梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验
梅毒螺旋体抗体检测法原理
梅毒螺旋体抗体检测法原理
梅毒是一种通过性接触传播的疾病，由梅毒螺旋体（Treponema pallidum）引起。
梅毒螺旋体抗体检测法是一种常用的诊断梅毒的
方法，其原理基于检测患者体内产生的抗体来判断是否感染了梅毒
螺旋体。
该检测方法主要分为两种，非特异性试验和特异性试验。
非特
异性试验包括梅毒螺旋体血凝试验（TPPA）和梅毒螺旋体颗粒凝集
试验（MHA-TP），这些试验可以快速筛查出患者是否感染了梅毒螺
旋体。
而特异性试验则包括梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和梅毒螺旋体荧光抗体试验（FTA-ABS），这些试验可以确
认患者是否真正感染了梅毒螺旋体。
在进行梅毒螺旋体抗体检测时，首先需要采集患者的血液样本，然后将样本与梅毒螺旋体抗体相关的试剂进行反应。
如果患者感染
了梅毒螺旋体，其体内会产生特定的抗体，这些抗体会与试剂中的
抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
通过观察这些复合物的形成情况，就可以确定患者是否感染了梅毒螺旋体。
梅毒螺旋体抗体检测法的原理简单而有效，可以帮助医生及时
诊断梅毒感染，从而采取相应的治疗措施。
然而，需要注意的是，梅毒螺旋体抗体检测法也存在一定的假阳性和假阴性情况，因此在进行诊断时需要综合考虑患者的临床症状和检测结果，以确保准确诊断梅毒感染。
总之，梅毒螺旋体抗体检测法是一种重要的梅毒诊断方法，其原理基于检测患者体内产生的抗体来判断是否感染了梅毒螺旋体。
通过该检测方法，可以及时发现患者的感染情况，为患者提供及时有效的治疗。
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价摘要目的评价分析5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果。
方法基于本次研究需求，分别采取梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光法（CLIA）、甲苯胺红不加热血清试验（Trust）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫印迹法（WB）对120例标本实施梅毒螺旋体抗体检测，对比分析5种检测法阳性率，将WB作为参照分析其他4种检测法的总符合率、特异度以及敏感度。
结果经分析，TPPA法、CLIA法、ELISA法以及Trust法和WB法阳性率对比差异无统计学意义（P>0.05）；将WB检测法当作确认试验，TPPA 法、CLIA法、ELISA法特异度、敏感度和总符合率均比较高。
结论经研究结果分析可知，TPPA法、CLIA法、ELISA法不管是敏感度，还是特异度均比较高，实际应用中可根据梅毒螺旋体抗体实际情况合理选用检测法。
关键词血清学；梅毒螺旋体抗体；检测在临床中梅毒作为常见性传播疾病之一，传染性非常高，目前在献血员以及临床患者输血之前、各种创伤性检验中梅毒血清学检验已成为常规检测中一项基本项目，基于该形势下，选用快捷、灵敏度和特异度均比较高以及操作便捷的检测法对于正确筛查与诊断梅毒也变得尤为重要[1，2]。
本次研究就5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果进行评价。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料本次研究所用标本来自2012年7月～2015年5月到本院诊治患者120例，全部标本均实施梅毒螺旋体抗体检测，其中男50例，女70例，年龄32～56岁，平均年龄（45.26±4.9）岁。
1. 2 方法于空腹状态下采集3 ml静脉血，以3000 r/min进行离心，离心时间一般为10 min，经血清分离实施检测。
5种血清检测法所用仪器如下：洗板机、水浴箱、Clem Clin化学发光免疫分析仪、振荡器、Roto-2600c酶标仪以及离心器等；所用试剂有CLIA试剂、ELISA试剂、TPPA试剂、WB试剂以及Trust试剂。
甲苯胺红不加热血清试验与密螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒螺旋体抗体的结果分析
１ 方法 ． ２
表 ３ 不 同年龄组 Ｔ Ｐ Ｐ Ａ检 测梅 毒
１ ． 甲苯胺红不 加热 血清试验 （ Ｒ Ｓ ）试 剂 中的心磷脂 ．１ ２ Ｔ ＵＴ ： 作为抗原与抗体发 生反应 ，卵磷 脂可加强心磷脂 的抗原性 ， 胆固醇可加强抗体 的敏 感性 。这些成 分溶于无水 乙醇 中， 在 加入水后 ， 固醇析 出形成 载体 ， 磷脂和 卵磷脂 在水 中形 胆 心 成胶 体状包裹在其周 围 ， 形成 胶体微粒 。将 此抗原微粒 混悬
例均＜ ５个月 ， 小的 只有 ５ｄ ６ ４ 最 。１ ～ ４岁 （ 青年人 ） 出阳性 检
计数资料 比较采用 检 验 ， Ｐ ００ 以 ＜． ５为差异有统计学意
义。 ２ 结 果
３ ２例 ， 性 １４例 ， 性 ２ ８例 ， ５ 男 ２ 女 ２ 女性 高于男 性 ， 阳性 率为
２１ ％， ． ９ 占阳性者 中的 ６ ． ％。 ５ ５ ５５ ５ ４ ～ ９岁 （ 中年人 ） 检出阳性 ７ １ 例， 男性 ４ ４例 ， 女性 ２ ７例 ， 阳性 率 为 ２１％， ． ９ 占阳性 者 中的 １ ．％。 ０ ７ ３２ ６ ４岁（ 年轻老年人 ） 出阳性 ６ 检 ６例 ， 男性 ５ 例 ， Ｏ 女 性 １ ， ６例 阳性率为 ０４ ％， ．１ 占阳性者 中的 １．９ ３７ 岁 （ ２ ％。 ５ 老 ２ 年人 ）检 出阳性 ３ ７例 ，男性 ２ ６例 ，女性 １ 例 ，阳性 率为 １ ０２ 占阳性者 中的 ６９ ％。 － ％， ． ２
・
１６ ０ ２・
实用医技杂志 ２ １ 年 ｌ ０ １ Ｏ月第 ｌ 卷第 ｌ 期 ８ Ｏ
Ｊｕ Ｍ ０ Ｐａｔ ａ Ｍ ｄｃｌ ｅｈ ｉ ｅ ， ｃ ｂ ｒ ０ １ Ｖ １１ ， ｏ ｌ ｏ ｍ ｒ ｉ １ ｅｉ ｃ ｎ ｕｓ Ｏ ｔ ｅ ２ １ ， ｏ ８ Ｎ ０ ｆ ｃｃ ａＴ ｑ ｏ
梅毒螺旋体检测标准操作规程
目 的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任 人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
先天梅毒的排除标准
先天梅毒的排除标准主要包括以下几个方面：
梅毒血清学检查阴性：六个月以后，如果梅毒血清学检查（如RPR）结果为阴性，可以排除先天性梅毒感染。
梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）阴性：如果RPR未转阴，始终维持在低滴度1:1的水平，应每三个月检查一次TPPA，一直至产后十八个月。
如果TPPA转阴，也可以排除感染。
特殊抗体检查：有条件的地区可进行特殊的抗体检查，如FTA-ABSIgM，如果结果阳性可诊断为先天梅毒，但结果阴性不能完全排除梅毒感染。
需要注意的是，以上标准并不是绝对的，如果有其他临床表现或疑虑，建议及时就医并咨询专业医生。
同时，预防先天梅毒的最佳方式是早期诊断和及时治疗，以防止母婴传播。
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)（凝集法）1.目的：标准实验室TPPA检测操作。
2.范围：xxx院xxx 科3 .测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反响发生凝集，产生粒子凝集反响（Particle Agglutination Test, PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.标本：采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸檄酸钠和EDTA抗凝剂。
样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去, 并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2-8°C 的冰箱中；假设需48小时以上保存或运输，那么应冻存于・20°C以下，防止反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂：珠海丽珠试剂股份提供的试剂。
试剂盒在2°C-10°C储存，防止冷冻，防止强光照射，有效期12个月。
试剂盒开启使用后，冷冻枯燥品配好后，2C—10°C保存可使用7日，使用前必须做对照试验。
5.3试剂组成5.溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
5.血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。
5.致敏粒子（冷冻枯燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。
5.未致敏粒子（冷冻枯燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1： 320（最终稀释倍数）。
6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1. 1溶解液（液体）：按照测定操作规那么使用。
血清稀释液（液体）：按照测定操作规那么使用。
微粒子化学发光法和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验检测梅毒抗体的一致性比较
梅毒螺旋体抗体 的敏感性 和特异性 。方法
致 性 。结 果
Ｐ 法 作 为对 照标 准 ， 用 Ｃ Ａ法 检 测 ４ ８ 血 清 标本 ， 用 Ｋ ｐ ａ 验 评 价 两 种 检 测 方 法 对 同 一 个 样 本 的 化 验 结 果 的一 Ａ） 采 ＭＩ ６ ６例 并 ａｐ 检 ４８ ６６例 血 清 标本 中用 Ｃ Ａ法 检 出 阳 性 率 ５ ４ ％ ，Ｐ Ａ法 检 出 阳性 率 ５ １ ％ 。 以 Ｔ Ｐ 为 金 标 准 ， ＭＩ 敏 ＭＩ ．８ Ｔ Ｐ ．４ ＰＡ Ｃ Ａ法 感 性 为 ９ ．７ ， 异 性 为 ９ ．０ 。其 中 Ｃ Ａ法 检 测 血 清 Ｓ Ｃ 值 ＞ ．０的 ２ ５例 ， Ｔ Ｐ ９ １％ 特 ９６ ％ ＭＩ ／Ｏ ４０ １ 用 Ｐ Ａ确 认 ２４例 阳性 ， １ 阳性 预 测 值
ｒ ｔ ｆＣＭ Ｉ ａ ｄ ＴＰＰＡ ｓ５． ８％ ａ ４％ ａ ｅｏ Ａ ｎ ｗａ ４ ｎｄ５．１ ，ｅ ｐ ｃｉ ｅｙ．Ｗ ｉｈＴＰＰＡ ｓｔｅ ｒｌ ｔｖ ｔ ｎ ｒ ｔ ｏ ｔ ｅ ｓｔｖｔ ｎ ｐｅ ｉ ｃ ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ｔ ａ ｈ ｅａｉ ｅｓａ ｄａｄ ｍｅ ｈ ｄ，ｈｅｓ ｎ ｉｉ ｉ ａ ｄ ｓ ｃｆ — ｙ ｉ
梅毒螺旋抗体TPPA(凝集法)
梅毒螺旋抗体TPPA（凝集法）传播途径：1、性接触这是主要的传染途径。
未经治疗的病人在感染后的1年内最具有传染性；随着病期的延长，传染性越来越小；到感染后4年，通过性接触一般无传染性。
2、血传播梅毒患者、潜伏梅毒及隐性梅毒血清具传染性，通过输血及共用针头可传染他人。
3、胎传患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染，一般认为感染发生在妊娠4个月以后。
名称：赛乐迪亚原理：将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体,并且可用来测定抗体效价。
操作方法：试验前试剂应恢复到15～30℃。
用前30分钟按规定量加溶解液（0.6ML)溶解致敏颗粒、未致敏颗粒并混匀；按规定量加溶解液于质控血清。
(1)标本稀释液加至微量反应板孔内，第l孔100微升，第2-5孔各25微升。
(2)取血清或血浆25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后取25微升至第5孔，混匀后弃去25微升。
(3)第4孔未致敏颗粒25微升，第5孔加致敏颗粒25微升。
(4)将反应板置振荡器振荡30秒。
(5)加盖后于室温（15-30℃）下水平静置，2小时后观察结果。
结果判断：判定基准阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－），致敏粒子（最终稀释倍数１：８０以上）的反应图象判定为（＋）时,最终判定为阳性，进行方法2的测定时，将显示出反应图象为(+)时的最终稀释倍数作为抗体效价。
阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图象，只要致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象显示为（－）时，最终判定即为阴性。
未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－）且致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象判定为（±）时，最终判定为保留。
注意事项：使用过的器具（移液管、试管等）、废液、废物等除用次氯酸钠（有效氯浓度1,000ppm，浸泡1小时以上），戊二醛（2%，浸泡1小时以上）进行消毒以外，还要进行高压蒸汽灭菌（121℃1小时以上）及焚烧等处理。
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RPR(+)、TP-ELISA(-)、TPPA(-)为假阳性或初期感染。
RPR(+)、TP-ELISA (+)、TPPA(+)为梅毒感染。 RPR(-)、TP-ELISA(+)、TPPA(+)为晚期梅毒或梅毒既往感染。
谢谢 thank you
致敏粒子和未致敏粒子在滴加前应充分摇匀。加样、稀释完毕后应轻 轻拍打反应板边缘以进行混匀，注意勿使液体溅入邻近的孔中，不要 使用旋涡混匀器
反应应在室温下静置2小时以上，不要使用水浴箱或恒温箱，结果观 察完毕前不要振摇反应板
临床意义
• RPR可用作临床筛查,TP-ELISA可作定量,用于疗 效观察;TPPA试验特异性高,主要用于确认试验。
2、快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)：在特制的纸片 上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现 凝集，用肉眼可观察结果。
3、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉 颗粒， 使结果更易于观察。 4、不加热血清反应素试验（USR)
梅毒的血清学试验（二）
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检
TPPA
原理：赛乐迪亚TP.PA是将梅毒Treponema Pallidum(Nichols株)的精制菌体成分包被在人工载体明胶 粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反 应（Particle Agglutination Test;PA法），由此可以检测出 血清和血浆中的梅毒螺旋体Treponema Pallidum（TP）抗 体,并且可用来测定抗体效价。 优点： 1、试剂稳定，批间差小 2、结果判读更为清晰明确 3、敏感性和特异性较TPHA进一步提高 4、通过了国家的批批检 不足：结果判定主观，较难实现自动化
梅毒与HIV感染
梅毒和一些其他性病均与艾滋病密切相关，从社会学角度 来看，凡人群中梅毒发病率高，意味着人群中性乱现象严 重，提供了艾滋病流行的条件；从医学角度来说，患有梅 毒的人，因有局部溃疡，可明显增加带有CD4受体信息的 目标细胞，故对HIV感染的易感性增加2-10倍。同样， HIV感染者伴有梅毒，其生殖道排出的HIV的量要比仅有 HIV感染者排出的量大得多 在HIV感染者中，梅毒血清学反应有时会出现难于解释的 现象，因此对于临床怀疑梅毒感染而血清学试验又表现为 阴性者，建议考虑HIV检查
梅毒的血清学试验（一）
非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原 检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种 试验，原理基本相同：
1、性病研究实验室玻片试验（VDRL) ：由于试剂需现配 现用，故 而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒诊断的血 清学方法
抗梅治疗，疗效观察
样本要求
• 样品中如果存在红细胞等其他有形成分，会给反 应带来不便，所以应在离心除去之后再进行检查。
•血清样品即使钝化也不会影响检查结果。
TPPA操作中的注意事项
不要将生产批号不同的试剂混合在一起使用 试剂应2-8 ℃保存，不可冻结试剂 试剂在使用前应事先从冰箱中取出, 平衡至室温后再进行操作 试验应在FASTEC硬质微量反应U型板中进行, 该板洗涤后可重复使用, 但重复使用次数不宜超过三次 最好将反应板放置在一块白色湿布上进行加样、稀释过程，以防止静 电可能带来的影响
•
• 先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血 清试验
关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）
梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA等）
（ +） 非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR 等） （ -） （ +） 现症梅毒 （ -） 阴性报告
询问梅毒既往感染和治疗 史 （有） （无） 既往感染 随访或抗梅治疗
测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性和特异 性均较高。常用的有以下五种方法：
Biblioteka 1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS) 2、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)
4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）
5、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）
关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）
先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR、TRUST等）进行初筛，再 以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TPHA、ELISA等）进行确认 优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使梅 毒检测的成本可以保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较差， 导致临床上易出现漏检的情况 同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验 优点：这是从技术上而言的最佳方案 缺点：人力和试剂成本较高
梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验 (TPPA)简介
聂明明
梅毒概况
梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性性传播疾病。人体 受感染后，螺旋体很快播散到全身，几乎可侵犯全身各组织与器 官，临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长
≪中华人民共和国传染病防治法≫规定要管理的性病是爱滋病、 淋病和梅毒，应加以重点防治。卫生部≪性病防治管理办法≫则规定 除上述3种病以外，还有生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、非淋菌性 尿道炎（NGU）、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病 梅毒早期主要侵犯皮肤及粘膜，晚期除侵犯皮肤、粘膜外，还可侵犯 心脏血管系统及中枢神经系统；另一方面，梅毒又可多年无症状呈潜 伏状态 梅毒主要通过性接触传染，也可因其它方式密切接触或输入患者的血 液而传染。梅毒孕妇可通过胎盘使胎儿在宫内受感染或出生时接触母 亲有病损的产道受染