手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量
手性高效液相色谱法测定恩替卡韦中对映异构体杂质
手性高效液相色谱法测定恩替卡韦中对映异构体杂质欧阳婷;杨小玲;麦曦;马惠玲;程帆;罗恒真;刘阳;刘斌【期刊名称】《药品评价》【年(卷),期】2015(012)024【摘要】目的:建立测定恩替卡韦对映异构体杂质的手性高效液相色谱法.方法:采用CHIRALPAK AD-H手性柱(5μm,4.6mm ×250mm),以正己烷-乙醇(55:45)为流动相的等度洗脱方法,流速为1.0mL/min,检测波长为254nm.结果:在上述色谱条件下,恩替卡韦与对映异构体杂质能分离度符合要求,检测限为1ng,精密度良好(RSD 为0.69%),恩替卡韦主成份和对映异构体在流动相溶液中放置8小时稳定性良好.结论:本方法操作简便,专属性强,灵敏度高,可用于恩替卡韦对映异构体杂质的限量控制方法.%Objective: To establish an enantio-specific HPLC method for enantiomer impurity determination in Entecavir.Method: The CHIRALPAK AD-H(5μm,4.6mm×250mm) column was used. Isocratic elution method was used with a mobile phase consisting of hexane- ethanol(55:45) at a flow rate of 1.0mL/min. The detection wavelength was 254 nm.Results: The resolution of Entecavir and enantiomer impurity was good. The limit of detection was 1 ng and the precision was good with RSD of 0.69%. The stability was good by keeping 8 h in mobile phase solution.Conclusion: The method is convenient, highly specific, sensitive and suitable for determining the limit of enantiomer impurity in Entecavir.【总页数】3页(P46-48)【作者】欧阳婷;杨小玲;麦曦;马惠玲;程帆;罗恒真;刘阳;刘斌【作者单位】南昌大学药学院,南昌 330006;江西青峰药业有限公司,赣州 341000;江西青峰药业有限公司,赣州 341000;南昌大学药学院,南昌 330006;南昌大学药学院,南昌 330006;江西青峰药业有限公司,赣州 341000;江西青峰药业有限公司,赣州341000;南昌大学药学院,南昌 330006;南昌大学药学院,南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R96【相关文献】1.手性固定相高效液相色谱法同时测定琥珀酸索利那新原料药中对映异构体和非对映异构体 [J], 王东武;王西宁;丰梅君;宋莹雪2.手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量 [J], 王文娜;邓桂凤;张玲娣;姚彤炜3.手性高效液相色谱法测定虫酰肼原药中的异构体杂质 [J], 魏泱;蔡玉梅;秦虓4.正相高效液相色谱法法测定恩替卡韦原料的对映异构体 [J], 赵海桥;吴双俊;付建;苏贵勇5.反相-高效液相色谱手性流动相添加剂法测定酸奶及含乳饮料中乳酸对映异构体[J], 潘瑞花;陈建华;胡小钟;崔海容;林雁飞;王帆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定恩替卡韦的含量
HPLC法测定恩替卡韦的含量作者：翁艳军鲁晶来源：《中国科技博览》2015年第01期[摘要]目的：本文建立了测定恩替卡韦含量的液相色谱条件。
方法：含量检测采用Kromasil 100-5C C18柱（250mm×4.6mm，5μ），流动相为乙腈-水（5： 95），流速1.0mL/min，检测波长254nm。
结果：恩替卡韦在80.53？g/ml～322.11？g/ml范围内，线性相关性较好（r=1.0000），平均回收率为99.9%（RSD=0.64%，n=9），耐用性及溶液稳定性良好。
结论：本方法简便、准确、专属性强，可用于恩替卡韦含量测定。
[关键词]恩替卡韦，含量，分析中图分类号：F364 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）01-0311-01[Key words] entecavir， content， analysis恩替卡韦（Entecavir）为鸟嘌呤核苷类似物，是一种新型的核苷类抗病毒药物对乙肝病毒（HBV）多聚酶具有抑制作用。
它能够通过磷酸化成为具有活性的三磷酸盐，三磷酸盐在细胞内的半衰期为15h。
通过与HBV多聚酶的天然底物三磷酸脱氧鸟嘌呤核苷竞争，恩替卡韦三磷酸盐能抑制病毒多聚酶（逆转录酶）的所有活性：（1）HBV多聚酶的启动；（2）前基因组mRNA逆转录负链的形成；（3）HBV DNA正链的合成。
本品适用于病毒复制活跃，血清转氨酶ALT或AST持续升高或肝脏组织学显示有活动性病变的慢性成人乙型肝炎的治疗【1】。
经查询，该品种在国外药典未见报道，参考在国家食品药品监督管理局标准YBH33292005、YBH14132008及文献[2]，建立了恩替卡韦含量的检测方法，选择了高效液相色谱检测手段，并通过线性、耐用性等实验对方法进行验证。
充分证明了该方法能够快速、简便、准确地测定恩替卡韦的含量。
1 仪器与材料Agilent高效液相色谱仪（包括G1311A泵，G1314B VWD检测器和G1315D DAD检测器、ChemStation Rev. B.04.02[98]液相色谱工作站，Agilent公司）恩替卡韦工作对照品（哈药集团制药总厂，含量93.53%），甲醇（色谱纯，TEDIA），乙腈（色谱纯，TEDIA），水为纯化水。
HPLC手性固定相法拆分恩替卡韦光学异构体
HPLC手性固定相法拆分恩替卡韦光学异构体
邹巧根;孙莉莉;韦萍
【期刊名称】《中国药科大学学报》
【年(卷),期】2012(43)1
【摘要】建立恩替卡韦5个光学异构体的高效液相色谱拆分方法。
采用Chiralpak AD-H手性柱(250 mm×4.6 mm,5μm)在正相条件下进行同时拆分,流动相为正己烷-异丙醇-乙醇-二乙胺(70∶6∶24∶0.1),流速为0.5 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。
色谱条件的优化过程中,考察了流动相组成及比例、酸碱添加剂、流速、柱温等因素对恩替卡韦异构体分离的影响。
在所建立的条件下,恩替卡韦5个光学异构体分离良好,分离度依次为1.923,4.498,4.573和2.143。
该方法简单快速、重复性好,适用于恩替卡韦原料药的光学异构体检查。
【总页数】4页(P51-54)
【关键词】高效液相色谱法;恩替卡韦;Chiralpak;AD-H;手性拆分
【作者】邹巧根;孙莉莉;韦萍
【作者单位】南京工业大学生物与制药工程学院;中国药科大学分析测试中心【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.高分辩气相色谱法手性固定相拆分α-羟基酮光学异构体 [J], 张月琴;史雪岩;傅若农;张汉邦;凌云;左晓斌;刘汉范
2.HPLC手性固定相法拆分YNC光学异构体 [J], 尹文龙;郝英魁;全红娜;潘雁涛;蒋庆峰;
3.HPLC手性固定相法拆分YNC光学异构体 [J], 尹文龙;郝英魁;全红娜;潘雁涛;蒋庆峰
4.流动相添加剂法与手性固定相法对己唑醇光学异构体的拆分 [J], 杨丽;江树人;廖勇;王鹏;田芹;周志强
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高效液相色谱-梯度洗脱法测定恩替卡韦分散片的含量和有关物质
动相 Ａ溶解 ， 酸 、 降解 的溶液调 ｐ 将 碱 Ｈ至 中性 ， 用流 动相 Ａ定 容， 摇匀 ， 作为各破坏方法 的有关物质供试品溶液 。 精密量取各有 关 物质 的供试 品溶液 、 对照 品溶液 、 供试 品溶液 ２ ， ０ 分别 进
（９： ０： ）按 表 １ ２ ７ １， 进行 梯度洗脱 ； 流速 ： Ｌ ｍｉ； １ ／ ｎ 检测 波长 ： ｍ ２ ４ｎ 柱温 ：０℃ ； ５ ｍ； ３ 进样量 ：０ 。 ２ 理论板数按恩替卡韦峰计算
质 量控 制 。
关键词 ： 梯度 洗脱 法 ； 恩替 卡 韦分 散 片 ； 量 ； 关 物 质 含 有
中 图分 类 号 ： ９ ７ ２ Ｒ ７ ． Ｒ ２． ；９８７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０６—４ ３ （０ ２ ０ —０ ２ １０ ９ １ ２ １ ）９ ０ ６—０ ２
０ ９ ９５ ｎ＝ ） 结果 表 明 ， ． ９ （ ６ 。 恩替 卡韦进 样量 在 １０ １ ６ ０ ６ ｇ ．０ ～ ．０ 范围内与峰面积线性关 系良好 。
２１ ０ ２年 ５月 ５日 第 ２ 卷 第 ９期 ｌ
Ｖ ｏ． ， ． ， ａ ， ０１ １ ２１ Ｎｏ ９ Ｍ ｙ ５ ２ ２
恩替 卡韦 （ｎ ｃｖ ） 由百 时 美 施 贵 宝公 司 自主 研 发 的 一 种 ｅｔ ａｉ 是 ｅ ｒ 鸟 嘌 呤 核 苷 类 药 物 ， 用 于 病 毒 复 制 活 跃 、 清 转 氨 酶 （ ｌ 或 适 血 ＡＪ ｒ ｒ Ａ Ｔ 持 续 升 高 或肝 脏 组 织学 显示 有 活 动 性 病 变 的 慢 性 成 人 乙 型 Ｓ） 病毒 性肝炎 的治疗 ， ２０ 于 ０ ５年 在 美 国 上 市 ， 型 有 片 剂 和 口服 剂
１０ ０ ，０５ ３ ； ０ ５ ２ １０ ０ ） 甲醇 、 乙腈（ 色谱纯 ） 。
正相高效液相色谱法法测定恩替卡韦原料的对映异构体
ｓ ｔ ａ ｂｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ａ ｔ ｉ ｓ ｆ ａ ｃ ｔ ｏｒ ｙ ｗｉ ｔ ｈ ａ ｌ ｌ ＲＳ ＤＳ ｂｅ ｌ ｏ ｗ ２ ％ ．Ｃｏｎ ｃ ｌ ｕｓ ｉ ｏ ｎ Ｔｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈｏｄ ｉ ｓ ａ ｎ ａ ｃ ｃ ｕｒ ａ ｔ ｅ ， ｆ ａ ｓ ｔ ａ ｎｄ ｓ ｉ ｍｐ ｌ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈｅ ｅ ｎ ａ ｎｔ ｉ ｏｍｅ ｒ ｓ ｏ ｆ Ｅｎｔ ｅ－
ＲＡＬ Ｐ ＡＫ ＡＤ— Ｈ，ｗｉ ｔ ｈ Ｈｅ ｘ ａ ｎ ｅ—Ｉ ｓ ｏ ｐ ｒ ｏ ｐ ａ ｎ ｏ ｌ — ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ｏ ｌ —ｔ ｒ ｉ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ａ ｃ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ（ ７ ０ ： １ ０ ： ： ３ ０ ： ０ ． ５ ）ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｆ ｌ ｏ ｗ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ０ ． ８ ｍｌ ？ ｍｉ ｎ －１
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高效液相色谱法测定恩替卡韦分散片剂含量
高效液相色谱法测定恩替卡韦分散片剂含量摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC），用于恩替卡韦分散片中恩替卡韦含量的测定。
方法：色谱柱选用安捷伦C18，流动相为“甲醇-0.1%甲酸的超纯水”，检测波长为254nm，进样量为10μL。
结果：恩替卡韦在1～10μg/mL浓度范围内，线性良好，其回归方程为A=25.90c+2.31（r=0.999）。
5个批次样品中恩替卡韦平均标示含量为99.20%。
结论：本方法简便、准确，可用于恩替卡韦分散片中恩替卡韦含量测定。
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）12-0327-01Determination of entecavir in entecavir dispersible tablet by HPLC【Abstract】 Objective: To develop an HPLC method for the determination of entecavir in entecavir dispersible tablet. Methods:Detemiantion was performed on Agilent C18 column. Mobile phase consisted of methanol and ultrapure water (0.1% formic acid). The wavelength was 252 nm and 10 μL of sample was injected to HPLC analysis. Results: The linear range of entecavir was 1～10 μg/mL and its equation wasY=25.90c+2.31（r=0.999）. The averaged labeling amounts of main components of 5 batches of samples were 99.20%. Conclusions: The method is simple, rapid and accurate. It can be used for the determination of entecavir in entecavir dispersible tablet.恩替卡韦是由美国百时美施贵宝公司研制开发的一种核苷类似物，临床上用于慢性乙肝的治疗，于2005年在中国批准上市。
高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰的手性杂质
高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰的手性杂质刘津爱;朱梅【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)007【摘要】目的建立检测草酸艾司西酞普兰手性杂质的高效液相色谱法.方法采用α1-酸性糖蛋白键合硅胶为填料的手性柱,流动相为含10 mmol/L正己酸和3.0 mmol/L的3-(N,N-二甲基十二烷基铵)丙烷磺酸盐的磷酸盐缓冲液(pH=6.5),流速0.9 mL/min,检测波长240哪,柱温25℃.结果草酸艾司西酞普兰S-对映异构体和R-对映异构体的分离度为2.41.结论高效液相色谱法灵敏度高,快速准确.%Objective To establish an RP- HPLC method for determination of the chiral impurity in escitalopram. Methods A Chiral-AGP column( 100 mm ×4.0 mm,5 μm) was used,the mobile phase was composed of pH =6. 5 phosphate buffer solution (10 mmol/L hexylic acid and 3.0 mmol/L N - dodecyl - N, N - dimethyl - 3 - ammonio - 1 - propanesulfonate) and detective wavelength was 240 nm, column temperature was 25 ℃. Results Under the optimized chromatographic conditions, the chromatographic resolution between S- enantiomers and Renantiomers was 2. 41. Conclusion This rapid,simple and accurate HPLC method is useful for quality control of escitalopram.【总页数】2页(P18-19)【作者】刘津爱;朱梅【作者单位】中国医药研究开发中心有限公司,北京,102206;中国医药研究开发中心有限公司,北京,102206【正文语种】中文【中图分类】R927.11;R971+.43【相关文献】1.手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量 [J], 王文娜;邓桂凤;张玲娣;姚彤炜2.手性高效液相色谱法测定恩替卡韦中对映异构体杂质 [J], 欧阳婷;杨小玲;麦曦;马惠玲;程帆;罗恒真;刘阳;刘斌3.手性高效液相色谱法测定虫酰肼原药中的异构体杂质 [J], 魏泱;蔡玉梅;秦虓4.高效液相色谱法测定抑郁患者血浆中草酸艾司西酞普兰的浓度 [J], 朱金芳;欧灿纯;陈兆霓;刘滔滔5.高效液相色谱法测定盐酸普拉克索的手性杂质 [J], 朱梅;李善茂因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恩替卡韦 测定 标准-概述说明以及解释
恩替卡韦测定标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述恩替卡韦（entecavir）是一种广泛应用于临床治疗乙型肝炎病毒（HBV）感染的药物。
它属于核苷类反转录酶抑制剂，通过抑制乙型肝炎病毒的DNA合成过程来抑制病毒的复制和传播。
自恩替卡韦问世以来，它已被证明是一种有效的治疗乙型肝炎的药物，被广泛应用于临床实践中。
与其他抗病毒药物相比，恩替卡韦具有较强的抗病毒活性和较低的毒副作用，受到医生和患者的广泛赞誉。
为了确保恩替卡韦的治疗效果和安全性，准确测定其含量就显得尤为重要。
恩替卡韦的测定方法可以通过不同的技术手段实现，例如高效液相色谱法、气相色谱法和质谱法等。
这些方法具有快速、准确、灵敏度高的特点，能够在不同样本中准确测定恩替卡韦的含量。
为了统一恩替卡韦的测定标准，相关标准化组织制定了一系列的标准。
这些标准规定了恩替卡韦的纯度、含量检测方法的准确性、测定范围以及其他相关参数。
严格按照标准进行恩替卡韦的测定，能够保证结果的准确性和可靠性，为医生的药物治疗提供良好的依据。
在临床实践中，恩替卡韦的重要性不言而喻。
它能够有效地抑制病毒的复制，减轻乙型肝炎患者的症状和疾病进展，提高患者的生活质量。
同时，准确测定恩替卡韦的含量能够确保患者在治疗过程中得到适当的药物剂量，从而提高治疗效果。
总而言之，恩替卡韦作为治疗乙型肝炎的重要药物，其测定方法和标准的制定对于保证治疗质量和安全性至关重要。
恩替卡韦的准确测定能够为医生提供合理的药物治疗方案，并为乙型肝炎患者的康复带来希望。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容:文章结构部分旨在提供读者对整篇文章的组织和内容安排的概览。
本文将按照以下结构进行叙述和讨论恩替卡韦的测定方法和标准。
首先，引言部分将对恩替卡韦进行概述，介绍其背景和基本信息。
随后，给出文章结构的说明，即对各个章节的内容进行简要介绍，为读者提供一个整体的框架。
接着，正文部分将详细讨论恩替卡韦的作用、测定方法以及标准。
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手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量王文娜 邓桂凤 张玲娣 姚彤炜3(浙江大学药学院药物分析和药物代谢研究室,杭州310031)摘 要 采用Chiral pak AD 2H 手性柱(250mm ×416mm,5μm ),建立了正相高效液相色谱(NP 2HP LC )法直接拆分恩替卡韦与其光学异构体的方法。
考察了流动相组成、酸碱性对柱效、分离度、保留时间等参数的影响。
经优化,以正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(70∶12∶18∶0105∶0105,V /V )为流动相,流速015mL /m in;检测波长261n m 。
在此条件下,恩替卡韦与光学异构体分离度>412;光学异构体的检出限为0112mg/L ,在0125～410mg/L 浓度范围内有良好的线性关系;日内与日间精密度RS D <410%;按标准加入法计算,加样回收率在8710%～10018%之间;RS D <310%;按外标法计算,加样回收率在9812%～11014%之间;RS D <310%。
本方法可作为恩替卡韦原料药中光学异构体杂质限量的控制方法。
关键词 恩替卡韦,光学异构体,高效液相色谱法,手性拆分 2008212229收稿;2009204229接受3E 2mail:rethe m@1 引 言慢性乙肝病毒感染一直是全球公共卫生的难题,开发抗乙肝病毒药物也一直是个热点。
目前,我国临床上应用的抗病毒治疗药物主要有两类:α2干扰素和核苷或核苷酸类似物,主要包括拉米夫定、阿德福韦和阿昔洛韦[1,2]。
2005年3月美国F DA 批准了新一代抗HBV 核苷类似物恩替卡韦(entecavir, 图1 恩替卡韦及其光学异构体的化学结构Fig .1 Structures of entecavir and its op tical is omerET V,商品名Baraclude )上市[3]。
恩替卡韦是一种鸟嘌呤核苷类似物(图1),在磷酸激酶的作用下在体内形成活性三磷酸化合物,拮抗HBV 所需天然底物脱氧鸟苷三磷(dGTP ),抑制HBV 2DNA 聚合酶和逆转录酶,阻断HBV 复制。
细胞内作用半衰期为15h,在人体内不被肝细胞代谢,主要从肾脏排出体外。
同时,其耐药性好,可有效治疗慢性乙型肝炎,临床应用前景良好[4,5]。
由于手性药物在合成过程中可能引入光学异构体杂质,故采用手性分离方法检查合成产品中光学异构体含量。
恩替卡韦及其光学异构体手性分离方法未见报道。
本研究采用直接手性HP LC 法拆分两光学异构体,建立恩替卡韦中光学异构体杂质限量检查方法。
2 实验部分211 仪器、试剂及材料LC 210A 型高效液相色谱仪、SP D 210A 型紫外可见光检测器(日本岛津公司);Chiral pak AD 2H 手性柱(250mm ×416mm ,5μm ,日本D iacel 公司)。
乙醇(TE D I A )、正己烷(Burdick &Jacks on )及异丙醇(TE D I A )均为色谱纯;三氟乙酸(国药集团化学试剂有限公司);三乙胺(分析纯,上海化学试剂采购供应五联化工厂);恩替卡韦及其光学异构体(99187%,浙江医药股份有限公司新昌制药厂)。
212 色谱条件色谱柱:Chiral pakAD 2H 手性柱;流动相:正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(70∶12∶18∶0105∶0105,V /V );流速015mL /m in;检测波长261nm;柱温:室温;灵敏度:01005AUFS;进样量20μL 。
第37卷2009年8月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究简报Chinese Journal of Analytical Chem istry 第8期1206～1210213 溶液制备21311 恩替卡韦供试液及自身对照液的制备 准确称取适量恩替卡韦于50mL 容量瓶中,加乙醇超声溶解,定容,作为储备液(500mg/L )。
准确移取储备液2mL 于10mL 容量瓶中,加正己烷2异丙醇(50∶50,V /V )混合溶液(以下简称混合稀释液)定容,得恩替卡韦的供试品溶液(100mg/L )。
取适量供试品溶液,用混合稀释液稀释100倍作为自身对照溶液。
21312 光学异构体对照品溶液的制备 准确称取适量异构体于100mL 容量瓶中,加乙醇超声溶解,定容,作为异构体的储备液(50mg/L )。
准确移取储备液2mL 于10mL 容量瓶中,加混合稀释液定容,作为异构体的对照品溶液(10mg/L )。
21313 恩替卡韦与异构体混合溶液的制备 取2mL 恩替卡韦供试品溶液和4mL 异构体的储备液于10mL 容量瓶中,加混合稀释液定容,即得浓度各为20mg/L 的混合溶液。
3 结果与讨论311 不同极性调节剂对保留时间、柱效和分离度的影响由表1可见,当流动相为正己烷和异丙醇时,调节比例,样品和异构体未达基线分离。
加入三氟乙酸,保留时间随着三氟乙酸的增加有所减少,仍未达基线分离,但峰型好。
加入三乙胺,两者未分开,但能使异构体的保留时间缩短。
再改变正己烷和异丙醇比例,两者分离,但是分离度仅为1118,理论塔表1 流动相的优化Table 1 Op ti m izati on of mobile phases流动相Mobile phase组成Compositi on (V /V )分离度Res oluti on保留时间Retenti on ti m e (m in )t R1t R2理论塔板数Theoretical p lateN 1N 2正己烷2异丙醇N 2Hexane ∶is op r opyl alcohol 60∶40<11336174770∶30<119722787正己烷2异丙醇2三氟乙酸N 2Hexane ∶is op r opyl alcohol ∶trifluor oacetic acid60∶40∶0105<11227155860∶40∶011<11114113174正己烷2异丙醇2三氟乙酸2三乙胺N 2Hexane ∶is op r opyl alcohol ∶trifluor oacetic acid ∶triethyla m ine 60∶40∶011∶0105<1815680∶20∶011∶010511182213627106589639正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺N 2Hexane ∶is op r opyl alcohol ∶ethanol ∶trifluor oacetic acid ∶triethyla m ine80∶15∶5∶011∶010521182911938194107782675∶15∶10∶011∶0105218123194311821768145270∶18∶12∶011∶0105119416156201201701141270∶15∶15∶011∶0105218018157241042045178370∶12∶18∶011∶01053175211632917423062198板数都小于650。
在流动相中加入乙醇后发现流动相中的乙醇含量明显影响保留时间、分离效果和理论塔板数。
乙醇含量越高,理论板数越大。
同时乙醇和异丙醇的比例也明显影响分离效果,乙醇比例增高,分离度和理论板数提高,保留时间也增加。
当流动相为正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(70∶12∶18∶011∶0105,V /V )时,分离效果理想(图2C )。
312 酸碱性对柱效、分离度和保留时间的影响31211 三乙胺的影响 固定流动相中正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸(70∶12∶18∶011,V /V )的比例,改变三乙胺用量,考察三乙胺含量对样品和光学异构体柱效、分离度和保留时间的影响。
由表2可知,随着三乙胺含量增加,理论板数和分离度逐渐提高,保留时间稍有缩短。
当流动相中三乙胺比例为0105%和011%时,理论板数、分离度和保留时间基本一致。
考虑到碱性大对手性柱的损害大,故选择三乙胺用量为0105%。
31212 三氟乙酸的影响 固定流动相中正己烷2异丙醇2乙醇2三乙胺(70∶12∶18∶0105,V /V )的比例,改变三氟乙酸用量,考察三氟乙酸含量对样品和光学异构体柱效、分离度和保留时间的影响。
由表2可知,随着三氟乙酸含量的增加,分离度逐渐降低,但均大于315。
保留时间逐渐变小,理论板数变化不明显。
综合考虑选择三氟乙酸含量为0105%。
7021第8期王文娜等:手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量图2 流动相对恩替卡韦及其光学异构体分离的影响Fig .2 Chr omat ogra m s of m ixture of entecavir and its op tical is omer in different mobile phaseA.正己烷2异丙醇2三氟乙酸(N 2hexane:is op r opyl alcohol:trifluor oacetic acid )(60∶40∶0105,V /V );B.正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(N 2hexane:is op r opyl alcohol:ethanol:trifluor oacetic acid )triethyla m ine (TEA )(75∶20∶5∶011∶0105,V /V );C .正己烷2异丙醇2乙醇2三氟乙酸2三乙胺(N 2hexane:is op r opyl alcohol:ethanol:trifluor oacetic acid:TE A )(70∶12∶18∶011∶0105,V /V )。
表2 流动相中三乙胺和三氟乙酸含量对恩替卡韦光学异构体拆分的影响Table 2 I nfluence of TE A in mobile phase on chiral separati on of entecavir试剂Reagent含量(%)Concentrati on分离度Res oluti on 保留时间Retenti on ti m e (m in )t R1t R2理论塔板数Theoretical p latesN 1N 2三乙胺TEA0210926113341639078690102531292015327178200718420105317521163291742306219801103183211062914322222054三氟乙酸Trifluor oacetic acid041642410635156231622960102541492213932154240323200105412922102311482316229601103175211632917423062198313 系统适用性、检出限和线性关系取配制的恩替卡韦与异构体的混合溶液,连续进样5次,记录峰面积,得恩替卡韦峰面积RS D 为213%,光学异构体RS D 为311%;分离度为413;恩替卡韦的保留时间约为21～23m in;光学异构体的保留时间约为30～33m in 。