抗酸染色操作规程
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查是一种用于检测酸杆菌的方法，特别用于检测结核杆菌。
它的原理是利用染色剂对细菌细胞壁中的酸性成分进行染色，通过显微镜观察染色后的细菌来进行检测。
具体方法包括：
1. 准备标本：收集待检的样本，如痰液、尿液等，可选择直接或间接涂片法。
2. 固定染色：将标本制成涂片，然后固定在加热后的玻璃片上，通常使用95%乙醇、甲醛等固定剂进行固定。
3. 染色处理：将固定后的标本涂片进行染色处理。
通常使用的抗酸染色法有神经酸染色法、济南中国红染色法和抗酸染色法等。
4. 洗涤：将染色后的标本涂片用清水洗涤，以去除多余染色剂。
5. 干燥：将洗涤后的标本涂片在空气中自然晾干。
6. 观察：将干燥的标本涂片放置在显微镜下进行观察，通过放大镜放大视野，并使用油浸镜头进行观察，寻找染色后细菌的存在。
通过观察染色后的细菌形态和染色情况，可以确定是否存在酸杆菌或结核杆菌等细菌。
这种方法可以有效地检测出结核病等疾病的感染。
抗酸染色——标准操作
抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
抗酸染色操作规程
抗酸染色操作规程
1.目的
规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。
2、原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
3、范围
用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定
4、质量控制
龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。
5、试剂
5.1石炭酸复红
碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液(3,盐酸酒精)
浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml
5.3吕氏美兰
美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序
6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
反复染5分钟,清水冲洗。
6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。
6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、结果判断
结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色
8、注意事项
染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。
抗酸染色操作步骤考核评分标准
冲洗未先平放扣2分，冲洗未从一端冲洗扣2分
脱色
1.3%盐酸酒精脱色30秒--1分钟；2.用水冲洗（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）。
（20分）
20分
未按标准步骤完成每步扣10分。酒精脱色未完全（痰膜无可视红色为止）扣2分。
复染
用亚甲兰溶液，复染30秒--1分钟，水洗，待自然干燥后用油镜观察。
2.滴加石碳酸复红2-3滴，覆盖整个标本
3.在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟.
4.待标本冷却后用水冲洗，（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）
（40分）
40分
未按标准完成每步扣10分。石碳酸复红未覆盖整个玻片标本扣2分
加热出现沸腾扣2分
抗酸染色操作步骤考核评分标准
被考核人：得分：
步骤
操作程序
分值
评分方法
缺陷及扣分
细菌图片的
制备
1涂片：用竹签挑取可疑部分标本0.05ml，涂10-20mm的卵圆形痰膜。
2干燥：自然干燥或染色前加热固定。
3固定：火焰Leabharlann 定（30分）30分
每骤10分，缺一步扣10分。痰膜过宽或过窄扣2分
初染
1.用玻片夹夹持涂片标本.
（10分）
10分
完成不规范每步扣5分，扣完为止。有红色斑块，未达到痰膜肉眼观为亮蓝色，扣2分。
合计
考核时间：2014年7月日监考人：
微生物抗酸染色步骤
微生物抗酸染色步骤如下：
1. 准备试剂：选择合适的载玻片，用9%的冰醋酸溶液浸湿载玻片。
用无菌操作取瑞氏染液、美蓝染液、无菌生理盐水，分别滴加到染色槽中，确保每个槽中液体的高度占据染色槽的2/3。
2. 涂片：采取标本时，应使用无菌操作取少量标本放入无菌离心管中，加入少量的无菌生理盐水，振荡离心管使标本充分溶解。
用吸管吸取少量的溶解标本均匀涂布在载玻片上，注意应避免标本在载玻片上形成气泡。
3. 抗酸染色：用竹镊子将涂有标本的载玻片拿起来，先加入少量美蓝染液，盖上盖玻片，避免染液进入对下步观察产生干扰。
用同样方法加等量无菌生理盐水洗去染液后，再滴加少量瑞氏染液，迅速用滤纸吸去多余染液。
4. 镜检观察：染色后，待染色液稍干后，用显微镜观察染色情况。
如果是抗酸阳性杆菌，则会被染成蓝色或淡蓝色；而其他革兰阴性杆菌则会被染成红色。
微生物抗酸染色主要用于区分抗酸杆菌和其他革兰阴性杆菌，尤其是在结核病诊断和疫情监测中具有重要意义。
不同微生物的抗酸染色结果可能会因为菌种的差异而略有差异。
具体操作时应注意无菌操作和染液的配制方法，以及涂片、染色和观察的技巧。
以上内容仅供参考，建议到正规医疗机构进行咨询，获取更全面和准确的信息。
24小时尿液抗酸染色标准操作程序
24小时尿液抗酸染色标准操作程序1 目的有效发现抗酸性细菌。
2 原理结核杆菌、麻疯杆菌等抗酸性细菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质的皮膜而不易着色，但一经着色后不易被酸性酒精脱色，仍固有最初色素的颜色（红色）。
3 试剂3.1 BASO结核菌染色液3.2 贮存条件：贮存于15~30℃，相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室内。
4 标本采集与接收24h尿标本由患者收集后全部送检，最好连续留取三次，按标本签收程序签收。
5 操作步骤5.1 标本分析5.1.1 收集24小时尿液加入明矾沉淀后取沉淀物离心并涂片，待干燥。
5.1.2 加Cabolfuchsin染色5分钟或更久，水洗。
5.1.3 加Acid Alcohol脱色2分钟。
水洗。
5.1.4 加Methylene Blue复染30秒。
5.1.5 干燥，镜检。
5.2 检验结果的录入和确认5.2.1 打开电脑，启动LIS程序，输入用户名及口令后，进入检验程序。
5.2.2 选择“检验录入”，进行检验结果的录入及修改。
通过申请序号进行结果的输入选择“住院号”，输入检验结果，并对患者以前检测结果进行历史回顾，观察变化趋势。
5.2.3 检验结果的确认：检验结果的确认应由主管技师(主治医师)或专业负责人进行确认，方法为单击“信息处理”菜单，核对检验结果后，按“审核”键进确认。
6 结果判定6.1 抗酸性菌：呈红色，6.2 其他细菌及细胞：呈蓝色7 质量控制7.1 试剂用完后，要迅速盖好，以免挥发。
7.2 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。
7.3 试剂效期过后，不能使用。
7.4 试剂贮存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
7.5 受试验条件及个体差异限制，本试验阴性不能说明未感染结核分枝杆菌。
8 临床意义8.1 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，大量生长繁殖，机体对菌体成分与其代谢产物引起免疫损伤及变态反应，导致一系列组织细胞学上变化。
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)
抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)简介：分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。
传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。
其中最具代表性是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 推荐热染的方法。
Leagene 抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)属于冷染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。
其染色原理是在室温条件下，分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
该染色法较改良Kinyoun 冷染法要深，更适用于常规抗酸染色，Leagene 推荐该Kinyoun 冷染法作为实验室或临床上标准抗酸染色法。
组成：自备材料：1、 接种环2、 载玻片3、 蒸馏水4、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥。
2、 滴加Kinyoun 复红染色液，染色。
3、 不必加热，蒸馏水冲洗。
4、 用Kinyoun 脱色液脱色至无红色为止。
5、 蒸馏水冲洗。
6、 用亚甲蓝染色液染色。
7、 蒸馏水冲洗。
编号 名称DM0035 3×50mlDM0035 3×100mlStorage试剂(A): Kinyoun 复红染色液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): Kinyoun 脱色液 50ml 100ml RT 试剂(C): 亚甲蓝染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份8、轻轻吸干水分，自然干燥。
9、油镜镜检。
染色结果：抗酸菌红色非抗酸菌、细胞、背景蓝色注意事项：1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。
2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：=编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)DC0032 Masson三色染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液DM0016 增强革兰氏染色液PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)。
改良抗酸染色法
改良抗酸染色法
改良抗酸染色法（隐孢子虫）
试剂：石炭酸复红试剂（第一试剂）：碱式复红4g，98% 酒精溶液20ml，石炭酸8 ml，蒸馏水100 ml ; 10% 盐酸酒精溶液; 2% 孔雀绿原液：孔雀绿2g ，蒸馏水100ml ；1：10 孔雀绿试剂（第二试剂）：孔雀绿原液1ml ，蒸馏水10ml
步骤：涂2块硬币大小的粪液于载玻片上，待其自然晾干, 滴加甲纯固定5-10min，滴加第一试剂染色，置于酒精灯上烘烤到出现烟雾为止，等待30min，冲洗用10% 盐酸酒精溶液（10ml盐酸90ml 水）脱色1min （此步骤可反复），用第二试剂染色1 min ，自然晾干.即可观察..
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抗酸染色操作规程
1.目的
规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。
2、原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
3、范围
用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定
4、质量控制
龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。
5、试剂
5.1石炭酸复红
碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液(3,盐酸酒精)
浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml
5.3吕氏美兰
美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序
6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
反复染5分钟,清水冲洗。
6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。
6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、结果判断
结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色
8、注意事项
染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。