实验三、植物病原细菌、病毒、线虫和寄生性种子植物形态观察最新

二、实验室诊断 1、鉴别寄主诊断 2、传染试验 3、显微镜检查 4、血清学技术 5、核酸杂交及PCR技术 6、物理化学特性

三、植物病原线虫
（一）植物病原线虫的形态与结构
线虫(nematdes)又称蠕虫(helminthes )，是一 类低等的无脊椎动物，危害植物的称为植物病 原线虫或植物寄生线虫，或简称植物线虫。
莴苣花叶病毒（LMV）和黄瓜花叶 病毒（CMV）等引起。
芹菜病毒病
叶片畸形，植株矮化。
芜菁花叶病毒（TuMV）和黄瓜花叶 病毒（CMV）、马铃薯Y病毒（PVY） 等引起。
菠菜病毒病
花叶、矮化、坏死
黄瓜花叶病毒（CMV）和芜菁花叶病毒 （TuMV）等。
蕹菜病毒病
病株矮缩，叶片畸形、皱缩，叶 质粗厚。

植物病原线虫的主要类群
1、粒线虫属 2、茎线虫属 3、异皮线虫属 4、根结线虫属 5、拟滑刃线虫属 6、伞滑刃线虫属
二、植物病原线虫所致病害症状观察
番茄根结线虫病
南方根结线 虫引起。
瘤状根结，植株 干旱枯死。
黄瓜根结线虫病
大豆胞囊 线虫引起。
根部有白色球状物，后期 形成胞囊。
松材线虫病

革兰氏阳性菌和阴性菌的细胞壁的组 成上有显著的不同，阳性的细胞壁厚、 坚硬而牢固，而阴性菌的壁薄而柔软。 再就是二者细胞壁的组成成份也不同。
（二）植物病原细菌所致病害症状观察
1、薄壁菌门：有壁较薄。革兰氏染色反应阴性，包括大多数植物
病原细菌。
主要有以下十一个属：土壤杆菌属、欧文氏菌属、泛菌属、果胶 杆菌属、假单胞菌属、布克氏菌属、劳尔氏菌属、噬酸菌薯、 黄单胞菌属、木质部小菌属和韧皮部杆菌属。

不同层次的植保人员的知识和经验不同， 因此，到最后确诊所需要的时间也是不一 样的。 田间症状（确诊），镜检（确诊），分离、 培养、接种（验证病原与症状的吻合，区 别寄生菌与腐生菌）确诊。 对于一个新手或经验不多的植保人员来说， 正确的诊断需作详细和系统的检查，而不 仅根据外表症状。

植物病原细菌病害的诊断要点

植物受线虫危害后所表现的症状，与一般的病 害症状相似，因此常称线虫病。习惯上都把寄
生线虫作为病原物来研究，所以它是植物病理
学内容的一部分。

线虫形态：差异很大，寄生人和动物的线虫有的很大，如蛔虫； 寄生植物的一般较小，长约0.3~1mm，也有长达4mm左右的，宽为 0.015~0.135mm。肉眼不易看见。线虫细长，有的呈纺锤形，横 断面呈圆形有些线虫的雌虫成熟后膨大成柠檬形或梨形。
（4）病毒病害症状往往表现为花叶、黄 化、矮缩、丛生等，少数脉带、环斑、 耳突、斑驳、蚀纹等特征性症状。此外， 随着气温的变化，植物病毒病时常发生 隐症现象。 病毒病与其他病原生物引起的侵染 性病害的主要区别是（1）病毒病在植物 表面绝对没有病征，而区别于线虫虫体、 细菌的菌脓、真菌的子实体等病征的出 现；（2）系统侵染性病毒病的症状在新 展的幼叶上更重，而其它病害在老叶上 症状更为明显。
4、分离培养与侵染性试验 按柯赫氏法则，从病部组织中分离病原细菌的 纯培养，无论是在普通培养基上，还是选择性 培养基上，挑选典型的单菌落，再接种到敏感 植物或指示植物上，使表现出典型的或特有症 状反应是必不可少的。 以上三个方面也只能区分是否是侵染性的细 菌性病害，并未回答是何种病菌引起的病害。 因此，也只是初步诊断。
2.细菌的细胞结构 （1）细胞壁 维持菌体形态,并保护 菌体; （2）细胞膜 一种半渗透性的生 物膜; （3）细胞质 含有蛋白质,无机盐, 脂类.水等; (4)核质 相当于真核生物的细胞 核.无核膜。

（5）粘质层
由细胞分泌的多糖物质组成; （6）荚膜 厚而固定的粘质层; 植物病原细菌细胞外一般有厚薄不均的粘 质层，但很少有荚膜。 （7）芽孢 在菌体一端或中间产生, 无色透明,具有抵抗不良环境的 作用; 植物病原细菌通常不产生芽孢。 芽孢抗逆性较强。 （8）鞭毛 细菌的运动器官,不同的 细菌鞭毛着生不一样,有极生鞭毛,周生鞭 毛。大多数植物病原细菌都具有鞭毛。
1、首先要田间观察，区别侵染性病害和非侵染性病害。 2、细菌病害的症状观察 细菌性病害，病植物表现的症状主要有坏死、萎蔫、 腐烂和畸形等4类，褪色或变色的较少，多数细菌病害 都有菌脓（Ooze）溢出。或者保温、保湿培养后会有菌 脓溢出。 3、显微镜检查 由细菌侵染引起的病害，无论是维管束系统受害的，还是 薄壁组织受害的，都可以在徒手切片中看到有很多细菌 从病部喷出，这种现象称为喷菌现象（Bacteria exudation,BE）。喷菌现象为细菌病害所特有，是区分 细菌病害或真菌、病毒病害最简单的手段。

二、植物病毒
一、病毒的形态和结构
1、病毒形态：病毒是由粒体（particle） 组成的，多数粒体为球状、杆状、线状，少 数为弹状、杆状、双联体状： 线状：11-13nm×750nm，细长可弯曲； 杆状、弹状：刚直不易弯曲，两端为截面， 称杆状；双端钝园，称弹状； 球状和双联体状：球状病毒也称多面体 病 毒，直径多为20-35nm，少数可达70-80nm； 若病毒由两个球状病毒粒体联合一起，称双 联病毒；

2、病毒结构
绝大多数病毒粒体是由核酸和蛋白质衣壳
组成； 植物弹状病毒粒体外有囊膜包被； 杆状或线状病毒粒体中间是螺旋体核酸链， 外面是由许多蛋白质亚基组成的衣壳； 球状病毒结构复杂，表面由二十个正三角 形组成，称20面体，还有60面体等；
（二）植物病毒所致病害症状观察
1、烟草花叶病毒属及TMV 2、黄瓜花叶病毒属及CMV 3、马铃薯Y病毒属及PVY
梨火疫病
发病后期“火烧状”
（二）假单胞菌属 主要引起叶斑和叶枯。
黄瓜细菌性角斑病
水渍状多角形斑点
西瓜细菌性角斑病
果实发病后期灰白 色病斑。
叶片发病淡褐色多 角形黄褐色斑点。
姜瘟病
地下根部腐烂，黄 褐色。
地上部变褐腐烂
（三）黄单胞菌属
主要引起叶斑和叶枯。
柑橘溃疡病
近圆性、米黄色隆起病斑。
黄色、半透明病斑油疱状 突起。
桃细菌性穿孔病

症状Symptoms ：
紫褐色至深褐色圆性或不 规则性病斑，最后病斑干 枯脱落，形成“穿孔状”。
（四）土壤杆菌属 主要引起植物的根、茎部
瘤肿。
桃根癌病
根部发病形成根瘤，大而硬， 木质化。
葡萄根癌病
贴近地表，枝蔓基 部形成瘤肿。
（五）棒形杆菌属 主要引起萎蔫。
烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒 （CMV）和甜菜曲顶病毒（BCTV）
黄瓜病毒病
黄瓜花叶病毒（CMV）、烟草花叶病毒 （CMV）和黄瓜绿斑花叶病毒（V） 引起。
叶尖细长，呈“鼠尾状”。
茄子病毒病
皱叶
花叶

主要由烟草花叶病毒（TMV），黄瓜花叶 病毒（ＣＭＶ）和蚕豆萎蔫病毒（ＢＢ ＷＶ）等引起。

主要由西瓜花叶病毒（WMV）、黄瓜花叶病毒 （CMV）和烟草花叶病毒（TMV）引起。
苹果花叶病
花叶
环斑、斑 驳型。
苹果花叶 病毒引起。
植物病毒病害的诊断要点

植物病毒的识别、诊断及病原鉴定往往比真菌 和细菌性病害复杂得多。因为非侵染性病害、 遗传性病害、药害及植原体引起的病害都与病 毒病症状相似。 一、病害初步识别 首先要区分非侵染性病害和侵染性病害。要点 是（1）病毒病有发病中心或中心病株，早期点 片分布，而非侵染性病害大多同时大面积发生； （2）发生病毒病的植株多为系统性感染，症状 分布不均一，新叶新梢上症状最明显，而生理 性病害大多比较均一；（3）病毒病有传染性， 非传染性病害没有传染扩散的过程；
实验三、植物病原细菌、病毒、 线虫和寄生性种子植物形态观察
指导教师：段海明
一、植物病原细菌
（一）细菌的一般形态结构
细菌属原核生物,它的典型特点是遗传物
质分散在细胞质中，没有核膜包围，没有 明显的细胞核。细菌是单细胞的生物。 1.细菌的形态 细菌有球形、杆状、螺旋状三种基本形状。 植物病原细菌大多是杆状，大小为 （0.5-0.8）×（1-5）μm，少数是球状; 细菌一般要经过染色后在光学显微镜下观 察。

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重 要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。 细菌先经碱性染料结晶（草酸铵结晶紫）染 色及碘液处理后，用酒精脱色，在一定条件 下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去， 因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏 阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。 为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱 性蕃红等进行复染。阳性菌仍是紫色，阴性 菌则被染上红色。
辣椒病毒病
凹凸不平的花斑
叶片变形扭曲

主要由黄瓜花叶病毒（CMV）、烟草花 叶病毒（TMV）、马铃薯Y病毒 （PVY）、烟草蚀纹病毒（TEV）和马 铃薯X病毒（PVX）等引起。
南瓜病毒病
花叶型
病瓜

主要由黄瓜花叶病毒等多种病毒引起。
丝瓜病毒病
花叶

主要由黄瓜花叶病毒引起。
西瓜病毒病
邹缩 矮化
植物病原线虫病害的诊断要点
（一）田间分布与症状观察 植物病原线虫在田间的分布一般是 不均匀的。植物线虫病害的症状往往表 现为植株矮小、叶片黄化、局部畸形和 根部腐烂等。 （二）线虫的分离与鉴定； （三）接种实验； （四）分子诊断和鉴定（同属不同的种）。
番茄溃疡病
发病后期茎中空，开裂，可 见褐色条斑。
果实受害，“鸟眼”斑。
马铃薯环腐病
维管束呈乳白色或黄褐色环状， 重者病部变黑褐色。
(六)
劳尔氏菌属 主要引起植株青枯。
马铃薯青枯病

马铃薯青枯病
地上部萎蔫死亡， 叶片仍保持青绿色。