高效液相色谱法测定格列吡嗪片含量

高效液相色谱法测定格列吡嗪片含量
【摘要】格列吡嗪片适用于经饮食控制及体育锻炼2-3个月疗效不满意的轻、中度2型糖尿病患者。

固定相为：依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ），乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相，检测波长为225nm；格列吡嗪在4～32μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

格列吡嗪的平均回收率为99.2%。

本法简便、重现性好、回收率高，可用于格列吡嗪片中格列吡嗪的含量测定。

【关键词】格列吡嗪片；格列吡嗪；测定
格列吡嗪为格列吡嗪片主要成分[1-5]。

格列吡嗪化学名称为：1-环己基-3-{4-[2-（5-甲基吡嗪-2-酰胺）-乙基]苯磺酰}脲[6-9]。

格列吡嗪片适用于经饮食控制及体育锻炼2-3个月疗效不满意的轻、中度2型糖尿病患者，且无急性并发症（如感染、创伤、酮症酸中毒、高渗性昏迷等）[10-13]。

目前主要生产格列吡嗪片的厂家有潍坊中狮制药有限公司、山东仁和堂药业有限公司、北京优华药业有限公司、北京京丰制药有限公司、贵州圣济堂制药有限公司、海口奇力制药股份有限公司、黑龙江瑞格制药有限公司、北京天衡药物研究院南阳天衡制药厂、哈药集团制药总厂等。

本文用高效液相法对格列吡嗪片中的格列吡嗪的进行了含量测定。

1.仪器与试药
DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）；FA114电子分析天平（成都市科恒达仪器设备有限责任公司）；TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；XYJ-H帕恩特实验室中央超纯水系统（北京湘顺源科技有限公司）；UV-1800紫外/可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；LC-600高效液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）。

盐酸（常州市弘裕化工有限公司）、甲醇（上海谱振生物科技有限公司）、冰乙酸（上海跃胜贸易有限公司）、乙腈（上海谱振生物科技有限公司）、磷酸（湖北巨胜科技有限公司）。

2.含量测定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。

色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相；检测波长为225nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。

理论板数按格列吡嗪峰计算应不得低于2000。

2.2供试品溶液的制备
取格列吡嗪片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加流动相适量超声溶解，放凉，流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.3对照品溶液的制备
精密称取格列吡嗪对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含格列吡嗪10μg）。

2.4阴性干扰试验
按方中比例取格列吡嗪片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。

结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与格列吡嗪相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。

2.5标准曲线的制备
制备浓度为4、8、16、20、24、28、32μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。

以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

试验表明，格列吡嗪对照品在4～32μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6精密度试验
精密吸取格列吡嗪对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.59%。

结果表明，本实验精密度良好。

2.7重现性试验
分别称取同批格列吡嗪片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.61%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品格列吡嗪峰面积积分值的RSD为0.53%。

结果表明格列吡嗪至少在4h内稳定。

2.9回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密
添加一定量的格列吡嗪对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。

6次测定的平均回收率为99.2%，RSD 为0.73%。

2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定格列吡嗪片三批样品中格列吡嗪的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.5%、101.1%、100.6%。

3.讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46），乙腈-甲醇-水（20∶10：70），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH 值6.0）-乙腈（50：50）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH至6.00）（22：32∶46）为流动相。

格列吡嗪片原有质量标准为分光广度法，没有采用高效液相法。

本实验采用高效液相法对格列吡嗪片中格列吡嗪的含量进行测定，为今后对格列吡嗪片的质量标准修订提供依据。

本实验方法是一种简便、准确、安全的测定格列吡嗪片含量的方法。

格列吡嗪片中格列吡嗪的含量为标示量的95-105%。

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