微生物棉签擦拭取样方法验证方案
清洁验证取样方法及检验方法验证方案
清洁验证取样方法及检验方法验证方案文件编码：EL-YZ54010-01文件审定部门签名日期起草人审核人审核人审核人审核人审核人批准人四川诺迪康威光制药有限公司目录1.概述 (3)2.目的 (3)3.适用范围 (3)4.职责 (4)5.验证条件 (4)6.验证时间计划 (4)7.验证要求及标准 (2)8.验证实施 (7)9. 验证结果评定与结论 (7)10. 拟定再验证周期 (7)11. 附件 (7)1.概述：生产过程中所用的生产设备均可能有残留物遗留，为了最大程度的避免由于上一批次生产产品的残留影响下一批次或其他品种，故必须对生产所用的设备进行清洁。
清洁后要对该清洗方法进行取样检测残留量。
一般通常的取样方法为棉签擦拭法和淋洗法。
由于我公司产品均为中成药，成分复杂，无法对每一成分进行测定，所以检测方2.目的：考察清洗验证涉及取样过程和所用检测方法的过程，是对人员取样操作、残留物转移、测试过程的考察，考察项目最低定量限、线性、综合回收率等。
3.适用范围：清洁验证取样方法及检验方法。
姓名部门小组职务职责方延刚质量管理部组长负责验证的组织协调工作，以保证本方案规定的验证项目顺利实施；负责验证数据及结果的审核；负责验证报告的起草；负责验证周期的确认乐元保工程部组员负责组织试验所需器具的校验。
张慧质量管理部组员负责验证现场监管并协调验证工作；负责偏差、变更的审核，杨燕质量管理部组员负责起草验证方案；负责验证方案的实施；负责协助调查和处理验证过程中的偏差；参与检验方法验证方案的实施；制备阴性样品。
李新质量管理部组员负责验证方案的实施。
负责协助调查和处理验证过程中的偏差。
陶瑶质量管理部组员负责验证方案的实施。
负责协助调查和处理验证过程中的偏差。
5.条件5.1.检验操作规程齐全（记录见附件1）5.2.设备相关标准操作规程齐全、用具齐全（记录见附件2）5.3.检验、检测仪器均已校验（记录见附件3）5.4.风险识别项目风险源风险发生的失败模式风险可能导致的后果1 文件与人员培训无操作指导文件，操作人员未经培训仪器操作失当，出现操作事故2 环境环境温湿度不符合要求影响仪器正常运行3 仪器状态仪器运行不正常；功能障碍、电源不符合要求损坏仪器4 试剂、试液、样品、工具不符合要求导致验证失败或结果不准确。
取样工具清洁、灭菌验证方案及报告
***********有限公司文件编号第1页共13页取样工具清洁、灭菌验证方案及报告文件编码颁发部门GMP办起草人日期年月日审核人日期年月日审核人日期年月日审核人日期年月日批准人日期年月日执行日期年月日制定、修订、变更原因记录：分发部门行政部[]质量部[]生产部[]工程部[]G M P办[]采储部[]销售部[]财务部[]药品生产质量管理文件目录一、验证的组织及职责---------------------------------第03页二、概述---------------------------------------------第03页三、验证目的-----------------------------------------第03页四、验证范围-----------------------------------------第04页五、验证内容-----------------------------------------第04页六、检验设备的确认及人员的确认----------------------第05页七、验证指令------------------------------------------第06页八、清洁规程------------------------------------------第06页九、验证过程中的漏项及偏差分析、处理------------------第06页十、验证报告------------------------------------------第06页十一、验证方案的实施计划------------------------------第06页十二、再验证计划--------------------------------------第07页药品生产质量管理文件1本次验证组织及职责验证小组成员本次验证职务部门/职务职责***组长质量部/经理1.组织本部门人员编写清洁验证方案；2.参与清洁验证方案的审核、批准；3.领导清洁验证项目的实施；4.负责清洁验证偏差的审批处理；5.负责清洁验证结果的价评；6.参与清洁验证报告的审核、批准。
关于制药设备清洁验证中表面微生物擦拭取样方法和检验方法的验证实验
关于制药设备清洁验证中表面微生物擦拭取样方法和检验方法的验证实验发布时间：2021-12-30T08:36:42.297Z 来源：《中国科技人才》2021年第25期作者：董小燕[导读] 微生物在适当温湿度下以残留物中的有机物为营养可大量繁殖，产生各种代谢物，从而增加残留物复杂性和危害程度，进而对下批产品造成不良影响。
因此必须对药品生产设备的微生物进行严格控制。
此外，擦拭取样能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性最难清洁部位的残留物水平评价整套生产设备的清洁状况。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：为降低药物交叉污染及微生物污染风险，保证用药安全，延长系统或设备使用寿命，提高企业经济效益设备。
药品生产的每道工序完成后，需对药品生产设备进行清洁，并对清洁方法进行验证，在以前清洁验证中要求对化学残留取样方法进行验证，却未要求对微生物取样方法进行确认，而《药品生产质量管理规范》新增了对表面微生物取样和检验方法验证的要求。
关键词：制药设备；清洁验证；表面微生物微生物在适当温湿度下以残留物中的有机物为营养可大量繁殖，产生各种代谢物，从而增加残留物复杂性和危害程度，进而对下批产品造成不良影响。
因此必须对药品生产设备的微生物进行严格控制。
此外，擦拭取样能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性最难清洁部位的残留物水平评价整套生产设备的清洁状况。
一、清洁验证目的清洁验证是对清洁程序进行的验证方法，一般经过对数据的收集等工作，来证明清洁程度是否能达到清洁设备的标准要求。
此外，若在进行多种药品的生产时，使用同一种设备进行生产，这样会导致问题的出现，因一旦生产完一种产品未及时进行设备的清洗，会直接导致下一批药物生产受到污染，从而影响药品质量。
但在实际生产时，许多药品需一个设备进行生产，并且清洁设备的方法也都无太大差别，这时制药公司就可根据药品所需原料及其溶解性质、稳定因素、需要清洁的剂量等进行有效分析，之后将其安全指数根据数据统一计算。
关于制药设备清洁验证中表面微生物擦拭取样方法和检验方法的验证实验
实验数据记 录：准确记 录实验数据， 包括擦拭取 样方法、检 验方法、结 果等
实验数据处 理：对实验 数据进行统 计、分析和 处理，确保 数据的准确 性和可靠性
实验结论： 根据实验数 据得出结论， 对制药设备 清洁验证中 表面微生物 擦拭取样方 法和检验方 法的验证结 果进行评价
实验数据处理与分析方法
第七章
实验结论总结
● 实验结论：通过对比不同清洁方法，发现采用高压蒸汽灭菌法清洁设备效果最佳，能够有效降低表面微生物残留。 ● 讨论：实验结果可为制药企业提供参考，指导设备清洁验证工作。同时，建议对不同设备类型和清洁方法进行深入研究，以提高清
洁效果和产品质量。 实验结论总结 ● 实验结论总结
● 实验结果：通过实验验证，我们发现采用高压蒸汽灭菌法清洁设备能够达到最佳清洁效果，有效降低表面微生物残留。 ● 讨论：这一结论对于制药企业具有重要的指导意义。在实际生产过程中，应加强对设备清洁工作的监控和管理，确保产品质量和安
设备来源：这些设备通常来源于专业的制药设备生产厂家或实验室设备 供应商，具有可靠的质量保证和售后服务。
材料与设备的准备情况
实验材料：无菌棉签、无菌生理盐水、无菌容器等 实验设备：微生物培养箱、显微镜、天平等 实验试剂：无菌生理盐水、微生物培养基等 其他辅助材料：无菌手套、口罩、实验服等
实验步骤与方法
全。同时，建议对不同设备类型和清洁方法进行深入研究，以提高清洁效果和产品质量。 实验结论总结 ● 实验结论总结
● 实验结果：通过本次验证实验，我们发现采用高压蒸汽灭菌法清洁设备能够有效降低表面微生物残留，达到最佳清洁效果。 ● 讨论：这一结论对于制药企业具有重要的指导意义。在实际生产过程中，应加强对设备清洁工作的监控和管理，确保产品质量和安
清洁验证微生物取样
取样用品
取样前准备
用75%酒精对手部消毒后，戴上一次性
口罩，戴上无菌手套或一次性兰薄橡胶 手套。如使用一次性兰薄橡胶手套，带 上手套后需再次用75%酒精对手套消毒， 并自然挥发至干。 (现场示范)
冲洗管口
用75%酒精进行喷洒消毒，然后在放掉 10L水后用微生物取样瓶接取不少于 100ml 水样。
对验证草案规定的取样点进行棉签取样。
在微生物取样棉签试管外标记所取设备
名称和取样点编号。
棉签取样
拔出棉签，一手拿棉签试管，将试管口朝下， 另一手拿棉签在取样点上25cm2 的范围内进行
划线（如下图），先用棉签的一面做平行划线， 再以其另一面垂直于原方向做平行划线，然后 将棉签放回到试管内。
注意：拿棉签的正确方法(演示),棉签或手绝对
不能触碰试管口。
棉签取样
方法----棉签表面擦拭(现场演示)
反转棉签
范围----25cm2 (5cm×5cm)
5cm约棉签试管的一半长度。 当取样表面不规则时如何处理?
Rodac 板取样
对验证草案规定的取样点进行取样，在平
板外标记所取设备名称和取样点编号。
打开Rodac 板使其凸出培养基表面与取样
将样品,检验记录一并交给微生物室有关人员。
注意事项
先进行水样取样，待设备表面晾干后再
进行棉签取样，防止棉签上的溶剂污染 设备。 化学棉签取样应在微生物棉签取样后进 行，且取样位置不得重合。 切勿将棉签碰到试管的外壁以免污染。 取样时避免工衣和取样设备内表面的接 触。
注意事项
同一设备上有多个取样点,需注意取样顺序(先
下后上,先外后内……),尽量减少人为影响.
当取样途中用手接触其他无关物品后,须用酒
清洁验证微生物记录
1.方法概述
用4个无菌棉签分别在下料口处按每个棉签100cm2/棉签擦拭取样，先取无菌棉签1支，用无菌的0.9%的氯化钠溶液5ml浸湿，去演时将棉签头按在取样表面上，以30度角与取样表面接触，平稳而缓慢得擦拭取样表面，在向前移动的同时将其一边移到另一边，每支棉签擦拭过程覆盖100cm2整个表面，翻转棉签，用另一面再进行擦拭，方向与前一次垂直，然后将棉签端用无菌剪刀置于100ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，左右振摇5min，做好标识。
作为供试品溶液。
2.合格标准
2.1本品阴性对照组均不得有菌生长。
2.2本品细菌、霉菌和酵母菌总数（cfu/ml），每不得过cfu。
3.试液、仪器准备
仪器名称：电热恒温培养箱仪器型号：DH-500A 仪器编号：QC-SB-013 仪器名称：生化培养箱仪器型号：SHP-150 仪器编号：QC-SB-0134 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液配制批号：营养琼脂培养基配制批号：
玫瑰红钠琼脂培养基配置批号：
4. 细菌、霉菌和酵母菌数检查：
4.1供试品制备：取供试品，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至ml。
混匀后，制备稀释级别为稀释液，备用。
4.5检验结果：本品菌落总数数为。
检验人：复核人：年月日。
关于制药设备清洁验证中表面微生物擦拭取样方法和检验方法的验证实验
汇报人：
实验设计：选择不 同的取样和检验方 法，进行对比实验
实验结果：分析实 验数据，比较不同 方法的优劣
结论：根据实验结 果，确定最优的取 样和检验方法
擦拭棒：用于擦拭设备表面，收集微生物样本 培养皿：用于盛放微生物样本，进行培养和观察 稀释液：用于稀释微生物样本，便于计数 显微镜：用于观察微生物形态和数量 培养基：用于培养微生物，观察其生长情况 生物安全柜：用于保护证实验结 果的可靠 性和准确 性
实验设计：描述实验的设计方案，包括取样方法、拭子类型、拭子数量、拭 子擦拭次数等。
数据收集：列出实验中收集的数据，包括微生物数量、拭子擦拭次数、拭子 类型等。
数据分析：对收集到的数据进行统计分析，包括平均值、标准差、置信区间 等。
结果评价：根据数据分析结果，评价取样方法的可靠性和准确性，以及拭子 类型、拭子数量、拭子擦拭次数等因素对实验结果的影响。
准备实验 材料：擦 拭取样器、 培养基、 无菌操作 台等
擦拭取样： 使用擦拭 取样器对 制药设备 表面进行 擦拭取样
培养基制 备：将擦 拭取样器 上的微生 物转移到 培养基中
培养：将 培养基放 入培养箱 中培养， 观察微生 物生长情 况
结果分析： 根据微生 物生长情 况，判断 制药设备 表面的微 生物污染 程度
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汇报人：
目的：验证表面微生物擦拭取样方法的可靠性和准确性 实验设计：选择合适的拭子和培养基，确定取样面积和擦拭次数 数据分析：比较不同拭子和培养基的检测结果，评估取样方法的可靠性和准确性 结论：确定最佳的拭子和培养基组合，为制药设备清洁验证提供可靠的取样方法
通过实验比较不 同取样方法的效 果，如擦拭面积、
(仅供参考)清洁验证取样方法和检验方法验证方案及报告
清洁验证取样方法和检验方法验证方案一、目的：通过对清洁验证取样方法（棉签取样法）的回收率试验，来验证该取样方法的回收率和重现性，及检验方法的线性、精密度（RSD）。
二、范围：适用于本公司设备清洁验证的取样和检验方法。
三、责任人：验证小组取样人员、检验人员。
四、内容:1.概述制药企业生产设备、生产场所、用具等需清洁，清洁后残留物限度经检验应符合要求，检验残留物的限度有两种方法：一是最终淋洗水取样；二是棉签擦拭取样，本公司目前所有设备均采用的是棉签擦拭取样方法。
棉签擦拭取样优点是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物限度评价生产设备的清洁状况。
但取样方法需验证其可行性（回收率和重现性），因此须通过取样方法验证确定清洁验证取样方法的有效性，及检验方法的线性、精密度（RSD）。
2.验证目的本验证是通过对清洗消毒后，棉签擦拭取样方法的回收率试验，来验证、评价取样方法的可行性（回收率和重现性）、代表性和科学性，及检验方法的线性、精密度（RSD），为证明清洗方法有效性提供基本的取样和检验依据。
3.范围本次验证适合清洁验证取样方法（棉签擦拭法）和检验方法（高效液相色谱法）。
4.验证选取的参照物本次验证选用黄芩苷（C21H18O11）来做取样方法回收率试验和检验方法的线性、精密度（RSD）。
5.验证周期及验证进度安排验证由起草人和审核人提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动分两个阶段完成。
验证小组成员的培训：试验时间：6.验证小组成员及职责验证小组成员所在部门验证小组职务质量部QA负责本次验证的取样人员，监督本次验证过程的实施，异常情况汇报和处理。
质量部QA主管验证小组组长，验证方案及报告的起草，提供取样方法验证方案；负责本次验证方案的培训与指导。
质量部QC负责进行本次验证过程中的检验、数据记录、分析和报告。
质量部QC主管验证方案及报告的审核，提供检验方法验证方案；负责本次验证实施规程中的指导。
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微生物棉签擦拭取样方法验证方案
1．主题内容
本方案规定了微生物棉签擦拭取样验证的目的、原理、标准及内容。
2．适用范围
本方案适用微生物棉签擦拭法取样。
3．责任人
质量部现场监控员：负责棉签擦拭取样方法验证方案的起草及实施。
质量部QC：负责按计划完成相关检验任务，确保检验结论正确可靠。
质量部QA：负责监督验证实施的全过程。
验证管理员：协助验证方案的起草，组织协调验证工作，并总结验证结果，出具验证报告。
质量管理部部长：负责验证方案及验证报告的审核。
质量授权人：负责验证方案及验证报告的批准。
组长：质量管理部部长
验证小组成员：QA主管 QC主管微生物限度检验员现场监控员4．内容
概述
制药企业生产设备、生产场所、用具等需要清洁，清洁后残留物限度经检验应符合要求。
检验残留物限度的方法有两种：一是最终淋洗水取样；二是擦拭取样。
擦拭取样优点是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物限度评价生产设备的清洁状况。
但取样方法需验证其可行性。
因此需通过取样方法验证确定清洁方
法的有效性。
能消除药品交叉污染及微生物污染。
验证目的
通过对清洗消毒后微生物取样方法的回收率实验，评价取样方法的有效性、代表性和科学性，并为证明清洁方法有效性提供基本依据。
验证原理
通过物理的擦拭对那些已经干燥的残留物取样。
通过选择适当的擦拭溶剂、擦拭工具和擦拭方法，可将清洗过程中未溶解的，已“干结”
在设备表面或溶解度很小的物质擦拭下来。
检验结果能直接反映出个取样点的清洁状况。
清洁方法执行《XX机清洁SOP》、《房间清洁SOP》。
验证方法
4.5.1.试验器具包括不锈钢载片（规格50mm×50mm）、培养皿Ф90mm、医用棉签，以上器具均需要经过121℃、30分钟灭菌后使用。
4.5.1.1.金黄色葡萄球菌菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26 003新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24小时。
取上述培养物用%无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每含菌数50-100CFU的工作菌液，并采用营养琼脂培养基计数。
4.5.1.2.白色念珠菌菌液的制备
接种白色念珠菌［CMCC(F)98 001］新鲜培养物至改良马丁或改良马丁琼脂培养基中，23-28℃培养24-48小时。
取上述培养物用%无菌氯化钠溶
液做10倍系列稀释制成每含菌数50-100CFU的工作菌液，并采用改良马丁琼脂培养基计数。
4.5.1.3.染菌不锈钢载片制备
·载片脱脂处理：载片放在含肥皂的水中煮沸30分钟，以纯化水洗净；用纯化水煮沸10分钟；用纯化水漂洗至PH中性晾干备用。
·菌液滴染
将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量为50-100CFU的菌液，并均匀涂布于整个载体表面。
滴染菌液后，载片置洁净工作台晾干备用。
每种菌平行制备2个染菌不锈钢载片。
4.5.1.4.擦拭取样
·取无菌医用棉签2支，用%无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。
将其中1支棉签头按在染菌载片上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面，擦拭路线按下图所示，擦拭过程应覆盖整个表面。
另取1支棉签再次对该不锈钢载片表面擦拭，擦拭路线和上次擦拭路线垂直。
擦拭完后，用无菌手术刀把棉签的头部（棉花部位）剪断，投入装有%无菌氯化钠溶液的锥形瓶中，密闭。
共制备12份检品。
·取适宜稀释的菌液（约50-100CFU）分别注入平皿中，立即倾入冷却至45℃左右的培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所涂布的试验菌数。
4.5.1.5.检验
将装有样品的锥形瓶反复振摇，使面前上的微生物释放到溶液中。
取样品溶液50ml薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上，贴于培养基上。
金黄色葡萄球菌用营养琼脂培养基，白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基。
4.5.1.6培养及计数
检验结束后，将细菌平皿倒置于30-35℃培养箱培养3天，霉菌平皿倒置于23-28℃培养箱培
养5天，计数。
4.5.2可接受标准：阴性对照应无菌生长，总回收率不低于70%，RSD ≤20%。
检验结果：见检验记录。
验证次数：进行三次验证。
5．结论与评价
验证小组根据验证情况对验证结果进行综合评审，做出验证结论，由质量受权人作出是否批准的决定及负责发放验证证书。
对验证结果评审应包括：
验证试验是否有遗漏
验证实施过程中对验证方案有无修改修改原因、依据以及是否经过批准
验证记录是否完整
验证试验结果是否符合标准要求
是否需要进一步补充试验
综合验证的结果，判定取样方法的有效性。
6．再验证：有以下情况需要进行再验证。
到了规定的再验证周期。
若取样方法有变化应进行再验证。
洁净区环境包括温、湿度有重大变化应进行再验证。
7．附表
表一取样检验记录
复核人：日期：表二验证结论与评价
验证小组成员签名：日期：。