菌种鉴定的几方面特征

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细菌分类鉴定的依据

细菌分类鉴定的依据

细菌分类鉴定的依据
细菌分类鉴定的依据主要包括以下方面:
1. 形态学特征:这包括菌落形态、菌落颜色、菌丝形态、芽胞形态等。

通过观察这些特征可以初步判断菌种的类别。

2. 生长特性:菌种的生长特性包括生长速度、生长温度、生长pH值等。

这些特征可以帮助我们进一步确认菌种的类别。

3. 代谢产物:不同的菌种代谢产物不同,例如产生酸、气体、色素等。

通过检测这些代谢产物可以进一步确定菌种的类别。

4. 生态环境:菌种的生态环境也是辨别菌种的重要依据。

例如一些细菌只能在特定的环境中生存,例如高温、低温、高盐等环境。

5. 分子生物学方法:分子生物学方法可以通过检测菌种的DNA 序列来确定菌种的类别。

例如PCR技术、测序技术等。

菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测

菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测

菌种鉴定⽅法及⼿段真菌细菌检测菌种鉴定⽅法及⼿段真菌检测/细菌检测菌种鉴定⼀般就只要提取基因组DNA,然后PCR扩增16srDNA⽚段,上GeneBank 或者Eztaxon对⽐即可。

⼀般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌。

常规鉴定常规鉴定内容有形态特征和理化特性。

形态特征包括显微形态和培养特征;理化特性包括营养类型、碳氮源利⽤能⼒、各种代谢反应、酶反应和⾎清学反应等。

⾃动鉴定BIOLOG鉴定系统以微⽣物对不同碳源的利⽤情况为基础,检测微⽣物的特征指纹图谱,建⽴与微⽣物种类相对应的数据库。

通过软件将待测微⽣物与数据库参⽐,得出鉴定结果。

该系统已获美国FDA认可,已逐步应⽤于⾷品和饮品企业、环保、海洋⽣物/⽔产品、制药、农业微⽣物、⽣物治理、化妆品、临床等领域的微⽣物鉴定试验中。

拥有国内最全的BIOLOG数据库,涉及⾰兰⽒阴性菌、⾰兰⽒阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000种微⽣物。

分⼦⽣物学鉴定应⽤分⼦⽣物学⽅法从遗传进化⾓度阐明微⽣物种群之间的分类学关系,是微⽣物分类学研究普遍采⽤的鉴定⽅法。

科标⽣物检测中⼼拥有微⽣物菌种分类鉴定的分⼦⽣物学实验室,配有PCR仪、⾼速冷冻离⼼机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备,以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。

可采⽤核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA(D1/D2)序列及丝状真菌的18S rDNA/ITS1-5.8S-ITS2序列,提供科学的鉴定结果。

API细菌鉴定API鉴定系统涵盖15个鉴定系列,约有1000种⽣化反应,已可鉴定超过600种的细菌。

鉴定过程中,可根据细菌所属类群选择适当的⽣理⽣化鉴定系列,通过软件将待测细菌与数据库参⽐,得出鉴定结果。

可应⽤API50CH系列、API20E系列、API Staph系列对乳酸杆菌(Lactobacillus sp.)和相关细菌、芽孢杆菌(Bacillus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、微球菌属(Micrococcus sp.)和库克菌属(Locuria sp.)进⾏鉴定。

关于菌种的名词解释

关于菌种的名词解释

关于菌种的名词解释菌种是一个常常出现在生物学、微生物学等相关领域的术语,它用来描述具有独特特征和功能的微生物。

菌种是从同一株菌株分离出的具有特定遗传特征的菌株群体,菌株之间具有高度的遗传相似性。

一、菌种的定义和分类菌种是微生物学中对具有相似形态、生理特征和遗传特征的微生物进行分类的基本单位。

它是从微生物体系中提取出来,并经过多次鉴定和验证,最终确定为一种独立存在的生物。

菌种主要根据微生物的形态学特征、生理生化特性、生态适应能力和遗传特征等方面进行分类和命名。

常见的菌种包括细菌、真菌、放线菌等。

细菌菌种通常根据细胞形态、革兰氏染色、营养需求等特征进行分类,而真菌菌种则根据菌落形态、孢子结构和菌丝形态等特征进行分类。

放线菌则根据产孢方式、菌丝形态和产生的代谢产物等特征进行分类。

二、菌种的重要性和应用菌种的研究对于生物学和医学等领域都具有重要意义。

首先,菌种的研究可以帮助我们深入了解微生物的生物学特性和遗传机制。

通过研究菌种的形态学特征、代谢途径和遗传变异等现象,可以揭示出微生物在生存和繁殖过程中的奥秘,从而为微生物的分类和生态学研究提供基础。

其次,菌种的研究对于药物和抗生素的研发也具有重要影响。

许多常见的抗生素,如青霉素和链霉素,都是从菌株中提取出来的。

通过对菌种的研究,可以筛选出具有抗菌活性的微生物,并进一步研发出新型的抗生素。

因此,菌种的研究对于抗生素的开发和抗菌药物的合理使用具有重要的指导意义。

此外,菌种的研究还对于环境保护和农业生产等具有重要意义。

一些细菌菌株具有固氮、溶解磷等功能,可以作为生物肥料应用于农业生产中。

而一些真菌菌株则具有生物降解和生物除草等功能,可以应用于环境修复和农业有害生物控制等领域。

三、菌种的鉴定和保存菌种的鉴定是指通过对菌株形态学特征、生理生化特性、遗传特征等方面进行鉴定,确定其所属的菌种。

鉴定的方法主要包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学技术和基因测序等。

其中,分子生物学技术和基因测序是目前菌种鉴定中最常用的方法,可以准确、快速地确定菌株的分类和亲缘关系。

环境微生物菌种鉴定

环境微生物菌种鉴定

环境微生物菌种鉴定微生物是地球上数量最多的生物,它们在我们的生活和环境中无处不在。

为了更好地利用和保护这些微生物资源,我们需要对它们进行鉴定和分类。

本文将介绍环境微生物菌种鉴定的基本方法和应用领域。

一、微生物菌种鉴定的基本方法1、形态学鉴定形态学鉴定是根据微生物的形态、大小、颜色、生长速度等特征对其进行分类和鉴定的一种方法。

通过观察菌落的形状、大小、质地、颜色、边缘特征等,可以初步判断微生物的种类。

2、生理生化鉴定生理生化鉴定是通过测试微生物对各种底物的发酵反应和代谢产物的性质,判断其生理生化特性,从而对其进行分类和鉴定的一种方法。

常见的生理生化试验包括糖发酵试验、柠檬酸盐试验、吲哚试验等。

3、分子生物学鉴定分子生物学鉴定是基于微生物基因组序列差异对其进行分类和鉴定的方法。

该方法通过提取微生物基因组DNA,进行PCR扩增,然后进行序列比对,判断微生物的种类和亲缘关系。

二、环境微生物菌种鉴定的应用领域1、环境保护环境微生物菌种鉴定在环境保护方面具有广泛的应用。

例如,在污水处理中,通过鉴定微生物的种类和数量,可以优化污水处理工艺,提高处理效率。

在土壤污染治理中,通过鉴定能够降解特定污染物的微生物种类,可以针对性地设计生物治理方案。

2、生物多样性研究环境微生物菌种鉴定在生物多样性研究中具有重要意义。

通过对不同生态环境中的微生物进行鉴定,可以揭示不同地区和不同气候条件下的生物多样性特征,为保护生物多样性和生态平衡提供科学依据。

3、生物技术应用环境微生物菌种鉴定在生物技术领域具有广泛的应用。

例如,在生物制药中,通过鉴定微生物的种类和代谢产物,可以发现新的药物资源和开发新的药物。

在农业微生物肥料开发中,通过鉴定微生物的种类和生理生化特性,可以研制出具有特定功能的微生物肥料。

三、总结环境微生物菌种鉴定是微生物资源保护和利用的重要手段。

通过形态学、生理生化和分子生物学等方法对微生物进行分类和鉴定,可以更好地了解和利用这些资源。

葡萄酒酵母菌菌种筛选与鉴定

葡萄酒酵母菌菌种筛选与鉴定

葡萄酒酵母菌菌种筛选与鉴定一、前言葡萄酒的制作是一个涉及多个环节的复杂过程,其中酵母菌作为发酵的主体之一起着非常重要的作用。

酵母菌种的筛选和鉴定是葡萄酒制作中至关重要的一环,选用合适的酵母菌种能够使葡萄酒更好地发酵,提高酒体质量和口感,从而提高产品的市场竞争力和品牌知名度。

二、葡萄酒发酵中的酵母菌种葡萄酒的发酵过程主要是利用酵母菌将葡萄中的糖分转化成乙醇和二氧化碳,形成酒精发酵过程。

在酿造葡萄酒的过程中,酒厂一般采用的是多种酵母混合的方法进行发酵,这样能够使酵母菌产生更多的代谢产物,提高葡萄酒的风味和特色。

目前用于葡萄酒发酵的酵母菌可以分为自然发酵酵母和人工培养的酵母两种类型。

自然发酵酵母是指无任何添加剂,通过自然选择和筛选获得的酵母种类。

而人工培养的酵母则是通过人工筛选和培养获得的酵母种类。

三、葡萄酒酵母菌种的选用与鉴定在酿造葡萄酒的过程中,酒厂一般采取多种类的酵母混合的方法进行发酵,利用各种酵母的不同特点来提高酒体的质量和口感。

为了选用适合自己生产的葡萄酒的酵母种这里对酵母菌的选用和鉴定的方法进行介绍。

(一)菌种筛选菌种筛选是指通过筛选,从众多菌种中筛选出一些可以用于葡萄酒发酵的酵母菌。

菌种筛选的方法一般有以下几种:1、自然筛选法:将葡萄酒的发酵物发酵一段时间后,根据酵母种的数量和特征进行筛选。

2、体外选择法:将酵母菌培养于不同营养条件下,通过检测酵母株是否对环境适应能力反映出来。

3、化学诱导法:通过添加特定化学物质的方法,诱导酵母菌株发生变异和突变,寻找具有特殊性状的菌株。

(二)菌种鉴定菌种鉴定是指通过对菌种的形态特征、生理代谢特征、分子生物学特征等方面进行分析和研究,鉴定该菌株是否为葡萄酒发酵中常见的酵母菌。

目前常用的酵母菌鉴定方法包括以下几种:1、形态学鉴定法:通过菌落形态、形态特征等对菌株进行鉴定。

2、生理学鉴定法:通过菌株对不同营养物质的利用特性、代谢产物的检测等对菌株进行鉴定。

3、分子生物学鉴定法:通过对酵母菌的DNA序列、核酸序列进行分析,对菌株进行鉴定。

菌种鉴定的依据

菌种鉴定的依据

菌种鉴定的依据
菌种鉴定是指通过对菌株的形态学、生理生化特征、生态习性以及分子生物学特征等方面的分析,确定菌株的种属分类和亚种分类。

菌种鉴定的依据主要包括以下几个方面:
1. 形态学:包括菌落形态、菌丝形态、孢子形态、染色反应等
方面的特征。

通过比较菌株的形态学特征,可以初步确定其种属分类。

2. 生理生化特征:包括菌株生长速度、营养需求、代谢产物等
方面的特征。

通过比较菌株的生理生化特征,可以进一步确定其种属分类和亚种分类。

3. 生态习性:包括菌株的生境、生长条件、寄主等方面的特征。

通过比较菌株的生态习性,可以确定其种属分类和亚种分类,并推测其在自然界中的分布和生态功能。

4. 分子生物学特征:包括菌株的DNA序列、蛋白质结构等方面
的特征。

通过比较菌株的分子生物学特征,可以准确地确定其种属分类和亚种分类,并建立菌株间的进化关系。

综上所述,菌种鉴定的依据主要包括形态学、生理生化特征、生态习性和分子生物学特征等方面的特征。

通过综合比较这些特征,可以准确地确定菌株的种属分类和亚种分类,为菌种鉴定提供科学依据。

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食用菌技术复习题答案

食用菌技术复习题答案

第一章食用菌基础1.名词解释菌丝:在培养基上向各个方向呈辐射状延伸、分支的每一根细线,称为菌丝。

细胞管状,壁薄、透明,细胞内含有一个、两个或多个细胞核。

菌丝体:是由基质内无数纤细的菌丝交织而成的丝状体或网状体。

单核菌丝:由担孢子萌发后,先形成没有隔膜的多核初生菌丝,然后再形成许多隔膜,使之成为每个细胞仅有一个细胞核的菌丝,称为单核菌丝。

双核菌丝:担子菌类食用菌中,单核菌丝仅占很短时间,两个单核菌丝很快结合,发生质配,但不核配,形成每个细胞内含有二个细胞核的菌丝,称双核菌丝。

锁状联合:是双核菌丝细胞分裂的一种特殊形式,先在双核菌丝的顶端细胞的两核之间的细胞壁上产生一个小突起,形似小分枝,分枝向下弯曲,其顶端与细胞的另一处融合,在显微镜下观察,形似一把锁,故称为“锁状联合”菌核:真菌在生活过程中由菌丝密集而形成的块状或颗粒状的休眠体。

菌索:由菌丝密集而成的绳索状的结构。

其外貌与根相似,故又称根状菌索。

子座:由菌丝密集而成的容纳子实体的垫状结构。

子实体:是食用菌的繁殖器官,是由分化的菌丝体组成,能产生孢子的菌体或菇体。

菌褶:菌盖下面辐射状生长的薄片叫菌褶。

孢子:是一种有繁殖功能的休眠细胞,分为有性孢子和无性孢子两大类。

菌柄:位于菌褶下方,是菌盖的支持物。

菌环:有些食用菌在幼小时,菌柄和菌盖之间有一包膜相连,子实体长大时,该膜破裂,一部分留在菌盖边缘,一部分留在菌柄上。

留在菌柄上的称为菌环。

菌托:有些食用菌幼年时,其菌蕾的外包着一层膜。

菌蕾长大,外膜破裂,留在菌柄基部的残膜称为菌托。

同宗配合:由一个担孢子萌发的两条单核菌丝能进行结合而生育后代者,称为同宗结合或自交亲和。

初级同宗配合:由同核体产生的同宗结合,如草菇:细胞内两个核没有遗传性差异。

(次级同宗配合:由异核体产生的同宗结合,如双孢蘑菇:担子上只生两个担孢子,每个担孢子含有一对异核体。

异宗配合:多数食用菌的单核菌丝有性别之分,常用“-”与“+”表示。

菌种的鉴定

菌种的鉴定

菌种的鉴定
菌种的鉴定是一种确定菌种身份的过程,通常包括以下步骤:
1.收集样品:从不同来源的样品中收集菌株或分离的菌落。

2.接种:将菌株或分离的菌落接种到适当的培养基上,培养出纯种。

3.形态分析:观察菌株在培养基上的形态,包括形状、大小、颜色等。

4.生理特性分析:检测菌株在特殊环境条件下的生长表现,如温度、pH、气氛等。

5.分子特征分析:使用分子生物学技术(如PCR、基因测序等)分析
菌株的基因组,确定其遗传特征和进化关系。

6.比对和识别:将菌株的形态、生理和分子特征与已知菌种进行比对,确定其身份。

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菌种鉴定的几方面特征1、个体形态:镜检细胞形状、大小、排列,革兰氏染色反应,运动性,鞭毛位置、数目,芽孢有无、形状和部位,荚膜,细胞内含物;放线菌和真菌的菌丝结构,孢子丝、孢子囊或孢子穗的形状和结构,孢子的形状、大小、颜色及表面特征等。

2、培养特征:①在固体培养基平板上的菌落和斜面上的菌苔性状(形状、光泽、透明度、颜色、质地等)。

②在半固体培养基中穿刺接种培养的生长情况。

③在液体培养基中混浊程度,液面有无菌膜、菌环,管底有无絮状沉淀,培养液颜色等。

3、生理生化特征:生理生化特征与微生物的酶和调节蛋白的本质和活性直接相关,酶及蛋白质都是基因产物,所以对微生物生理生化特征的比较也是对微生物基因组的间接比较,加上测定生理生化特征比直接分析基因组要容易得多,因此生理生化特征对于微生物的系统分类仍然是有意义的。

4、血清学试验与噬菌体分型。

5、氨基酸顺序和蛋白质分析。

6、核酸的碱基组成【(G+C)%】7、核酸的分子杂交。

营养缺陷型的应用从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始菌株,称为野生型菌株。

野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养(氨基酸、维生素、核酸等)的能力,只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长,称为营养缺陷型。

营养缺陷型菌株的筛选,在生产实践和基础理论中都有着重要的意义。

生产实践中,营养缺陷型可用于工业微生物育种,协助解除代谢反馈调控机制,从而达到大量积累终产物的目的;也可将营养缺陷型菌株作为生产菌种杂交、重组育种时的遗传标记。

在基础理论中,营养缺陷型不仅被广泛应用于阐明微生物代谢途径上,而且在遗传学上具有特殊的地位。

在遗传规律中的转化、转导、原生质体融合、质粒和转座因子等的研究中,营养缺陷型是最常用的标记菌种。

代谢调控的类型1、初级代谢的调节控制:虽然代谢调节方式很多,由于微生物细胞体内的所有生化反应都是在酶的催化下进行的,因此,对酶的调节控制是最主要、最有效的调控方式。

它包括两个方面,一是调节酶的合成量(反馈阻遏),二是调节现成酶分子的催化活力(反馈抑制)。

两者密切配合和协调,以达到最佳的调节效果。

①酶合成的调节:酶合成的调节是一种通过调节酶的合成量进而调节代谢速度的调节机制,这是一种在基因水平上(在原核生物中主要在转录水平上)的代谢调节。

凡能促进酶生物合成的调节,称为诱导,而能阻碍酶生物合成的调节,则称为阻遏。

②酶活性的调节:酶活性调节是以酶分子的结构为基础的,在酶分子水平上的一种代谢调节。

它是通过改变现成的酶分子活性来调节新陈代谢的速率,包括酶活性的激活和抑制两个方面。

2、次级代谢的调节控制:①次级代谢产物的诱导调节②次级代谢产物碳源分解调节③次级代谢产物氮源分解调节④次级代谢反馈调节⑤磷酸盐调节⑥细胞膜透性的调节原生质体的制备方法制备大量具有活性的原生质体是微生物原生质体融合育种的前提。

为制备原生质体,必须有效地除去细胞壁。

去壁的方法有三种:⑴机械法⑵非酶分离法⑶酶法。

采用前两种方法制备的原生质体效果差,活性低。

酶法分离原生质体的方法:首先选择原始亲株,经过遗传标记筛选,得到直接亲本,采用培养皿平板玻璃纸或摇瓶振荡法培养,取年轻的菌体转入到高渗溶液中,加入有关水解酶,在一定条件下(温度、pH值等)酶解细胞壁。

酶解后释放的原生质体和残存菌丝片断的混合液经过滤,除去大部分菌丝碎片。

滤液进一步低速离心10min,洗涤后弃去上清液,沉淀悬浮于同一种高渗溶液中,即可得到纯化的原生质体。

融合体的鉴定融合体中除重组体外,还有异核体或部分结合子、杂合二倍体或杂合系,这些都会在平板上形成菌落,检出融合体的方法有多种,在育种工作中可根据实验目的和微生物不同加以选择,下面是在原生质体融合育种中经常采用的。

⑴利用营养缺陷型标记选择融合体,其检出设计的原则是在分离的培养基上只有融合体生长而不能让双亲本原生质体形成菌落。

融合的双亲带有不同营养缺陷型标记,原生质体融合处理后的混合物直接分离到基本培养基上就可检出融合体。

⑵利用抗药性选择融合体,微生物的抗药性是菌种的重要特性,是由遗传物质决定的。

不同种的微生物对某一种药物的抗性存在差异,利用这种特性也可用于融合体筛选。

⑶利用荧光染色法选择融合体,荧光染色法是事先使双亲染色体而携带不同荧光色素标记,然后在显微操作器和荧光显微镜下,挑取同时带有双亲原生质体荧光标记的融合体,直接分离到再生培养基上再生,最后得到融合体。

⑷钝化选择法,用灭活原生质体和具活性原生质体融合(营养缺陷型),由于灭活亲株原生质体和营养缺陷型亲株原生质体在基本培养基上都不能生长,只有融合体才能形成菌落。

菌种选育的方法和特点1、诱变育种:微生物的诱变育种,是以人工诱变手段诱发微生物基因突变,改变遗传结构和功能,通过筛选,从多种多样的变异体中筛选出产量高、性状优良的突变株,并且找出发挥这个变株最佳培养基和培养条件,使其在最适的环境条件下合成有效产物。

基因突变是微生物变异的主要源泉。

人工诱变又是加速基因突变的重要手段。

以人工诱发突变为基础的微生物诱变育种,具有速度快、收效大、方法简单等优点,它是菌种选育的一个重要途径。

2、杂交育种:微生物杂交的本质是基因重组,优点:第一,通过具有不同遗传性状菌株的杂交,使遗传物质进行交换和重新组合,改变亲株的遗传物质基础,扩大变异范围,使两亲株的优良性状集中于重组体内,获得新品种。

第二,通过杂交后获得具有新遗传特性的重组体,不仅可克服因长期诱变造成的生活力下降,代谢缓慢等缺陷,也可以提高对诱变剂的敏感性,降低对诱变剂的“疲劳”效应。

第三,通过杂交可以总结遗传物质的转移和传递规律,丰富并促进遗传学理论的发展。

3、基因工程育种:与传统育种方法不同的是,基因工程育种不但可以完全突破物种间的障碍,实现真正意义上的远缘杂交。

而且这种远缘既可跨越微生物之间的种属障碍,还可实现动物、植物、微生物之间的杂交。

广义的基因工程育种包括所有利用DNA重组技术将外源基因导入到微生物细胞,使后者获得前者的某些优良性状或者利用后者作为表达场所来生产目的产物。

由于微生物是单细胞,且结构简单,是基因工程理想的表达载体。

所以许许多多来自于不同界的物种(人体、动物、植物、微生物等)的基因都被成功地克隆到微生物细胞中并获得表达。

诱变育种的方法和优缺点诱变育种具有方法简单、投资少、收获大等优点,但它最大缺点是缺乏定向性。

在诱变育种过程中应注意出发菌株、诱变剂及诱变剂量的选择、诱变处理方式方法的应用,以及结合有效的筛选方法等来弥补不足,以提高诱变育种的效率。

诱变育种的步骤和方法包括:出发菌株的选择,单孢子(或单细胞)菌悬液的制备,诱变剂及诱变剂量的选择,诱变的处理方法,以及纯化分离等。

1.出发菌株要求:⑴对诱变因素敏感的菌株;⑵选择具备一定生产能力,并且在生产过程中经过自然选育的菌株;⑶采用具有有利性状的菌株,如生长速度快、营养要求低以及产孢子早而多的菌株;⑷选择纯种作出发菌株;⑸选择出发菌株应考虑其稳定性;⑹选择出发菌株的其他因素;2.出发菌株的纯化:确定诱变出发菌株之后,就要进行纯化,通过菌种纯化分离,从单菌落中挑选所需要的优良菌株,与具有其他性状的菌株分离开来,从中获得遗传性状基本一致的,并且稳定的变种。

纯种分离方法,常用划线分离法和稀释分离法。

3.单孢子(或单细胞)悬液的制备:在诱变育种中,所处理的细胞必须是单细胞、均匀的悬液状态。

这是因为,一方面分散状态的细胞可以均匀地接触诱变剂,另一方面又可避免长出不纯菌落。

4.诱变剂及诱变剂量:凡能诱发生物基因突变,并且突变频率远远超过自发突变率的物理因子或化学物质,称为诱变剂。

它们包括物理诱变剂、化学诱变剂和生物诱变剂三大类。

诱变的最适剂量,应该使所希望得到的突变株在存活群体中占有最大的比例,这样可以减少以后的筛选工作量。

5.诱变的处理方法:⑴单因子处理⑵复合因子处理①两个以上因子同时处理②不同诱变剂交替处理③同一种诱变剂连续重复使用④紫外线光复活交替处理。

反馈阻遏和反馈抑制的原理反馈阻遏:主要是通过终产物与阻遏蛋白的亲和力的改变,使阻遏蛋白与操纵基因结合,不能合成mRNA,从而达到对整个反应过程进行调节的目的。

反馈抑制:主要的作用方式在于末端产物对反应途径中调节酶的抑制。

受反馈抑制的调节酶一般都是变构酶,酶活力调控的实质就是变构酶的变构调节。

变构酶分子具有两个和低分子物质结合位点,一个是与底物结合的催化中心(活性中心),另一个可与调节因子(又称效应物)相结合的调节中心(变构中心)。

当效应物与调节中心结合后,可引起酶蛋白分子发生构象变化,从而引起酶的活性中心对底物的亲和力和催化能力的改变,阻碍了酶和它的底物的结合,促进或抑制了酶活力,使整个代谢途径的快、慢受到调节,称这种现象为变构效应。

抗反馈调节菌株的筛选抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。

其特点是所需产物不断积累,不会因其浓度超量而终止生产,如果由于结构基因突变而使变构酶成为不能和代谢终产物相结合的,便是失去了反馈抑制的突变,称为“抗反馈突变型”,若是由于调节基因突变引起调节蛋白不能和代谢终产物相结合而失去阻遏作用的,称为“抗阻遏突变型”。

操纵基因突变也能造成抗阻遏作用,产生类似于组成型突变的现象。

其方法是把结构类似物作为筛选的遗传标记。

通常是把结构类似物和培养基混合制成平板,诱变后菌体分离其上,经培养,那些被解除反馈调节的突变株可以选择性地生长,并在细胞内合成相应的氨基酸。

变株的菌落在生长过程把氨基酸分泌到培养基中,促使菌落周围敏感菌的生长,形成一个混淆的增殖圈,挑取增殖圈大而明显的菌落,进一步试验复证。

建库前的菌种的检定(大肠杆菌表达的工程菌菌种)1、划种LB琼脂平板,应呈典型大肠杆菌集落形态,无其他杂菌生长,2、涂片革兰氏染色,在光学显微镜下观察为典型的革兰氏阴性杆菌,3、对抗生素的抗性,应与原始菌种相符,大多数为抗氨卡青霉素,4、电镜检查,应为典型大肠杆菌形态,无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。

5、生化反应,应符合大肠杆菌生物学性状,6目的产物表达量,在摇床中培养应不低于原始菌种的表达量,7、表达产物的类型,用免疫学或合适方法证明型别无误,8、质粒检查,质粒的酶切图谱应与原始质粒相符。

微生物细胞的破碎方法化学法:1、自溶法,细胞膜结构在一定的条件下,由于细胞自体的各种水解酶如蛋白酶、酯酶等的酶解作用而发生溶解,2、表面活性剂处理法,常用十二烷基硫酸钠等阴离子表面活性剂,3、脂溶性溶剂处理法:用丙酮、氯仿、甲苯等溶解细胞的脂蛋白,4、用低渗溶液,如氨水、稀盐及含有少量有机溶剂的水溶液处理,是细胞膜胀破。

物理法:1机械磨碎法,2、加压破碎法,在55Mpa的高压下,急速喷射撞击挤压。

3超声破碎法,4反复冻融法。

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