大肠杆菌基因型说明

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大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一DXY

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一DXY

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一点击次数:982 作者:佚名发表于:2009-09-27 00:00转载请注明来自丁香园来源:丁香园实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因,每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp (基因Ⅷ)。

E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。

利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型(Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotype)。

具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。

分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则,采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态,除非在基因型上另外注明。

大肠杆菌基因型的表示方法(Demerec, et, al. 1966):一、一般规则:1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。

例如:D NA Adenine Methylase→dam。

2、不同的基因座,其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同,其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。

例如:Recombination→recA、recB、recC。

3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。

如supE44(sup基因座E的44位突变)。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“ -”代替大写字母,如trp-31。

4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。

这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。

其基因符号应与基因座的表示符号明显区别,符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内;质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。

常用大肠杆菌 (K-12株来源) 的基因型

常用大肠杆菌 (K-12株来源) 的基因型
DH5
supE44,hsdR17,recA1,endA1,gyrA96,thi-1,relA1
DH5α
supE44, ΔlacU169 (φ80lacZΔM15), hsdR17,recA1,endA1,gyrA96,thi-1,relA1
DP50supF
supE44,supF58,hsdS3 (rB-mB-) ,dapD8,lacY1,glnV44, Δ (gal-uvrB) 47,tyrT58,gyrA29,tonA53, Δ (thyA57)
常用大肠杆菌(K-12株来源)的基因型
Strain
Genotype
BB4
supF58,supE44,hsdR514,galK2,galT22 ,trpR55,metB1,tonA, ΔlacU169/F' [proAB+,lac Iq,lacZΔM15 Tn10(tetr) ]
BL21(DE3)
F-,ompT,hsdSB(rB-mB-) , gal (λc I857,ind1,Sam7,nin5,lacUV5-T7gene1) ,dcm(DE3)(B株来源)
K803
F-,lacY1 or Δ (lac Iq-Y) 6 (lac-3) ,supE44,galK2,galT22,mcrA, rfbD,metB1,mcrB1,hsdR3
LE392
supE44,supF58,hsdR514,galK2,galT22,metB1,trpR55,lacY1
MC1061
hsdR, mcrB,araD139, Δ (araABCห้องสมุดไป่ตู้leu) 7679, ΔlacX74,galU, galK, rpsL, thi
MV1184

bl21de3基因型 -回复

bl21de3基因型 -回复

bl21de3基因型-回复BL21(DE3)基因型是一种被广泛应用于分子生物学研究中的大肠杆菌基因型。

BL21(DE3)是指一株大肠杆菌菌株,DE3则表示其内含有一个重组T7 RNA聚合酶基因。

在本文中,我将逐步解释BL21(DE3)基因型的含义、应用以及工作原理。

首先,我们来介绍一下BL21(DE3)基因型的含义。

BL21(DE3)基因型是指大肠杆菌一株具有特定基因组合的菌株。

其中BL21表示该菌株的基本型号,DE3则表示该菌株具有一个重组T7 RNA聚合酶基因。

T7 RNA聚合酶是一种能够特异性地识别T7启动子的聚合酶,因此在融合了该基因的大肠杆菌中,T7启动子能够高效地驱动外源基因的转录和表达。

BL21(DE3)基因型在分子生物学研究中得到了广泛应用。

这主要归功于其高效的外源基因表达能力。

BL21(DE3)菌株中的T7 RNA聚合酶能够识别T7启动子,在转录过程中高效地驱动外源基因的转录和表达。

这种高效的表达系统可以大大提高外源蛋白的产量,便于后续的纯化和功能研究。

在利用BL21(DE3)基因型进行外源基因表达时,通常需要构建一个含有目标基因的质粒,并利用化学方法或电穿孔法将质粒导入到大肠杆菌中。

接着,将转化后的菌株进行筛选,选择包含目标质粒的细菌克隆。

最后,通过T7 RNA聚合酶的识别和驱动,使转录和表达目标基因。

BL21(DE3)基因型还可以与其他辅助的工具和系统一起使用,以进一步提高外源基因的表达效率。

例如,可以利用大肠杆菌中的分泌系统来帮助将产生的蛋白在菌体内向外分泌,从而便于纯化和功能研究。

此外,还可以通过调控T7 RNA聚合酶基因的表达,实现目标基因的适时和高效表达。

总结起来,BL21(DE3)基因型是一种被广泛应用于分子生物学研究中的大肠杆菌基因型。

其具有高效的外源基因表达能力,能够提高外源蛋白的产量,并便于后续的纯化和功能研究。

通过将目标质粒转化到BL21(DE3)菌株中,并利用T7 RNA聚合酶的驱动,可以实现目标基因的高效转录和表达。

大肠杆菌基因工程菌常用类型

大肠杆菌基因工程菌常用类型

1、大肠杆菌DH5a菌株DH5a是世界上最常用的基因工程菌株之一。

由于DH5α是DNA酶缺陷型菌株,有利于基因克隆,保存质粒,但该菌株的蛋白酶没有缺陷,表达的蛋白容易被降解,因此通常不作为表达菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12、大肠杆菌BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3、大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4、大肠杆菌JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株。

基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5、大肠杆菌TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

细菌菌株基因型及基因符号说明

细菌菌株基因型及基因符号说明

大肠杆菌基因型及遗传符号说明前言:实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因,每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp(基因Ⅷ)。

E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。

利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型(Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotype)。

具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。

分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则,采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态,除非在基因型上另外注明。

大肠杆菌基因型的表示方法(Demerec, et, al. 1966):一、一般规则:1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。

例如:DNA Adenine Methylase→dam。

2、不同的基因座,其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同,其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。

例如:Recombination→recA、recB、recC。

3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。

如supE44(sup基因座E的44位突变)。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“-”代替大写字母,如trp-31。

4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。

这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。

其基因符号应与基因座的表示符号明显区别,符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内;质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。

大肠杆菌BL21和DH5α的区别

大肠杆菌BL21和DH5α的区别

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET 系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)
BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr 最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用。

当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。

也有人用BL21保存质粒的,但时间久了,质粒容易丢失。

你要是做原核表达的话,应该会现用前者克隆得到重组质粒,转化入后者进行表达
(学习的目的是增长知识,提高能力,相信一分耕耘一分收获,努力
就一定可以获得应有的回报)。

大肠杆菌dh5a菌株特征

大肠杆菌dh5a菌株特征

大肠杆菌dh5a菌株特征
大肠杆菌DH5α(Escherichia coli DH5α)是一种广泛应用的
实验室菌株,具有许多特殊的特征和优势。

这种菌株最初是由Messing 在1975年从K12菌株中构建而成,并被广泛应用于分子生物学、生物
工程和基因工程领域中。

下面将介绍DH5α菌株的主要特征。

1. 基因型
DH5α菌株基因型为F-Φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169, recA1, endA1, hsdR17(r_K-, m_K+), supE44, thi-1, gyrA96, relA1。

其中,F-表示此菌株没有细菌质粒F,邻苯二酚酶基因lacZ为突变型,可以
实现蓝白斑点筛选,endA1表示此菌株缺失限制酶endonuclease I的
基因,可以有效防止质粒DNA的降解等等。

2. 生长特性
DH5α菌株可以在常规的LB(Luria-Bertani)平板和液体培养基上正
常生长,并且生长速度较快。

此外,DH5α菌株的细胞形态规则、菌落外观整齐,易于操作,比其他大肠杆菌菌株更加稳定。

3. 转化效率
DH5α菌株的常规转化效率较高,通常可达到10的6到10的8次方CFU/μgDNA,因此非常适合质粒转化、基因克隆以及DNA测序等实验
操作。

4. 可重复性
DH5α菌株经过多次冻存和复苏,仍然能够保持其稳定性和表型特征,并且不会出现不同批次之间表型差异较大的情况。

综上所述,大肠杆菌DH5α菌株具有较好的稳定性和易于操作的
特点,被广泛应用于各种实验室研究中。

然而,在使用DH5α菌株时,也需要严格遵守实验室安全操作规程,确保实验室安全和健康。

常用大肠杆菌感受态JM109-DH5a-BL21等的区别(1)

常用大肠杆菌感受态JM109-DH5a-BL21等的区别(1)

【引用】常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别生命科学2011-03-31 14:48:42 阅读80 评论0 字号:大中小订阅本文引用自xxrrzq《常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别》1:DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。

E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。

可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。

T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。

该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)3:BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。

PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。

该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS ,Camr4:JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

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大肠杆菌基因型及遗传符号说明前言:实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因,每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp(基因Ⅷ)。

E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。

利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型(Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotype)。

具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。

分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则,采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态,除非在基因型上另外注明。

大肠杆菌基因型的表示方法(Demerec, et, al. 1966):一、一般规则:1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。

例如:DNA Adenine Methylase→dam。

2、不同的基因座,其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同,其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。

例如:Recombination→recA、recB、recC。

3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。

如supE44(sup基因座E的44位突变)。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变,则用连字符“-”代替大写字母,如trp-31。

4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。

这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。

其基因符号应与基因座的表示符号明显区别,符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内;质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。

5、对于携带附加体的菌株的完整基因型描述应包括附加体的状态(游离或整合)。

以F因子为例,F-:F因子缺失;F+:自主性F因子,不携带任何遗传可识别染色体片段;F’:携带有遗传可识别细菌染色体片段的自主性F因子;Hfr:整合到染色体上的F因子(high frequency of recombination)。

当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时,用()”或“/”等以区别。

例如:/F' [traD36、proAB、lac I q、lacZ M15]6、某个基因或某个领域缺失时,在其基因型前面加上“ ”表示。

例如:lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为( lac-proAB)。

7、由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化,有时也用其表现型代替基因型进行表示。

例如:某些抗药性的获得或丧失,用如下方式表示:Streptomycin抗性→Str+或Str r,Ampicillin敏感性→Amp-。

(第一个字母要大写,“+”或“r”表示有抗性,“-”表示无抗性或敏感)。

8、根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。

例如:TH2菌株上有一种基因型表示如下:hsdS20 (rB-、mB-),其中S20代表特异性识别蛋白发生变异,()中的rB-、mB-表示由于S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。

9、蛋白质的名称与对应的基因或等位基因相同,但不用斜体,且首字母大写,如,UvrA、UvrB。

二、基因符号和意义(见表1)部分基因符号和意义基因符号意义注释Δ缺失缺失突变用“Δ”表示,其后的()中是缺失基因的名称、等位基因号码。

如Δ(lac-proAB)表示lac-proAB基因的缺失。

:断裂表示:前的基因是断裂的。

::插入“::”前的基因由于“::”后的基因插入断裂。

IN 倒位倒位在大肠杆菌中很少见,用IN(区域)表示。

TP 转座如TP(lacI-purE)33表示lac I和pur E间的基因区域(包括这两个基因)被插入到染色体的某个位点。

+ 显型或抗性如果是表示抗性,+也可用r代替- 隐型或敏如果表示对某种抗生素的敏感性,用“-”上标表示。

感、无抗性/ 质粒或附加体的缺失()or [] ()或[]中的基因是缺失或变异所在Φ融合如Φ(ara-lac)表示ara和lac融合成新基因三、主要的基因型说明1、基因重组相关的基因型recA (Recombination)功能:recA基因表达ATP依赖型DNA重组酶,它在λ-噬菌体与基因组DNA的溶原重组时起作用,同时具有对DNA放射性损伤的修复功能。

由recA基因的变异所产生的基因型使同源或异源DNA的重组不能进行,保持插入DNA的稳定性,对DNA的转化有利。

一个菌株的基因型如果是recA,则说明此菌株的表现型是重组缺陷的。

recB (Recombination)功能:recB基因表达ATP依赖型DNase和核酸外切酶V的一个亚基,对recA的DNA重组酶起辅助和促进作用。

DNase催化双链DNA的解旋和解链,核酸外切酶V催化单链DNA 的裂解,在DNA的重组和损伤修复中发挥重要作用。

recB基因的变异导致其DNA重组和修复功能丧失,保证了外源DNA的稳定,有利于DNA转化。

recC (Recombination)功能:recC基因表达四种酶,即核酸外切酶V,ATP依赖型的核酸内切酶,解旋酶及ATP 酶,它们和recA, recB所表达的酶相互协调作用,在DNA的重组及放射性损伤的修复中发挥作用。

recC基因的变异导致DNA重组功能缺失,保证外源DNA的稳定性。

2、甲基化相关的基因型dam (DNA adenine methylase)功能:dam基因表达DNA腺嘌呤甲基化酶,它能催化特异序列GATC中A的甲基化,保证DNA免受限制性核酸内切酶Mbo I的切断,同时在DNA复制时也起一定的辅助作用。

dam基因的变异导致腺嘌呤(A)甲基化酶活性的缺失,使腺嘌呤 (A) 不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。

dcm (DNA cytosine methylase)功能:dcm基因表达DNA胞嘧啶甲基化酶,它能特异性识别DNA双链上的CCWGG序列,并使第二个C甲基化,即CmCWGG,避免DNA受到相关限制酶的切断。

dcm基因的变异导致胞嘧啶甲基化酶活性缺失,使外源DNA上的C不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。

mcrA (Modified cytosine restriction protein a)功能:mcrA基因表达大肠杆菌防御体系中起重要作用的mcrA酶,这种酶能特异性地作用于外来DNA上的被甲基化的胞嘧啶序列,即C5mCGG特异序列,使之分解,对大肠杆菌本身起保护作用。

mcr A基因的变异,导致上述功能缺失,对外来DNA中被甲基化的胞嘧啶特异序列(C5mCGG)失去作用,有利于限制酶及甲基化酶的克隆体的稳定。

mcrB, C (Methyl cytosine-specific restriction)功能:mcrB, C基因表达两种特异性蛋白,即mcrB蛋白和mcrC蛋白,它们在大肠杆菌的防御系统中起重要作用。

一般情况下,只有这两种蛋白同时存在时才表现出活性,mcrC具有识别和调节功能,它能特异性的结合到外源DNA上被甲基化的胞嘧啶(C)的特异序列G5mC上,然后由mcrB蛋白切断(mcrB蛋白是特异性切断外来DNA中G5mC序列的限制性核酸内切酶),防御外来DNA的侵入。

mcrB, C基因的变异,使上述的对外来DNA 的防御作用缺失,对质粒的转化有利。

mrr (Methylation requiring restriction)功能:mrr基因是大肠杆菌细胞防御系统中重要的基因之一,它能严格限制被甲基化的外源DNA的介入。

另外,它对限制酶Acc I,Cvi R I,Hin f I (Hha II),Nla II,Pst I以及N6-腺嘌呤甲基化酶和C5-胞嘧啶甲基化酶活性有明显的抑制作用。

mrr欠损株(基因型)可用于含有N6-mA和C5-mC的DNA的转化。

另外,含有此基因型的菌株也可用于限制酶和甲基化酶的克隆体。

hsdM(Host specificitive defective)Map position: 99 min功能:hsdM基因所表达的DNA甲基化酶是I型限制酶复合体(具有对DNA切断和修补的双重功能)的一部分,它能使DNA双链上的AA (双腺嘌呤) 甲基化,保护宿主DNA不被分解。

hsdM的变异使细胞内的DNA不被甲基化,易于获得非甲基化质粒。

3、点突变相关的基因型mutS (Mutator)功能:mutS基因表达的蛋白具有识别DNA上错配序列的功能,并能修复其错配序列(GC →AT),防止基因突变。

mutS基因的变异导致DNA的错配序列不能得到修复,容易发生基因突变,这对于利用点突变进行基因改造是有利的。

mutT(Mutator)功能:野生大肠杆菌在进行DNA复制时,细胞中的8-OXO-dGTP插入模板DNA中的DA 位点的效率几乎与插入DC位点的效率相同,导致A-T转换成G-C,使DNA产生变异。

而mutT蛋白就是特异性地降解8-OXO-dGTP成为单磷酸盐(8-OXO-dGMP),这种单磷酸盐状态的G (鸟嘌呤) 不能作为底物进行DNA合成,从而防止了上述的基因突变。

mutT基因的变异使细胞中8-OXO-dGTP浓度增高,A→C的突变几率增大,有利于利用点突变进行基因改造。

dut (dUTPase)功能:dut基因表达脱氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase),它能水解dUTP成为dUMP,使细胞体内dUTP的浓度维持在较低的水平,尿嘧啶(U)就不易掺入到DNA中,避免了基因发生A→U的突变。

dut基因发生突变使dUTPase活性缺失,导致dUTP浓度升高,碱基U(尿嘧啶)极易掺入到DNA中,使其发生A→U的基因突变,有利于利用点突变进行基因改造。

ung (Uracil DNA glycosylase)功能:ung基因表达尿嘧啶-N-糖苷酶,这种酶能特异性识别DNA单链或双链上发生突变的尿嘧啶残基,并从DNA上水解去除尿嘧啶残基,防止DNA发生突变。

ung基因的变异导致上述功能缺失,有利用点突变。

uvrB (Ultraviolet)功能:uvrB基因表达核酸外切酶中的b亚基,这种核酸外切酶具有DNA的切补功能,对紫外线损伤的DNA有修补作用。

uvrB基因的变异使细胞中核酸外切酶切除变异碱基的活性缺失,有利于点突变。

4、核酸内切酶相关的基因型hsdR (Host specificity defective)功能:hsdR基因表达I型限制酶Eco K (K12株) 或Eco B (B株),在大肠杆菌细胞中起到一种“抗体”的作用,对外来的各种 DNA有严格的限制。

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