二轮复习选修一 专题五蛋白质的提取与分离知识点梳理导学案填空
高二生物选修一第六课时 蛋白质的分离和纯化.导学案doc
第六课时蛋白质的分离和纯化【课标要求】：本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
【学习目标】：知识：尝识从血液中提取和分离血红蛋白，了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理能力：体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤学习蛋白质提取和分离的一些基本技术情感：初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神【学习重点】：凝胶色谱法的原理和方法【学习难点】：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填【课前导学】一、制备蛋白质的粗制品组织破碎_______________细胞破碎_______________酸性蛋白质：_______________蛋白质抽提水溶性蛋白质：_______________脂溶性蛋白质：_______________去除固体杂质______________蛋白质粗制品:可能是多种蛋白质的混合物，其中还可能混有许多小分子化合物二、蛋白质的分离与纯化1、原理：根据不同的物质其分子的大小、溶解度的大小、所带电荷的多少，吸附性质等方面存在差异进行的。
2、方法：⑴透析法：其原理是___________不能透过半透膜，而其他小分子化合物可以透过_____________。
⑵离心沉降法：通过控制_________，使得___________________不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。
⑶电泳法①概念：带电颗粒在电场作用下向着与其____________________的现象②影响泳动速度的因素：____________________，（一般来说，分子直径_________，越接近于____形，所带净电荷_______，泳动速度越快，反之，则越慢。
）③常用的方法：______________电泳。
(完整word版)2017人教版高中生物选修1专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》word导学案
专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。
2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。
（三）电泳1、电泳是指。
2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。
二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
（一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入（质量分数为），缓慢搅拌 min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。
人教版高中生物选修一专题五《DNA和蛋白质技术》知识点归纳
专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定一、提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。
②在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。
酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。
2.从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。
一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
3.采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。
4.提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。
利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。
温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。
补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。
5.洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。
6.当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。
原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。
二、实验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同。
2020-2021学年生物选修一配套导学案：5.3血红蛋白的提取和分离
§5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案班级：高二（）班姓名：【学习目标】1.概述凝胶色谱法、电泳法分离大分子的基本原理。
2.知道缓冲溶液的作用。
3.尝试对血液中血红蛋白进行提取和分离,体验从复杂体系中提取生物大分子的基础过程和方法。
4.掌握对样品的预处理、色谱柱制作及装填等操作,进行样品的加入和洗脱并最终分离出血红蛋白。
【自主学习】一、基础知识1.蛋白质的分离依据:蛋白质特性的差异,如分子的形状和_____、所带_____的性质和多少、溶解度、_________和对其他分子的亲和力等。
2.凝胶色谱法:(1)概念:也称做___________,是根据____________________分离蛋白质的有效方法。
(2)凝胶的特点形态:微小的_________组成:大多数由_____________构成结构:内部有许多___________(3)常用凝胶:_______和琼脂糖。
(4)分离原理。
①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。
②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶_____移动,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。
3.缓冲溶液:(1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制______________对溶液pH的影响,维持pH基本不变。
(2)配制:通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的_________就可以制得____________________的缓冲液。
(3)意义:为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,保持_____________与体内环境中的pH基本一致。
4.电泳:(1)概念:带电粒子在_____的作用下发生_____的过程。
(2)原理。
①带电粒子:许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有_______的基团,在一定的pH下,这些基团会带上___________。
生物选修1 专题5 DNA和蛋白质技术导学案(高三复习)
1 课题：生物选修1 专题5 DNA 和蛋白质技术导学案编写人： 审核组长： 审核主任：温馨寄语：【学习目标】1. 初步掌握DNA 粗提取以及DNA 鉴定的原理2．理解PCR 的原理和PCR 的基本操作。
3．了解凝胶色谱法的原理和方法【知识梳理】（一）DNA 的粗提取与鉴定1. 实验原理提取生物大分子的基本思路是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
对于DNA 的粗提取而言，就是要利用＿＿＿＿与＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。
（1）DNA 的溶解性①DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的＿＿＿＿＿溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使＿＿＿＿充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。
②DNA 不溶于＿＿＿＿＿＿溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步的分离。
（2）DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解＿＿＿＿＿，但是对＿＿＿＿＿没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温，而DNA 在＿＿＿＿＿＿才会变性。
洗涤剂能够瓦解＿＿＿＿，但对DNA 没有影响。
（3）DNA 的鉴定在＿＿＿＿条件下，DNA 遇＿＿＿会被染成＿＿色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
2. 实验设计（1）实验材料的选取凡是含有＿＿＿＿＿＿的生物材料都可以考虑，但是使用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的生物组织，成功的可能性更大。
（2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液破碎动物细胞：如在鸡血细胞液中加入一定量的＿＿＿＿，同时用＿＿＿＿＿搅拌，过滤后收集滤液即可。
破碎植物细胞（如洋葱），需在切碎的洋葱中加入一定的＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。
①加入蒸馏水作用：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种＿＿＿＿液体，使血细胞＿＿＿＿＿，再加上搅拌的机械作用，加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 。
(人教版)生物高二选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案(有答案)
课题3 血红蛋白的提取和分离蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。
2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。
4．具体过程：（1）________混合物上柱。
（2）洗脱开始，____________的蛋白质进入凝胶颗粒内；相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。
（3）___________的蛋白质被滞留；_____________的蛋白质向下移动。
（4）相对分子质量不同的分子完全分开。
（5）___________的蛋白质行程较短，已从________中洗脱出来，________________的蛋白质还在行进中。
提示：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
二、缓冲溶液1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液____的影响，维持____基本不变。
2．配制：通常由________溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的______就可以制得在不同________使用的缓冲液。
三、电泳1．概念：带电粒子在______的作用下发生______的过程。
2．原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有________的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。
人教版高中生物选修1专题5dna和蛋白质技术复习教案
选修1专题5 DNA和蛋白质技术复习（教案）复习要点1.DNA的粗提取与鉴定2.PCR技术3. 血红蛋白的提取和分离复习过程一、DNA的粗提取与鉴定【知识点讲解】1.实验原理(1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶解规律 2 mol/L NaCl溶液0.14 mol/L NaCl溶液DNA 溶解析出蛋白质NaCl溶液物质的量浓度从2mol/L逐渐降低的过程中，溶解度逐渐增大部分发生盐析沉淀溶解(2)DNA离。
(3)DNA与二苯胺沸水浴加热，呈蓝色。
2.操作流程（1）材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织（2）破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞→加蒸馏水→用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液（3）去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质（4）DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液（5）DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5 min，溶液变成蓝色【例题讲解】如图为菜花DNA的粗提取与鉴定的实验流程图。
据图回答下列问题：（1）选择菜花作为提取DNA的实验材料的原因是______________。
（2）研磨前，向研钵中加入石英砂的目的是___，加入的物质a是_______。
（3）研磨液过滤后，应向滤液中加入2 mol/L的NaCl溶液，目的是______；也可以向滤液中加入嫩肉粉，目的是__________。
（4）鉴定DNA所用的化学试剂为________，鉴定实验中，A、B两支试管属于对照组的是____________________，对照组试管中加入的物质有______。
【答案】（1）菜花中的DNA含量相对较高（2）使研磨充分洗涤剂和食盐（3）溶解DNA，析出不溶的杂质分解蛋白质（4）二苯胺A NaCL溶液和二苯胺试剂【解析】（1）原则上含DNA的生物材料都可以作为提取DNA的实验材料，只是选用DNA含量相对较高的生物组织，实验成功的可能性更大。
中图版选修一蛋白质的提取和分离学案
第一节蛋白质的提取和分离 翦因fl 自主学习•基础知识|接^息讣扣 一、 蛋白质分离提纯技术常用的蛋白质分离提纯技术包括离心技术、 层析技术和电泳技术等。
其中电 泳技术最为快捷灵敏、简便易行。
二、 电泳技术分离蛋白质的原理1. 蛋白质中含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定 pH 条件下带 有电荷。
2. 蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。
3 •蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，分子量越小_ 移动越快。
三、 结果分析不同蛋白质的混合溶液经过同一电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹， 每种带纹可能就是一种蛋白质。
四、 “血清蛋白的提取和分离”活动程序1. 点样：取新制血清5微升、质量浓度为0.4克/毫升的蔗糖溶液和质量分 数为0.1%的溴酚蓝指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取 5卩样品加到电泳 样品槽的胶面上。
2. 电泳。
3. 染色：用质量分数为0.05%的考马斯亮蓝R 250染色液对凝胶进行染色。
4•脱色：用体积分数为7%的醋酸溶液对凝胶板进行浸泡漂洗,至底色脱净。
5 .制干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 3 h 〜4 h 后，放在两层»第六章 蛋白质和DNA 技术透气的玻璃纸中间自然干燥。
疑难问题卡片预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中刃合作探究•重难疑点问题1问题2问题3问题4ZHONGNANTUPO 突破^-----------一、蛋白质分离提纯的方法1.蛋白质分离的基本过程破碎细胞抽提(粗制品) 纯化蛋白质2.破碎细胞的方法在分离与纯化蛋白质之前，必须采用适当的方法使蛋白质呈溶解状态释放出来：通常先将生物组织进行机械破碎，再根据细胞的特点，选择不同的破碎细胞方法(常用的有研磨法、超声波法、酶解法)。
3.抽提细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来，再根据蛋白质的不同性质，选择不同的溶剂进行抽提。
4.纯化(1)原理：纯化主要是指根据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度大小、所带电荷的多少、吸附性质等方面存在的差异进行的。
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血红蛋白的提取和分离导学案
班级姓名
一、基础
1、蛋白质提取与分离的依据:1.分子的大小2.电荷性质和多少3.溶解度4.吸附性质5.对其他分子亲和力
2、血红蛋白由条肽链组成，包括和；因含而成红色；作用：
2、凝胶色谱法：根据被分离物质的
凝胶①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的；
②化学本质：化合物，如、糖：
原理：的蛋白质由于扩散作用不进入凝胶颗粒内部，路程，移动速度，先流出，的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部，路程，移动速度，后流出，依此可对血红蛋白进行分离和纯化。
3、透析法：利用透析袋通过，留下。
透析袋一般用又称制成
4、电泳法：利用分离样品中各种分子，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用电泳法和；测定蛋白质分子量常用
SDS能消除的影响，原因：SDS使蛋白质变成链，SDS所带负电荷大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因此掩盖了不同种类蛋白质的，使电泳迁移速率完全取决于
二、蛋白质提取与分离四步
1、样品处理（1）红细胞的洗涤：目的：，洗涤次数过少，无法除去
低速短时离心，防止白细胞和淋巴细胞沉淀
加入，防止血液凝固
缓慢搅拌的目的，防止
（2）血红蛋白的释放：加和40%体积
蒸馏水的作用：甲苯的作用
（3）分离血红蛋白第1层（最上层）：无色透明
离心第2层色薄层固体，物质的层，
第3层：色透明的层
第4层：其它杂质的色层
滤纸的作用：___________________________
分液漏斗的作用是：______________________
2、粗分离（4）透析血红蛋白目的将透析袋放入中
缓冲溶液的作用：模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常和。
3、纯化法①胶色谱柱的制作②凝胶色谱柱的. ③.
观察到红色区域移动，说明色谱柱制作成功
注意：凝胶装填时尽量紧密，均匀，以低凝胶颗粒之间的空隙；
装填凝胶柱时不能有气泡存在。
（气泡和空隙会，降低分离效果）液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果
不能发生洗脱液，露出凝胶颗粒的现象。
4、纯度鉴定
1.判断常考语句，澄清易混易错
(1)纯化主要是根据蛋白质以及蛋白质与其他物质之间的理化性质的差异进行的()
(2)透析法可去除小分子化合物杂质，原理是不同分子所携带净电荷不同()
(3)通过控制离心速率，可使分子大小、密度不同的蛋白质沉降分层，从而分离不同的蛋白质()
(4)不同的物质在同一电场中的泳动速度不同，因此可用电泳法分离蛋白质()
(5)影响泳动速度的因素包括带电颗粒的性质、电场强度、溶液的pH等()
2.分析命题热图，明确答题要点
下图是用凝胶色谱法分离a、b两种蛋白质的示意图，请分析：
(1)先从层析柱中洗脱出来的是哪种蛋白质？为什么？
(2)d是什么？有什么特点？
(3)层析柱装填时不能有气泡的原因是什么？
4.如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题：
(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的
作用体现了蛋白质具有______功能
(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是_____________；乙装置中，C溶
液的作用是______________。
(3)甲装置用于___________ ，目的是_______________________________。
用乙装置分离蛋白质的方法叫__________，是根据__________________分离
蛋白质的有效方法。
(4)用乙装置分离血红蛋白时，待____________________________时，用试管
收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。
10.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。
请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：
(1)将实验流程补充完整：A为______________，B为_________________。
凝胶色谱法是根据_________________________而分离蛋白质的有效方法
(2)洗涤红细胞的目的是去除____________________；离心速度过高和时间过长会使__________一同沉淀，达不到分离的效果。
洗涤干净的标志是________________________。
释放血红蛋白的过程中起作用的是______________。
(3)某同学利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的______________、分子的大小、形状等。
而另一位同学则利用凝胶过滤分离蛋白质。
待蛋白质接近凝胶色谱柱底端时，用试管连续收集流出液。
先收集到的蛋白质与后收集到的蛋白质的区别是_________________________________________
__________________________。