双缩脲蛋白定量试剂盒
总蛋白试剂盒(双缩脲比色法)标准操作程序.
总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。
5.原理蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm处吸光度的上升。
由于反应所产生的化合物在波长550nm处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。
−C−→++2u紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件−−6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：测定：酒石酸钾钠≥5g/L试剂：硫酸铜≥2g/L、碘化钾≥1g/L、NaOH≥30g/L校准品：白蛋白（含量见瓶签）7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。
校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求shouyi
总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）
适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。
1.1产品规格
4×100mL；6×60mL；8×50mL；2×100mL
1.2产品组成成分
NaOH 600mol/L，硫酸铜12 mmol/L，酒石酸钾钠32 mmol/L。
2.1 外观
试剂为淡蓝色透明溶液。
2.2 装量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度
A≤0.15（光径1.0cm，波长540nm）。
2.4分析灵敏度
测定57.2g/L被测物时，吸光度变化在0.1631～0.2075范围内。
2.5 准确度
相对偏差应不超过±5%。
2.6 精密度
2.6.1 重复性
变异系数CV＜3%。
2.6.2 批间差
批间相对极差＜3%。
2.7 线性区间
a）（0，100]g/L。
在规定的线性区间内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应不低于0.990。
b）（0，30]g/L区间内，线性绝对偏差应不超过±3g/L；（30，100]g/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。
2.8稳定性
原装试剂2～8℃避光保存，有效期18个月，有效期满后两个月内测定结果应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。
对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。
目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
Leagene 总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。
双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。
双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解总蛋白标准品的稀释液。
编号 名称TC0547 120T Storage试剂(A): 双缩脲试剂 250ml 4℃ 试剂(B): 蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 蛋白标准配制液 5ml RT 试剂(D): 双缩脲空白试剂(备选) 100ml4℃ 使用说明书1份2、样本处理：血清、血浆样本直接取检测。
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求ruizhengshanda
总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中总蛋白的含量。
1.1产品型号/规格及其划分说明1.2主要组成成分2.1外观2.1.1 外观（液体单试剂）.R应为蓝色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；.试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.1.2 外观（液体双试剂）a）R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物；b）R2应为蓝色溶液，无混浊，无未溶解物；c）校准液应为浅黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物；d）试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量R和校准液的净含量不少于标示值。
R1、R2和校准液的净含量不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在主波长540nm, 副波长700nm处（光径1cm），试剂空白吸光度A≤0.20。
2.4分析灵敏度测量1g/L的被测物时，吸光度变化△A≥0.0010。
2.5 线性区间在[10，110]g/L线性范围内，线性相关系数r≥0.990。
在[10,20]g/L范围内，绝对偏差不超过±2g/L；在(20,110]g/L范围内，相对偏差不超过±10%。
2.6 精密度2.6.1 重复性重复测定(45±5)g/L、(70±10)g/L和 (100±10)g/L的样品，变异系数CV%≤5%。
2.6.2 批间差相对极差≤5%。
2.7 准确度测定标准物质BW3627-2，测定值与靶值的相对偏差不超过±10%。
2.8 稳定性原包装的试剂盒在（2～8）℃避光保存，有效期为18个月。
试剂盒在规定的储存条件下保存至有效期满后，检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法) 产品技术要求珠海森龙生物
总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)性能指标
1 外观和性状
单试剂：R应为蓝色澄清液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2 装量
液体试剂的装量应不小于标示量。
3 试剂空白吸光度
试剂空白吸光度应不大于 0.200 。
4
线性
试剂盒线性区间应覆盖[30.0 ，100]g/L；
a）线性相关系数 r 应不小于 0.995；
b）线性偏差不应超过±6.0%。
5
准确度
相对偏差应不超过±5%。
6 分析灵敏度
70g/L 样本吸光度差值（△A）应不小于 0.150。
7
精密度
7.1 重复性
重复测试（70.0±10.0）g/L 的样本，所得结果的变异系数（CV）应不大于 2% 7.2 批间差
测试（70.0±10.0）g/L 的样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于 5%
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双缩脲法测定实验报告
一、实验目的1. 学习双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。
2. 掌握双缩脲试剂的配制和使用。
3. 了解实验过程中可能出现的误差及解决办法。
二、实验原理双缩脲法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）在碱性条件下发生反应，生成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）处的吸光度与蛋白质含量呈正比关系。
通过测量吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质标准液（已知浓度）- 待测样品（含有未知蛋白质）- 双缩脲试剂A（含CuSO4）- 双缩脲试剂B（含NaOH）- 6mol/L NaOH溶液- 0.1mol/L HCl溶液- 10g/L NaCl溶液- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计四、实验步骤1. 配制双缩脲试剂：- 称取0.1g硫酸酮（CuSO4）溶于50mL去离子水中。
- 称取1.5g酒石酸钾钠溶于50mL去离子水中。
- 称取0.05g碘化钾溶于50mL去离子水中。
- 将三种溶液混合，搅拌均匀，备用。
2. 准备蛋白质标准液：- 将蛋白质标准液用去离子水稀释至一定浓度，备用。
3. 准备待测样品：- 称取一定量的待测样品，用去离子水稀释至一定浓度，备用。
4. 标准曲线的制作：- 取7支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL蛋白质标准液，然后依次加入1.5mL双缩脲试剂A和1.5mL双缩脲试剂B。
- 将试管放入水浴中加热10分钟，取出冷却至室温。
- 用移液器取0.5mL溶液于比色皿中，以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度。
- 以蛋白质含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 待测样品的测定：- 按照标准曲线的制作步骤，对待测样品进行测定。
- 根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 在540nm波长处，蛋白质含量与吸光度呈良好的线性关系，相关系数R²=0.998。
双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明
双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒使用说明货号:PC0040产品简介:样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
该方法测定范围为1~10mg蛋白质，适用于蛋白质浓度高的样品，尤其是动物材料。
自备仪器和用品:可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
标准品：液体×1瓶，5mg/mL，4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取:1.液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤:1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。
样品中蛋白质浓度计算：C待测（mg/mL）=C标准管×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)=5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)注意事项：1.样品蛋白浓度须在1~10mg/ml范围内，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml须做相应稀释。
总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)产品技术要求mairui
2性能指标
2.1外观
试剂1（R1）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂2（R2）应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物；
试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；包装标签文字符号应完整、清晰。
2.2净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
试剂以水为空白在37 ℃ 1 ℃，546 nm 波长条件下，吸光度应小于0.200。
2.4分析灵敏度
当样本浓度为70 g/L 时，吸光度变化应不小于0.150。
2.5线性范围
试剂盒在（2～120）g/L 范围内：
a)线性相关系数r 应不小于0.995；
b)当样本浓度不小于30 g/L 时，线性相对偏差应不超过±6.0%；当样本浓度小于30 g/L 时，线性绝对偏差应不超过±3.6g/L。
2.6测量精密度
2.6.1重复性
变异系数：CV 应不大于 2.0％。
2.6.2批间差
相对极差：R 应不大于 4.5％。
2.7准确度
2.7.1国家标准品测试
测定国家标准品，测定结果与靶值的相对偏差应不超过±5.0% 。
2.7.2质控品测试
测定质控品，测定结果应在靶值范围内。
2.8分析特异性
血红蛋白浓度在250 mg/dL 内、抗坏血酸浓度在30 mg/dL 内、内源性酯浓度在1200 mg/dL 内、结合胆红素在21 mg/dL 内、非结合胆红素浓度均在21 mg/dL 内、葡聚糖（分子量：7w 或4w）浓度在3000 mg/dL 内，对试剂检测结果的偏差影响应在±10 .0%以内。
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双缩脲蛋白定量试剂盒
【产品组成】
【保存条件】
室温,12个月
【产品概述】
双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色。
所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。
双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响，另外，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。
双缩脲法在10～160mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
【使用方法】
1、取1ml蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成160mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用0.9%NaCl或PBS作为溶解BSA稀释液。
2、将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20μl加到96孔板的标准品孔，加稀释液补足至20μl。
3、加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。
如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入20μl稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入20μl稀释液。
4、各孔加入200μl双缩脲试剂,室温放置10～15min。
5、测定540nm波长处的吸光值，如无540nm，520～562nm之间的波长也可。
6、根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
【注意事项】
1、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
2、待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深。
显色反应也会随温度升高而加快。
如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。
3、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。
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4、建议每次测定时都做标准曲线。
因为颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
5、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。
应按比例适当加大双缩脲试剂的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
6、检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
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