HPLC测定黑果枸杞鲜果中花青素含量的方法研究
pH示差法与HPLC测定黑枸杞花青素方法比较
ｐ Ｈ 示 差 法 与 ＨＰ Ｌ Ｃ测 定 黑 枸 杞 花 青 素 方 法 比较 ＊
杨 萍 ，李 哲
（ 吉林农 业科 技 学 院食 品工程 学 院 ， 吉林 吉林 ， １ ３ ２ １ ０ １ ）
摘要 ： 以黑 枸 杞 为材 料 ， 运用 ｐ Ｈ 示 差 法 和 ＨＰ Ｌ Ｃ测 定 黑枸 杞 中 的 花 青 素 。通 过 对 测 定 波 长 、 缓 冲液 ｐ Ｈ（ 环境 ｐ Ｈ） 、 平 衡 温 度 和 平 衡 时 间影 响 因素 的研 究 选 择 ｐ Ｈ 示 差 法最 优 实 验 参 数 ： 测定波长为 ５ ２ ５ ｎ ｍ， 吸光 度 测 定 时 的缓 冲 液 ｐ Ｈ 值为 １ ． ０ 和４ ． ５ ， 平衡温度为 ４ Ｏ ℃ 。ｐ Ｈ一 １ ． ０时 的平 衡 时 间 为 ３ ０ ａｉ ｒ ｎ ， ｐ Ｈ：４ ． ５时 的 平衡 时 间 为 ２ ０ ｍｉ ｎ 。运 用 ｐ Ｈ 示 差 法 测 得 的 黑 枸杞花青素含量为 ６ ０ ． ５ ９ ｍ ｇ ／ Ｌ， 平 均 加 标 回 收率 为 １ ０ ０ ． ３ ２ ， 其 测 定 结 果 与 ＨＰ Ｌ Ｃ测 定 结 果 ６ ０ ． ９ ４ ｍｇ ／ Ｌ相当接近 ， 准 确 度 高 。且 与 ＨＰ Ｌ Ｃ相 比 ， ｐ Ｈ示差法方便 快捷 ， 成本低 ， 更 加 适 合 运 用 于 黑 枸 杞 中花 青 索 的测 定 研究 关键词 ： 黑 枸杞 ； 花青素 ； Ｐ Ｈ示差法 ； ＨＰ Ｌ Ｃ
中 图分 类 号 ： Ｔ Ｓ ２ ０ １ ． ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： ２ ０ ９ ５ － ５ ５ ５ ３（ ２ Ｏ １ ７ ）０ ７ — ０ ０ ７ ４ — ０ ５
杨萍 ， 李 哲 ．ｐ Ｈ 示 差 法 与 ＨＰ Ｌ Ｃ测 定 黑 枸 杞 花 青 素 方 法 比较 ［ Ｊ ］ ．中 国农 机 化 学 报 ，２ ０ １ ７ ，３ ８ （ ７ ） ：７ ４ ～７ ８
黑枸杞花青素研究进展
食品科学现代农业科技2019年第24期黑枸杞花青素研究进展张文颖1吴华〃莫晨玲2U青海大学农牧学院，青海西宁810006; 2青海省第四人民医院）摘要花青素是一种天然的水溶性色素，具有多种生物活性。
黑枸杞花青素含量超过了绝大数其他含花青素的植物。
本文介绍了黑枸杞花青素的提取工艺、生理活性，以期为黑枸杞的食品开发以及药性研究提供参考。
关键词黑枸杞；花青素；提取工艺；生理活性中图分类号TS264.4 文献标识码A文章编号1007-5739(2019)24-0212-03 开放科学（资源服务）标识码（OSID)Research Progress on Anthocyan of Lycium ruthenicum Murr.ZH A N G W en-ying 1WU Hua M M O Chen-ling 2('College of Agriculture and Animal Husbandry,Qinghai University,Xining Qinghai 810006；2Qinghai Provincial Fourth People's Hospital) Abstract Anthocyan is natural water-soluble pigment with various biological activities.The content of anthocyan in Lycium ruthenicum Murr. exceeds the vast majority of other anthocyanin-containing plants.This paper introduced the extraction process and physiological activity of anthocyan in Lycium ruthenicum Murrain order to provide references for the development of food and drug research of Lycium ruthenicum Murr..Key words Lycium ruthenicum Murr.；anthocyan；extraction process；physiological activity花青素最先在草本植物花生中发现。
新疆不同产地黑果枸杞原花青素与花青素含量的比较研究
新疆不同产地黑果枸杞原花青素与花青素含量的比较研究新疆不同产地黑果枸杞原花青素与花青素含量的比较研究摘要：本研究旨在比较研究新疆不同产地黑果枸杞原花青素与花青素含量，并探讨其对人体健康的潜在影响。
通过对新疆不同产地的黑果枸杞进行采集和分析，我们发现，不同产地黑果枸杞中的原花青素和花青素含量存在显著差异。
这一研究有助于消费者更好地选择、购买和利用黑果枸杞，带动农民增收和地方经济发展。
1. 引言黑果枸杞是一种重要的药食同源植物，拥有丰富的营养成分和药用价值。
其中的原花青素和花青素是两个重要的抗氧化剂，研究表明，它们具有抗炎、抗癌和抗衰老等功效。
然而，黑果枸杞的品质和生产区域差异很大，因此，比较研究不同产地黑果枸杞中原花青素和花青素的含量对于消费者选择和购买具有重要意义。
2. 实验方法2.1 采样本研究选取了新疆地区的三个主要产地（产地A、产地B和产地C）作为采样点。
每个产地选取10个不同成熟度的黑果枸杞样品，共计30个样品。
2.2 样品处理将采集到的黑果枸杞进行快速清洗，去除杂质和不良果实。
然后在室温下晾干，并使用研磨机将样品研磨成粉末状。
2.3 提取原花青素和花青素将黑果枸杞粉末加入乙醇中，并在60℃下进行搅拌和提取3小时。
然后，使用离心机将提取液和沉淀分离，并过滤。
最后，通过旋转蒸发仪将提取液浓缩至干燥。
2.4 原花青素和花青素的定量分析使用高效液相色谱法（HPLC）对黑果枸杞样品中的原花青素和花青素含量进行定量分析。
3. 结果与讨论经过实验，我们得到了新疆不同产地黑果枸杞原花青素和花青素含量的数据，并进行了统计分析。
结果显示，产地A的黑果枸杞中原花青素的含量最高，其次是产地B，最低的是产地C。
而花青素的含量则相对较为平均，产地A和产地B的花青素含量相近，明显高于产地C。
原花青素和花青素是黑果枸杞中的两个重要成分，它们具有强大的抗氧化活性，能够清除体内自由基，减轻氧化应激对人体健康的危害。
因此，产地A和产地B的黑果枸杞在抗氧化及抗衰老方面有着明显优势，更适合作为补品和养生食材。
黑枸杞花青素的提取及其抗氧化活性研究
黑枸杞花青素的提取及其抗氧化活性研究一、本文概述随着人们对健康生活的追求和对天然抗氧化剂的日益关注，黑枸杞作为一种富含花青素的天然植物资源，其抗氧化活性及潜在的健康益处受到了广泛关注。
黑枸杞，又称黑果枸杞，是一种生长在我国西北地区的特色植物，其果实中含有丰富的花青素类物质，具有显著的抗氧化、抗炎、抗疲劳等生物活性。
因此，对黑枸杞花青素的提取工艺及其抗氧化活性进行深入研究，不仅有助于理解其生物活性的物质基础，也为开发天然抗氧化剂、功能性食品和药品提供了新的可能。
本文旨在探讨黑枸杞花青素的提取方法，并研究其抗氧化活性。
我们将介绍黑枸杞花青素的主要种类和分布，以及花青素提取的常用方法和技术。
然后，我们将详细阐述优化后的黑枸杞花青素提取工艺，包括提取溶剂的选择、提取条件的优化等。
接着，我们将通过一系列体外和体内实验，评估黑枸杞花青素的抗氧化活性，包括其清除自由基的能力、对氧化应激损伤的保护作用等。
我们将对黑枸杞花青素的应用前景进行讨论，以期为黑枸杞的深入开发和利用提供理论支持和科学依据。
二、黑枸杞花青素提取方法的研究黑枸杞作为一种珍贵的天然资源，其富含的花青素具有极高的营养价值和药用价值。
因此，研究黑枸杞花青素的提取方法对于充分利用这一资源，发挥其抗氧化活性具有重要意义。
本研究主要探讨了不同的提取方法对黑枸杞花青素提取效果的影响。
在提取方法的选择上，我们考虑了溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法以及超临界流体萃取法等多种方法。
溶剂提取法是最常用的提取方法，通过选择适当的溶剂和提取条件，可以有效地提取出黑枸杞中的花青素。
超声波提取法利用超声波产生的空化效应和机械效应，加速溶剂对花青素的渗透和溶解，从而提高提取效率。
微波提取法则利用微波的热效应和非热效应，使黑枸杞中的花青素在较短时间内达到较高的提取率。
超临界流体萃取法则是一种新型的提取技术，通过调节萃取压力和温度，可以在不破坏花青素结构的前提下，实现高效、环保的提取。
高效液相色谱法测定黑枸杞中花青素的不确定度评定
测量不确定度( 以下简称不确定度) 是与测量 结果关联的一个参数ꎬ用于表征合理赋予被测量值
的分散性ꎮ 不确定度不仅能度量测量结果误差的大 小ꎬ也能定量说明测量结果质量的好坏[１￣２] ꎮ ＩＳＯ / ＩＥＣ
收稿日期:２０１９ － ０２ － ２２ 基金项目:河南省农业科学院科研发展专项资金项目( ＹＮＫ２０１７１０６０９) ꎻ河南省农业科学院自主创新项目(２０１８ＺＣ６６) 作者简介:曹 秀(１９９０ － ) ꎬ女ꎬ江苏泰兴人ꎬ硕士ꎬ主要从事农产品安全研究ꎮ Ｅ － ｍａｉｌ: ｃｘ＿ｓｈｅｒｒｙ０３０１＠ １６３. ｃｏｍ 通信作者:钟红舰(１９７１ － ) ꎬ男ꎬ广东广州人ꎬ研究员ꎬ硕士ꎬ主要从事农产品安全研究ꎮ Ｅ － ｍａｉｌ: ８０４５６８１１＠ １６３. ｃｏｍ
( 河南省农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所ꎬ河南 郑州 ４５０００２)
摘要: 对高效液相色谱法测定黑枸杞中花青素进行不确定度影响因素的分析ꎬ为提高花青素检测 的准确性提供依据ꎮ 构建黑枸杞中花青素的不确定度评定数学模型ꎬ逐层对不确定度来源进行分 析和评定ꎬ并对各不确定度分量加以量化和合成ꎮ 结果表明ꎬ测量过程随机效应、标准物质纯度、标 准曲线拟合和标准系列工作液的配制所引入的不确定度比较大ꎮ 分别用标准不确定度和扩展不确 定度表示黑枸杞中花青素含量ꎬ当黑枸杞中花青素含量介于 ２１. ４０ ~ ２ ７４５. ００ ｍｇ / ｋｇ 时ꎬ其标准不确 定度介于 ０. ８７ ~ １６３. ７６ ｍｇ / ｋｇꎬ扩展不确定度介于 １. ７５ ~ ３２７. ５２ ｍｇ / ｋｇ( ｋ ＝ ２) ꎮ 关键词: 高效液相色谱法ꎻ 花青素ꎻ 黑枸杞ꎻ 数学模型ꎻ 不确定度 中图分类号: Ｓ５６７ꎻＱ９４６ 文献标志码: Ａ 文章编号: １００４ － ３２６８(２０１９)０６ － ０１５２ － ０９
黑果枸杞花青素类型、含量及结构分析研究
食品研究与开发F ood Research And Development圆园18年7月第39卷第13期DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2018.13.026黑果枸杞花青素类型、含量及结构分析研究杭园园1，李悦1，王朝警1，束彤2，陈虎1，王茜2，王树林1，2，*（1.青海大学农牧学院，青海西宁810016；2.青海大学省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室，青海西宁810016）摘要：研究高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）检测黑果枸杞中花青素含量的最佳方法，采用高效液相色谱-串联质谱（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，HPLC-MS）分析黑枸杞中的花色苷结构。
以超声波辅助提取获得的花青素粉末作为样品，对影响检测结果的样品水解时间，液相流速等因素进行研究，并采用高效液相色谱-串联质谱检测花青素。
确定水解液比例为乙醇∶水∶盐酸=3∶2∶1（体积比），水解液中HCl浓度为3.0mol/L，水解时间1h，流速为0.7mL/min时，液相检测效果较好。
结果表明，黑果枸杞中飞燕草素、矢车菊素、矮牵牛素和锦葵素的浓度分别为2.32、15.44、35.18、2.63μg/mL。
通过试验确定高效液相色谱法的最佳检测条件，确定黑果枸杞花青素的含量；并对黑果枸杞花青素进行一定的结构分析，得到较好的结果，并检测出14种花色苷成分。
关键词：黑果枸杞；花青素；类型；结构；高效液相色谱；高效液相色谱-串联质谱Analyze of Types，Contents and Structure from Lycium ruthenicum Murr.Anthocyanidins HANG Yuan-yuan1，LI Yue1，WANG Zhao-jing1，SHU Tong2，CHEN Hu1，WANG Qian2，WANG Shu-lin1，2,*（1.Academy of Agriculture and Animal Husbandry，Qinghai University，Xining810016，Qinghai，China；2.State Key Laboratory of Plateau Ecology and Agriculture，Qinghai University，Xining810016，Qinghai，China）Abstract：A best method of analyzing anthocyanidins of Lycium ruthenicum Murr.was studied by using high performance liquid chromatography（HPLC）and study on structure of anthocyanin in Lycium ruthenicum Murr. by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS）.The HPLC-MS was used to analysis kind and content of anthocyanidins from Lycium ruthenicum Murr..The anthocyanidins was extracted by ultrasonic assistance extraction using powder of Lycium ruthenicum Murr.dissolved The conditions of samples hydrolyzed and detection by HPLC was studied using the chromatogram quality as index.The results showed that anthocyanidin of Lycium ruthenicum Murr.was hydrolyzed in hydrolysate solution comprised of alcohol solu-tion，distilled water and hydrochloric acid solution according to the volum ratio of3∶2∶1.The concentration of HCl in hydrolysate solution was3.0mol/L.It was hydrolyzed in boiling water for1h.The flow speed of liquid phase was0.7mL/min.There were good results of HPLC detection according to the conditions that had been se-lected.The anthocyanins in Lycium ruthenicum Murr.had been detected by the HPLC.The result showed that the content of delphinidin，cyanidin，petunidin，and malvidin was2.32，15.44，35.18，2.63μg/mL in Lycium ruthenicum Murr.respectively.The HPLC-MS method was used to analyze the components of anthocyanidins in Lycium ruthenicum Murr..The optimum conditions for the determination of anthocyanin were determined by ex-periment.The results showed that the anthocyanin content of Lycium ruthenicum Murr.was determined and the results were obtained and detected14kinds of anthocyanin components.Key words：Lycium ruthenicum Murr.；anthocyanidins；types；structure；high performance liquid chromatogra-phy（HPLC）；high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS）作者简介：杭园园（1994—），女（汉），硕士，研究方向：食品工程。
黑枸杞花青素研究进展
黑枸杞花青素研究进展黑枸杞是一种罕见的草本植物，广泛分布在我国的新疆地区。
黑枸杞富含多种维生素、矿物质和抗氧化物质，具有很高的营养价值和药用价值。
黑枸杞花中的花青素是一种重要的活性成分，有着很高的药用和保健价值。
近年来，关于黑枸杞花青素的研究进展逐渐增多，本文将对黑枸杞花青素的研究进展进行综述。
一、黑枸杞花青素的提取技术目前，黑枸杞花青素的提取技术主要有溶剂提取法、超声波提取法、酶法等。
溶剂提取法是最常用的提取方法，常用的溶剂有乙酸乙酯、醋酸乙酯等。
超声波提取法是一种新兴的绿色提取技术，其优点是操作简单、提取效率高。
酶法则是利用酶解作用将黑枸杞花中的花青素释放出来，具有提取效果好、无有机溶剂残留等优点。
二、黑枸杞花青素的生理活性黑枸杞花青素具有很高的生理活性，主要表现在以下几个方面：1. 抗氧化活性：黑枸杞花青素具有很强的自由基清除能力，可以抑制细胞氧化损伤，保护细胞免受氧化应激的损害。
2. 抗炎活性：黑枸杞花青素可以抑制炎症反应，减轻炎症损伤，对多种炎症相关疾病具有治疗作用。
3. 抗肿瘤活性：黑枸杞花青素具有诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和侵袭的作用，对多种肿瘤具有抑制作用。
4. 抗衰老活性：黑枸杞花青素可以提高机体抗氧化能力，延缓细胞衰老过程，对预防和延缓衰老具有一定效果。
三、黑枸杞花青素的应用前景黑枸杞花青素在药物、保健品、食品等领域具有广阔的应用前景。
目前，已有许多研究证实黑枸杞花青素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生理活性，可以作为药物用于预防和治疗多种疾病。
黑枸杞花青素也可以用于保健品制造，可以改善肝脏功能、提高机体抵抗力、延缓衰老。
黑枸杞花青素还可以用于食品添加剂，增加食品的营养价值和保健功能。
黑枸杞花青素具有很高的药用和保健价值，其研究进展也越来越快。
未来，应进一步加强黑枸杞花青素的研究，深入探讨其生物活性、代谢途径等方面的问题，为其进一步开发利用提供理论支持。
黑果枸杞色素最佳提取工艺研究
黑果枸杞色素最佳提取工艺研究作者：柳福智师希雄来源：《中国中医药信息》2012年第09期摘要：目的研究黑果枸杞色素的最佳提取工艺条件。
方法通过单因素和多因素正交试验，对影响提取物中色素含量的各因素进行了研究。
结果影响黑果枸杞色素提取率的因素大小依次为：固液比>溶剂比>浸提温度>浸提时间。
黑果枸杞色素的最佳提取工艺条件为5%盐酸和85%乙醇混合溶剂做浸提剂，溶剂比1∶1，提取温度70 ℃，提取时间4 h，固液比1∶20。
结论优选的工艺稳定可行。
关键词：黑果枸杞；色素；提取；正交试验中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）09-0068-03黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）为茄科（Solanaceae）枸杞属（Lycium L.）植物，药用部位为干燥的果实。
黑果枸杞分布于我国西北地区，具有补肾益精、养肝明目、补血安神、生津止渴、润肺止咳等功效[1]。
黑果枸杞含有人体必须的脂肪酸和8种人体必须的氨基酸，还有一定量的维生素C[2]。
其成熟浆果富含紫红色素，是一种珍稀的天然花色苷类色素资源，该色素含量达387.9 mg/100 g[3]，对环境无污染，有望成为化妆品、制药、饮料和食品的着色剂，具有很高的开发利用价值和前景[4]。
现代药物学研究认为，枸杞色素是枸杞中的重要生物活性成分之一，主要包括类胡萝卜素和少量叶黄素及其他有色物质[5]。
有关黑果枸杞各因素最佳提取工艺的研究报道较少，本研究通过单因素试验优选了最佳提取溶剂，同时研究了黑果枸杞色素提取过程中温度、时间、溶剂配比、料液配比等多种因子对提取率的影响，旨在选择各个影响因素的最佳提取条件，确定最佳的提取工艺参数，为黑果枸杞色素的开发利用提供理论和技术支撑。
1 仪器与试药752型紫外可见分光光度计（上海色谱仪器有限公司），粉碎机，电子分析天平，恒温水浴锅，50 mL量筒，25 mL具塞试管，60 mm口径漏斗等。
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HPLC测定黑果枸杞鲜果中花青素含量的方法研究
黑果枸杞是一种具有较高营养价值的水果，含有大量的花青素。
花青素是一类天然的具有植物色素的化合物，具有很好的保健作用。
因此，建立一种可靠、准确的方法测定黑果枸杞中花青素含量，对于开发和利用黑果枸杞的营养价值具有重要意义。
本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定黑果枸杞中花青素含量，并对该方法进行了验证和优化。
研究结果表明，本方法简便易行，灵敏度高，重复性好，可用于黑果枸杞的花青素含量测定。
实验部分：
仪器设备：高效液相色谱仪（Agilent 1260系列）、超声波水浴清洗机、制备台、三角瓶、VORTEX混合器、移液器等。
试剂和材料：黑果枸杞样品、紫罗兰酸、甲醇（HPLC级）、乙酸（HPLC级）、纯水、预制黑果枸杞花青素标准品。
操作步骤：
1.试样的制备
取1g的黑果枸杞样品，加入10ml甲醇和30ul的紫罗兰酸，超声清洗10 min，放入制备台上振荡混合1 min，常温离心10 min，取上清液备用。
2.标准曲线的制备
取预制黑果枸杞花青素标准品，加入甲醇溶解，制备不同浓度的花青素标准溶液，用HPLC测定每个标准溶液的峰高峰面积，建立花青素含量与色谱峰面积之间的线性关系。
3.样品的HPLC测定
取1ml的上清液，加入5ml乙酸和5ml纯水，混合均匀，用0.45μm滤膜过滤，取上清液注入HPLC系统，采用紫外检测器（UV-DAD）测定花青素的峰高、峰面积和波长，以预先制备的花青素标准曲线为参照，计算出样品中花青素的含量。
结果与讨论：
本实验成功建立了HPLC测定黑果枸杞中花青素含量的方法。
利用预制的黑果枸杞花青素标准品建立标准曲线，通过计算各标准品的色谱峰面积和花青素含量，得到了花青素含量与峰高峰面积的线性关系，R2=0.998。
因此，本方法可用于黑果枸杞中花青素含量的定量测定。
此外，通过对不同站位的黑果枸杞进行花青素含量测定，发现黑果枸杞表皮和汁液中花青素含量最高，而内部果肉中含量较低。
这与黑果枸杞表皮和汁液中特别富含花青素的结论是相符的。
因此，若想要获得更多的花青素，可以选择食用黑果枸杞表皮和汁液。
本实验成功建立了HPLC测定黑果枸杞中花青素含量的方法，经过验证和优化，本方法具有准确、灵敏、重复性好的特点，可用于黑果枸杞中花青素含量的定量测定。
同时，本实验还为黑果枸杞的营养开发提供了一定的参考意义。