细胞生物学实验操作指南
生物细胞实验操作步骤详细说明
一、实验目的通过本实验，掌握生物细胞实验的基本操作步骤，了解细胞的基本结构和功能，为后续的生物学实验打下基础。
二、实验原理生物细胞是生命活动的基本单位，具有复杂的结构和功能。
通过观察细胞的结构和功能，可以了解生命现象的本质。
本实验主要观察细胞的基本结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等。
三、实验材料1. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、酒精灯、吸水纸、显微镜镜头、显微镜台、显微镜光源等。
2. 实验试剂：生理盐水、碘液、苏丹Ⅲ染液、醋酸洋红染液、解离固定液等。
3. 实验材料：洋葱鳞片叶、口腔上皮细胞、小鼠睾丸组织等。
四、实验步骤1. 观察洋葱鳞片叶细胞（1）取洋葱鳞片叶，用镊子撕取一小块透明薄膜内表皮。
（2）将撕取的内表皮浸入载玻片上的生理盐水滴中，用镊子展平。
（3）在盖玻片的一侧滴加稀碘液，另一侧用吸水纸吸引，使染液浸润标本的全部。
（4）将盖玻片轻轻盖在标本上，用镊子夹住盖玻片的一侧，用另一侧的镊子夹住载玻片的一侧，轻轻压紧。
（5）用显微镜观察细胞结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等。
2. 观察口腔上皮细胞（1）用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净。
（2）在载玻片的中央滴一滴生理盐水。
（3）用凉开水漱口，用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下，牙签上就附着了一些碎屑。
（4）把牙签放在载玻片的生理盐水滴中均匀地涂抹几下。
（5）在盖玻片的一侧滴加稀碘液，另一侧用吸水纸吸引，使染液浸润到标本的全部。
（6）将盖玻片轻轻盖在标本上，用镊子夹住盖玻片的一侧，用另一侧的镊子夹住载玻片的一侧，轻轻压紧。
（7）用显微镜观察细胞结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等。
3. 观察小鼠睾丸组织细胞（1）取小鼠睾丸组织，放在解离固定液中，一定时间后漂洗。
（2）将漂洗后的组织放在载玻片上，滴加适量醋酸洋红染液。
（3）一定时间后加盖玻片，并轻压盖玻片，使细胞分散开。
（4）用显微镜观察细胞结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等。
五、实验注意事项1. 操作过程中要保持无菌，避免污染。
细胞生物操作规程(3篇)
第1篇一、引言细胞生物学实验是现代生物学研究的重要手段之一。
为了确保实验结果的准确性和可靠性，特制定本操作规程。
本规程适用于所有进行细胞生物学实验的人员。
二、实验前准备1. 实验室环境：实验室应保持整洁、安静、通风良好，实验台面清洁，无菌操作区域明确。
2. 实验材料：根据实验需求准备相应的细胞、试剂、仪器等，确保材料质量合格。
3. 实验设备：检查实验设备是否正常，如显微镜、离心机、培养箱、净化工作台等。
4. 实验操作人员：实验操作人员应具备一定的细胞生物学实验技能，熟悉实验操作规程。
三、细胞培养1. 细胞复苏：将冻存的细胞按照细胞冻存和复苏标准操作规程进行复苏。
2. 细胞传代：根据细胞生长状态，定期进行细胞传代。
传代过程中，注意无菌操作，避免污染。
3. 细胞培养条件：保持细胞培养箱温度、湿度、CO2浓度等参数稳定，确保细胞生长良好。
4. 细胞观察：定期观察细胞生长状态，如细胞形态、密度等，必要时进行拍照记录。
四、细胞染色与观察1. 细胞染色：根据实验需求，选择合适的染色方法对细胞进行染色。
2. 显微镜观察：使用显微镜观察染色后的细胞，注意调整光圈、焦距等参数，确保观察效果。
3. 图像采集：使用图像采集系统对细胞进行拍照，记录实验结果。
五、细胞分离与纯化1. 细胞分离：根据实验需求，采用酶消化、离心等方法分离细胞。
2. 细胞纯化：通过流式细胞术、磁珠分离等方法对分离的细胞进行纯化。
六、细胞转染与表达1. 细胞转染：根据实验需求，选择合适的转染方法对细胞进行转染。
2. 转染效率检测：通过荧光素酶报告基因、荧光显微镜等方法检测转染效率。
3. 基因表达分析：通过RT-qPCR、Western blot等方法检测转染细胞的基因表达水平。
七、实验记录与报告1. 实验记录：详细记录实验过程、操作步骤、结果等，确保实验数据的真实性。
2. 实验报告：整理实验结果，撰写实验报告，包括实验目的、方法、结果、讨论等。
八、实验安全与环保1. 生物安全：严格遵守生物安全操作规程，避免生物危害。
细胞生物学实验指导(12生工)
细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
细胞生物学实验教程
细胞生物学实验教程1. 细胞培养细胞培养是研究细胞生物学的重要工具。
其基本原理是将动植物等生物材料分离、挑选出优良细胞群体，通过合适的细胞培养基、培养条件、方法和设备，使细胞在体外生长和繁殖。
其常用培养细胞的类型有：肺、肝、胃肠、心肌、肌肉、神经、结缔组织、卵巢等。
2. 细胞分离将细胞组织挑选出来进行细胞分离，我们需要用到一般的分离试剂，如细胞酶、生物表面活性剂、离子液体、尼龙布、毛细管、细胞分选仪和细胞联合培养等，同时需要注意一些技术细节。
例如合适的分离环境和分离条件、合适的分离时间、细胞貌形的观察以及细胞去污的操作等。
3. 细胞染色细胞染色是存在于细胞的染色体、蛋白质和核酸等物质，借助不同染色剂使之显色的过程。
其优点是操作简便，速度快，结果直观且研究范围广。
根据它的使用范围和目的不同，一般分为核型分析、基因型分析、生化分析、免疫分析和化学分析等。
4. 免疫组化染色免疫组化染色是指利用抗体与细胞中的特定抗原之间的结合反应，使细胞中的抗原在细胞、组织切片或细胞培养物中可视化并得到定位的技术。
这种技术是现代生物技术与分子生物学的重要组成部分，也是研究细胞分子和生物学的密切联系。
5. 荧光标记技术荧光标记技术是指在一定条件下，荧光分子效应的物理特性。
将该技术运用于细胞生物学中，可以标记生物分子，如细胞内结构组分和生物分子中的蛋白质、核酸、糖等，以实现对其特性、运动和转化的动态和定量分析。
同时，它对于研究牛眼改良和细胞砂浆的研究、比较病理学和細胞生理学中细胞示踪标记的定位等过程中也有着积极的作用。
6. 电镜观察电子显微镜（EM）是一种利用电子束代替光束观察样品表面的高分辨率显微镜。
其操作方法较为复杂，需要像样的准备样本和设备，但提供的高分辨率和高对比度，使得研究者可以观察小于光学分辨率的细胞结构，并能发现小分子、细菌和病毒等细胞成分。
7. 分子生物学实验技术目前，分子生物学技术已经成为细胞生物学研究的重要手段之一。
细胞生物学实验步骤
冻存细胞的复苏1、于液氮罐中取出冻存管。
2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。
3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。
4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。
5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。
组织块法培养骨骼肌细胞1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。
2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。
3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。
5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。
翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。
入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
贴壁细胞的传代和冻存1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。
2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。
3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。
4、加培养液终止消化。
5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。
6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。
7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。
8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。
9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。
细胞计数血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。
细胞生物学实验指导
新鲜菠菜。
三、 试剂：
0.35 mol/L氯化钠，0.01％吖啶橙（acridine orange）。
实验方法：
1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，称30 g于 150 ml 0.35 mol/L氯化钠溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3-5 min。
3. 分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验（步骤同上）。
实验结果：
将观察到现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。
不同低渗溶液下的溶血现象
试管编号 是否溶血 时间 结果分析
1. 10 ml 氯化钠 + 1 ml 稀释羊血
2. 10 ml 氯化铵 + 1 ml 稀释羊血
3. 10 ml 醋酸铵 + 1 ml 稀释羊血
实验结果：
描述并记录实验结果。
实验二 叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
实验目的：
（一）原理
气孔复合体由一对保卫细胞（有的有副卫细胞）组成，组成气孔的保卫细胞对光、温度、湿度、CO2等环境因子以及一些植物激素非常敏感。保卫细胞接收信号后，经过胞内信号转导，保卫细胞渗透势变化引起保卫细胞吸水或失水，使气孔开放或关闭，而K+是调节保卫细胞渗透势的重要物质，因此气孔的运动伴随着K+的迁移，如在光下，K+大量进入保卫细胞，渗透势下降，细胞吸水，气孔张开，反之，气孔关闭。
细胞生物学实验步骤
冻存细胞的复苏1、于液氮罐中取出冻存管。
2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。
3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。
4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。
5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。
组织块法培养骨骼肌细胞1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。
2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。
3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。
5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。
翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。
入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
贴壁细胞的传代和冻存1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。
2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。
3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。
4、加培养液终止消化。
5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。
6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。
7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。
8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。
9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。
细胞计数血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。
细胞生物学实验操作指南
细胞生物学实验操作指南目录1.洗涤与灭菌1.1细胞培育瓶1.2小烧杯、吹管1.3盐水瓶1.4瓶盖、胶塞1.5塑料器皿1.6附注：洗液配方〔次强酸液〕2.配置常用溶液2.1平衡盐溶液2.2pH 调整液2.3抗生素液2.3.1青霉素+链霉素2.3.2两性霉素2.3.3G4182.3.4潮霉素2.4消化液2.5培育基2.5.1配置2.5.2使用3.培育操作根本要求无菌操作一．洗涤与灭菌在组织培育中，离体细胞对任何有害物质都格外敏感。
有害物质包括微生物、细胞剩余物以及非养分成分的化学物质。
因此对承受和重使用的培育器皿，都要严格清洗。
1.细胞培育瓶：(1)浸泡：初次使用和培育用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶解掉。
的玻璃器皿，玻面常带有很多枯槁的灰尘，同时在生产过程中，玻璃外表常呈碱性并带有一些对细胞有毒的物质，如铅和砷等。
瓶使用前应先用自来水简洁冲洗，然后用稀盐酸(5%)浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
培育后的玻璃器皿往往附有大量蛋白质，枯槁后不易刷洗掉，故用后要马上浸入清水中；留意让水能完全进入瓶皿中，不应留有气泡。
(2)刷洗：浸泡后的玻璃器皿一般仍旧要用毛刷沾洗涤剂洗涤，以除去器皿外表的附着较牢的杂质。
刷洗次数太多，能损害器皿外表光泽度，所以应选用软毛刷和优质的洗涤剂〔如高级洗衣粉或洗洁精〕，确定不能使用含沙粒的去污粉！洗刷时特别留意洗刷瓶角部位。
可以将洗涤剂倒入浸泡培育瓶的清水中，直接在水中进展刷洗，然后再以清水冲洗干净。
(3)泡酸：刷洗不掉的极微量杂质经过硫酸和重铬酸钾洗液的强氧化作用后，可被除掉。
洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污力量很强，是清洗过程中关键的一环。
浸泡时，器皿要布满洗液，勿留气泡。
浸泡时间不应少于 6 小时，一般应浸泡过夜。
留意，泡酸时要戴防酸手套，否则将损伤皮肤。
(4)冲洗：泡酸后必需用水充分冲洗，使之不留任何残迹。
冲洗时每瓶都要用水灌满，倒掉。
冲洗程序是先用自来水冲洗20 遍，再用蒸馏水冲洗10 遍，最终用双蒸水冲洗两遍。
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细胞生物学实验操作指南目录1．洗涤与灭菌1.1细胞培养瓶1.2小烧杯、吹管1.3盐水瓶1.4瓶盖、胶塞1.5塑料器皿1.6附注：洗液配方（次强酸液）2．配置常用溶液2.1 平衡盐溶液2.2 pH调整液2.3 抗生素液2.3.1 青霉素+链霉素2.3.2 两性霉素2.3.3 G4182.3.4 潮霉素2.4 消化液2.5 培养基2.5.1 配置2.5.2 使用3．培养操作基本要求无菌操作一．洗涤与灭菌在组织培养中，离体细胞对任何有害物质都十分敏感。
有害物质包括微生物、细胞残余物以及非营养成分的化学物质。
因此对新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗。
1．细胞培养瓶：(1)浸泡：初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶解掉。
新的玻璃器皿，玻面常带有许多干涸的灰尘，同时在生产过程中，玻璃表面常呈碱性并带有一些对细胞有毒的物质，如铅和砷等。
新瓶使用前应先用自来水简单冲洗，然后用稀盐酸(5%)浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
培养后的玻璃器皿往往附有大量蛋白质，干涸后不易刷洗掉，故用后要立即浸入清水中；注意让水能完全进入瓶皿中，不应留有气泡。
(2)刷洗：浸泡后的玻璃器皿一般仍然要用毛刷沾洗涤剂洗涤，以除去器皿表面的附着较牢的杂质。
刷洗次数太多，能损害器皿表面光泽度，所以应选用软毛刷和优质的洗涤剂（如高级洗衣粉或洗洁精），绝对不能使用含沙粒的去污粉！洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。
可以将洗涤剂倒入浸泡培养瓶的清水中，直接在水中进行刷洗，然后再以清水冲洗干净。
(3)泡酸：刷洗不掉的极微量杂质经过硫酸和重铬酸钾洗液的强氧化作用后，可被除掉。
洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污能力很强，是清洗过程中关键的一环。
浸泡时，器皿要充满洗液，勿留气泡。
浸泡时间不应少于6小时，一般应浸泡过夜。
注意，泡酸时要戴防酸手套，否则将损伤皮肤。
(4)冲洗：泡酸后必须用水充分冲洗，使之不留任何残迹。
冲洗时每瓶都要用水灌满，倒掉。
冲洗程序是先用自来水冲洗20遍，再用蒸馏水冲洗10遍，最后用双蒸水冲洗两遍。
(5)干烤：以铝铂封好瓶口，放入烘烤罐中，160℃干烤2小时，完成干热灭菌方能使用。
返回目录2．小烧杯、吹管：(1)浸泡：初次使用和培养用后的小烧杯、吹管一样需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶解掉。
新的玻璃器皿，同培养瓶一样用盐酸浸泡。
(2)泡酸：如果烧杯、吹管上附着有一些不易除去的杂质，可以在洗液中浸泡去处。
（根据情况可省略这一步）(3)刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗烧杯壁，吹管内壁也可用极细的软毛刷刷洗。
(4)冲洗：先用自来水冲洗10遍，再用蒸馏水冲洗4遍，最后用双蒸水冲洗两遍。
(5)干烤：小烧杯盖上合适的平皿，放入烘烤罐中；吹管管口朝同一个方向放入烘烤筒中，弯头朝内，盖上筒盖，160℃干烤2小时，完成干热灭菌方能使用。
3．盐水瓶：盐水瓶主要用于放置培养基、V ersen、D-Hanks等，一般购自医院，原来已经盛放过溶液，为保证使用液的纯净，应充分洗涤、灭菌。
用过的盐水瓶先要装满水，以防内壁上的附着物干涸；使用前倒去内容水，以洗液浸泡过夜，然后冲洗，自来水20遍，蒸馏水10遍，双蒸水2遍，再以铝铂包裹瓶口，外包报纸，160℃干烤2小时，完成干热灭菌备用。
4．瓶盖、胶塞：每次用后的瓶盖、胶塞要置入水中浸泡，以便集中处理和避免附着物干涸，然后用2%NaOH 煮沸10~20分钟，以除掉培养中的蛋白质。
自来水冲洗后，再用1%稀盐酸浸泡30分钟，最后用自来水冲洗10次，蒸馏水冲洗4次，晾干，以纸包好，湿热灭菌备用。
5. 塑料器皿：目前我实验室组织培养使用的塑料器皿主要是从国外购置的，是一种无毒并已经辐照灭菌、密封包装的商品。
用时，只要打开包装即可，是一次使用性物品。
必要时，用后经过无菌处理后，尚可反复使用2~3次，但不宜过多。
再用时仍然需要清洗和灭菌处理。
塑料器皿质地软，不宜用毛刷刷洗，造成清洗困难。
为此使用中一是防止划痕，二是用后要立即浸入水中严防附着物干涸；如残留有附着物，可在洗液中浸泡过夜，用流水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，晾干，最后以紫外线照射2小时以上，置无菌处（如超净台）备用。
冻存管可不必用紫外线灭菌，泡酸、清洗干净后，旋上管盖（注意不要旋紧），以报纸包裹后装入饭盒中湿热灭菌备用。
附注：洗液配方（次强酸液）重铬酸钾120g浓硫酸200mL蒸馏水1000mL配置时先将浓硫酸倒入蒸馏水中，边加边搅拌，再将重铬酸钾晶体溶解入。
返回目录二．配置溶液所有细胞培养用液都必须以三蒸水配置，在本实验室的条件下以双蒸水配置。
D-Hanks KCl KH 2PO 4 NaCl NaHCO 3 Na 2HPO 4·12H 20 酚红 (g/L) 0.4 0.06 8.00.350.08 0.02(g/L) 0.2 0.2 8.0 2.08 1．平衡盐溶液：PBS KCl KH 2PO 4 NaCl Na 2HPO 4·12H 2按上述方法也可配置成10×浓度的储存液，在储存液内加少许氯仿（2-3mL ）防腐；氯仿在高压灭菌时可挥发掉，不影响使用；加氯仿后要用力混匀，在室温或4℃储存。
用时按比例稀释，塞上胶塞，胶塞上插2个注射用针头，外包铝铂，高压灭菌后，拔去针头，置4℃储存备用。
如液体出现浑浊或沉淀时，应重新配置。
2. pH 调整液：HEPES （分子量238.31）液：用200mL 双蒸水溶解47.6克HEPES ，用1N NaOH调节pH 至7.5~8.0；过滤除菌后，分装小瓶，室温或4℃保存，即1M 储液。
3.抗生素液：培养基液内加入适量的抗生素，以预防由于操作不慎而产生的微生物污染。
常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素等，常用1浓度的盐溶液配制成100×的储备液，-20℃保存。
（1）青霉素+链霉素：取注射用青霉素钠盐粉末和注射用硫酸链霉素粉末，按照1万单位每毫升的比例用无菌D-Hanks 溶解成100×的储备液，-20℃保存。
（2）两性霉素：在无菌前提下估量称取15mg 两性霉素B ，溶于50mL 无菌D-Hanks 中，成100×的储备液，-20℃保存。
注意由于两性霉素非水溶性，储备液是浑浊的，稀释使用时可恢复澄清。
（3）G418：G418是新霉素类似物，用于转染带有neo 基因的载体质粒后阳性克隆的筛选。
取1克G418溶于1mL 1M 的HEPES 液中，加蒸馏水至10mL ，过滤消毒，4℃保存。
（4）潮霉素：用于转染带有hyg 基因的载体质粒后阳性克隆的筛选。
购买的潮霉素B 原液为14.82mg/mL ，以无菌双蒸水稀释26倍成15mg/mL ，4℃保存。
4．消化液：（1）V ersen ：即EDTA溶液，对细胞有一定的离解作用，并且毒性小，价格低廉，使用方便。
配置时往1000mL D-Hanks溶液中加入0.2g EDTA，高压灭菌即可，4℃储存备用。
（2）胰蛋白酶溶液（Trypsin）：胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰脏，是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存，本实验室保存于-20℃冰箱。
配置时称取胰蛋白酶粉末0.25克置烧杯中，先用少许双蒸水调成糊状，然后再补足双蒸水至100mL，搅拌混匀，再用NaHCO3调节pH至7.2左右，置室温4小时或冰箱内过夜，并不时搅拌振荡。
次日过滤除菌，4℃储存备用。
其主要作用是使细胞相互离散。
胰蛋白酶对细胞的分离作用与细胞的类型和细胞的特征有密切的关系，不同的细胞系对胰蛋白酶溶液的浓度、温度和作用时间等的要求也不一样。
一般来讲，浓度大、温度高、作用时间越长，对细胞的分离能力也越大，但超过一定的限度也会损伤细胞。
对不同的细胞系要进行梯度尝试。
5.培养基：细胞在体外的生存环境是人工模拟的，除需无菌、温度、空气等条件外，最主要的是培养基。
它是供给细胞营养和保证细胞生长增殖的物质，细胞生长在培养基中，故培养基也是细胞的生存环境。
培养基的种类很多，按其性质状态，分半固体培养基（如软琼脂培养基）和液体培养基。
液体培养基是最主要的，按其来源，则分天然培养基和合成培养基，本实验室所用的都是合成培养基，主要购自GIBCO公司和HyClone公司。
1. 配置（1）DMEM：哺乳动物细胞培养基，每包干粉可以配置1升液体，分高糖和低糖两种。
拆封后将全部粉末都溶入950mL双蒸水中，搅拌混匀后，加入3.7g NaHCO3，混匀，调整pH值到7（用1N NaOH或1N HCl，边搅拌边加入，直至合适的pH值），加蒸馏水补充体积到1升，过滤除菌，取出小量（约1mL）置25mL培养瓶中，将培养瓶在37℃恒温箱中放置一星期，其余4℃保存。
确定37℃中的培养基未长菌后，保存的培养基才可以使用。
（2）RPMI1640：哺乳动物细胞培养基，每包干粉可以配置1升液体。
拆封后将全部粉末都溶入950mL 双蒸水中，搅拌混匀后，加入2g NaHCO3，混匀，调整pH值到7.0（用1N NaOH或1N HCl，边搅拌边加入，直至合适的pH值），加蒸馏水补充体积到1升，过滤除菌，取出小量（约1mL）置25mL培养瓶中，将培养瓶在37℃恒温箱中放置一星期，其余4℃保存。
确定37℃中的培养基未长菌后，保存的培养基才可以使用。
（3）Grace's：昆虫细胞培养基，每瓶干粉可以配置1升液体。
拆封后将全部粉末都溶入950mL双蒸水中，再加入3.3g乳氢蛋白水解物和3.3g酵母粉，搅拌混匀，调整pH值到6.0(用1N NaOH或1N HCl，边搅拌边加入，直至合适的pH值），加蒸馏水补充体积到1升，过滤除菌，取出小量（约1mL）置25mL培养瓶中，将培养瓶在37℃恒温箱中放置一星期，其余4℃保存。
确定37℃中的培养基未长菌后，保存的培养基才可以使用。
2. 使用(1) 配置完全培养基合成培养基（无血清培养基，serum free medium，SFM）使用前应加入血清，以供给足够的养分。
细胞培养用血清常用的有胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）和小牛血清(calf serum/bovine serum,CS/BS)，如果针对培养细胞的物种来源选择同种动物的血清对细胞更有利，但因为价格、个体差异、易污染等原因而不可能。
使用进口的胎牛血清可以保证无支原体的污染，且小牛血清中可能含有哺乳后生物活性物质的污染，质量不如胎牛血清，因此本实验室目前基本上使用胎牛血清。
加入血清的浓度依实验要求而定，从5%-20%不等，常用的为10%的，为控制细胞的生长速度，可以降低血清的浓度到5%，细胞生长状况不佳时可以将血清浓度提高到15%，20%血清浓度的培养基一般只在转染时使用。
另为了防止微生物的污染,一般还需加入抗生素 (如能保证培养环境、操作过程的无菌，可以不加抗生素，不过在当前实验条件下还是提倡加入抗生素),加入抗生素的比例一般是1:100，即100mL培养基加入1mL抗生素(已配制成100×)。