手性高效液相色谱法分析测定缬沙坦对映体
液相色谱法分离手性药物
第一讲手性分离色谱手性药物常用的色谱分离方法有：高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳、超临界流体色谱。
手性药物给人类曾经带来过空前的灾难——反应停事件。
概念手性:指一种化合物分子由于其三维空间结构的原因所显示出的相互不能重合，但互为镜像关系，它形象的比喻为人的左右手，这叫手性。
对映体: 由于手性中心连接的四个基团在空间三维排列的不同，对偏振光产生的旋转方向不同，从而产生不能重叠的互为镜像的光学异构体,称对映体。
旋光性:手性药物对映体之间对偏振光的偏转程度相同,但偏转方向相反,即旋光性。
右旋体:能使偏振光按顺时针方向旋转的对映体称为右旋体以d-或（+）-表示。
左旋体:按逆时针方向旋转者称为左旋体以l-或（－）-表示。
外消旋体:等量的左旋体和右旋体构成外消旋体，没有旋光性，以（dl）或（±）表示。
内消旋体:分子中含有手性碳原子，但作为分子整体来说是非手性的。
内消旋化合物是纯净物。
外消旋体与内消旋体的共同之处是：二者均无旋光性。
外消旋体：是混合物，可拆分出一对对映体。
内消旋体：是化合物，不能拆分。
手性药物:是指由具有药理活性的手性化合物组成的药物。
手性药物的表示方法1.dl-或(±)-表示能使偏振光的偏振面按顺时针方向旋转的对映体称为右旋体（dextrotatory），在药名前用d-或(+)-表示；反之，称为左旋体（levorotatory），在药名前加l-或(-)-表示。
外消旋体（racemate）则是由等量的左旋体和右旋体构成，没有旋光性，在其药名前用dl-或(±)-表示。
2. D/L标记法（相对构型）1951年前，人们还无法确定化合物的绝对构型。
费歇尔(Fischer)人为地选定(D)-甘油醛为标准物，以标准参照物来确定药物的立体化学构型，相对构型。
由于D/L构型表示法它只适用与甘油醛结构类似的化合物，对多个手性碳的化合物使用不方便。
与表示旋光方向的d和l容易混淆，目前多限于糖和氨基酸的立体化学命名。
手性色谱分析(Dr.Yuan)
手性固定相（CSP） 手性固定相（CSP）法
间接法：柱前衍生 • 优点：
*可采用通用的非手性柱分离 *通过衍生化可提高检测灵敏度 *分离条件简单 *分离效果好
• 缺点：
*要有可被衍生化的基团 *要有高光学纯度的手性试剂 *对个对映体衍生化率速和平衡常数应一致 *衍生化和色谱过程中不能发生消旋化
间接法：柱前衍生
常用的手性化合物测定技术 • 高效液相色谱 (HPLC)
• • • • 气相色谱 (GC)(样品需具有一定的挥发性及热稳定性） 毛细管电泳(HPCE) 超临界流体色谱（SFC) 流动模拟床技术
HPLC
• 80年代初HPLC法迅速成为药物对映体分离 和测定最为广泛应用的方法。 • 特别适用于极性强、热稳定性差的手性药 物的分析。 • HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途 径：间接(CDR)和直接(CMPA、CSP)方法。
冠醚固定相结构
大环抗生素型（Macrocyclic antibiotics） 大环抗生素型（Macrocyclic antibiotics）
hydrogen bonding & dipole stacking sites amine
H3 C NH HO H O NH O O NH NH HO O O NH COOH NH 2 HO OH
含肽或蛋白质手性固定相
Characteristics
Peptide chain: Carbohydrate content: Molecular weight: Isoelectric point (pI) 183 aa 45% 40000 2.7
• CHIRAL-AGP
Chiral-AGP固定相是a-酸性糖蛋白(alpha1-acid glycoprotein), 这种非常稳定的蛋白质被键合到5um 球型硅胶表面, 能够耐受高比例有机流动相, 宽范围 的pH, 以及更高的操作温度. Chiral-AGP用于反相色 谱, 能够分离数量非常多的各种手性化合物.
HPLC法测定缬沙坦胶囊的有关物质
HPLC法测定缬沙坦胶囊的有关物质发表时间：2013-02-25T17:15:14.263Z 来源：《医药前沿》2012年第36期供稿作者：李明杰蒋燕杰郭中明罗兆亮[导读] 该方法准确可靠,专属性强,可用于缬沙坦胶囊有关物质测定。
李明杰蒋燕杰郭中明罗兆亮（山东罗欣药业股份有限公司 276000）【摘要】目的建立测定缬沙坦胶囊有关物质的HPLC方法。
方法用Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）为流动相,流速1.0ml?min～(-1),柱温40℃,检测波长230nm,进样量20μl。
结果有关物质各杂质峰与主峰之间的分离良好,且已知单个杂质分离良好。
结论该方法准确可靠,专属性强,可用于缬沙坦胶囊有关物质测定。
【关键词】缬沙坦胶囊有关物质高效液相色谱仪缬沙坦是一种口服有效的特异性的血管紧张素Ⅱ（AT1）受体提起拮抗剂，它选择性地作用于AT1受体亚型，阻断AngⅡ与AT1受体的结合（其特异性拮抗AT1受体的作用大于AT2受体约20,000倍），从而抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用。
临床用于治疗轻、中度原发性高血压[1]。
《中国药典》2010年版收载了缬沙坦原料药及胶囊的含量和有关物质测定方法,本次实验采用《中国药典》2010年版HPLC法对缬沙坦胶囊进行有关物质方法学研究，并与国内上市缬沙坦胶囊质量作了系统的比较。
1 方法与结果1.1 色谱条件与系统适用性[2]色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；柱温：30°C；流动相：乙腈-水-冰醋酸（500：500：1）；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；检测波长：230nm。
1.2 专属性试验空白干扰试验：精密量取空白溶剂20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果表明，空白溶剂不干扰本品的有关物质测定。
按处方配制不含缬沙坦的空白样品，作为供试品溶液。
缬沙坦的血药浓度测定
缬沙坦的血药浓度测定郭影坤;隋阳【摘要】测定了人血浆中的缬沙坦的药物浓度.以替米沙坦为内标,血浆样品采用液-液萃取法提取,高效液相色谱法测定.色谱柱：Agilent ZORBAZX Eclipse XDB-C18柱(4.6×150 mm,5μm)；流动相：乙腈：0.01 mol·L-1KH2PO4缓冲液( pH=2.96,48：52)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：激发波长265 nm,发射波长378 nm；柱温：30℃.结果缬沙坦在12.5~5000 ng·mL-1浓度范围内线性良好( r=0.9973),平均提取回收率为58.7%,日内、日间精密度RSD为5.13%~7.93%.血浆样品在-20℃反复3次冻融、预处理后室温放置24 h、-20℃冰冻放置1个月后3种不同考察下稳定性均良好.结论本方法准确、快速,适用于缬沙坦的血药浓度测定及药代动力学研究.%Telmisartanas was used as internal standard, plasma samples were extracted with a liquid-liquid method, then valsartan concentration in human plasma was determined by HPLC. Stationary phase:Agilent ZORBAZX Eclipse XDB-C18 column (4.6×150 mm, 5μm);Mobile phase:acetonitrile and 0.01 mol·L-1 KH2PO4 buffer ( pH 2.96, 48︰52); Flow rate: 1.0 mL·min-1; Detection wavelength: excitation wavelength 265 nm, Emission wavelength 378 nm;Column temperature:30 ℃. The results show that the method has better linear when valsartan concentration is in the range of 12.5 to 5 000 ng·mL-1 ( r=0.997 3), the average extracted recovery is 58.7%, and the precision RSD is in the range of 5.13%~7.93%. The stabilities of plasma samples are excellent. This method is simple, accurate and reliable. It is suitable fordetection of the concentration of valsartan in human blood samples so asto study its pharmacokinetics.【期刊名称】《当代化工》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】4页(P249-252)【关键词】缬沙坦;高效液相色谱;血药浓度测定【作者】郭影坤;隋阳【作者单位】东北制药集团供销有限公司，辽宁沈阳 110023;东北制药集团供销有限公司，辽宁沈阳 110023【正文语种】中文【中图分类】O657缬沙坦是一种非肽类的血管紧张素 II 受体AT1拮抗剂，选择性作用于AT1受体亚型，从而阻断血管紧张素II介导的生理效应。
缬沙坦的手性拆分和稳定性的结晶工艺研究
摘要手性药物的光学纯度和稳定性是其产品质量的重要指标。
在众多手性拆分的方法中，结晶法因其操作简便，经济，一直是人们关注和研究的热点。
本文以抗高血压药物缬沙坦为例，研究了利用优先结晶拆分高共熔点组成的外消旋化合物缬沙坦的过程，并利用诱导结晶工艺改善了其药物的稳定性。
具体内容如下：利用质量法分别测量了不同对映体含量的缬沙坦在乙酸乙酯和混合溶剂（乙酸乙酯：乙醇=99%:1%，m:m）中的溶解度，根据得到的溶解度数据分别绘制了缬沙坦在两种溶剂体系中的溶解度三元相图。
对比两种溶剂体系中的三元相图，判断外消旋体缬沙坦属于外消旋化合物，且其共熔点组成为S:R(R:S)=90%:10%。
此外，测量了91%(S)-V（表示对映体(S)-缬沙坦的摩尔含量为91%）在两种溶剂体系中的溶解度和介稳区，用于设计和实施优先结晶工艺。
根据三元相图确定了待优化纯度为91%(S)-V的初始浓度，并成功在两个溶剂体系中分别实施优先结晶，得到了光学纯度大于99%的产品。
对比两个体系中的实验结果，在混合溶剂中收率更高，且操作区域更大，更易实现优先结晶，确定混合溶剂为该药物优先结晶的较适宜溶剂体系，说明溶剂的选择对药物的手性拆分影响重大。
此外，根据三元相图理论，提出一种用于快速拆分外消旋化合物的结晶优化方法。
在1L反应釜中研究了自发结晶，诱导结晶，反溶剂结晶和造粒工艺对药物缬沙坦原料药稳定性的影响，然后在5L反应釜中放大诱导结晶工艺研究其制剂适应性。
即将缬沙坦原料药按照配方做成胶囊剂型，做三个月加速稳定性试验研究其化学稳定性。
同时将缬沙坦原料药按照配方做成分散片剂型，研究其崩解速率。
最终确定诱导结晶工艺生产的缬沙坦原料药适用于胶囊剂型和分散片剂型的制作。
研究了几种过程分析技术在结晶过程中的应用。
在本文的结晶研究中，将在线红外，浊度计和在线二维成像应用于结晶过程的研究，并取得了良好的成果，说明了过程分析技术对结晶过程的重要性，应该大力发展其在结晶过程中的应用。
如何应用高效液相色谱法进行手性药物对映异构体拆分
如何应用高效液相色谱法进行手性药物对映异构体拆分对于市场上越来越多对目标物准确定性的要求，而手性产物是其中较为重要的一部分，因此对于手性目标物的检测就显得尤为重要。
一、什么是手性导构和对映异构体？当药物分子中碳原子上连接有4个不相同的基团时，该碳原子被称为不对称碳或手性碳（中心），会导致药物分子存在异构体，如果两个异构体之间的关系如同一个物体的立体结构在照镜子，这个立体结构和它在镜子中的像互为对映异构体（对映体）。
图1是手性对映异构体的图示。
图1 手性对映异构体图示对映体具有相同的物理性质（如熔点，沸点，溶解度，折射率，酸性，密度等），热力学性质（如自由能，焓、熵等）和化学性质。
除非在手性环境（如手性试剂，手性溶剂）中才表现出差异。
对映体对偏振光的作用不同，它们的比旋光度数值相同，但方向相反。
对映体的生物活性不相同，化学反应中表现出等速率。
等量的左旋体与右旋体的混合物构成外消旋体。
从对映体中分离出单纯一个光学异构体的方法称手性拆分。
最普通的手性拆分方法是消旋旋体与光学活性相反的离子（称拆分剂）作用生成非对映体。
手性药物对映体拆分的方法主要有非色谱法和色谱法。
非色谱法（主要包括结晶法、微生物消化法等）耗时长，过程繁琐不能制备高纯度对映体，色谱法是基于把对映体的混合物转换成非对映异构体，然后利用它们在化学或物理性质上的差异进行分离。
主要包括气相色谱(GC)、超临界流体色谱(SFC)、毛细管电泳(CE)和毛细管电色谱(CEC)等。
表1罗列了色谱手性拆分的发展史。
其中高效液相色谱(HPLC)因其独特的优势成为手性分析领域最常用的一种技术。
表1 色谱手性拆分发展史二、HPLC手性拆分方法手性药物拆分法通常分为直接法和间接法两大类。
间接法和直接法的共同特点是均以现代技术为基础并引人不对称中心或光活性分子；不同的是间接法是将其引入分子溶质内，而直接法则是引人分子间。
引人手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异是手性进行光学异构体拆分的基础。
高效液相色谱手性固定相法分离酸性化合物对映体
3. 1 流动相中异丙醇浓度对手性分离的影响 3. 1. 1 在涂敷型 CDMPC 柱上的分离 改变流动相正己烷中异丙醇的浓度 (含 0. 1 %三氟乙酸) 对这 6 种酸性化合物进行手性分离 ,结果见表 1 。图 1 是它们在 CDMPC 柱上的对映体色谱分离图 。
2003204207 收稿 ;2003208225 接受 本文系浙江省分析测试基金资助项目
2. 04 2. 06 2. 06 1. 07 1. 07 1. 08 1. 23 1. 23 1. 23 1. 12 1. 12 1. 11
5. 80 6. 48 7. 02 0. 24 0. 29 0. 57 1. 47 1. 77 1. 89 1. 36 1. 36 1. 39
(浙江大学化学系 杭州 310027)
摘 要 在自制的涂敷型纤维素三 (3 ,52二甲基苯基氨基甲酸酯) (CDMPC) 和 Pirkle 型 (S , S)2Whelk2O1 两种手 性柱上 ,对 6 种酸性化合物 (西替立嗪 、外消旋萘普生 、托品酸 、布洛芬 、酮洛芬以及 2 ,22二苯环丙烷羧酸) 进行 了对映体分离 。考察了在流动相正己烷中 ,不同的醇类添加剂 、酸性添加剂对手性分离的影响 ,研究了溶质的 体积大小及空间立体结构因素对手性分离的影响 ,并初步探讨了手性识别机理 。
3. 41 10. 43
5
2
1 0. 83 2. 27 4. 76
2
13. 22
5
2
1 1. 80 4. 27 12. 03
1. 26 1. 25 1. 30 1. 13 1. 14 1. 18 1. 02 1. 03 1. 04 1. 10 1. 07 1. 04
溶质 Solute
缬沙坦氨氯地平片有关物质研究
缬沙坦氨氯地平片有关物质研究周志勇;黄鹤飞;张烨【摘要】目的：建立缬沙坦氨氯地平片有关物质含量的测定方法。
方法采用高效液相色谱法，Agilent1220高效液相，（Eclipse plus，250 mm ×4．6 mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲液（取三乙胺10 mL 加水至1000 mL，用磷酸调节pH 值至2．8）为流动相A，以甲醇—乙腈（70∶30）为流动相 B，进行线性梯度洗脱，流速为1．0 mL・ min－1，检测波长为237 nm。
结果氨氯地平与杂质D 分离度为14．44，缬沙坦与杂质 B 的分离度为9．46，且各物质之间有较好的分离；空白辅料对有关物质测定无干扰，专属性良好；强制降解试验中，杂质可与主峰完全分离。
结论该方法结果准确，重复性好，可靠性强，可用于测定缬沙坦氨氯地平片中的有关物质。
%Objective Aimed to establish an analytical method for related substances of valsartan Amlodipine tablets.Methods The sample was determined by HPLC (Agilent1220).The analysis was performed on Eclipse plus C18 column (250 mm ×4.6 mm, 5 μm) with the detection wavelength at 237 ing phosphate buffer (10 ml triethylamine volumetric to 1 000 mL,adjusted to pH 2.8 with phosphoric acid) as mobile phase A, methanol -acetonitrile (70∶30) as mobile phase B, and linear gradient, mobile phase was initi-ated at a flow rate of 1.0 mL・ min-1 .Results The resolution of amlodipine and impuritie D was 14.44;the resolution of amlodipine and impuritie B was 9.46, and there was good resolution between each substance.Conclusions This method is accurate, reproduci-ble and reliable, which can be used to determine the related substances of valsartan Amlodipine tablets.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2016(020)004【总页数】5页(P651-655)【关键词】缬沙坦氨氯地平;有关物质;高效液相色谱【作者】周志勇;黄鹤飞;张烨【作者单位】三峡大学医学院药学系;三峡大学第一临床医学院药剂科，湖北宜昌443003;三峡大学第一临床医学院药剂科，湖北宜昌 443003【正文语种】中文◇药物分析◇缬沙坦氨氯地平片是由诺华公司研发，并于2006年12月获得美国FDA批准用于治疗原发性高血压，用于单药治疗不能充分控制血压的患者。
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２． ２９
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结果表明降纤酶在 ２ １ 单位／ Ｌ内呈 良好的线性关 一０ ｍ
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１． ６８
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２４ 重复性试验 ． 照“．．” 项下方法制备样品溶液 ， ２１ ４ 三批样品， 每批 １ ０
ｃｒ ａ ｇ ｐｉｃｎｉ ｎ ｗｒ ｌ ｅ ｂｌ ：ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ｍ ｘ ｍ ，｝ ） ｌ ｎ ７０ ｓｈｔｂｆｒ ｅ ａｏ ｈ ｍ ｔ ｒ ｈ ｏｄｉ ｓ ｅ ｄ ｏ Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ２０ ｍ ｍ ５ ｍ ｃ ｕ ， ． ｐｏ ａ ｕｅ ｍ ｔ ｎｌ ｏ ｏ ａ ｃ ｔ ｏ ｅ ｉ ｅｗ Ｃ ｏ ｓ ｔ ｈａ ４ Ｌ ｏｍ ｐ Ｈ ｈ ｐ ｅ － ｈ ｈ ａｂ （０２ ） ｍ ｂｅ ｓ ａ０９ Ｕｍｎ ｄｔ ｔｎ ｅ ｎｔｗｓ ｎ ， ｍ ｔ ｐｒｕ ｗｓ Ｃ Ｒ Ｓ Ｌ Ｓ ｃｌ ｒ－ ８： ａ ｏｉ ｐａ ｔ ｍ ｉ， ｅ ｃｏ ｗｖ ｅｇ ａ２０ｍ ｃ ｕ ｎ ｅ ｔｅ ３０． Ｅ Ｕ Ｔ Ｔ ｅ ｉ ａ ０ ｓ ｌ ｈ ｅ ． ｅ ｉ ａ ｌ ｈ ５ ｏ ｌ ｅ ａｒ ａ ０ ｍ ． 岁 ｔｎ ｖ ｗｒｌｅｂｔｅ ０ １ ５ 岁ｍ ． ｌ ｅ ｌ ｉ ｆ ｃｏ ｗｓ ２，ｍ ａｄ ｌ ｉ ｆ ｎｔｉ ｗｓ ７ ｉ ｃｒ ｓ ｅ ｒ ｅ ． ｏ ｕ ｅ ｅ ｉ ｅ ｎ 一 ｎ ｗ Ｌ Ｔｅ ｓ ｉ ｔ ｅ ｔｎ ００ｐ／ Ｌ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｔｎ ａ００ Ｗ ｈ ｏ ｔ ｏｄｔ ｉ ａ ． ｇ ｗ ｍ ｅ ｎ ｈ ｍ ｏｑａ ｉ ｏ ｅ ａ
注射用降纤酶是由蛇毒类凝血酶加赋型剂组成的生物 制剂， 主要用于治疗血栓性疾病， 脑梗死， 股动脉栓塞， 肺栓
塞。其成分中 类凝血酶含量的准确确定对疗效起关键性作 用。注射用降纤酶常用的测定方法是凝固法， 赋形剂和离
收稿 日 ： ０－ － 期 ２ ４ ９１ ０ ０ ４
４５ 波长测定吸光度（ ０ｕ ｒ ｎ Ａ值） 以Ａ值为横坐标， ， 对照品含 量为纵坐标， 进行直线相关分析， 由供试品 Ａ值求出相应的 供试品含量。
表 １ 注射用降纤酶专属性试验结果（ 标示量％， ＝ ） ｎ５
Ｔａ ｂ
１ Ａ ｓ ｒ ｕｓ ｓｅｉｃ ｄｆ ｒ ｅ ｌ ｅ ｄ ｓ ｙ ｓｌ ｏ ｐｃ ｆ ｅｂａ （ ａ ｌ ａ ａ ｅ ｔ ｆ ｆ ｏ ｉ ｓ ｉ ｒ ｂｅ －
ｍ ｕｔ ｎ ５ ｏｎ ％， ＝ ）
样品 空白辅料 凝固法
发色底物法
２３ 标准曲线的可靠性 ．
每 浓度 三 精 取 照品 一 重复 管， 密吸 对 溶液。 ０ ０１ ， ， ， ，０ ４８ ２
１ ， ，分别置于试管中， ６ ２０ Ｌ ０ ｐ ０ 加缓冲液至 １Ｌ ｍ 作为标准曲
线。取供试品溶液 １ Ｌ ｍ 于待测试管中， 将上述各管分别加人 Ｓ １ ｌ ， － ６ ｍ， 混匀， ℃保温３ｍｎ加入０２ Ｌ ２ ０ ｌ ３ ７ ０ ｉ， ． 冰醋酸终止 ｍ 反应。以 标准系列中不含降纤酶对照品管调零点， 在分光光 度计上测各管Ａ 值。以吸光度及对照品量（ ， ， 单位） 绘制标
手性高效液相色谱法拆分和测定撷沙坦对映体
张明浩， 刘立军， 解斌（ 大 业 珠 有 公 ，东 珠 １７） 天 药 （ 海） 限 司广 海５ ０ ９０
摘要： 的 建立测定蝴沙坦对映体的高效液相色 目 语方法。方法 采用Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ ｍ ｘ ， ） ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ ｍ ｍ ５ 手性柱， Ｃｏ ｈａ ２０ ４ｍ Ｎ ， ｒ ｎ
准确、 灵敏， 专属性强， 适用于撷沙坦对映异构体的测定。 关键词： 高效液相色 濒沙坦； 语； 对映体； 手性 中图分类号：９７７６１ Ｒ １．９． 文献标识码： Ｂ 文章编号： ０－ ９ （ ０ ）６ ４３ ３ １ ７ ６３２ ５０－ ８－ ０ ７ ０ ０ ０
Ｅ ａｔ ｍｅｉ ｓｐｒｔ ｎ ｄ ｔ ｍ ｎｔ ｎ ｖｌ ｒ ｎ ｃｉ ｌ Ｌ ｎ ｎｉ ｒ ｅａａ ｏ ａ ｄ ｅ ｉ ｉ ｏ ａ ａｔ ｂ ｈ ａ Ｈ Ｃ ｏ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ａ ｏ ｆ ｓ ａ ｙ ｒ Ｐ Ｍ Ａ Ｇ ｎ－ａ，Ｉ Ｌ－ ｎＸＥ Ｔａ Ｐａ ａ ｕｃｓ ｈｉＬＤ ， ａ５９７， ａ Ｎ Ｍ ｇ ｏＬＵ ｊ ，Ｉ Ｂｎ（ｉｎ ｒ ｃ ｔａ（ ａ Ｔ． ｈｉ ０Ｃｉ ） ｉ ｈ ｉｕ ｉ ｔ ｈ ｍ ｅｉｌ Ｚｕ ） Ｚｕ １ ｈ ｈ ０ ｈ ｎ
稀释至 浓度， ／ ＝ 不同 按Ｓ ３ Ｎ 测得最 低检出限 ． ／Ｌ 为００ｐ ｍ ； ２， ｇ 按ＳＮ １ 测得其定量限为００ｐ／ Ｌ ／ 二０ ． ｍ ． ７ ． ｇ
２５ 对照品进样重复性试验 ． 取浓度为２ 的 ｐ／ Ｌ 对照品溶液２ｐ ， ，ｍ ｇ ０， 注人色谱仪， Ｌ 重 复进样５ ＲＤ为０５％ 二 ） 次，Ｓ ． （ ５ 。 ２ ｎ ２‘ 回收率试验 ． 称取已知Ｒ对映体含量的缴沙坦９ 每份１ｍ ， 一 份， Ｏ ｇ置于 ｌ ｍ 量瓶中， ０ Ｌ ０ 分成３ 分别加人上述 Ｒ对映体贮备液 组， 一 １， ， ｍ ， ５ ２ Ｌ流动相稀释至刻度， ２ ５ ０ 配制成高、 低三组不同 中、 浓度溶液， 各取２ｐ 注人色谱仪， ０， Ｌ 记录峰面积， 按外标法计 算加样回收率， 三组平均回收率分别为 ９．％，９６ ９８ ９．％， １ ． ；Ｓ 分别为０３％， ４％， ５％， ０ １ ０ ％ Ｄ Ｒ ． ０ ４ ０ ７ 总平均回 ８ ． ． 收率
ｐ ７０ Ｈ ． 磷酸盐缓冲液一 甲醉（０２ ） ８．０ 为流动相， 流速０９ Ｕｍｎ柱温３０ 检浏波长２０ｍ ． ｉ， ｍ ０ Ｃ， ５ｎ 。结果 纸沙坦对映体在 ０１ ．
５ Ｌ内 好的线性关系， Ｎ／ ，ｍ 呈良 ｇ 检测限为００Ｗ／ Ｌ定量限为００Ｍ／ Ｌ平均加样回收率为９．％。结论 本方法简 ． ｍ ， ２ ． ｍ ， ７ ． ｇ ８８ ． 便、
３ 讨论
发色肤 Ｓ １０释放出对硝基苯胺（Ｎ ）Ｐ Ａ在４５ｍ处 － ６， ２ Ｐ Ａ ，Ｎ ０ｎ 有强吸收峰， 其显色程度与类凝血酶含量成正比， 且该试验 不受降纤酶制剂中赋形剂右旋糖醉干扰， 也不受钙离子影 响， 因此比肉眼观察的凝固法准确、 特异、 简单、 快速， 适于降
纤酶原料、 半成品、 成品的含量测定与常规质量控制。 参考文献 ［１ 管利丰， １ 戚正武． 发色多肤底物及其临床应用【ｌ 中 ｉ． 华血液 学杂志，９５６ ）１ ． ８， ３ ； ４ １ （ ７ ［〕 严慧敏， ２ 黄济群， 廖兆全． 凝血酶底物发色肚的 化学合成【］ Ｊ． 广州医学院 学报，９５２ （）３． １ ， ５； ９ ３ ３
０ ３ ６ ９ ． ． １ ９ ４ ０ ３ ５ ９ ． ． １ ９ ０
１． ６６
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Ｊ．
６ ，
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０ ３ ７ ９ ． ． １ ９ ８
准曲 计 回 方 线，算的 归 程为（二 ）Ｙ ００ ３ 十． ， 。 ５；二． Ｘ ０ ４ ｒ ７ ７ ０１ ８
＝ ９ ３ ０９ ９ ａ ．
ａ ｈｍｅ ｎｔｏ ｒ
１Ｒ对映体； 领沙坦 ．一 ２ ．
１Ｒｅａｔｍ ｒ ａ ａａ ；． ａａ ． ｎｏ ｅ ｏｖｌｒｎ２ｖｌｒｎ － ｉ ｎ ｆ ｔ ｓ ａ ｔ ｓ
２４ 检出限及定量限 ． 取线性试验中 浓度为０１ Ｌ ． ｍ Ｒ对映体溶液， 列 ｐ／ 一 ， ｇ 按比
圈 １ 顺沙坦的化学结构式 Ｆｇ ｈｍｃｌ ｃ ｕ ｏｖｌ ｒｎ ｉ １ ｅ ｉ ｓｕｔ ｅ ａ ａａ Ｃ ａ ｔ ｒ ｆ ｔ ｒ ｓ
时间（）含量（ ， ％）
２． ７８
１ ４ ７．
Ａ． ．
含量（ ％）
０ ０
９ ６ ７．
１６ ５
５ 单位降纤酶对照品 ５ 单位降纤酶对照品 ＋ ％右旋糖ｆ １ ｆ ｆ ５ 单位降纤酶对照品 ＋ ａｌ ＣＣ ２ ％ ２ 注射用降纤酶 注射用降纤酶 ＋ ％ １ ＣＣ２ ２ ａ
子含量对测定结果产生很大影响。本实验类凝血酶作用于
瓶， 另按“．．” ２１２ 项下方法制备对照品溶液； 依上法平行测 定， 计算样品的含量和精密度（Ｓ ） ＲＤ 。方法的精密度测定结 果为１ ％（ ＝ ） ． ｎ ３ 。结果表明， ４ 本法精密度良 好。 ２５ 专属性 ． 对空白 降纤酶对照品、 辅料、 注射用降纤酶样品， ％ 含２ ＣＣ 样品， ａ儿 在给定反应条件下与凝固法进行比较。
为９ ．％。 ９８ 表 １ 回收率试验结果（ ＝ ） ｎ９
１ 仪公与试药
Ｈ Ｉ 液相色谱仪， Ａ 检测器， Ｐ Ｐ１ ０ ０ ＤＤ Ｈ 化学工作站； 甲 醉为色谱纯； 撷沙坦及其Ｒ对映体样品均由 一 本公司合成室提
供。 ２ 实验方法
２１ 色谱条件 ．
色谱柱：ｉ ｒ Ａ Ｔ ｒ ｅ（５ ｍ ｍ ５ 手 ｈ Ｃ Ｒ ＣｉＤｘ ｍ ｘ ， ） Ｌ ｏ Ｃ ｈａ ２０ ４ｍ ｗ ｒ ｎ 性柱； 流动相： ７０ ｐ ． Ｈ 磷酸盐缓冲液一 醇（０２）流速： ９ 甲 ８： ； ０ ０ ． ｍ ｉ； ３ｃ 检测波长： ０ｍ 进样量： ｗ ｏ Ｕｍｎ柱温： Ｃ； ０ ２ ｎ； ５ ２ Ｌ ０
ｎ ｔ ｎ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｏ ｖｌ ｒ ｎ ａｉ ｏ ｎ ｎｉ ｒ ａｓ ｔ ． ｏ ｆ ｏ ｆ ａ ａ
Ｋ Ｙ Ｏ Ｄ ： Ｃ ｌ ｒｎ ａｔｍ ｒｃｉｌ Ｅ Ｗ Ｒ Ｓ Ｈ Ｌ ； ａａ ； ｉ ｅ； ａｔ Ｐ ｖｓ ａ ｔ ｅ ｎｏ ｎ ｈ ｉ ｒ ｙ
绷沙坦（ａａａ） ｌｒｎ是一种口 ｖｓ ｔ 服有效的特异性的血管紧张 素Ｉ ，受体拮抗剂， ＩＡ ） （Ｔ 临床用于治疗轻、 中度原发性高血 压， 其化学名为（ ） Ｓ －－ Ｎ戊酞基一－ ’ １ 一 Ｎ ｛ 一 Ｈ 四氮哇一基） ［ （ ２ ［，’ １１一 联二苯〕 一 甲 一 －基」 基｝ ４ 撷氨酸。分子结构见图１其中 ， 含有一个手性中心， 存在一对对映异构体。由于Ｒ对映体药 一 物活性远低于Ｓ 一 对映体， 故撷沙坦原料需控制Ｒ对映体的限 一 度。本实验建立的高效液相色谱方法， 采用 Ｌ ｈ Ｃ Ｒ ｉｒＡＴ Ｃｏ