的研究方法优秀课件
25
#
蛋白质的研究方法优秀课件
26
等电点（PI）：
1.能破坏蛋白质分子水化作用 2.是减弱分子间同性相斥作用的因子
蛋白质的研究方法优秀课件
5
制备过程中注意事项：
要求自始至终保持在天然状态
• 避免一切过激因素如：过酸或过碱，高温， 重金属等的影响。
2. 通常都在低温条件下操作。
3. 尽可能使样品中蛋白质的浓度维持在较高
水平。
蛋白质的研究方法优秀课件
这样经过SDS变性的蛋白质在电场中完全按大小分离开。
蛋白质的研究方法优秀课件
18
非离子去污剂：
相对温和，一般不会使蛋白质变性。只是将蛋白质 分子从膜上溶解下来而已。
➢当[去污剂]＜其CMC值的时候，去污剂分子与膜蛋 白表面的疏水区域结合，使蛋白质在水溶液中溶解 而不聚集。 ➢当[去污剂]≧其CMC值的时候，去污剂分子将与膜 磷脂一起形成混合微团，膜蛋白以整合在微团中的 形式存在。
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22
细胞碎片的去除——离心( centrifugation)
原理：悬浮在溶液中的两个或多个不同质量或密度 的颗粒（如细胞、细胞器、大分子复合体、或分子 等）沉降到试管的底部的速度是不一样的，质 量越大、或密度越高沉降的速度越快。
沉淀：固体性的细胞碎片和细胞器沉降到离心管的 底部形成；
蛋白质颗粒表面有一层水膜，也称水化层。水化层 的存在使蛋白质颗粒相互隔开，不会聚集成大颗粒 而沉淀。
蛋白质有两性解离性质。如果溶液的PH值偏离了PI， 所有分子都带相同电荷，又会进一步增进它们的分 散能力。
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等电点（PI）：
1.能破坏蛋白质分子水化作用 2.是减弱分子间同性相斥作用的因子
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5
制备过程中注意事项：
要求自始至终保持在天然状态
• 避免一切过激因素如：过酸或过碱，高温， 重金属等的影响。
2. 通常都在低温条件下操作。
3. 尽可能使样品中蛋白质的浓度维持在较高
水平。
蛋白质的研究方法优秀课件
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
NH2—CO—NH2 + NH2—CO—NH2
NH2—CO—NH—CO—NH2 + NH3
双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这 种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应） 蛋白质分子中含有肽键 —CO—NH— 与双缩脲结构 相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下， 其颜色深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计 来测其吸光度，确定含量。（560nm）
样液中氨基酸的羧基与其它酸性物质的总
和。
二者之差可计算氨基酸含量
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
（二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应， 生成蓝紫色化合物，可比色定量。
二．个别氨基酸的定量测定
介绍了8种氨基酸的定量测定方法。
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
第七节 氨基酸的分离与测定
原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时 展开，点与点之间间隔1～2cm。 a.可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注 意要等一个点干了再点另一个点。 b.用一小直径ф3 mm 滤纸片，浸入样液，埋到 板子上先挖好一个小洞穴。
蛋白质是食品的最重要质量指标，其含量与 分解产物直接影响食品的色、香、味。
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
蛋白质的测定方法分两大类： 一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折
射率等测定蛋白质含量； 另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和
碱性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。
具体测定方法：
凯氏定氮法——最常用的，国内外应用普遍。 双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法 国外： 红外分析仪
① 用H3BO3吸收后再以标准HCl溶液滴定。根 据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。
② 也可以用过量的标准H2SO4或标准HCl溶液 吸收后再以标准NaOH滴定过量的酸。
NH2—CO—NH—CO—NH2 + NH3
双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这 种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应） 蛋白质分子中含有肽键 —CO—NH— 与双缩脲结构 相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下， 其颜色深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计 来测其吸光度，确定含量。（560nm）
样液中氨基酸的羧基与其它酸性物质的总
和。
二者之差可计算氨基酸含量
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
（二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应， 生成蓝紫色化合物，可比色定量。
二．个别氨基酸的定量测定
介绍了8种氨基酸的定量测定方法。
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
第七节 氨基酸的分离与测定
原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时 展开，点与点之间间隔1～2cm。 a.可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注 意要等一个点干了再点另一个点。 b.用一小直径ф3 mm 滤纸片，浸入样液，埋到 板子上先挖好一个小洞穴。
蛋白质是食品的最重要质量指标，其含量与 分解产物直接影响食品的色、香、味。
蛋白质和氨基酸的测定优秀课件
蛋白质的测定方法分两大类： 一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折
射率等测定蛋白质含量； 另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和
碱性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。
具体测定方法：
凯氏定氮法——最常用的，国内外应用普遍。 双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法 国外： 红外分析仪
① 用H3BO3吸收后再以标准HCl溶液滴定。根 据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。
② 也可以用过量的标准H2SO4或标准HCl溶液 吸收后再以标准NaOH滴定过量的酸。
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定
5．植物组织中可溶性蛋白质含量的测定Ⅰ考马斯亮蓝G – 250 染色法一、原理考马斯亮蓝G – 250 （Coomassie brilliant blue ，G-250 ）法是利用蛋白质–染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G-250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
它和蛋白质通过范德瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。
此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465 nm 变成595 nm ，通过测定595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2 min 即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定 1 h ，之后，蛋白质–染料复合物发生聚合并沉淀出来。
此法灵敏度高（比Lowry 法灵敏 4 倍），易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。
其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物材料。
（二）试剂1. 标准蛋白质溶液（100 μg ／mL 牛血清白蛋白）：称取牛血清蛋白25 mg ，加水溶解并定容至100 mL ，吸取上述溶液40 mL ，用蒸馏水稀释至100 mL 即可。
2. 考马斯亮蓝试剂：称取100 mg 考马斯亮蓝G-250 ，溶于50 mL 90 ％乙醇中，加入100 mL 85 ％（W ／V ）的磷酸，再用蒸馏水定容到1000 mL ，贮于棕色瓶中。
常温下可保存一个月。
（三）仪器设备分光光度计，离心机，研钵，烧杯，量瓶，移液管，试管等。
三、实验步骤1. 标准曲线的绘制取 6 支试管，按表26–1 加入试剂，摇匀，向各管中加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5 min 左右，以0 号试管为空白对照，在595 nm 下比色测定吸光度。
以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
第六章蛋白质的测定ppt课件
计算
从标准曲线中查出相对应的蛋白质含量X（μg）， 再计算样品中蛋白质的百分含量。
蛋白质含量（％）=[X（μg）×稀释倍数]÷(样品重 ×106)
试验注意事项
（1）Folin乙试剂仅在酸性pH条件下稳定，但此实验 的反应只是在pH10的情况下发生，所以当加试剂乙 时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破 坏之前即能发生还原反应，否则会使显色程度减弱。
消化装置
原理
（2）蒸馏 消化液 + 40%氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气。 (NH4)2SO4+NaOH→NH3↑+Na2SO4+H2O
原理
（3）吸收与滴定 用2%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定.
2NH3 + 4H3BO3→ (NH4)2B4O7 + 5H2O
(NH4)2B4O7 + 2HCl + 5H2O→2NH4Cl + 4H3BO4
（2） Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨 酸引起，不同蛋白质含量不同而使显色强度稍有不 同。本法也可用于游离酪氨酸和色氨酸含量测定。
3）酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖 类、甘油 、还原剂(二硫代苏糖醇、巯基乙醇） EDTA和脲素均会干扰反应。但质量分数或体积分 数在5％时，尿素、硫酸钠、硝酸钠、三氯乙酸、乙
<2> 加硫酸铜 作为催化剂，还可以做蒸馏时碱性指 示剂。
受热
CuSO4 → Cu2SO4+SO2↑+O2↑ C+ CuSO4 →Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ H2SO4 + Cu2SO4 →CuSO4+SO2↑+2H2O↑
<3>氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化 钛。
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计算
从标准管中选一管与测定管光吸收值接
近值，按公式
C测
C标A测 A标
计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上
可选 A测= 0.317 g/L，C标=0.354 g/L， A标=1.6 g/L；则得到：C测=1.432 g/L。
注意事项
• 1.本实验是定量实验，要求所有玻璃 仪器必须清洁，整齐、干燥。蛋白质 标准液和淀粉上清液取量必须准确。
双缩脲比色法
测定面粉中蛋白质的含量
一 原理 二 实验材料与仪器 三 操作步骤 四 计算 五 注意事项
原理
1.双缩脲（NH2CONHCONH2）是两 个尿素分子经180 ℃左右加热，放出 一个分子氨后得到的产物。
原理
2.在强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲 反应。凡具有两个肽键或两个直接连 接的肽键，或能过一个中间碳原子相 连的肽键，这类化合物都有双缩脲反 应。
植物中活动重 要的参与者，它影响和 调节着细胞与细胞，组 织与组织间的生理活动， 并且反馈着细胞与组织 的化学反应信息。
功能肽是由氨基酸构成， 活性高，在极微量的使用下， 都能发挥作用，它们在人体内 被利用后迅速的被代谢，最终 变为氨基酸和水，无残留，无 副作用。
操作步骤
3.离心，4000dr/min，离心15分钟； 4.取上清液比色
操作步骤
<二>标准曲线的制作与 样品中蛋白质的测定
1.取7支试管，编号，按照表1 数据操作。
2.利用分光光度计测光吸收值 并记录。
表1
标准管
测定管
管号
0
试剂
1
2
3
4
5
6
蛋白质
标准液 (10mg/
-
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.仪器和材料： 分光光度计、 7支试管、 1mL 刻度吸管3支、 移液器、坐标纸、摇床、离心机、 具塞三角瓶、分析天平。
2.试剂：四氯化碳溶液、少 许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。
分析天平
具塞三角瓶
离心机
摇床
操作步骤
<一>.样品处理
1.0.25 g小麦面粉＋2ml四氯化碳； 2.加塞，在摇床上振摇30分钟， 使之充分混匀、反应，然后于实验台上 静置10分钟；
……
……
很早以来科学家就 想把它们应用到人们的日 常饮食中，作为营养补充剂和功能因 子，用以影响或改善人们的营养代谢、 脂肪代谢、糖代谢、调节神经系统等。
测定方法
测定面粉中蛋白质的含量
双缩脲比色法
一 原理
半微二量凯试氏剂滴氮法（水蒸气蒸馏法） Foli三n-酚操作试步剂骤法 紫外四吸收计法算 考马斯五 亮注蓝意染事项色法
-
mL)
面粉溶
液上清
-
-
-
-
-
-
1
液mL
氯化钠
溶液
1
0.8
0.6
0.4
0.2
-
-
mL
双缩脲
试剂
4
4
4
4
4
4
4
mL
λ光吸 收值
0
0.085 0.181 0.261 0.354 0.438 0.317
各管浓
度
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
？
mg/ml
操作步骤
3.在坐标纸上以各管蛋白质 含量为横坐标，光吸收值为纵坐 标，绘制标准曲线。
• 2.各管加好样后必须充分混匀。 • 3.显色反应需在20到30min才完成。
谢谢观赏
原理
3.测定： 在一定的浓度范围内， 紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈 线性关系。而与蛋白质分子量及氨基 酸成分无关，故可在540 nm处比色再 与同样处理的标准蛋白质来比较测定 蛋白质含量。
测定范围为1－10mg蛋白质/ml。 干扰这一测定的物质主要有：
硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
实验材料与仪器