第12章体外试验与新生物技术在毒理学中的应用
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Food Toxicology
• 细胞毒理学的研究内容 • 1. 研究外源性有害因子对浸提的细胞毒性作用及特异
细胞毒作用 • 2. 研究细胞毒物代谢 • 3. 研究毒物的细胞度效应作用机制 • 4. 研究外源性有害因子的致癌作用 • 5. 进行药物筛选
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• 分子毒理学研究现状 • 1. 毒物代谢酶遗传多态性研究 • 2. 毒物对基因，蛋白表达影响的研究 • 3. 毒物与细胞凋亡的研究 • 4. 化学致癌机制的研究 • 5. 分子生物标志物及其应用的研究
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• （七）细胞培养在食品毒理学中应用
一般毒性： ✓ 主要为急性细胞毒性 器官特异性毒性： ✓ 利用有代表性细胞类型如肝细胞、肾近曲小管细胞、神经细胞及
心肌细胞等
毒作用机理：
✓
生物转化、毒性代谢产物的形成
✓
遗传毒性，如程序外DNA合成测定
✓
繁殖毒性
✓
联合毒性
✓
不同物种间的比较毒性
Learning Objectives
Food Toxicology
1．熟悉体外试验。概述、体外试验系统。
2．了解细胞毒理学。哺乳动物细胞制备和培养。概 述、基本技术、培养细胞的定量、污染鉴定、生 存指标、细胞特性鉴定、细胞培养在食品毒理学 中应用。
3．了解分子生物学技术在毒理学中的应用。
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Learning Contents
• （三）mRNA定性与定量的测定方法 • 原理：很成两组引物，通过随机组合，使每个细胞中表
达的15000种mRNA均有扩增机会，并使所有mRNA通过电 泳带表现出来 在毒理学研究中的应用： 用于外源性因素作用机制的研究 疾病相关基因的研究 营养学方面的研究
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• （五）基因芯片技术 • 基因芯片（Genechip），又称DNA芯片，DNA微阵列
（DNA microarray），包括寡核苷酸微阵列（oligomicroarray）及cDNA microarray。是指利用大规模集 成电路的手段控制固相合成成千上万个靶基因或寡核苷 酸探针，并把它们有序地高密度地排列在玻璃或硅片等 不同载体上 • 在毒理学研究中的应用： 毒物的筛选及毒作用机制的研究 确定单独的或混合的毒性物质的遗传毒性并测定低剂量 下的毒性影响
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• 在毒理学中的应用： 淋巴细胞分型及鉴定 T细胞活化性息传递研究 DNA含量与细胞周期分析 细胞凋亡检测技术
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胞器等 • 3. 试验间的误差较少 • 4. 可同时和／或反复多次取样 • 5. 可做成复杂的互相作用的试验系统，如复合细胞培
养等 • 6. 较为快速和经济 • 7. 需要较小量的受试化合物 • 8. 产生较小量的有毒废物 • 9. 可以利用人体细胞 9• 10. 减少整体动物的使用
• 哺乳细胞培养的基本技术： （一）细胞分离和原代培养
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• （六）流式细胞术 • 流式细胞仪（flow cytometer，FCM）：是一项集激光
技术、电子物理技术、光电侧技术以及细胞荧光化学技 术、单克隆技术为一体的新型高科技仪器 • 流式细胞术（flow cytometry）：就是对于处在快速直 线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定 量分析和分选的技术 • 流式细胞仪工作原理：把根据目的细胞特有的表面标记 后的悬液中单细胞一次通过测量去，当每个细胞通过测 量区时产生电信号，这些信号可以代表荧光，散射光， 光吸收或细胞的光阻抗，遇事细胞的一系列重要的物理 特性和化学特性就被快速的，大量地测定
Food Toxicology
1．体外试验。概述、体外试验系统。
2．细胞毒理学。哺乳动物细胞制备和培 养。概述、基本技术、培养细胞的定量、 污染鉴定、生存指标、细胞特性鉴定、 细胞培养在食品毒理学中应用。
3．分子生物学技术在毒理学中的应用。 PCR技术、细胞程序性死亡及其检测方 法、毒理学中的mRNA定性与定量的测 定方法、转基因动物、基因芯片技术、 流失细胞术。
Applications of in vitro tests and novel biotechnology in toxicology
Food Toxicology Instructor: GU BING, Ph.D. Jiangxi Science and Technology Normal of University
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• （二）细胞程序性死亡及其检测方法 • 细胞程序性死亡又称细胞凋亡，由基因编程控制的细胞
主动参与的自杀过程没事一种生理性调节机制，与细胞 坏死的死亡机制是完全不同 • 检测方法： • 亚G1峰检测法 • Ho/PI染色法 • 磷脂酰丝氨酸外翻分析
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第一节 概念
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• 毒理学（toxicology）是研究外源性物质对生命有机体 损伤作用规律及其机制的一门学科
• 细胞毒理学（cytotoxicology）：研究外源性有害因子 包括，物理（电离辐射）、化学和生物（病毒）因子对 生命细胞损害作用规律，探讨毒作用机制，并对其作出 危险评估的一门方法学
细胞悬液：离心收集
组织块 1. 机械分散 2. 剪切分离 3. 消化分离 胰蛋白酶法 胶原酶法
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（二）培养细胞的传代 • 原代培养的首次传代（数量、纯度） • 细胞传代方法 贴壁细胞的传代 悬浮细胞的传代 • 细胞系的维持
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• 体外试验的基本原理是所观察到的毒理学效应均是毒物 和／或反应活性代谢产物在敏感性细胞上或敏感细胞内 某一分子靶部位作用的结果能控制环境因素
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• 体外试验的特点 : • 1. 可排除相互作用的系统如免疫系统、神经内分泌系
统的影响 • 2. 每一剂量水平可利用大量的生物样品，如细胞，细
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第二节 哺乳动物细胞制备和培养
• 细胞培养 (cell culture) 的含义： 简单地说即是把 来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内 的体外环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以 观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。细胞培养技 术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等 领域已得到广泛的应用
• （四）转基因动物 • 转基因动物是指一类动物的基因组中整合有外源目的基
因。通过转基因技术，将改建后的目的基因或基因片段 导入实验动物的受精卵，使其与受精卵DNA发生螯合。 然后将次受精卵转移到磁性受体的输卵管或子宫中，使 其顺利完成胚胎发育 • 在毒理学研究的应用：主要为制备转基因动物模型
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• （五）生存指标
• 1.台盼蓝排斥试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 2. 酶漏出的检测
• 其它方法,如，铬的释放
•
贴壁效率
•
ATP含量
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• （六）细胞特性鉴定 ： 形态学检查 生长特性的检查 染色体的数目和结构 DNA、RNA和蛋白质的含量测定
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光敏毒性
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第三节 分子生物学技术在毒理学中的应用
• （一）PCR-SSCP技术 • PCR（polymerase chain reaction）技术：称聚合酶链
反应技术，又称无细胞克隆技术（“freebacterria” cloning technique），是一种对特定的DNA片段在体外 进行快速扩增的新方法 • PCR-SSCP：即聚合酶链反应-单链构象多态性分析， 原理是单链DNA分子在变性的聚丙烯酰胺电泳（PAGE） 中电泳迁移率随其构象的变化而变化，而单链DNA分 子的构象变化可由DNA多态性引起，因而可根据电泳 迁移率判断DNA的多态性或基因有无突变，加以比较 并区别开来
（三）观察 • 培养液 • 细胞生长概况 • 细胞形态变化 • 微生物污染 • 细胞活力检测 （0.4% trypan blue 拒染）
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• （四）鉴定方法：真菌或细菌的污染可用肉眼或低倍光 学显微镜观察，支原体仅能用特别的荧光染料如 Hoechst 33258染色后在光学显微镜下，或用扫描电子 显微镜观察。由于用肉眼无法发现支原体的污染，在细 胞培养过程中应经常定期检查，例如每三个月。最简便 和最可靠的检测支原体的方法是用荧光染料染色在显微 镜下观察。
新技术在毒理学中应用
新技术在毒理学中的应用08级食品质量与安全（3）班戴黛08118065摘要：近20年来，毒理学领域发生前所未有的巨大进展，而这些进展的取得，在很大程度上得益于科学新思想的渗透和新技术的应用。
特别是细胞生物学和分子生物学理论和技术的飞速发展，给毒理学研究提供了新的思维和研究工具，改变了毒理学研究的基本格局，使毒理学研究从经典的整体器官水平向细胞和分子水平飞跃。
纵观近年来毒理学的发展历程，一些常用的分子生物学技术，如PCR技术、核酸杂交技术、DNA测序技术以及一系列突变检测技术已广泛应用于外源化合物和环境致癌物引起的DNA损伤、基因突变、加合物形成及癌基因和抑癌基因研究等方面。
特别是近年来基因差异分析技术、转基因技术、基因芯片技术等分子生物学新技术的建立和引入，大大提高了毒理学研究的整体水平。
关键字：毒理学细胞生物学分子生物学正文：“民以食为天”，饮食是人类社会生存发展的第一需要。
现在，人们已经把食品的安全性作为食用的重要原则和取舍标准。
可是，近年来，因为食品污染造成的急性食物中毒事件越来越多，随着食品的数量和种类日益丰富，如何提高食品的质量和安全性已经成为了社会公众普遍关注的问题。
毒理学就是研究外源化合物对生命机体损伤作用及机制的一门科学。
所谓外源化合物是指存在于人类生活的外界环境中，可能与机体接触并进入机体，在体内呈现一定生物学作用的化学物质。
主要有人类在食品生产、加工中使用的物质和食物本身生长中存在的物质。
外环境中的多种有害因子，包括物理因子、化学因子和生物因子等，通过不同途径作用于机体，引起机体的器官组织结构和功能的改变，而这些改变都是要通过细胞结构与功能的变化反映出来的。
因此，细胞毒理学研究是用细胞进行毒理学研究，应用体外培养模型对环境有害因子进行检测，评价其对人体可能产生的危害。
分子生物学水平上毒理学则是在毒理学发展过程中，受到分子生物学理论和技术促进而发展起来的，从分子水平上研究外源化合物与生物机体相互作用的一门学科。
食品毒理学·体外实验与新技术在毒理学中的应用
第十六章 体外试验与新技术在毒理 学中的应用
第一节 第二节 第三节
细胞毒理学 分子毒理学 新技术在毒理学中的应用
第一节 细胞毒理学
一、概念
细胞毒理学是研究外源性有害因子包括物理(电离辐 射)、化学和生物(病毒)因子对生命细胞损伤作用规 律，探讨毒作用机制，幵对其作出危险评估的一门 方法学，它是毒理学的一个重要分支。
一块基因芯片相当于一个集成处理器，其中的每个 探针相当于一个探头，能对相关的大量信息实现同 时、自动和快速的采集传输、分析和处理，给出相 应的检测、诊断结果。
芯片技术可以用于毒物的筛选及毒作用机制的研 究、确定单独的或混合的毒性物质的遗传毒性，幵 测定低剂量下的毒性影响。 在评价毒性机制及剂量效应关系时，基因芯片可 以评价模型系统、通过体内和体外实验去比较基因 表达的变化，用已知毒性物质处理，如多环芳烃、 生殖毒素、氧胁迫和雌激素化合物，毒性物质导致 的信号响应将改变基因芯片上基因表达的信号，这 些信号代表组织或分子对毒性物质的响应。
六、转基因动物试验
转基因动物是指一类动物的基因组中整合有外源目 的基因。通过转基因技术，将改建后的目的基因或 基因组片段导入实验动物的受精卵，使其与受精卵 DNA发生整合。然后将此受精卵转移到雌性受体的 输卵管或子宫中，使其顺利完成胚胎的发育。 (1)受精卵的微注射技术 (2)胚胎干细胞介导技术 (3)反转录病毒载体法 (4)其它 动物转基因技术还有脂质体介导法、电脉 冲介导法、原生殖细胞介导法、细胞融合法等。
Hale Waihona Puke 流式细胞术毒理学中的应用
1．淋巴细胞分型及鉴定．
2．T细胞活化信息传递研究
3．DNA含量与细胞周期分析
分子毒理学研究中的体外与体内模型
分子毒理学研究中的体外与体内模型近年来，随着工业化进程的不断加快，环境中的污染物也变得越来越多，这些污染物经常会进入我们的身体，对我们的健康造成很大的影响。
为了更好地理解和评估这些污染物对我们身体的影响，分子毒理学研究可以提供很好的支持。
因此，在分子毒理学研究中，体外和体内模型不可或缺。
体外模型是指在实验室中对生物体外部进行研究的模型。
体外模型可以从分子水平探寻作用机制，也可以用来筛选和验证新的化合物的毒性。
常见的体外模型有细胞培养系统、酶试剂盒、分子建模等。
其中，细胞培养系统是最常见的体外模型，它可以模拟人体组织、器官，通过细胞生存、增殖和合成的变化来研究物质毒性的影响。
此外，酶试剂盒也是常用的体外模型，通过检测酶活性来评估化合物与酶之间的相互作用，从而研究其作用机制和毒性。
然而，体外模型也有其局限性。
它无法模拟生物体内的复杂情况，例如生物体内液体的水平变化、代谢产物和体内环境变化都会导致细胞生存状态的改变。
此外，化合物在体外模型中的作用与其在人体内的作用会有所不同，因此体外模型无法精确预测生物的毒性。
因此，为评估药物和污染物的毒性，需要使用更准确的体内模型。
体内模型是将化合物注入动物体内或使用组织切片等方法，在生物体内进行研究的模型。
由于体内模型可以模拟真实的生物体内环境和生物过程，因此更能够准确评估化合物的毒性和人体对其的反应。
同时，体内模型也可以模拟化学物质在人体内的代谢反应，并可以预测此过程对生物的影响。
例如，在药物研发中，研究人员可以在动物体内进行药物代谢和药物动力学研究，以评估其安全性和疗效。
与此同时，体内模型也存在局限性，例如注入动物体内会影响其生理机能，不同种类和个体的动物对化合物反应也不同。
此外，高成本和高动物使用量也是体内模型的不足之处。
因此，研究人员需要在良好的动物福利、伦理和道德框架下使用体内模型来解决这些问题。
因此，在分子毒理学研究中，体外和体内模型都起着不可或缺的作用。
生物毒理学的研究与应用
生物毒理学的研究与应用生物毒理学是应用生物学、药理学、毒理学等多学科知识，探究毒物对生物体产生的毒理学效应及其机理的一门学科。
生物毒理学的研究与应用在生产实践、环境保护、公共卫生、食品药品安全等领域都有广泛的应用。
一、生物毒理学研究的基本方法生物毒理学研究通常包括毒物承口、吸入和接触三种途径的毒性作用，还需探究毒物对生物体产生的机理。
生物毒理学的研究方法主要分为动物实验和体外实验两大类。
其中，动物实验是生物毒理学研究的重要手段，可通过体内毒性实验、亚急性毒性实验、突变和致癌实验等，探究毒物对生物体产生的毒理学效应及其机理。
体外实验则是通过细胞毒性实验、酶制动力学等手段，验证生物毒理学的假设和理论模型，为动物实验提供支撑。
二、生物毒理学研究的应用领域1.环境保护生物毒理学研究可应用于环境化学品的风险评估、环境效应监测、水质检测等领域中，为环境保护提供科学依据。
例如，在某些高危的污染区域开展生物毒性测试，通过在中止那些不良物质对自然界中某些生物种源的繁衍情形的影响度量，推算在环境化学品释放后，自然界的生态损失和高危，可以据此采取更为有针对性的防治方法，达到环境保护的目的。
2.食品药品安全生物毒理学研究可应用于食品药品毒理学领域中，通过实验测定和毒敏感性研究，确定某些化学品、饲料或药物在动物体内的安全冲量，为食品药品的生产安全提供保障。
例如，在某种新型的口服药物研发实验中，常常需要通过动物毒性实验，评估药物在动物体内的副作用、安全冲量等因素，保证药物的生产、销售和使用的安全性。
3.公共卫生生物毒理学研究可应用于疾病的治疗和流行病监测，例如，在某些有关毒物中毒的疫情监测中，生物毒理学研究是评估毒物在人体内累积和影响人体内器官、细胞、蛋白质等生化变化的实验方法，通过实验结果可以评估疾病的病理过程和药物治疗方案。
4.生产实践生物毒理学研究还可以应用于生产实践中，例如，对于某些有毒化学品、化合物的生产过程，可以通过门嗅味试验、动物实验等方法评估其对生物体的影响，优化生产工艺，确保工人和环境的安全。
毒理学研究的新技术与方法
毒理学研究的新技术与方法随着社会的发展和科技的进步，毒理学研究的新技术和方法也在不断涌现。
这些新技术和方法旨在更准确、更快速地评价化学物质的毒性，为保护人类健康和环境生态提供科学依据。
在本文中，我们将简要介绍一些毒理学研究的新技术和方法。
一、“体外”检测技术传统的毒性测试主要是采用“体内”测试方法，即在动物身上进行毒性试验。
这种方法存在许多问题，比如说：1. 试验动物满足条件的数量困难，往往需要大量的试验动物，也就极大了整个体系的成本和时间开销。
2. 这种试验结果的可靠性存在较大的争议，因为即使两种动物属于同一种，但是其生理状态、代谢能力、能否耐受毒性物质等方面都有可能存在差异，所以在某些情况下，通过动物实验得到的结果可能与真实生态环境和人体情况存在较大差异。
针对这些问题，近年来科学家们开发出了“体外”检测技术，这种技术并未需要使用活体动物进行试验，能够极大地提高检测效率和减少实验成本。
现如今，“体外”检测技术已经成为毒理学领域热门研究方向，不断有新的技术被研发，比如人工智能辅助计算、荧光传感技术、生物芯片技术等。
二、毒性小分子研究毒素通常是指那些在人或某些生物体上引起不良反应的化学物质。
除了它们可能对人类的生命、健康和环境产生负面影响外，从科学角度看，毒素也同时作为天然的和合成的小分子，贡献着基础研究的重要成果。
关于毒性小分子的研究，传统上主要采用各种化学方法来分离、鉴定和表征。
但最近，许多机器学习和人工智能的新技术为毒性小分子研究提供了一个全新的视角。
利用机器学习结合各种基因组数据，我们可以更好地预测毒性以及有潜在毒性的小分子化合物的机理。
这种技术有望帮助科学家快速、准确地识别潜在毒性分子，并为药物研发和毒性评估提供指导，诸此端倪已经在药物开发等领域得到更快的进展。
三、3D打印技术和有机仿生材料传统上，毒性测试和药物研发严重依赖于动物实验，如同以上所示。
但是近来，随着3D打印技术和仿生材料的快速发展，可以创建非常接近人体器官的“人体器官模型”，从而代替动物实验，具有重大的意义。
外泌体生物学体外模型及其在毒理学研究中的应用
中图分类号：R114;R99 文献标识码：A 文章编号：1002-3127(2021 )01-0072-05•综述•外泌体生物学体外模型及其在毒理学研究中的应用方道奎1，周国宏1,余淑苑\冯锦姝1,胡大林2(1.深圳市疾病预防控制中心，深圳市医学重点学科环境卫生学科，广东深圳518055;2.南方医科大学公共卫生学院环境卫生学系，广东广州510515)关键词：外泌体；细胞外囊泡；体外模型；生物标志；作用机制外泌体是分泌的膜结合囊泡，其中包含大量可以改变受体细胞中基因表达的核酸、蛋白质和脂质。
毒 物可以改变外泌体的合成及其生物活性内含物的成分，因此外泌体可以作为暴露与效应的生物标志。
尽 管人体和动物研究已确认器官毒性的外泌体生物标志，而体外模型是研究外泌体功能生物学机制的理想选择，在此领域进一步使用体外模型对于探索外泌体生物学在毒理学中的潜在应用至关重要。
本文对外泌 体在毒理学研究中的重要性，外泌体体外模型的应用及其在暴露相关疾病中的作用综述如下。
1概述近年来外泌体从被低估的细胞外囊泡成为生物学 前沿研究的热点。
其最早是在1980年代初被发现，最 初被视为是无意义的细胞废物处理机制。
最近的发展 推动了外泌体的研究，2019年发表了超过3 000篇与 外泌体相关的论文。
对其不断增多的研究兴趣主要归 因于以下3个方面。
首先，外泌体包含源自亲代细胞的蛋白质、脂质和核酸，可以提供有关亲代细胞状况的 信息；其次，外泌体可以从其亲代细胞迁移到可及的体 液，如血液和尿液，从而可用作生物监测；最后，外泌体 可以将内含物运送到其他细胞并改变其生理功能，这 对于理解细胞间通讯、疾病的病理学及新型疗法的发展具有重要意义。
迄今为止，在免疫学和癌症领域已经开展了大量的外泌体研究，研究重点主要包括发现新型的生物标志，了解外泌体在免疫调节、肿瘤形成及转移中的作用，以及外泌体药物的有效递送。
外泌体研究在毒理学方面的应用同样具有革命性的变化，虽然这方面的基金项目：国家自然科学基金（21677066);深圳市医学重点学科建设经费（SZXK067)作者简介：方道奎，硕士，副主任医师，研究方向：环境与健康通讯作者：胡大林.教授，博士生导师，研究方向：环境与健康研究还处于起步阶段。
毒理学研究中的生理学方法
毒理学研究中的生理学方法毒理学是一门研究化学物质对生命体系造成的危害和毒性机理的学科。
在毒理学领域，生理学方法是非常重要的工具，它们能够帮助我们了解化学物质对生命体系的影响，揭示毒性机理，评估风险并制定预防策略。
生理学方法包括体外研究和体内研究两种方式。
下面我们将分别介绍这两种方法以及它们的应用。
一、体外研究体外研究指的是在离体条件下进行的研究，也就是说，研究对象不是整个生命体系，而是从组织或细胞水平研究的。
1. 细胞毒性学方法细胞毒性学方法是体外研究中应用最广泛的方法之一，它利用细胞的生存、增殖和代谢等活动来观察毒物的毒性作用。
可以通过细胞增殖、凋亡、細胞周期、核酸合成等生物学指標来评价毒物的毒性。
细胞毒性学在物质的毒性预测、毒物机理的研究、毒物筛选和替代试验等方面都有重要应用。
这些方法具有操作简便、成本低廉、可重复性强、毒性评价结果快速等优点。
2. 代谢互作法代谢互作法是利用细胞的代谢系统模拟体外毒物代谢和毒性作用的方法。
该方法通过引入人工合成的代谢酶体系来模拟毒物的代谢环节，评估对药物和污染物的毒性和代谢特征，从而在体外更真实地模拟体内毒物代谢状况。
3. 蛋白质学方法蛋白质学方法是利用质谱技术、蛋白质芯片等手段，研究化学物质对细胞蛋白质组成和蛋白质相互作用的影响。
相较于传统的细胞毒性学方法，蛋白质组学分析有更强的发现性和信息量。
它可以揭示化学物质对细胞信号途径、逆转录酶、核酸合成和蛋白质结构的影响，从而帮助我们更好地理解毒物的毒性机理。
二、体内研究体内研究指的是在整个生命体系内进行的研究，它涉及到整个生物体的细胞、组织、器官、系统等层次。
在毒理学研究中，体内研究是不可或缺的一种手段。
1. 动物实验动物实验是体内研究中常用的一种实验手段。
其主要方案是在动物体内注入一定剂量的化学物质，然后观察动物体征、生化指标和组织病变等变化，评估其毒性。
动物试验的优点包括能够有效评估毒物的急性和慢性毒性、毒性机理和剂量-效应关系。
毒理学新技术
养液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形
成细胞悬液再传代。
2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴 壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱 落下来，进行传代。
3．贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。常用的消化液有 0.25％的胰蛋白酶液。
培养细胞活力测定
总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力
来自公众要求减少实验中使用动物数量的压力 整体动物实验可显著地减少常规整体动物实验所需 的高额费用 人们越来越不满意实验动物与人体结果之间相关性 的缺乏。
体外系统——细胞在毒理学中应用的优、缺点
优点
改善效率，减少费用
使用实验动物较少 仅需少量的受试物 较大程度控制细胞族的性状 直接控制胞外基质、化学物浓度及接触时间 排除可能的混淆因素如激素；神经系统或免疫系统的影响 可从同一实验体系重复取样
风淋室:
风淋室是生物洁净 室的理想配套设备，它 不仅可以清除人体和物 品表面附着的尘埃，减 少带入洁净室的灰尘量， 而且兼有气闸室的功能， 可防止非洁净空气的侵 入。
传递窗:
该装置是一种洁净室 的辅助设备，主要用 于洁净区与洁净区， 洁净区与非洁净区之 间小件物品的传递， 以减少洁净室的开门 次数，把对洁净区的 污染降低到最低程度。
检测的细胞：
组织分离的细胞 复苏后的细胞
1．台盼蓝法 活细胞不被染色，死细胞染成蓝色； 方法： 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中； 2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟；
3、镜检计细胞活力。
死细胞深兰色，活细胞呈无色透明状。
2．四唑盐（MTT）比色法
第12章+体外试验与新技术在毒理学中
毒理学研究展望
1、从高度综合到高度分化； 从高度综合到高度分化 综合到高度分化； 2、从体内试验（in
vivo） vivo）到体外试验（in vitro）； vitro）
3、从结构－活性关系（SARs）到三维（3D）定量 从结构－活性关系（SARs）到三维（3D） 结构－活性关系（QSARs）； 结构－活性关系（QSARs）； 4、从定性毒理学到定量毒理学； 从定性毒理学到定量毒理学； 5、从微观（细胞、生化、分子）到宏观（环境） 从微观（细胞、生化、分子）到宏观（环境）
从结构-活性关系到定量结构从结构-活性关系到定量结构-活性关系
根据化学物的结构、理化特性和某些生物学活性，即 根据化学物的结构、理化特性和某些生物学活性， SARs， SARs，可初步预测其潜在危害性或致癌性 SARs 法不能超越化学物的种类，尤其是避开多个毒性 法不能超越化学物的种类， 终点， 终点，而仅以一种生物学反应来预测化学物的毒性 QSARs研究，尤其是包括多个毒性终点以及致突变、 QSARs研究，尤其是包括多个毒性终点以及致突变、致 研究 畸和致癌的QSARs 研究， 畸和致癌的QSARs 研究，为开展环境中大量存在的混合 化合物的危险度评价创造了良好的条件。 化合物的危险度评价创造了良好的条件。
从危险度评价到危险度管理
危险度评价程序 危害性认定； 危害性认定； 剂量－反应关系评价； 剂量－反应关系评价； 接触评定； 接触评定； 危险度特征分析。 危险度特征分析。
毒理学研究展望
毒理学的发展是与生命科学的发展同步的， 毒理学的发展是与生命科学的发展同步的，生命科学的 新理论新技术推动了毒理学的发展， 新理论新技术推动了毒理学的发展，而具有各种各样的 特异性毒作用的毒物也成为生命科学打开生命奥秘的工 具和钥匙。 具和钥匙。 几乎没有一个学科可以同时是基础学科又有直接的应用， 几乎没有一个学科可以同时是基础学科又有直接的应用， 研究外源化学物有害作用的毒理学可能是兼有这两个方 面的唯一的学科。 面的唯一的学科。 毒理学面临着巨大的挑战，毒理学将不断地发展和创新 毒理学面临着巨大的挑战物试验到替代试验） （从整体动物试验到替代试验）
新生物技术在毒理学中的应用
第十三章食品安全性毒理学评价确保食品安全和人体健康，需要对食品进行安全性评价。
食品安全性评价主要是阐明某种食品是否可以安全食用，食品中有关危害成分或物质的毒性及其风险大小，利用足够的毒理学资料确认物质的安全剂量，通过风险评估进行风险控制。
食品安全性评价在食品安全性研究、监控和管理上具有重要的意义。
第一节毒理学安全性评价的概念和发展进程一、基本概念1. 安全与安全性在毒理学学科，安全(safe)是指一种化学物质在规定的使用方式和用量条件下，对人体健康不产生任何损害，即不引起急性、慢性中毒，亦不至于对接触者(包括老、弱、病、幼和孕妇)及后代产生潜在的危害。
安全性(safety)则是一种相对的、实用意义上的安全概念，是指在一定接触水平下，伴随的危险度很低，或其危险度水平在社会所能接受的范围之内的相对安全概念。
安全性和危险度实际上是从不同的角度反映同一个问题。
2. 可接受危险度水平在实际生活和工作中，任何活动都伴随一定程度的危险性，绝对的安全即零危险度是不存在的。
当接触某种化学毒物人群发生某种损害的频率接近或略高于非接触人群，那么这一频率可作为该化学毒物对人体健康产生危害的可接受危险度水平(acceptable risk level)。
3. 实际安全剂量与可接受危险度相对应的接触剂量是实际安全剂量(virtual safe dose，VSD)。
例如在终生致癌试验中，引起肿瘤发生率接近或相当于可接受危险度水平的化学毒物剂量即可作为这种化学毒物致癌作用的实际安全剂量。
4. 毒理学安全性评价通过动物实验和对人群的观察，阐明某种物质的毒性及潜在的危害，对该物质能否投放市场作出取舍的决定，或提出人类安全的接触条件，即对人类使用这种物质的安全性作出评价的研究过程称为毒理学安全性评价(toxicological safety evaluation)。
它实际上是在了解某种物质的毒性及危害性的基础上，全面权衡其利弊和实际应用的可能性，从确保该物质的最大效益、对生态环境和人类健康最小危害性的角度，对该物质能否生产和使用作出判断或寻求人类的安全接触条件的过程。