无菌检查室微生物限度检查室的管理规定
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1.
明确无菌检查室、微生物限度检查室的要求和规定，确保检验结果的准确性。
2.范围：
适用于本厂质监科无菌检查室、微生物限度检查室的操作。
3.责任：
质监科化验室有关人员。
4.内容：
4.1本厂无菌检查室为1万级、局部（净化操作台）100级的洁净室；微生物限度检查室为1
万级的洁净室。
4.2室内严禁放置杂物，无关人员严禁入内。
4.3室内应保持整洁，定期用甲醛熏蒸消毒（每月一次）；使用前用0.1%新洁尔灭溶液擦拭消
毒净化工作台。
4.4在操作前，对菌检室、缓冲间及净化工作台进行紫外线消毒30分钟，并打
开净化工作台的层流净化装置。
操作完毕及时清理，擦净台面,再开紫外灯
照射30分钟。
4.5化验员进入无菌室，必须按规定程序进行更衣、戴帽、换鞋等；操作前用0.1%新洁尔灭或
75%酒精进行手消毒。
4.6吸取菌液时，切勿直接用口接触吸管。
吸完菌液的吸管放入5%石炭酸消毒液中。
4.7接种针在每次使用前后，必须通过火焰烧红灭菌，冷却后方可接种培养物。
4.8所有带菌的实验用品，须经有效的消毒灭菌方法处理后，再洗刷，严禁污染下水道。
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4.9如有菌液污染桌面或地面，应立即用消毒水彻底消毒后，再作处理。
4.10无菌室每月检查杂菌数（在室内打开营养琼脂培养皿30分钟，经37℃培养48小时），10000
级平均菌数不得过3个/皿，100级平均菌落数不得过
1个/皿，如超过应进行清洁消毒。
4.11无菌检查室和微生物限度检查室的清洁卫生均按“1万级洁净区的清洁卫生操作规程”进
行。
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无菌实验室及要求与日常管理
无菌实验室的要求与日常管理一、实验室设施开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规X》及《药品生产质量管理规X》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。
无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止传播。
（一）洁净实验室1.洁净室的布局1.1根据样品检验要求，一般应至少包括更衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检查室、阳性菌室和物流通道。
1.2更衣系统应至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、缓冲以及人流走廊等。
1.3物流通道应考虑净污分流的布局，有条件的可设置污物走廊2.1净化级别：洁净走廊、检查室、阳性菌室应为一万级；其他房间应为十万级2.2气流组织：阳性菌室对走廊呈负压，走廊对缓冲有5Pa的正压；阳性菌室全排风2.3电气控制：控制开关外置；设置通讯系统3.结构与要求：无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过2.4m，由两个缓冲间、操作间组成。
操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。
无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。
缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）''用于空气消毒。
紫外线波长200－300nm者具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱X 围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。
紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。
微生物限度及无菌检查
计数方法适用性检查
1.供试液的制备
u 水溶性供试品 u 非水溶性供试品：可适量加入如聚山梨酯80等表面活性剂，加入量及加 入的试剂均需进行验证，以证明其无明显抑菌性。 u 油性供试品：十四烷酸异丙酯或其它无抑菌性的表面活性剂。 u 肠溶供试品：一般肠溶制剂用pH8.6磷酸盐缓冲液，结肠制剂用pH7.6磷 酸盐缓冲液。
阳性对照组：相当于1g或1ml的供试液+不大于 100cfu的目标菌
阴性对照组：与供试液同体积的稀释液
耐胆盐格兰阴性菌检查
1.供试液制备和预培养：取供试品10g，加胰酪大豆胨液体培养基至100ml，放置20~25℃培养 约2小时内。 2.定性试验：取1:10的供试液10ml，加至肠道菌增菌培养基中（加入量应经过验证），此方法 适用于标准为不得检出的供试品。 3.定量试验：三管法，同上述MPN法，每级稀释级均取1ml加入一管培养基中。 4.选择与分离：取上述培养物划线于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上。 5.结果判断：若紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长，定性试验判断是否检出；定量试验 则对应培养管，查表确定供试品中含有耐胆盐格兰阴性菌的可能菌数。
概要
实验室 管理要
求
菌种管 理
培养基 适用性 检查
微生物 限度检
查
无菌检 查
总体要求： 各功能区域应明确标识，特别是菌种储藏室、污染物处理
区、阳性菌室等存在生物安全危害的区域。
洁净室要求： 洁净室作为药品微生物实验室的核心区域，应远离交通干道、厕所及污染区，
应选上、下水道及其他安装适宜的位置。 洁净室与各配套功能区，包括清洗、培养基配制、消毒/灭菌、灭菌物品存放和
洁净度级 过滤完整性 别
气流组织
A级
B级
无菌实验室卫生管理规定
微生物实验室管理操作规程1.目的:规范微生物室管理规范,以保证微生物实验的顺利进行。
2.范围:微粒检测室、无菌室、微生物限度室、阳性间及灭活间3.依据:管理制度、《中国药典》四部4.操作方法4.1 人员控制4.1.1人员:实验人员应系统掌握实验方法和实验所依据的标准,了解实验过程。
不得将与实验无关人员带入实验室。
4.1.2人员进出流程:洗手并消毒→穿工作服、工作鞋→缓冲间→实验室→结束实验→缓冲间→脱下工作服、工作鞋→洗手并消毒4.2 物品控制4.2.1实验用器材:统一从传递窗口进、出(注:两侧窗口不可同时打开),物品进传递窗时可开启传递窗紫外灯30min。
4.2.2操作台面:操作区域内不允许存放不必要的物品,保持工作区的洁净气流流型不受干扰。
4.2.3实验用工作服、工作鞋:工作服、工作鞋消毒并清洗后封存于袋内放置二更。
4.3 一般清洁4.3.1清洁部位:实验设备、操作台面4.3.2清洁方法:先用消毒液由上往下,由内而外的擦拭两遍,再开启净化系统及紫外灯30min。
4.3.3清洁周期:每次实验后4.4 彻底清洁4.4.1清洁部位:顶棚、墙面、生物安全柜、灭菌高压锅、试验设备、操作台面、日光灯、地面、插座电线、凳子、紫外灯4.4.2清洁方法:先用纯化水由上往下、由内而外的擦拭两遍后,再用消毒液按上述顺序擦拭一遍;之后再开启净化系统及紫外灯30min。
4.4.3清洁周期:每月一次5.清洁用消毒剂5.175%酒精5.1.1配置方法:量取95%浓度的酒精,用纯化水稀释至75%浓度,混匀。
5.1.2使用期限:7天5.284消毒液5.2.1配置方法:将0.7%的84消毒液按瓶身标签的稀释方法配置所需量,混匀。
5.2.2使用期限:一个月6.消毒剂更换周期:6个月7.卫生安排:参加实验的人员在实验过程中,要注意保持室内卫生。
实验结束后,必须及时做好清洁整理工作,实验人员必须将工作台、仪器设备、器皿等清洁干净,并将仪器设备和器皿按规定归类放好。
医疗器械产品无菌和微生物限度检查法
（8）检验方法 （9）污染废弃物的处理 （10）检测结果的质量保证和检测的质量控制 （11）实验记录 （12）结果的判断和检测报告 （13）文件
一、微生物实验室质量管理指导原则
1.人员
（1）检验人员要求
✓ 具备微生物学或相近专业知识的教育背景 ✓ 必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价 ✓ 岗前培训 ✓ 持续培训 制定继续教育计划，保证知识与技能不断的更新
应根据检验目的选择适宜的方法进行样品检验
✓ 检验方法的验证
1 药典方法或标准中规定的方法是经过验证的，当进行样品检验时 ， 应进行方法适用性确认
2 如果不是药典或标准中规定的方法，使用前应进行替代方法的验 证，确认其应用效果优于或等同于药典方法
3 替代方法的验证按药品微生物检验替代方法验证指导原则（通则 9201）进行
防措施
一、微生物实验室质量管理指导原则
12.结果的判断和检测报告
✓ 样品检验应有重试的程序 ✓ 微生物实验室检测报告应该符合检测方法的要求 ✓ 实验室应准确、清晰、明确和客观地报告每一项或每一
份检测的结果
一、微生物实验室质量管理指导原则
13. 文件
✓ 文件应当充分表明试验是在实验室里按可控的检查法进行的 ✓ 一般包括
一、微生物实验室质量管理指导原则
6. 设备
✓ 一般要求
（1）微生物实验室设备配备
➢ 与检验能力和工作量相适应
➢ 类型、测量范围和准确度等级
应满足检验所采用标准的要求
（2）设备的安装和布局
➢ 便于操作 ➢ 易于维护 ➢ 易于清洁和校准 ➢ 保持清洁 ➢ 保持良好工作状态
（3）唯一标识
➢ 用于试验的每台仪器、设备应该有 唯一标识
微生物限度检查室管理规程
微生物限度检查室管理规程一、目的规范微生物限度检查室洁净区、一般区的管理。
二、适用范围适用于微生物限度检查室的管理。
三、内容1微生物限度检查室准备间1.1准备间应保持清洁，严禁吸烟和饮食。
1.1.1工作人员进入微生物限度检查室准备间，必须穿戴一般工作服，离开时脱去，放于指定地点，一般工作服按《一般生产区工作服清洁操作规程》定期清洁。
1.1.2工作人员操作前后或离开准备间，必须用肥皂或0.1%新洁尔灭洗手。
1.1.3严防一切器材和培养基被污染，已污染的应立即停止使用并作相应的处理，保证实验的准确性。
1.1.4工作衣、帽、口罩等受到菌液污染时，应立即脱去，湿热灭菌后洗涤。
如有菌液污染手部，应先用75%的乙醇棉球擦拭后，浸入0.1%新洁尔灭消毒液内片刻，再用肥皂及清水彻底洗刷干净。
1.1.5接种环（针）每次使用前后，必须通过酒精灯外焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
1.1.6废弃培养物和带菌的实验用品应先进行湿热灭菌，再清洗干燥。
1.1.7阳性菌专用的无菌工作服使用后应先进行湿热灭菌后，按《微生物限度检查室清洁操作规程》进行洗涤，再经湿热灭菌后备用。
1.2微生物限度检查室洁净区1.2.1洁净区内应有消毒设施、消毒毛巾及挂衣钩等。
检测室有放置试验用品的工作台和实验操作有关的仪器，室内应设置适当的日光灯。
1.2.2检测室内备好消毒液、酒精灯、镊子、消毒棉球、打火机及天平等。
1.2.3微生物限度检查室洁净区应定期检查空气洁净度。
1.2.4出入微生物限度检查室洁净区的管理规定1.2.5一切物品按要求经消毒或灭菌程序处理后，方可传入微生物限度检查室洁净区。
1.3 物品进出规定进：清除外包装,放进传递窗后关闭传递窗（阳性菌传递窗在物品放入前开启风机）。
开启紫外灯照射消毒30分钟后，从传递窗另一侧取进。
出：检验后物品放入传递窗，关闭传递窗，再从传递窗另一侧取出。
1.4 人员进出规定进：准备区用肥皂洗净手，脱一般区工作鞋，进到缓冲间从鞋柜取出并穿上已消毒的工作鞋，脱一般区工作服，进入一更换上洁净拖鞋，洗手液洗手烘干。
微生物实验室管理条例
常用菌株的保存
大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44102〕 大肠埃希菌 〔 〕 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 金黄色葡萄球菌 〔 26003〕 〕 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕 白色念珠菌 〔 〕 黑曲霉（ 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC(F)98003〕 ） 〕 乙型副伤寒沙门菌(Salmonella apecies)〔CMCC(B) 乙型副伤寒沙门菌 〔 50094〕 〕 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B) 铜绿假单胞菌 〔 10104〕 〕 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 生孢梭菌 〔 64941〕。 〕 常用上述菌株进行培养基灵敏度检查和检查方法的验证。 常用上述菌株进行培养基灵敏度检查和检查方法的验证。 菌株可用普通肉水加15%甘油冻存于 甘油冻存于-20℃或-70℃冰箱。试验用 菌株可用普通肉水加 甘油冻存于 ℃ ℃冰箱。 对照菌株可保存于营养琼脂斜面，存于4℃ 对照菌株可保存于营养琼脂斜面，存于 ℃～8℃。试验前对菌种进 ℃ 行传代培养，对照菌株必须使用18～ 小时的新鲜培养物 小时的新鲜培养物。 行传代培养，对照菌株必须使用 ～24小时的新鲜培养物。一旦发 现对照菌株污染或存在问题，则应立即更换。 现对照菌株污染或存在问题，则应立即更换。
4. 检验者接受检品后，首先对检验卡与样品中的品名、 批号、生产厂家、检验依据、检验项目、包装、数 量、编号等进行核对，确认无误后，按照质量标准 及其方法和有关SOP进行检验，并按要求记录。 5. 检验结果的复检，应由检验人员申述理由，查找原 因，经科室主任同意后方可进行。检验结果不合格 的项目或结果处于边缘的项目，除另有规定以一次 检验结果为准不得复检外，一般应予复检。必要时 室主任可指定他人进行复检。
洁净实验室的要求与日常管理
厌倦了城市中的繁华,想在这绿树丛中寻找一份清静。无论过程怎么样艰辛
5.2 当温度、相对湿度和照度等指标出现 符合时，洁净室可不必停用，但应及时修复空 系统（或更换照明装置），使其符合规定。
二、实验室管理：
为保证实验有序进行，实验室必须制定一系 列实验室管理制度。
（一）实验室要求：
1 实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室 内严禁吸烟和饮食。
菌机理可能是在细菌细胞 DNA 中引起胸腺嘧啶双 聚体形成，从而干扰细菌细胞 DNA 复制，导致细 菌变异死亡。紫外线杀菌灯 1m 以内距离杀菌效 果最佳，每次开灯照射时间为 30min。应定期检 查紫外线灯辐射强度，不得低于 70μW·cm-21m 距离。其缺点是穿透力 弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体
开展无菌检查及微生物限度检查，首先要 照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药 生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合 使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善 实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度 查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应 格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭
洁净实验室 1.洁净室的布局
4.温度、湿度
厌倦了城市中的繁华,想在这绿树丛中寻找一份清静。无论过程怎么样艰辛
无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀
菌灯的杀菌效果，故温度最好控制在
25±2℃，相对湿度 40－60％。操作
净化台的洁净空气应保持对环境形成正压，不
5.操作间
于 49Pa。
无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及 调温装置。洁净度要求：净化台洁净度为 100 级，
2 实验人员必须穿戴衣帽，服经常洗涤、消 毒、保持清洁。
微生物限度检查室管理规程
分发部门及份数：质量管理部1份目的：规范微生物实验室管理,确保微生物检验结果的准确性。
范围：适用于微生物实验室。
职责：微生物检测人员及检验室负责人对此规程执行负责.内容：1.微生物实验室包括微生物限度检查室、阳性菌接种室及抗生素微生物检定室。
1.1 微生物实验室结构应坚固、严密、防尘、光线明亮,地面应光滑，并应有缓冲间,设双层传递窗传递物件。
1.2 室内温度18～26℃，相对湿度为45～65％，室内必须保持整洁.2.微生物实验室洁净度要求：2.1微生物实验室洁净度应符合相应的医药洁净室设计规范和验收要求。
2.1.1 操作室洁净度应符合洁净度C级要求。
2。
1。
2 操作台洁净度应符合洁净度A级要求。
3.微生物实验室的使用：3。
1 微生物实验室由微生物检验员管理及使用,其他人员须经主管人员批准后方可进入和使用。
3.2 微生物实验室的人员需经过相关的岗位培训,必要时定期进行再培训。
3。
3 微生物实验室操作人员应严格遵守洁净工作区域净化控制规定。
3.3.1 保持个人卫生，不得佩带饰物，不得涂抹化妆品。
3.3。
2 室内应穿戴专用衣帽、口罩及鞋子。
3.3.3 手部应进行2次消毒,宜带无菌手套.3.3。
4 在操作中，操作台面应垫上消毒布巾，以防操作中有滴落液污染台面。
3.3.5 人员进入微生物限度检查室、阳性对照室或抗生素微生物检定室前，在一更脱外衣、换鞋后，进入一更缓冲间洗手，并消毒后，进入二更自上而下依次换上洁净帽、口罩、洁净服、洁净鞋后，进入二更缓冲间，手经再次用消毒液消毒后方可进入微生物限度检查室或阳性对照室，实验操作前须带上无菌手套。
3.4 微生物实验室使用前应确保操作室的洁净程度。
3.4.1 微生物实验室的清洁分为一般清洁及彻底清洁，其具体的清洁部位、方式方法、频率见下表所示:3。
4。
2 微生物实验室常用消毒剂及其配制3.4。
3 使用前30分钟应先开启操作台及操作室的净化和消毒系统，关闭消毒系统后10～15分钟再进入操作室；操作结束后,开启消毒系统30分钟后再关闭消毒系统和净化系统。
无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理
无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理一、实验室要求：1.实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室内严禁吸烟和饮食。
2.实验人员必须穿戴工作衣帽，工作服经常洗涤、消毒、保持清洁。
3.操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。
4.发生菌液污染台面或地面，应立即用3%甲醛或5%碳酸等消毒液由外向内倾覆其上，1小时后再擦拭，如为破伤风梭菌，则应隔夜后再擦洗。
5.工作衣、帽、口罩受到菌液污染时，应立即脱下使污染部位包裹在内部，高压灭菌后再清洗。
6.如有传染性培养物污染手部，应先用75%乙醇棉球擦拭，再浸入01新洁尔灭消毒液内泡手，然后再用肥皂及清水彻底洗干净。
7.接种环(针)，每次使用前后，必须通过火焰灭菌，冷却后方可接种培养物，接种带有蜡质、油质的培养物或菌苔残留多时，不应立即在火焰上灼烧，应先在内焰里将油质培养物烘干后再移至火焰上灭菌，以免活菌外溅污染环境及感染操作者。
8.带菌的吸管应浸泡在5%甲酚消毒液内24h后取出清洗，带菌的试管或培养物应在121℃高压灭菌后再取出清洗。
9.在接种霉菌、放线菌时应在铺有浸过消毒液的纱布上操作，防止孢子散落传播。
10.凡带活菌的物品，必须消毒后才能清洗，严禁污染下水道。
二、无菌操作要求:无菌操作是指在无菌的环境条件下，使用无菌器材，防止微生物污染的操作技术。
即保持待检样品在操作时不被污染，又要防止被检的微生物及阳性对照菌在操作中污染环境或感染操作人员。
从事无菌及微生物操作的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识的学习及培训才具备上岗操作的资格，微生物专业检验人员也不应该频繁地变换工作岗位。
1.无菌室应每次使用前后用0.1%新洁尔灭消毒液或2%甲醛液擦拭工作台面及可能污染的死角，湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净工作台的开关30分钟，紫外线杀菌灯照射1小时。
2.操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用75%乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。
将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操作间，再用01新洁尔灭泡手后进入操作间，在乙醇(或煤气灯)火焰区(火焰高度3-5cm)操作。
微限及无菌操作注意事项
8）薄膜过滤法要求及操作步骤
☆ 应优先采用全封闭式薄膜过滤器。应选择低吸附 的滤器及滤膜。滤膜孔径应不大于0.45um。直径为 50mm。使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时， 应保证滤膜在过滤前后的完整性。 ☆ 水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润 湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应 充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保 持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液 经薄膜过滤后，若需用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜 每次冲洗量一般为100ml，总冲洗量不得超过 1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。
培养温度及结果报告单位
培养温度：除另有规定外，本检查法中细菌及控制 菌培养温度为30～35℃﹡；霉菌、酵母菌培养温度 为23 ～28℃。 检验结果报告：以1g 、1ml 、10g 、10c㎡为单位 报告，特殊品种可以最小包装单位报告。 特殊品包括 （1）药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 （2）一些贵重药品也应考虑检验量。
微生物实验室建设问题
除地面、墙面、顶棚和工作台外，传递窗、物品台、坐凳、门把手等细微环节， 也应做到易于清洁，耐腐蚀、不起尘、不开裂、光滑防水，便于消毒。 洁净室内照明、紫外、超净工作台等仪器设备开关易设置在第1缓冲间以外，便 于控制。 洁净室内各区域的风速、压差、温度、湿度显示等易设置在第1缓冲间以外或第 1缓冲间外可以观察到的地方，便于观察纪录，实时提示屏障系统的有效性 。 洁净区内部和外部宜设置对讲设备，便于实验人员的信息交流和协作。 洁净室内不应安装水槽、水管、上下水道等，避免滋生微生物。 微生物实验室空调系统的设计应充分考虑生物安全柜、恒温水浴、培养箱、冰箱、 高压蒸汽灭菌器等冷、热、湿和污染负荷。 无菌室内不宜放置水浴等对湿度影响较大的仪器，如需要放置应加盖，并经常换 水 ，防止微生物滋生 由于实验室建成后，结构布局很难变更，所以应对未来的人员编制、检验内容、 工作量、所需仪器做出规划，充分考虑实验室的承载能力，必要时预留部分空间。