十二、猪细小病毒检测方法
猪细小病毒病的鉴别诊断
2020.6作者简介:薛增(1985.2-),男,山东省微山县人,助理兽医师,研究方向:动物疫病防治。
猪细小病毒病的鉴别诊断薛增(山东省微山县畜牧兽医服务中心277600)摘要:猪的细小病毒病属于病毒性疾病,与猪伪狂犬病、猪流行性乙型脑炎等病症有很多相似之处,但是又有所不同。
猪细小病毒病的病原为猪细小病毒,猪是本病唯一的易感动物。
猪伪狂犬病不是只感染猪,猪流行性乙型脑炎畜禽均可感染此病毒,主要通过蚊子叮咬传播。
正确鉴别有助于有效防治猪病。
关键词:细小病毒;伪狂犬;流行性乙型脑炎;诊断近几年来,微山县猪的细小病毒病时有发生,主要表现在侵害母猪,引起母猪繁殖障碍,给养猪场(户)造成很大的经济损失。
猪的细小病毒病属于病毒性疾病,与猪伪狂犬病、猪流行性乙型脑炎等病症有很多相似之处,但又有所不同。
现将本病的鉴别诊断方法分析如下,供大家参考。
1猪细小病毒病病原和流行特点1.1猪细小病毒病的病原猪细小病毒病的病原为猪细小病毒,猪是本病唯一的易感动物,目前还没有该型病毒感染人或其它动物的案例,病猪和带此病毒猪是本病的传染源。
可通过病源的排泄物和分泌物排毒,怀孕母猪可以经胎盘感染影响胎儿发育,一般呈地方性流行或散发,且常常会使感染此病的猪场连续几年出现母猪繁殖障碍现象,本病季节性不明显。
1.2猪细小病毒病的特征任何生长阶段的猪只均可以感染猪细小病毒病,但是仔猪、育肥猪和成年猪感染此病毒后一般不会表现出临床症状,怀孕母猪若感染此病毒后症状明显,特别是初产母猪表现尤为强烈,容易造成流产,即便是母猪在怀孕过程中没发生流产现象,病猪也会产出死胎、木乃伊胎或病弱的仔猪。
2猪细小病毒病的诊断要点2.1猪细小病毒病的临床症状不同孕期的母猪感染猪细小病毒后症状不同。
2.1.1怀孕早期母猪怀孕早期(30d 前)感染猪细小病毒,会造成胚胎死亡,并且死亡的胚胎会被母体吸收,造成母猪不孕或不规则的反复发情。
2.1.2怀孕中期母猪怀孕30~50d 时感染猪细小病毒,主要是会产木乃伊胎;母猪怀孕50~60d 时感染猪细小病毒,大多数情况下会产生死胎。
猪细小病毒病PCR检测方法的建立及应用
保健科 技 公 司 提 供 （ 号 ０４４ １ ， 小 病 毒 核 酸 批 ０ ００ ） 细 模板 分离 自细 小 病毒 血 清 检测 阳性 病 猪 组 织 ， 料 病 采集 于 临床 表现 体温 升 高 ， 呼吸 困难 ， 腹泻 的 患病断 奶仔 猪 及 呼 吸 困难 、 殖 障 碍 的母 猪 和 流 产 胎 儿 。 繁
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病 毒病 检测 方 法 。
１ 材 料 与方 法
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维普资讯
猪病毒性传染病：猪细小病毒病
猪病毒性传染病：猪细小病毒病病原本病是由猪细小病毒感染所致。
其病毒粒子直径为20nm左右。
能凝集猴、豚鼠、小鼠、鸡、狗、猫、猪等动物和人O型红细胞，但不能凝集牛和绵羊红细胞。
猪细小病毒通常在扁桃体、颌下淋巴结、肾、肝、脊髓和肠系膜淋巴结内增殖。
用免疫荧光技术可以查出组织细胞浆和胞核内的病毒包涵体。
猪感染后3-7天开始通过粪便排出病毒，以后呈不规则排毒。
感染猪的脏器、分泌物、排泄物以及种公种的精液中都含有病毒，猪感染后6-10天，即可产生高滴度的抗体，经感染前后抗体水平监测比较即可发现猪群的感染状况。
猪细小病毒对各种不良环境因素具有较强的抵抗力。
70℃2h、胰酶及pH3-9时都不能破坏其感染力。
2%NaOH热溶液能杀灭该病毒。
流行特点1.猪是已知的惟一的易感动物。
不同年龄、性别的家猪和野猪都可感染，尤以初产母猪为典型。
2.传染源主要是感染本病毒的种公猪和母猪。
带毒猪经粪、尿、鼻涕、唾液、精液以及死胎、弱胎、胎衣、胎水向环境排毒，污染水源、饲料、土壤、猪舍等。
病毒一般可在猪舍存活数月。
阴性猪场一旦引入带毒猪，通常于3个月内全场所有的猪只都会被感染，后呈地主流行或散发，并持续多年。
3.本病既可水平传播，又可垂直传播。
一般经口鼻为主传播。
带毒种公猪也可通过交配传染母猪，怀孕母猪也可通过胎盘感染胎猪。
鼠类也可机械性带毒散毒。
4.本病可见于一年四季(尤其是规模化猪场)，但农村散养为主的地区，仍为春、秋两季产仔时多见。
临床症状仔猪和母猪感染后通常表现为亚临床感染。
主要症状为病猪母源性繁殖障碍。
妊娠初期(10-30天)的母猪感染后，可能重新发情而屡配不孕，或窝产仔数明显减少。
妊娠中前期(30-50天)感染，分娩时大部分胎儿为木乃伊。
回顾性分析可知，怀孕过程中怀孕母猪腹围逐渐缩小。
妊娠中期(50-60天)感染时，大部分胎儿为死胎。
妊娠70天时感染，母猪主要表现为流产。
妊娠70天后感染，此时的胎儿已具备产分免疫应答能力，能产生抗体，因此不宜送检以分离病毒。
猪细小病毒病的流行病学临床症状诊断与防控
猪细小病毒病的流行病学临床症状诊断与防控【摘要】猪细小病毒病是一种由病毒引起的传染病，主要通过直接接触、空气传播和粪口传播等途径传播。
流行病学特征包括高死亡率和易在冬春季节流行。
临床症状主要表现为呼吸道症状、消化道症状和神经系统症状。
诊断方法包括临床表现、病毒学检测和分子生物学检测。
防控措施包括加强养殖场卫生管理、及时消毒和隔离患病动物等。
结论建议加强疫情监测和预警、提高动物养殖场卫生管理水平，并加强病毒病防控意识，以预防和控制猪细小病毒病的传播。
【关键词】猪细小病毒病、流行病学、临床症状、诊断、防控、传播途径、疫情监测、预警、养殖场卫生管理、病毒病防控、意识。
1. 引言1.1 猪细小病毒病概述猪细小病毒病，又称猪繁殖障碍综合征病或猪细小病，是由猪细小病毒（PRRSV）引起的一种猪类传染病。
该病主要传播途径为呼吸道和性传播，是目前全球范围内猪场常见的传染病之一。
猪细小病毒病的特点是病程隐匿、传播迅速，容易造成严重危害。
患病猪只表现为呼吸道症状、发热、厌食、抖动、咳嗽、粘液性鼻涕等临床症状。
诊断方法主要包括临床症状观察和实验室检测。
为了有效防控猪细小病毒病的传播，需要加强疫情监测和预警，提高养殖场卫生管理水平，加强病毒病防控意识，减少疫情对养猪业的影响。
加强疫情监测和预警、提高养殖场卫生管理水平、加强病毒病防控意识是有效控制猪细小病毒病流行的关键措施。
2. 正文2.1 病毒的传播途径猪细小病毒病是由猪细小病毒引起的一种传染性疾病，主要通过直接接触感染猪或病毒携带者的分泌物和排泄物传播。
病毒在猪体内主要通过呼吸道和消化道进入，最常见的传播途径包括饲料、水源、皮肤伤口等。
病毒还可以通过气溶胶传播，尤其在猪群密集的养殖场中更容易发生。
值得注意的是，虽然猪细小病毒主要感染猪，但人也可能通过直接接触感染猪或病毒携带者而受到感染，因此在养殖场工作或处理猪的过程中要注意个人防护措施，避免交叉感染的发生。
在疫情防控工作中，除了加强猪群的隔离管理和健康监测外，也要注意环境卫生的重要性，减少病毒传播的机会，从而有效控制疫情的蔓延。
仔猪细小病毒病诊断防治
2023-11-08CATALOGUE 目录•概述•诊断方法•防治策略•病例处理与报告•展望与建议01概述定义与特点仔猪细小病毒病是由仔猪细小病毒（Porcine Parvovirus，简称PPV）引起的一种病毒性传染病。
该病毒具有泛嗜性，可感染不同年龄段的猪，但主要引起1-3周龄的仔猪发病。
仔猪细小病毒病通常以生殖障碍、呼吸系统症状和消化系统症状为主。
流行病学仔猪细小病毒病主要通过水平传播和垂直传播。
垂直传播则通过感染母猪的胎盘和子宫，导致胎儿感染。
水平传播主要通过接触感染猪的排泄物、分泌物以及污染的食物和饮水等。
病毒对干燥和高温敏感，但在低温下可长期存活。
危害与影响母猪繁殖障碍：感染母猪可导致不孕、流产、死胎和新生仔猪死亡等。
仔猪成活率下降：感染仔猪出现生长受阻、死亡和淘汰率增加。
继发感染：病毒可与其他病原菌或病毒协同作用，加重病情。
免疫抑制：病毒可导致免疫抑制，使猪更容易感染其他疾病。
仔猪细小病毒病对养猪业造成严重的经济损失，主要表现在以下几个方面02诊断方法母猪感染后无症状或仅表现轻微症状，怀孕母猪感染后可引起流产、死胎、木乃伊胎。
新生仔猪感染后表现为呕吐、拉稀、脱水、共济失调、不能站立，有的出现黄疸、震颤、体温稍升高，几天内死亡，死亡率高。
临床症状母猪流产时，流产胎儿和死亡仔猪的肝、脾和淋巴结呈弥漫性出血。
新生仔猪死亡后，脱水、剖检可见肠道呈卡他性炎症，胃内有凝乳块，小肠和大肠黏膜有不同程度的充血和出血。
病理变化实验室诊断采取病猪的粪便和血液进行实验室诊断，常用电镜观察、免疫荧光染色法和ELISA方法进行检测。
免疫荧光染色法：将病猪粪便或血液制成涂片，用荧光抗体染色，在荧光显微镜下观察。
电镜观察：将病猪粪便或血液制成涂片，用磷钨酸钠负染，在电镜下观察病毒颗粒。
ELISA方法：采用ELISA方法检测病猪血清中的抗体，以判断是否感染该病毒。
03防治策略针对仔猪细小病毒病的疫苗包括活疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗。
猪细小病毒病的诊断与防控
疫病防治ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤＰＯＵＬＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮｏ．４，２０２４猪细小病毒病的诊断与防控丁希军肇庆市动物疫病预防控制中心，广东肇庆５２６０４０摘 要 猪细小病毒病是因猪细小病毒所引发的一种繁殖障碍性疾病，该病在规模化猪场较常见，具有较强的传染性和较快的传播速度，对猪的健康及繁殖影响甚大。
着重对猪细小病毒病的诊断与防控措施展开了深入探析。
关键词 规模猪场；细小病毒病；诊断；防控措施ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８ ０４１４．２０２４．０４．０２１０ 引言目前养猪业在畜牧经济发展中占据着重要地位，保证养猪业稳定发展意义重大。
近年来，受到引种、环境、营养、疫苗等诸多因素的影响，导致猪细小病毒病的发病率呈现升高趋势，患细小病毒病的猪主要表现为繁殖障碍，如流产、产死胎或畸形胎、公猪不育等，严重阻碍了畜牧经济的增长。
如何有效防控猪细小病毒病的发生成为行业工作者思考的关键问题。
１ 病原学猪细小病毒病的致病原是单股ＤＮＡ病毒属的细小病毒，该病毒直径为２０～２３ｎｍ，形态不一，有椭圆形、圆形、六角形，没有囊膜，对自然环境的适应性和抵抗力非常强，因此能够长期在粪便、土壤、污水中生存，即使在５６℃的高温环境下依然能够存活４８ｈ，但随着温度的升高，猪细小病毒的活性及感染性均会呈现出明显的下降态势。
当温度升高至７０℃时２ｈ就能够让病毒丧失感染性；温度升高至８０℃时５ｍｉｎ病毒即失去活性和感染力。
猪细小病毒病具备较强的抗酸性和碱性能力，在ｐＨ值３～９环境下依然可以生存。
该病毒对紫外线及甲醛蒸汽有一定的抵抗性，需要长时间方可将病毒杀死。
该病毒对氢氧化钠、漂白粉等有较高的敏感性，能够被其快速杀灭。
短时间胰酶处理无法降低病毒感染性，甚至会增强其感染力。
细小病毒对低温环境的适应性也非常强，即使在－２０℃的环境下毒力也不会出现非常明显的变化［１］。
２ 流行特点细小病毒病可发生于任何猪，患病的母猪是该病的主要传染源之一，处于妊娠期的母猪患病后可将病毒经胎盘垂直传播给腹中胎儿，流产母猪所产下的死胎以及胎衣、羊水等，均含有大量病毒，是重要的传染源。
猪细小病毒病的诊断和防治措施
猪细小病毒病的诊断和防治措施猪细小病毒病是一种传染性极强的病毒病，可引起仔猪的严重死亡。
即便是小猪顺利生产，也会在一定时期内发生死亡，不仅提高了养殖成本，还会给养殖场户造成较大的经济损失。
由于猪细小病毒给全球养猪业造成了持续的损失，所以要重视对该病的防控。
另外，该病很容易混淆猪繁殖与呼吸综合征，要注意鉴别诊断和控制。
1 病原特征细小病毒是细小病毒科的一种。
猪肾、猪睾丸等原代细胞和PKps、ST、IBR2 等传代细胞中均可产生该病毒。
该病毒为单一的血清型，与其它微小病毒没有任何的抗原联系。
可凝集人、猴、豚鼠、鼠、鸡等动物的红血球。
该病毒对热、消毒物具有较高的耐受性，且对pH 值有较大的适应性。
可耐70℃2h，但80℃加热5min 后，其感染性及凝集活性均消失。
2 感染症状仔猪与母猪感染一般以亚临床表现为主，但在许多组织、特别是淋巴组织中均可检出病毒。
不同的母猪在不同的妊娠期间会出现不同的临床表现，如死胎、木乃伊胎、流产。
妊娠30～50d 内，感染以产木乃伊胎为主；妊娠50～60d 内，感染多见死胎；感染70d 的母猪一般会有流产的表现。
妊娠中期和晚期感染后，可出现经胎盘感染，但在此期间，胎儿通常可以在没有明显的临诊情况下存活。
由于大部分胎儿在妊娠70d 后会出现有效的免疫反应，但是这些小猪往往携带了抗体和病毒。
另外，该病还会导致产仔瘦小、弱胎、发情异常、长期不育等。
对雄性母猪的生育能力和XY 无显著影响。
3 流行特点对热、酸性、碱性有很好的抗性。
消毒可用0.3%的氯酸钠溶液有较好的杀灭作用。
猪细小病毒会感染怀孕母猪，导致胎猪的发育受到影响，会引起母猪流产、胎猪早死。
同时，由于母猪感染后会以胎盘感染为主要表现。
所以，要严格控制感染后的母猪，避免其扩大病毒的传播。
公猪对猪细小病毒病也易感，很可能会通过配种将病毒传染给母猪，从而波及整个猪群。
公猪、母猪、育肥猪等都易感。
该病多见于春、夏季节，所以，春夏季节应注意防控该病。
猪细小病毒病的症状 猪细小病毒病的诊治与预防 - 养猪技术
猪细小病毒病的症状猪细小病毒病的诊治与预防-养猪技术猪细小病毒是一种只能在来源于猪的生长分裂旺盛的细胞上增殖，其体外复制是杀细胞性的，细胞病变表现为细胞隆起、变圆、核固缩和溶解，最后许多细胞碎片黏附在一起，使受感染的细胞单层外形不整，呈破布条状。
另外，不同毒株间存在培养温度依赖性差异，从而可以解释不同分离株在猪体内的复制能力和毒力差异的现象。
传染源主要来自感染细小病毒的母猪和带毒的公猪，后备母猪比经产母猪易感染，病毒能通过胎盘垂直传播，感染母猪所产的死胎、仔猪及子宫内的排泄物中均含有很高滴度的病毒，而带毒猪所产的活猪可能带毒、排毒时间很长，甚至终生。
下面就具体来了解一下：猪细小病毒病的症状猪细小病毒病的诊治与预防。
1、患病症状这种病毒主要攻击成年猪的生殖器官及生长旺盛的细胞，如精子，对于胎盘中的仔猪主要攻击仔猪的肝、脏、肺，以及生殖器官，不但具有很强的致命性还有很高的感染性。
患有此种病毒，对于成年猪来说没有什么明显的特征，但过了数个月之后成年猪也会发生明显的特征反应，母猪表现为不孕不育，子宫溃烂，身体不适，严重时会出现死亡。
公猪表现为性欲底下，身体不适，严重将会导致死亡。
对于胎盘中的仔猪，情况比较严重，出现流产，生出死猪、畸形胎、病猪或生理虚弱的仔猪，有些猪在生出不久就夭折，还有出现木乃伊的现象。
只有少数猪在生出之后才能免于一死，幸运存活，绝大多数猪都难逃厄运，给养殖者带来巨大的经济损失。
2、诊断猪患上细小病毒的可能性总会存在，为了及早发现患病猪，应该经常对猪群进行抽样检查，以防病毒在猪群内传播，造成巨大损失。
对猪细小病毒的诊断方法有很多，这里笔者就简单介绍几种经常用到的，主要有血清学诊断包括了血凝试验和血凝抑制试验、血清中和试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、乳胶凝集试验。
分子生物学诊断技术包括了PCR检测技术、核酸探针技术、单克隆抗体技术、基因芯片技术。
这些技术在检测中准确率高，速度快，但是成本相对来说比较高。
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十二、猪细小病毒检测方法
猪细小病毒血凝抑制试验操作方法
（一）材料准备
1．抗原：猪细小病毒浓缩抗原
2．PPV阳性及阴性血清
3．被检血清：自被检猪的前腔静脉血或自耳静脉采血分离血清。
4．红细胞：按抗凝剂与血液1：4的比例心脏采集豚鼠血液，用PBS洗三次，沉积红细胞配成0.5%悬液备。
5．稀释液：用灭菌的PH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
6．25%白陶土：取白陶土25克，置离心瓶中，加入适量1mol/L盐酸溶液，充分搅匀，2 000转/分钟离心10分钟，弃上清，再加1mol/L盐酸溶液，搅匀，离心，反复洗三次，沉淀白陶土，用0.15mol/L生理盐水100毫升配成25%悬液，然后用5mol/L氢氧化钠溶液调pH7.2左右,高压灭菌,置4℃备用,保存期不超过半年。
7．器材：96孔U型滴定板或V型滴定板，25微升稀释棒，25微升滴管，微量振荡器，普通离心机。
（一）试验操作
HA：用滴管在滴定板上从第一孔至试验所需稀释倍数孔，每孔滴加稀释液25微升于第一孔再滴加抗原25微升，用稀释棒从第一孔开始依次稀释。
置微量振荡器上振荡15秒，最后每孔滴加0.5%豚鼠红细胞25微升，振荡30分钟，置室1小时判定并记录结果。
HI：用滴管在滴定板上从第一孔至所需稀释倍数孔各加稀释液25微升，于第一孔滴加被检测血清25微升，然后每孔加4单位抗原25微升，振荡15秒，置4℃13小时或室温4小时，每孔加0.5%的豚鼠红细胞悬液25微升，振荡30秒，置室温1小时判定结果。
以完全抑制的最高稀释倍数做为HI价。
同时设已知阳性血清、已知阴性血清、不加抗原的被检血清及抗原、红细胞对照。
抗原对照亦即第二滴定，复核使用单位。
（二）判定标准及注意事项
1．判定时先检查对照是否正确，唯有对照各孔准确方可证明操作和使用材料无误。
2．红细胞凝集现象的判定
（1）红细胞均匀的平均铺于孔底者可判为“++++”。
（2）基本上与（1）相同，但边缘有下滑皱缩者为“+++”。
（3）红细胞于孔底形成环状或成团，四周有小凝集块者为“++”。
（4）红细胞于孔底形成团块，但边缘不整齐或有少量小块者为“+”。
（5）红细胞于孔底形成小团块，边缘整齐光滑，稀释液清亮者为“—”。
“++”以上凝集的最高稀释倍数做为HA价。
3．凝集抑制：本试验红细胞集中于孔底呈团块状，边缘光滑整齐为阳性，以“—”表示，说明抗原凝集红细胞的特性已被抑制，反之红细胞呈“++”以上凝集现象者判为阴性。
1．凝集抑制价：以被检血清最大稀释倍数能抑制红细胞凝集者为该血清抑制
价。
(吴斌)
猪细小病毒病乳胶凝集试验（LAT）操作方法
猪细小病毒乳胶凝集试验是用猪细小病毒培养液致敏乳胶抗原来检测动物血清中的抗体。
其具有简便、快速、特异、敏感之优点。
（一）试验材料
猪细小病毒病乳胶凝集试验抗体检测试剂盒：包括猪细小病毒致敏乳胶抗原、阳性血清、阴性血清和稀释液、玻片、吸头及使用说明书。
由华中农业大学畜牧兽医学院研制。
（二）操作方法
1．定性试验：取检测样品（血清）、阳性血清、阴性血清、稀释液各一滴，分置于玻片上，各加乳胶抗原一滴，用牙签混匀，搅拌并摇动1~2分钟，于3~5分钟内观察结果。
2．定量试验：先将血清作连续稀释，各取1滴依次滴加于乳胶凝集反应板上，另设对照同上，随后再各加乳胶抗原一滴，如上搅拌并摇动，判定。
（三）结果判定
1．判定标准：
“++++”全部乳胶凝集，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明；
“+++”大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊；
“++”约50％乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊；
“+”有少许凝集，液体呈混浊：
“—”液滴呈原有的均匀乳状。
2．对照试验出现如下结果试验方可成立，否则应重试：阳性血清加抗原呈“++++”；阴性血清加抗原呈“—” ；抗原加稀释液呈“—”。
以出现“++”以上凝集者判为阳性凝集。
（四）注意事项
1．试剂在2~8℃冷暗处保存，暂定1年。
2．乳胶抗原在使用前应轻轻摇匀。
(吴斌)
聚合酶链式反应（PCR）检测猪细小病毒
1 材料准备:待检组织、组织匀浆器、蛋白酶K，十二烷基磺酸钠（SDS），苯酚、氯仿，异戊醇（分析纯）、TEN缓冲液。
引物：扩增猪细小病毒VP2基因中445bp基因片段，由上海生物工程公司合成。
序列为, 上游引物P1: 5’-CAGAATCAGCAACCTCAC-3’
下游引物P2: 5’-TGGTCTCCTTCTGTGGTAGG-3’
仪器设备有：凝胶电泳紫外线检测仪，PCR扩增仪，电泳仪
2操作步骤：
2.1 样品的采集：采集病猪的淋巴结、肝脏置-20℃保存。
2.2样品处理所采病料经组织研磨器充分研磨，按1:5用TEN缓冲液悬浮收集于离心管内，-70℃反复冻融3次，7000r/min离心5min。
取上清液472.5μl,加入25μl 10％SDS和2.5μl的20mg/ml 蛋白酶K，50℃水浴摇床上放置2h后加入等量的饱和酚500μl，涡旋20s。
离心取上清液，加等量的酚：氯仿：异戍醇（25:24:1）抽提一次，再用氯仿：异戍醇（24：1）抽提一次，最后用乙醇沉淀，真空抽干后加入20μl双蒸水溶解，-20℃贮存备用。
2.3. PCR的操作程序PCR反应体系为：总体积50μl，含有•100•μmol/L dNTPs，5μmol/L引物， 0.5U Taq酶及1μl模板DNA，常用的反应体系组成如下：
10×缓冲液 5.0 μl
25mM MgCl2 5.0 μl
dNTPs 1.0 μl
引物各1.0μl
Taq聚合酶 0.5μl
DNA模板 1.0μl
灭菌去离子水 35.50μl
扩増条件为:94℃变性3分钟，进入循环，94℃45秒，54℃45秒，72℃30秒，30个循环后，72℃延伸10分钟。
2.4 PCR产物的检测PCR扩增产物在0.8％的琼脂糖凝胶上电泳，溴化乙锭染色，在紫外光下观察结果，并与标准分子量比较，可见一条445bp的DNA 片段。
（华中农大吕建强）。