HPLC简介 watersHPLC仪器使用 放射性检测器使用
(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
Waters HPLC2695液相色谱仪操作规程
Waters HPLC2695液相色谱仪操作规程1目的规范Waters HPLC2695液相色谱仪操作程序，正确使用仪器，保证检验工作顺利进行。
2 适用范围适用于Waters HPLC2695液相色谱仪的使用操作。
3 职责3.1 操作人员按照本规程操作仪器，并做使用登记；3.2 保管人员对仪器进行定期维护，保养；3.3 科室负责人负责仪器的全面管理工作。
4 技术参数4.1 温度范围：0-65℃；4.2 流动相数量：1-4；4.3 流量范围：0.000和0.010-10.000mL/min；4.4 最大运行压力：34.5Mpa；4.5 梯度范围：0-100%；增量：0.1%；4.6 样品盘：5*24个，进样量：“0.1-100μL；进样精度：<0.5%；4.7 进样次数：1-99次/瓶；4.8 灵敏度范围：0.0001-4.0000AUFS；5操作程序5.1将泵清洗管路和洗针管路分别放入溶剂（水、甲醇、乙腈、盐溶液）5.2打开路由器，计算机电源，待系统完全开启完毕后，打开2695主机和检测器电源。
5.3接通2695分离单元后，仪器开始自检，待屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。
5.4按“Menu/Status”键，显示菜单画面，按“Diag”键，选择Prime SealWash 清洗柱塞杆约1min，再选择“Prime SealWash”，清洗针头1-2次。
5.5灌柱：按“Menu/Status”键，显示菜单画面，再按“Direct Function”键，选择“Wet Prime”(湿灌柱）键来灌注，排除实验所需流路中气体。
5.6打开计算机“Empower”软件，点配置系统运行项目的编辑。
5.7在运行样品界面进行样品方法的编辑，包括流量、流速、柱温等参数，若需要2998PDA检测器，还应在2D通道中填写所需要的波长，规定四个（A,B,C,D)流动相管路分别通入水、甲醇、乙腈、盐溶液。
WATERS 2695-2487 HPLC 仪器操作简明流程
WATERS 2695-2487 HPLC 仪器操作简明流程WATERS 2695-2487 HPLC 仪器操作简明流程1、2487检测器开、关机及使用：打开电源仪器自检1-2min 预热5min 稳定约30min 设定通道、波长模式、波长（也可在工作站上设置）回零（Auto Zero）分析检测实验完毕关掉电源开关即退出。
2、2695分离单元使用操作：1) 开机自检打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样表示自检成功。
2) 脱气（Degas）按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
3) 设定柱温（可选项）在“Status（1）”界面，移动光标至“Col Htr Set”，输入目标温按Enter即可。
（可在工作站方法中设置）4) Prime Seal Wash（清洗柱塞杆）按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5) Wet Prime在“Status（1）”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“2 Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。
将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。
6) Purge Injector（注射器排气泡及清洗）进入“Direct Function”界面后，选择“3 Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。
7) Prime Needle Wash（清洗注射针）进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。
Water 2695 高效液相色谱仪操作规程
Water 2695 高效液相色谱仪操作规程1目的用于规范检验人员正确操作使用Waters 2695 高效液相色谱仪。
2 适用范围适用于使用Waters 2695高效液相色谱仪检测分析的操作管理。
3 职责使用Waters 2695高效液相色谱仪进行检验的检验员应对本规程负责，相关项目经理负责监督该操作规程的正确执行。
4仪器组成及原理4.1仪器组成本仪器由Waters 2695 高效液相色谱仪、检测器(2996型二极管阵列检测器、2487紫外检测器、2489紫外检测器、474型荧光检测器)、Empower色谱作站组成。
2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面等组成。
4.2高效液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，经色谱柱进行分离，检测器检测分离后的不同组分，数据处理装置记录色谱图或进行数据处理。
5.仪器的操作5.1仪器的准备5.1.1 检查流动相（使用前应首先脱气）、在线清洗溶液（10%甲醇-水溶液seal wash）、进样针清洗溶液（90%甲醇-水溶液injector wash）是否足够。
5.1.2 检查色谱柱的使用是否正确（方向是泵出来进检测器的方向，正常的话是色谱柱上所标示的箭头向上；一般情况下不能将色谱柱反过来用，除非柱子确实无法使用可考虑反方向使用）、连接是否有误，有无漏液，废液瓶的容量是否足够。
5.2开机、自检与仪器预备5.2.1依次开启不间断稳压电源、开启2695 分离单元电源和计算机电源；仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。
5.2.2按动仪器面板右下方“Menu/Status”键进入操作状态，按动“Direct Function” 功能键，若仪器是首次使用或溶剂的管路充满空气时，先选择Dry Prime，按动OK，对管路进行排空；此时开启仪器下方purge阀，用专用注射器手工抽出管路内部的空气。
waters2695操作规程
进样器进样量范围
0.1-100 μL，进样精度：<±1%。
检测器波长范围
UV-Vis检测器通常为190-600 nm，荧光 检测器则根据具体型号而定。
色谱柱规格
内径2.1-4.6 mm，长度50-300 mm，填 料粒径1.5-5 μm。
02
安装与调试
安装前准备工作
确认waters2695仪 器型号和配置，准备 相应的安装工具和材 料。
样品前处理要求
01
02
03
样品清洁度
确保样品中无颗粒物或杂 质，以避免对仪器造成损 害或影响分析结果。
适当的溶剂
选择与样品相容的溶剂， 确保样品在溶剂中均匀分 散，提高分析的准确性。
样品浓度
根据分析方法的要求，调 整样品的浓度至合适范围 ，避免过高或过低的浓度 导致分析误差。
进样针使用注意事项
选择合适的进样针
实验前准备
1
2
检查waters2695系统状态，确保各部件正常工作 。
3
准备实验所需试剂和标准品，检查其纯度和有效 期。
实验操作规范流程
01
清洁实验台面和仪器表面，避免污染。
02
实验操作过程
03 按照实验需求设置waters2695参数，如流速、压 力、温度等。
实验操作规范流程
01 连接色谱柱和检测器，确保流路畅通。
THANKS
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软件功能概述
方法开发与管理
支持多种液相色谱方法的创建 、编辑和管理。
数据采集与处理
实时采集色谱数据，提供多种 数据处理选项，如峰检测、积 分、校正等。
报告生成与导出
生成定制化的分析报告，支持 多种数据格式导出。
watersarc高效液相色谱仪说明书
watersarc高效液相色谱仪说明书摘要：1.引言2.watersarc 高效液相色谱仪概述3.色谱仪的部件和特性4.色谱仪的操作流程5.色谱仪的维护和保养6.结论正文：【引言】高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离和分析样品的方法，被广泛应用于化学、生物、环境等领域。
watersarc 高效液相色谱仪是Waters 公司推出的一款高性能液相色谱仪，具有卓越的性能和可靠性。
【watersarc 高效液相色谱仪概述】watersarc 高效液相色谱仪采用先进的设计理念和技术，具有高灵敏度、高分辨率、高效率等特点。
该仪器主要由输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成，可以满足各种分析需求。
【色谱仪的部件和特性】1.输液系统：输液系统包括高压泵、进样器和流动相。
高压泵提供稳定的流速，进样器可以精确控制样品的进样量，流动相则帮助样品在色谱柱中进行分离。
2.分离系统：分离系统是色谱仪的核心部分，主要包括色谱柱和填料。
色谱柱根据样品的特性选择合适的填料，以实现样品的有效分离。
3.检测系统：检测系统用于检测经过色谱柱分离后的样品。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等，根据样品的特性选择合适的检测器。
4.数据处理系统：数据处理系统负责收集、处理和分析检测到的数据，可以提供实时的数据和结果。
【色谱仪的操作流程】1.准备样品：将待分析的样品进行处理，使其符合进样要求。
2.安装色谱柱：根据样品的特性选择合适的色谱柱，并正确安装在色谱仪上。
3.配置流动相：根据色谱柱的特性和样品的性质，选择合适的流动相，并进行配置。
4.启动高压泵：启动高压泵，使流动相在色谱仪中循环。
5.进样：将样品加入进样器，通过进样器将样品送入色谱柱。
6.检测：开启检测器，检测经过色谱柱分离后的样品。
7.数据处理：使用数据处理系统对检测到的数据进行处理和分析。
HPLC使用指南
3.3 流动相 3.3.1 中性体系的洗脱能力
异丙醇 > 乙腈 > 甲醇。 对于分辨率不好的图谱（出峰比较集中），可以更换洗脱能力较低的 Solvent B，可以提高分辨 率。如果峰无法洗脱，或者峰过宽，可以选用洗脱能力较强的 Solvent B。 3.3.2 酸性体系的洗脱能力 0.1% (v/v) TFA 体系洗脱能力强于 0.08% (v/v) TFA 体系，但是差别不大。酸含量较低的体系可以降 低 pH 值，保护色谱柱。 3.3.3 缓冲体系的洗脱能力 相同 pH 条件下，0.1M TEAB 的洗脱能力强于 0.05M TEAB，但是差别不大。为减少体系中三乙胺的 含量，可以选用低浓度的缓冲体系。 *在同一体系内，如果无法通过条件优化得到满意的图谱，可以尝试改变体系，例如从甲醇-水体 系改为酸性乙腈水体系。含有羧基的小分子在酸性乙腈水体系分离效果较好。 **当出现色谱峰距离很近，且无法在同一体系内优化条件时，可以尝试改变体系。
4.2 终浓度 常用浓度：1mg/ml。 根据测试针的浓度调整浓度与进样量。 浓度过大，会产生平头峰，影响峰面积及面积百分比。
4.3 配置方法及过滤
样品溶解后需要用滤膜过滤。 13mm, 0.22um 针筒式水系滤膜：只能过滤只含水溶液的样品。 13mm, 0.22um 针筒式有机系滤膜：含有有机溶剂的样品，需要用有机系滤膜过滤。 *相同的样品可以用同一滤膜过滤。不同的样品要用不同的滤膜过滤。 **除相同的样品外，滤膜不可重复使用。 ***过滤样品对样品的损失较大，可用少量溶液洗涤
1.1.2.2 如果无in 的体系来初步尝试，根据出峰时 solvent B 的浓度，再对洗 脱梯度进行细化。
water高效液相色谱仪的使用说明
转载：《分析测试百科网》Waters 600型高效液相色谱仪操作规程一．开机前准备1．根据需要选择合适色谱柱。
2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。
二．开机1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。
2．等各仪器自检通过后，开微机进入Windows NT，双击millog.exe，进入millennium 32工作站。
三．编辑仪器方法1．选择所需Project，run sample上击右键，选择所需仪器，联机。
2．点击instrument method 的edit，设置好各仪器参数。
3．保存所编缉的方法。
四．样品分析与采集1．点击set up，建立方法。
2．等待色谱柱、系统平衡，基线稳定后，设置好样品信息，点击Start，即开始样分析与数据采集。
五．报告输出1．在millennium 32界面点击Brown Project。
2．选择所需Project，选择所要处理的数据文件。
3．选择所要选用的报告格式，输出报告。
六．关机1．冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液，并用双蒸水冲洗泵的柱塞杆。
2．泵停止，关闭氦气阀门。
3．退出工作站，关闭仪器电源。
4. 在记录本上记录使用情况。
注意事项：1. 所有的溶剂均选用HPLC级试剂。
2. 水相流动相需经常更换，防止长菌变质；如果流动相有缓冲盐，必须用5%甲醇或5%乙腈过渡冲洗。
3. 样品均用0.45um的滤膜过滤后才可进样。
4. 色谱柱用合适的溶剂保存，若为C18柱推荐用甲醇保存。
一、问：用HPLC液相色谱仪进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?答：关于漂移问题：1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
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报告人：程文 2010.11.29
HPLC的一般组成：
使用前准备：
开机顺序
放射性检测器
稳定 5min
程序 计算机 高压泵
紫外检测器
稳定 10min
第2步
放射性检测器启动程序
第1步
紫外检测器启动程序
程序寻找设备的进度
硬件寻找完毕 开始工作界面
工作区状态：
按钮
主要功能
系统平衡 样品名称 使用的方法名称 小瓶/进样/运行时间 状态
Breeze软件开始时会出现Cancel boot，更新后 出现此界面
按钮Biblioteka 主要功能泵延缓时间
说明
单击该按钮可以应用1.00分钟的泵流速率延缓时间。右 击可以选择1.00分钟以外的其他时间。
冲洗向导
一般呈灰色状态不启动，具体不明
停止泵流
单击可以立即停止泵流
流动相输送控制
显示系统的流速和流动相的比例
压力量规
显示系统当前的压力，并定义压力范围（最低和最高压 力限制）
流动相设定和紫外设定
梯度洗脱设置
平衡设定的方法， 达到较平基线
进样
导出 数据
查看数据并导出数据
谢谢大家！
进行单次进样
说明
单击该按钮,出现Specify Single Inject Parameters 对话框,输入相关参数,单击Iniect.开始进样
运行样品组
批量进样,Auto Sample
终止运行
重复上一次
单击立即停止采集数据
单击该按钮可以重复最近一次的运行的方法 单击给按钮可以打开Equilbrate System对话框. 选择要使用的平衡方法进行平衡.并在实时 图表中显示基线和方法的参数