高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用
高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用
摘要：外消旋化合物的手性分离是获得单一对映体的方法之一。随着人们对纯光学药物的需求日益增加，各种手性分离技术得以快速发展。近几十年来，在这些手性分离技术中，高效液相色谱法 ( HPLC ) 被公认为是一种强大、快速、高效的分离技术，它已成功应用于对映体药物的分离分析和制备中。HPLC用于对手性药物分离的研究已取得很大进展，并且研发了大量可应用于手性小分子和聚合物分离的手性固定相，大大提高HPLC的手性识别能力。本文以HPLC的手性药物分离为焦点，介绍了近几年高效液相色谱法手性固定相的新发展和应用。
关键词：高效液相色谱法 手性药物 手性拆分
- 1 - Application of High Performance Liquid Chromatography
in Chiral Separation of Pharmaceuticals
Abstract：Resolution of racemic compounds is one of the potential ways of obtaining
both enantiomers. The increasing demand for enantiopure drugs has led to the
development of a variety of stereoselective separation technologies. Among several
resolution techniques in the past few decades, high performance liquid
chromatography ( HPLC ) is well recognized as a powerful, fast and efficient
technique, which has been successfully employed for analysis and preparation of
enantiomers of drugs. Enantioseparation by HPLC has significantly advanced, and a
large number of chiral stationary phases ( CSPs ) for HPLC have been developed
using both chiral small molecules and polymers with chiral recognition abilities. This
review focuses on various HPLC methods for chiral separation of pharmaceuticals,
many new developments and applications are introduced in chiral stationary phase of
HPLC in recent years.
Keywords：HPLC; Chiral drug; Chiral separation;
- 2 - 引 言
手性药物是指药物分子结构中引入手性中心后，得到的一对互为实物与镜像的对映异构体，是目前药物研究领域的热点之一。这些对映异构体的理化性质基本相似，仅仅是旋光性有所差别。而手性在自然界中是普遍存在的，并且人体本身就是一个手性环境，比如蛋白质、多糖、核酸和酶等大都是手性的。绝大多数的药物由手性分子构成。虽然它们的理化性质相似，但在生物体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异。由于酶、受体、载体等分子都是具有手性特征的物质,手性药物的不同对映体在生物体内的吸收、转运、分布、代谢、排泄等存在显著的差异，甚至能够产生意想不到的毒性作用[1, 2]。因此，往往两种异构体中仅有一种是有效的，另一种无效甚至有害。比如，(S) -构型多巴为治疗帕金森综合症的首选药物，而(R) -构型能造成粒状白细胞减少症，使用极度危险；著名的“反应停事件”，R-反应停具有镇静作用，而S-反应停则对胎儿有致畸作用。
手性制药是医药行业的前沿领域，2001年诺贝尔化学奖就授予分子手性催化的主要贡献者。不同手性药物在体内发挥的作应不同，一种可能是高效低度的，而另一种可能有毒害作用。手性制药就是利用化合物的这种原理，开发出药效高、副作用小、药物的专一性高的药物。据调查，1985 - 2004年上市的550个新化学合成药物中，有313个药物具有手性中心，其中以单一异构体上市的手性药物为167个，手性药物数量呈逐年上升趋势；2005年世界药物的销售总额为6020亿美元，而手性药物的销售总额为2250亿美元，占全球制药市场销售总额的37 %，2010年可望超过5000亿美元[3, 4]。
一般情况下获得手性化合物有以下几种方法：天然物的提取、生物合成、外消旋体拆分、不对称合成等方法[5]。外消旋体拆分主要有：经典结晶法拆分、动态动力学拆分、色谱法拆分、膜拆分法、萃取拆分法等技术[6, 7]。本文重点介绍色谱法中HPLC在手性药物拆分中的应用。
1 高效液相色谱法简介
高效液相色谱法( High Performance Liquid Chromatography , HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”等。HPLC是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分
- 3 - 被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分
高效液相色谱的发展始于20世纪60年代中后期。60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划、蛋白质组学用HPLC做预分离等。现在该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
高效液相色谱法有如下特点：(1)
高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。(2)
高效：分离效能高，可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。(3)
高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。(4)
应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。(5) 分析速度快、载液流速快：通常分析一个样品在15 - 30分钟。此外，高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
2 高效液相色谱的手性拆分方法
高效液相色谱技术在手性药物拆分中应用最广泛的方法之一，在手性药物质量控制、立体选择性的药理学和毒理学研究等方面起着极其重要的作用。HPLC对药物对映体的分离方法主要分间接法和直接法。
2.1 间接拆分法
间接法又称衍生化法，是手性化合物对映体在分离之前把手性药物对映体混合物在预处理液中进行柱前衍生化，形成一对非对映异构体，溶质分子与固定相和流动相之间作用力不同，发生差速迁移，对映体分子实现分离。常用的手性衍
- 4 - 生化试剂主要有：酰化试剂、胺类试剂、氯甲酸酯类和邻苯二醛等。
如Bhushan R等[8]合成琥珀- (S) -萘普生酯，并用它做衍生化试剂处理DL -青霉胺对映体，采用反相高效液相色谱法进行分离，分离效果很好。Peccinini RG等[9]使用C18柱，(-) -氯甲酸薄荷酯作为衍生试剂处理血浆和尿液中的卡维地洛，用氯仿提取，用荧光检测器检测，对映体分离较好。该方法可应用于对映选择性的药代动力学研究。Bhushan R等[10]考察了二氯- S -三嗪和一氯- S -三嗪作为氨基酸的衍生化试剂，产生的对非对映体用反相C18柱分离，流动相为乙腈和三氟乙酸水溶液的混合物，实验结果说明，这两种试剂可以安全地用于氨基酸的手性分析药物分离。手性试剂衍生化法多用非手性柱即可分离，但是需要较高纯度的衍生试剂，衍生化反应要严格控制，对不同的药物要寻找相应的衍生化试剂，且操作比较麻烦，只可在小范围内应用。在HPLC中，直接法应用较多，手性添加剂和手性固定相种类多样。
2.2 直接法
2.2.1 手性流动相添加剂法
手性流动相添加剂法是在流动相中加入手性添加剂，然后利用非手性固定相进行拆分。常用的手性流动相添加剂有：手性离子对、CD、冠醚、手性金属配合物、动态手性固定相等。最常用的添加剂为环糊精。如郭娜等[11]采用 C18固定相，以羟丙基- β -环糊精为手性流动相添加剂，建立了奥昔布宁对映体的高效液相色谱拆分方法。该法拆分奥昔布宁对映体，方法简单，灵敏度高，分离度好。刘学斌等[12]建立拆分新药尤利沙星对映异构体的 HPLC手性流动相添加剂法。本文利用尤利沙星对映体与手性添加剂L -异亮氨酸和 Cu2+ 间形成三元非对映体配位化合物，在较短时间内能达到理想的分离效果。
2.2.2 手性固定相法
目前认为手性固定相法是非常简单而有效的方法，应用也最为广泛，可分离的手性药物多。手性固定相法是将手性试剂化学键合到固定相上制成手性柱，外消旋体中的一个手性物质与手性固定相发生作用，生成不稳定的短暂复合物，而两者在固定相中的保留时间不同，从而达到分离的目的。CSP法发展异常迅速，手性固定相的种类大致有以下几类：手性聚合物类、刷型手性固定相、蛋白质类、大环抗生素类、分子印迹聚合物、冠醚类、多糖类和环糊精类等[13]。本文对几
手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展
论 一 健康必读杂志２０１０年９月 第９期Ｈｅａｌｔｈｍｕｓｔ—ｒｅａｄ Ｍａｇａｚｉｎｅ ２０１０ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ Ｎｏ１．９．；， ‘’’‘… ‘’ ‘…‘。’。‘’’’…’。’。‘’。‘ 。‘ ‘’。’‘‘‘。‘ ‘ 。－・－－・・・・・・・・・－・・・・－・・・・・・・・・－・・－－・・・・・・・・・・－・・・・・・・・・・・－－・－－ －－・・－・－・・・・・・・－・・…・・－－・－…・ 自 ‘ ’ ‘‘ ‘‘‘‘‘‘・ ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・－・・－・・・・・・・・・・・・・・・・－・・・・・・・－・・・・・・・・・・・・・・・…－・・・・・・・－・・・．．・．－．．．．．．－ 手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展 李亚捷 【中图分类号】Ｒ９８【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２—３７８３（２０１０）０９—００１２－０２ 【摘要］自然界很多药物是手性药物，手性药物的开发已成为制药领域的必然趋势，其分析测定方法也得到快速发展。高效液相 色谱法作为经典实用的分析测定方法，得到了广泛的运用。本文综合国内外文献，综述了手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展， 为手性药物的含量测定和生物分析提供思路。 ． 【关键词］手性药物；高效液相色谱法；拆分 手性是自然界的本质属性之一，作为生命活动重要基础的 生物大分子和许多作用于受体的活性物质均具有手性特征。对 手性药物而言，两个对映体并非具有相同的药效。１９９２年初美 国食品与药物管理局作出一项规定：所有在美国申请上市的外 消旋体新药，生产者均需要提供报告说明所含对映体各自的药 理作用。手性药物的分析有很多方法，高效液相色谱法作为经 典实甩的分析测定方法，得到了广泛的运用。本文综述了手性 药物高效液相色谱拆分方法研究进展，为手性药物的含量测定 和生物分析提供思路。 ＨＰＬＣ分离药物对映体可分为间接法和直接法，前者又称为 手性试剂衍生化（ＣＤＲ）法，后者可分为手性流动相添加剂（ＣＭＰＡ） 法和手性固定相（ＣＳＰ）法。ＣＤＲ法是将不对称中心引入分子内， 而ＣＭＰＡ法和ＣＳＰ法则是将不对称中心引入分子间 １．ＣＤＲ法 ＣＤＲ法是将药物对映体先与高光学纯度衍生化试￣／ＩＪ（ＣＤＲ１ 反应形成非对映异构体，再进行色谱分离测定，适用于不宜直 接拆分的样品。该法的优点是衍生化后可用通用的非手性柱分 离，无需使用价格昂贵的手性柱，而且可选择衍生化试剂引入 发色团提高检测灵敏度。金银秀等【１］采用手性衍生化试剂ＧＩＴＣ 对美西律进行柱前手性衍生化，建立了美西律对映体在人血清 白蛋白中的测定方法。 ２ ＣＭＰＡ法 ＣＭＰＡ法是将手性选择剂添加到流动相中，利用手性选择 剂与药物消旋体中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与 结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。此法的优 点在于：不需对样品进行衍生化，可采用普通的色谱柱，手性 添加剂可流出，也可更换，同时添加物的可变范围较宽，使用 比较方便。目前常用的手性流动相添加剂有：环糊精（ＣＤ）及其 衍生物、配位基手性选择剂、手性离子对添加剂、蛋白质、大 分子抗生素。 ２．１配体交换型手性添加剂 此类添加剂多为氨基酸及其衍生物与二价金属离子铜、锌、 镍等结合，以适当浓度分布于流动相中，然后外消旋体共同形 成非对映的配位络合物进行拆分。 ２．２环糊精添加剂 常用的环糊精主要为１３．ＣＤ，Ｂ．ＣＤ络合的化学计量关系通 常为ｌ：１，但是其它比例也存在，在添加ＣＤ的ＲＰ色谱中，存 在两个平衡流动相中游离溶质和ＣＤ络合物在固定相上的吸附 平衡，其影响因素包括有机溶剂的用量及酸度等。如杨青等［２】 以Ｃ１８为分析柱，将Ｂ—ＣＤ、２，６．二甲基§一ＣＤ、２，３，６一三甲基Ｂ —ＣＤ分别作为手性流动相添加剂，系统地研究了酮基布洛芬对 映体在ＨＰＬＣ系统中的拆分。 ２－３手性离子对添加剂 一１２一 此方法为对映体与手性离子对试剂形成非对映离子对，利 用其在固定相和流动相之间不同的分配比来分离，手性离子对 必须具有３点作用模式。 ３．ＣＳＰ法 手性固定相（ＣＳＰ）是由具有光学活性的单体固定在硅胶或 其它聚合物上制成的，在拆分中ＣＳＰ直接与对映体相互作用， 而其中一个生成具有不稳定的短暂的对映体复合物，造成在色 谱柱内保留时间的不同，从而达到分离的目的。 ３．１吸附型手性固定相 这种固定相主要是利用对映体在手性固定相上吸附与解吸 附能力的不同而进行分离。可分为天然高分子手性固定相、合 成高分子手性固定相、氨基酸型手性键合固定相等。 ３．１．１天然高分子手性固定相 这种固定相主要有蛋白质类、环糊精类、多糖及其衍生物 类、冠醚等。其中，以环糊精类目前应用较多，同时ＣＤ分子 上的手性中心也能选择性地与对映体作用。目前，以１３．ＣＤ应 用最多。不同的环糊精的空腔大小不同，ｎ．ＣＤ适于分离小分 子药物对映体，ｙ．ＣＤ适于分离大分子药物，Ｂ．ＣＤ对形成包 合物有最佳大小的空腔，适用于大多数对映体的位阻和电子特 征，如酮咯酸氨丁三醇盐对映体，佐匹克隆对映体，萘普生乙 酯对映体的分离【３】。冠醚具有亲水性内腔和亲脂性外壳，可键 合在硅胶或聚苯乙烯基质上制成手性固定相。根据主一客化学 原理，用于含有能够质子化的伯胺功能团的药物对映体的分离， 方骏［４】等人利用冠醚手性柱，用ＨＰＬＣ法分离了苯甘氨酸等十 种伯胺类药物。将（＋）．１８ 冠醚．６．２，３，１１，１２一四羧酸键合至氨基丙 基硅胶上作手性固定相，不仅可以分离具有伯氨基的药物对映 体，如肌肉松弛药物氟喹酮、抗疟药伯氟喹等。 ３．１．２合成高分子固定相 主要包括聚丙烯酞胺、聚甲基丙烯酸醋等含光学活性中心 的高分子物质。运用较多的是交联聚酞胺，其分离机理一般认 为是对映体与高分子聚合物本身的手性空间结合，同时还受到 聚合物分子量，溶剂ｐＨ值等因素的影响。 ３．１＿３氨基酸型手性固定相 该固定相是以硅胶为起始原料，硅烷化成梭基型键合物， 最后与有光学活性的氨基酸反应制得。其机理是对映体与固定 相的氢键形成不同的非对映体络合物而分离。适于分离ａ一氨基 酸衍生物、ａ一氨基烃基磷酸衍生物、二肽等，缺点是价格较贵。 ３．２配体交换型固定相 该固定相是以某种聚合物，如交联的氯甲基苯乙烯与手性 氨基酸结合而成，同时，还需过渡金属离子的参与，如Ｃｕ２＋ 等。被拆分物质通过金属络合物与固定相上的配位基发生配体 交换，络合在固定相上。由于这种络合是可逆的，因此这种方 法的分离效果较好，一般用来分离各种氨基酸。
手性药物拆分的研究进展
沈阳药科大学 药物分析专论
1 手性药物拆分的研究进展
许多药物具有光学活性(opitical activeity)。一般显示光学活性的药物分子，其立体结构必定是手性(chirality)的，即具有不对称性。手性是指其分子立体结构和它的镜像彼此不能重合。互为镜像关系而又不能重合的一对分子结构称为对映体(enantiomer)。虽然对映异构体药物的理化性质基本相同，但由于药物分子所作用的受体或靶位是由氨基酸、核苷、膜等组成的手性蛋白质和核酸大分子等，后者对与之结合的药物分子的空间立体构型有一定的要求。因此，对映异构体在动物体内往往呈现出药效学和药动学方面的差异。鉴于此，美国食品药品监督管理局规定，今后研制具有不对称中心的药物，必须给出手性拆分结果，欧盟也提出了相应的要求。因此，手性拆分已成为药理学研究和制药工业迫切需要解决的问题。
目前，利用酶法、超临界流体色谱(SFC)法、化学法、高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法、毛细管电泳(capillary electrophoreisis，CE)法和分子烙印法拆分对映体，已成为新药研究和分析化学领域的重要课题。笔者在本文综述了近年来利用上述方法拆分手性药物的研究进展。
1酶法
酶的活性中心是一个不对称结构，这种结构有利于识别消旋体。在一定条件下，酶只能催化消旋体中的一个对映体发生反应而成为不同的化合物，从而使两个对映体分开。该法拆分手性药物已有较久的历史，反应产物的对映过剩百分率可达100％。酶催化的反应大多在温和的条件下进行，温度通常在0～50℃，pH值接近7.0。由于酶无毒、易降解、不会造成环境污染，适于大规模生产。酶固定化技术、多相反应器等新技术的日趋成熟，大大促进了酶拆分技术的发展。脂肪酶、酯酶、蛋白酶、转氨酶等多种酶已用于外消旋体的拆分。脂肪酶是最早用于手性药物拆分的一类酶，是一类特殊的酯键水解酶，具有高度的选择性和立体专一性，反应条件温和，副反应少，适用于催化非水相递质中的化学反应，在B一受体阻滞药、非甾体类抗炎药和其他多种药物的手性拆分中都有广泛的应用。意大利的Batlistel等用固定于载体Amberlite AD-7上的脂肪酶对萘普生的乙氧基乙酯进行酶法水解拆分，对温度、底物浓度和产物抑制等进行了研究，最后使用500 mL的柱式反应器，在连续进行了1200h的反应后，得到了l8kg的光学纯S-萘普生，且酶活性几乎无损失。另外，酯酶具有很高的工业价值，其应用前景也极为广阔。Jiaxin等利用pseudomaonas cepacia脂肪酶拆分了一类酰基取代的1．环己烯衍生物，通过酶催化酯交换反应，得到产率较高的光学纯化合物，且提供了反应过程监测方法。这种方法可推广到该类化合物系列衍生物的合成与拆分。
手性高效液相色谱法
第 1 页 共 3 页 手性高效液相色谱法
手性药物对映体在人体内与受体、酶等生物大分子互相作用，展现出复杂的对映体挑选性，进一步表现为不同的药理作用、代谢过程和毒性反应。对于手性药物，可能其中一个对映体活性高、疗效好，为活性对映体(优对映体)；另外的活性低甚至没有活性的为劣对映体。因为劣对映体没有药效或药效较低，甚至可能产生严峻的不良反应，基于此，FDA于1992年领先发布了手性药物指导原则，我国亦于2006年颁布了《手性药物质量控制讨论指导原则》。为了评价手性药物的生物活性，监测对映体的光学纯度，建立和进展迅速精确 的药物对映体分别办法具有重要的意义。 手性高效液相色谱法通常分为挺直法和间接法。间接法又称手性衍生化试剂法(chiral derivatization reagent, CDR)，是将对映体与手性光学试剂反应，生成一对非对映异构体之后以常规固定相分别，因此是对手性衍生物的非手性分别。而挺直法则是采纳手性固定相法(chiral stationary phase, CSP)或将手性化合物加入到流淌相中，再用常规固定相分别的手性流淌相法(chiral mobile phase,
CMP)。手性固定相法因其用法简便快捷、重复性好、精确 度高、应用范围广而倍受青睐。 一、手性色谱柱的分类 目前，已商品化的手性固定相有100多种，按照手性固定相和溶剂的互相作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系： 第1类：通过氢键、π-π作用、偶极-偶极作用形成复合物； 第2类：既有1类中的互相作用，又存在包埋复合物。此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱； 第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。这类手性色谱柱中最典型的是环糊精型手性柱，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚(苯基甲基甲基丙烯酸酯)形成的手性色谱柱也属于此类； 第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankv 开发的手性分别技术，也称为．手性配位交换色谱(CLEC)；
浅谈色谱技术在手性药物拆分工业中的应用
２００７年７月刊 （总第９５期） 大众科技 ＤＡＺＨＯＮＧ ＫＥ Ｊ ２００７．７ （Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｌｙ Ｎｏ．９５）
浅谈色谱技术在手性药物拆分工业中的应用
李燕’，何彬 （１．桂林医学院，广西桂林５４１００４；２．四川大学华西药学院， 四川 成都６１００４１） 【摘要】以国内外大量有代知陆的论文为依据，将近年来应用于手性药物拆分的色谱技术进行了整理、概括，着重比较它们 在制备期模上的优缺点。尽管各种色谱拆分技术在手性药物的拆分上已有应用，但就工业制备上，ＨＰＬＣ、ＳＭＢ、ＳＦＣ最有前景。 【关键词】手性药物；拆分；色谱技术 【中图分类号】Ｒ９ 【文献标识码】Ｂ 【文章编号】１００８—１１５１（２００７）Ｏ７一Ｏ１２６一Ｏ２
手性是自然界的本质属性之一。生命体系就是一个手性 环境，生物体的基本组成成分蛋白质、多糖、核酸、酶等几 乎都是手性的。２０世纪６０年代震惊世人的沙利度胺事件证实 了手性药物的不同对映体间往往显示出不同的药理学、毒理 学及药代动力学性质。为了保证用药安全，美国ＦＤＡ１９９２年 发布了手性药物指导原则，要求所有在美国上市的消旋体新 药的生产者均需提供有关报告，说明药物中所含对映体的各 自药理作用、毒性和临床效果。据相关统计数据，２００２年全 球５００种畅销药物中手性化学品药物有２８９种。专家预测， ２０１０年世界手性化学品药物总销售额可望超过２５００亿美元。 手性化合物的获得一般可以通过手性合成和手性拆分两种途 径。手性合成不但步数多，产率不高，至今还未得到广泛的 应用。因此，目前大约６５％非天然对映体药物都是通过手性拆 分的方法制造。手性拆分技术主要包括：结晶法、色谱法、 膜法、手性萃取等。其中色谱法因其快速、高效、成本相对 低等优势而得到广泛的应用。本文综述了几种色谱拆分方法， 侧重比较它们在工业领域中进行生产的优缺点和可能性。 （一）液相色谱（ＬＣ） １．高效液相色谱（ＨＰＬＣ） ＨＰＬＣ在拆分对映体时通常有三种方法：一是利用手性试 剂与被拆分物进行衍生化反应生成非对映异构体，从而可被 传统的非手性ｔｔＰＬＣ所拆分；二是在流动相中加入手性添加剂， 利用非手性固定相ｔｔＰＬＣ进行拆分；三是利用手性固定相 （Ｃｈｉｒａｌ Ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ Ｐｈａｓｅ，简称ＣＳＰ）的ＨＰＬＣ进行拆分。 其中最有效、应用最广的是手性固定相法，据ＣＨＩＲＢＡＳＥ的统 计，到２０００年４月为止，全世界合成手性固定相的公司有 ４４４７９家，ＣＳＰ的种类有１１５７种…。制备拆分固定相主要有多 糖类手性固定相、手性聚合物、基于蛋白质的固定相、尢一酸 和尢一碱固定相、配位体交换手性固定相和冠醚类键合固定相 等。 （１）多糖类手性固定相
高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用
高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用
摘要：在上个世纪的七十年代，高效液相色谱法出现在世界上，并因为其优良的应用效果，促使其在各个行业得到了广泛运用。与此同时在持续的实践和创新过程中，该项技术不断发展和完善，如今已经逐步运用到药品检测的各个领域，并得到了较好的应用效果。高水平的自动化以及较高的灵敏度，预示着该项技术拥有较好的分离效果。通常情况下，高效液相色谱法主要应用到药品检测行业，再加上其技术的功效显著，慢慢变成药品安全监管的重要工具。基于此，笔者在本篇主要针对高效液相色谱法展开相关介绍，并对其在药品检验中的相关运用进行一定的分析和讨论，希望能够为我国药品检验行业尽绵薄之力。
关键词：高效液相色谱法；简介；药品检验；运用
引言：药品检验是医疗行业中重要的组成部分，并且该部分能够应用的手段有很多，其中比较常见的当属高效液相色谱法。该技术早在上个世纪就已经应用在药品检验当中，同时也伴随着医药行业的发展而不断改进和完善，更是获得相关业内人士一致的赞誉和夸奖，在药品检验中也取得优良的效果和成绩。
一、高效液相色谱法的相关简介
高效液相色谱是色谱法的关键组成内容，应用的手段主要依据高压输液泵、色谱柱、进样器以及检测器和馏分收集器来促进对药品相关信息的检测和反应。高效液相色谱的第一次运用能够向上追寻到上个世纪的70年代，在当前发展阶段，该技术已经具备丰富娴熟的应用经验，因此能够在面对各种各样的工作状况时，可以尽快给出相应的解决办法。与传统的的经典液相色谱对比，高效液相色谱既能够实现药品的固定检测，还可以有效细化所检测物质，确保被检测化学物质的精细化管理。除此之外，在高效液相色谱工作的全过程中，可以推进药品检测的自动化顺利开展。借助计算机语言，还能够大大降低可能出现的人力资源的浪费，有效提升检验结果的精准度[1]。与此同时，还可以很好减少人工操作产生的偏差，使检测结论更趋向精确。
高效液相色谱是在经典液相色谱的基本上进一步改善和健全的。与经典液相色谱对比，高效液相色谱具备下列优势：第一，流动性相可以用高压输液泵运输，在进行药品剖析检验中，能够大大缩短时间；次之，应用的颗粒物极细，固定相分离具有较高效率，传质阻抗很小；第三，选用了一些高灵敏的感应器，可以大大增加检测敏感度，并取得了不错的运用。
探讨高效液相色谱法在药品检验中进行检测的应用
探讨高效液相色谱法在药品检验中进行检测的应用
摘要：近年来，随着我国社会经济的快速发展，人们生活水平日益提高，同时也引发了一系列问题，其中抗生素滥用现象尤为突出。随着我国医药行业的快速发展，药品检验工作也随之变得越来越重要，高效液相色谱法在中药检测中应用，不仅可以提高药物质量、减少农药残留量等方面发挥着很大作用。为了有效解决这一严峻形势，国家相关部门开始重视新型农药和化肥残留检测方法研究工作，并投入大量人力物力开展这项技术研究工作。本文对近年来国内外相关研究及文献进行了总结归纳，通过分析目前国内部分制药企业生产现状和存在问题以及分析当前国家新药研发项目进展情况下我国高效液相色谱仪研制的发展趋势与前景，针对性地提出改进现有的检测方法，以期为药品检验提供参考依据。
关键词：高效液相；色谱法；药品检验
引言
药品生产工艺的不断改进发现传统方法存在诸多弊端，如耗费时间长、操作复杂等。近年来我国医药行业发展迅速，为了适应新时代制药企业对新型设备和技术研发创新与改造升级要求，以及提高中药质量安全水平，高效液相色谱法(HPLC)这一具有灵敏度高、选择性好及线性范围广优点的检测方法逐渐显露。本文通过查阅文献和询问指导老师了解了高效液相色谱仪在检验过程中使用时应注意事项及检测方法，比如在药品生产过程中使用高效液相色谱法进行检验时应注意采用先进的技术设备、仪器及人员等，保证实验数据准确可靠并且分析速度快。
1高效液相色谱法介绍
在当今社会，人们对安全问题越来越重视，国家也加大了药品管理力度，为了保证我国人民群众用药安全和健康，可以采取高效液相色谱法、气相色谱仪与气质联用技术相结合的方法进行检测分析，探讨有效利用高效液不相留物或者分离杂质来鉴别出化学试剂中所含物质，通过实验研究分析高效液体纯度在不同样品中对检验结果影响，进而得出效率更高准确率更好地含量测定药品标准值[1]。
高效液相色谱法是一种新型的检验方法，它在药品质量控制、分离和鉴定等方面具有良好应用前景，它可以用于药品中各种组分及含量测定。通过查阅文献资料对高效液相色谱法进行介绍并分析其在检验过程中出现问题及其原因提出了解决方案，利用实验室现有条件设计实验装置来完成试验研究目标，发现采用高压泵将待测物与标准样品分离，用气-固联方法制备出高选择性的液相色谱柱，其中在对检测器进行进一步研究可以看出高效液相色谱法具有很高灵敏度、准确率较高等优点，与传统的方法相比有着较大优势及发展潜力等特点，其应用范围也越来越广。
手性分离技术在药物合成中的应用研究
手性分离技术在药物合成中的应用研究
药物合成是指通过化学合成来制造药物的过程。在这个过程中，手性分离技术的应用显得尤为重要。
手性分离技术是指将具有手性的分子（即分子中具有对称中心的分子）分离成两种具有镜像对称关系的手性异构体的技术。这种手性分离技术在药物合成中的应用非常广泛，因为不同手性异构体的药理学和毒理学作用可能截然不同。
手性分离技术在药物合成中的应用有以下几个方面：
1. 手性合成试剂的折光率差异分离法
将一组具有不同折光率的手性试剂溶解于同种溶剂中并徐放置。由于折光率较高的异构体分子在液相中聚集，折射率较低的异构体分子则分散在液相中。
这种手性分离技术可以用于制备具有高纯度手性异构体的试剂，同时可以控制合成过程中各异构体的比例。
2. 熔点差异分离法
将含有手性异构体的混合物加热至一定温度，然后让其逐渐冷却。由于不同异构体的熔点不同，这些异构体可以在一定温度下分离。这种方法适用于手性纯度较低，但含有短碳链的分子。
3. 液相色谱法
液相色谱法是通过异构体在液相移动时的亲和性差异来完成手性分离的技术。具有不同手性异构体的化合物可以通过对手性固相柱进行分离。这种技术适合合成复杂的立体异构体，其分离过程可以更加精细，但需要消耗更多的时间和费用。
手性分离技术在药物合成中的应用非常广泛。例如，以左旋咪唑为例，它是一种广谱的抗生素，但只有左旋异构体才有药理学效果。因此，分离和纯化左旋异构体成为合成左旋咪唑的关键步骤。
手性分离技术还有助于开发新颖的手性药物。近年来，随着科学技术的发展和相关法规的出台，人们越来越重视医药领域的手性问题，手性药物的研发和应用也日渐普及。在此背景下，手性分离技术对于开发新型药物非常关键。
总之，手性分离技术在药物合成中的应用非常广泛。它能够帮助合成出高纯度的手性异构体，对于制备具有特殊作用的药物和生产药物的安全性和有效性都非常重要。
高效液相色谱法对泡菜中L_乳酸和D_乳酸的手性分离和测定
《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.23 No.8(总98)
74 高效液相色谱法对泡菜中L-乳酸和D-乳酸的 手性分离和测定 刘冬梅1，吴晖1，余以刚1，李晓凤1，郭文洁2，曾伟杰2 （1.华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640）(2.广州菲罗门科学仪器有限公司，广东 广州 510620) 摘要：采用高效液相法和手性分离柱对泡菜发酵上清液中的L-乳酸和D-乳酸进行分离和测定。泡菜的培养上清液用8000 r/min 离心20 min，再用0.45 µm滤膜过滤。滤液用配备二极管阵列检测器的高效液相系统检测，检测波长为254 nm。检测色谱柱为手性柱Chirex 3126 (D)-penicillami （4.6 mm i.d×250 mm L, 5 µm），流动相为2 mmol/L CuSO4溶液（溶剂为5 %的异丙醇溶液）。L-乳酸和D-乳酸的标准曲线在2.5-20.0 g/L范围线性良好，两者的线性相关系数都为0.999。泡菜滤液的L-乳酸和D-乳酸的回收率分别是99.82 %和100.02 %。该方法操作简便，精密度和准确度高，适用于泡菜中L-乳酸和D-乳酸的测定。 关键词：L-乳酸；D-乳酸；高效液相色谱；手性柱；泡菜 中图分类号：TS255.54；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2007)08-0074-03 Chiral Separation and Determination of L-and D-lactic Acid in Pickles by High-performance Liquid Chromatoraphy LIU Dong-mei1, WU Hui1, YU Yi-gang1, LI Xiao-feng1, GUO Wen-jie2, ZENG Wei-jie2 （1.College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China） （2.Guangzhou FLM Scientific Instrument Co., Ltd, Guangzhou 510620, China） Abstract: A new method for the separation and determination of L- and D-lactic acid in pickles supernatants by high-performance liquid chromatography (HPLC) with a chiral colomn was studied here. The culture supernatants of pickles were centrifuged for 20 min at 8000 r/min and the supernatant fractions were filtered through a 0.45 µm membrane. The samples were then analyzed by HPLC on chiral columns with a PDA detector at 254 nm. High separation efficiency was achieved by using a Chirex 3126 (D)-penicillami column (4.6 mm ID×250 mm L, 5 µm) and a mobile phase consisting of CuSO4 (2 mmol/L) and isopropyl alcohol-water (5:95). The calibration curves of L- and R- lactic acid were linear with regressions being of 0.999 in the concentration range of 2.5-20.0 g/L. The average recovery was 99.82 % for D--lactic acid and 100.02 % for L-lactic acid in filtrate of pickles. The method was simple and easy to operate with high accuracy and reproducibility and it was suitable for detection the concentration of L- and D-lactic acid in pickles. Key words: L-lactic acid; D-lactic acid; HPLC; chiral column; pickles 乳酸（Lactic acid）学名2-羟基丙酸，结构式为CH3CHOHCOOH，相对分子质量为90.08，由于分子内含有一个不对称碳原子，因此具有旋光异构现象[1]，如图1，可区分为L-乳酸和D-乳酸，当两者以等比例混合时，即成为内消旋的DL-乳酸。由于人体只有代谢L-乳酸的L-乳酸脱氢酶，世界卫生组织提倡在食品及医药行业中使用L-乳酸取代目前普遍使用的DL-乳酸[1]，WHO明确规定，人体每天摄取D-乳酸的量限制在100 mg/kg体重以下，而对L-乳酸不加限制[2]。 基金项目：国家自然科学基金项目（20676042） 作者简介：刘冬梅（1971-），女，博士，讲师，主要从事食品微生物及食品安全的教学及研究工作 另外，高光学纯度的聚L-乳酸在骨外科、人造手术缝合线、血管外科及药物控制缓释材料等方面具有良好的应用前景[3]。所以，对乳酸对映异构体进行拆分研究，建立快速、灵敏、分离性能好的测定方法是一个具有理论及实际意义的课题。L-乳酸含量的测定方法中有酶法[4]、EDTA定钙法]和高效液相法，其中酶法测定步骤多，酶易失活，测定误差大；EDTA定钙法测量误差大，对乳酸的两种对映体无法精确定量，如果采用普通的有机酸色谱柱，也无法区分乳酸的两种对映体。用手性柱的HPLC方法分离乳酸对映异构体还未见报道。本文利用手性色谱柱中青霉胺与二价铜离子配位体，对乳酸的两种对映体的络合能力的不同《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.23 No.8(总98)
色谱分析中的手性分离技术
色谱分析中的手性分离技术
色谱分析是一种常见的分离和检测技术，它可以通过不同成分在色谱柱上的运移速度差异，实现样品中组分的分离。而手性分离技术则是其中一种具有广泛应用的技术。
手性分离技术又称拆分体分离技术，是指将具有手性的化合物分离成其对映异构体的过程。手性分离技术主要有两种：手性凝胶色谱和手性高效液相色谱。
手性凝胶色谱是一种传统的手性分离技术，它利用具有手性结构的聚合物凝胶作为色谱填料，通过样品分子与凝胶之间的分子识别作用实现分离。手性凝胶色谱是一种相对简单的手性分离技术，但是由于其分离程度较低，通常用于对手性分析的初步筛查。
手性高效液相色谱是一种高效手性分离技术，它基于手性色谱填料的表面手性区分作用和反相分离作用，实现对手性化合物的高效分离。在手性高效液相色谱中，手性色谱柱成为关键的分离工具，色谱柱内填充了各种具有手性结构的填料，如纳米结构材料、束缚配体、离子交换树脂等。
手性高效液相色谱技术需要精密的操作和控制技术，同时对手性填料的选择和性能也十分关键。常见的手性高效液相色谱模式包括正相模式、反相模式和杂相模式。正相模式下，填料是手性站点，流动相是水/有机溶剂混合物，溶液的极性越强，分离能力越高；反相模式下，填料是非手性的，分离基于无手性分子和手性分子与填料的相互作用，流动相是弱极性有机溶剂/水混合物；杂相模式是正相和反相模式的结合。
手性高效液相色谱技术在制药、化妆品、食品、医疗诊断等领域得到了广泛应用。例如，在药物研发中，手性高效液相色谱可以对药物的对映异构体进行分离和鉴定，以确定对映异构体的药效和安全性；在食品领域，手性高效液相色谱可以对添加的手性能呈现不同风味的香料成分的组成比例进行分离和鉴定。
当然，手性分离技术也存在一些困难和局限性。一方面，手性化合物的对映异构体之间的物理和化学性质非常相似，因此分离困难。另一方面，手性化合物的分离需要精密的手性填料和色谱柱控制技术，手性柱的制备和使用成本也较高。
药物研究中手性分离分析方法及技巧
药物研究中手性分离分析方法及技巧
手性药物是指药物分子结构中引入手性中心后，得到的一对互为实物与镜像的对映异构体。液相色谱法成为目前手性药物分离测定的首选方法，根据实际工作中需要的手性分离问题，总结如下：
1、流动相
手性分析很关键的一项是流动相的选择，手性分析一般都采用正相，使用最多的流动相是正己烷、正庚烷、乙醇和异丙醇这四种，其中起洗脱作用的流动相是乙醇和异丙醇，正己烷和正庚烷用来调节流动相的洗脱强度。正己烷和正庚烷对于样品分离没有什么太大的影响，不会改变选择性和分离度，通常都可以混用，不过正庚烷比正己烷对人体的伤害要小很多，但价格是后者的一倍，所以欧美的很多大制药公司多使用正庚烷，而国内多使用正己烷。
乙醇和异丙醇对样品的分离起关键的作用，不同的醇有不同的选择性，改变醇的种类可以改变选择性，常用的醇类是乙醇和异丙醇，甲醇不能使用是因为它和正己烷、正庚烷不互溶，叔丁醇粘度太大，一般作为添加剂配合乙醇或者异丙醇少量使用，提供特殊的选择性，通常能起到意想不到的效果。一般情况下分析手性样品，很多人推荐首选异丙醇，但是我喜欢首选乙醇，因为乙醇气味比异丙醇好一点，且乙醇做流动相压力要低一些，实际上二者差别不是太大。
流动相里经常需要添加酸或者是碱来调节峰形，常用的酸有三氟乙酸、乙酸和甲基磺酸，碱一般是二乙胺和三乙胺，也有用乙醇胺和
异丁胺的，流动相里添加酸和碱的浓度一般要求控制在0.2%(体积比)以下，我们一般用0.1%，使用的原则一般是酸性样品加酸，碱性样品加碱，但实际上很多样品是即含酸性基团又含碱性基团，这就要看哪个基团作用强了，对于某些含氨基的两性样品，例如苯甘氨酸，甲基磺酸是一个非常好的选择，磺酸基能够抑制氨基的碱性，又能提供一个酸性的流动相环境，使样品既能得到很好的分离又能获得对称的峰形。
一般做纯度分析检测杂质含量时我们要求尽量的采用低波长来让尽可能多的杂质有紫外吸收，而做手性分析时我们需要采用尽可能高的波长来去除在低波长下才有吸收的杂质的干扰，一般原则还是尽量选择样品紫外吸收最好的地方来获得较高的灵敏度，但流动相里添加二乙胺会导致在低波长下基线波动变大，系统难以平衡，这种情况下一般要提高检测波长，实际操作过程中有些样品在高波长下吸收非常差，只能用低波长检测，这样的样品可以尝试在样品稀释的时候加入过量的二乙胺(但不宜太多)，而流动相用中性，从而获得满意的分析结果。有些样品只添加碱或者酸效果不好，可以尝试在样品里同时添加酸或者碱，这样的样品我曾经遇到过，只添加酸或碱样品都拖尾，不能达到基线分离，这种情况下通过酸碱同时加入，最后获得了非常漂亮的峰形和良好的分离度。实际操作中有些样品碱性太强，进样以后根本不成峰，低波长下细看似乎能感觉到基线一直在漂，开始时怀疑样品浓度不够，加大样品浓度以后仍看不到样品峰，流动相加入二乙胺或三乙胺以后再进样，得到比较漂亮的样品峰。