高效液相色谱仪和紫外分光光度计
高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量
高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量摘要：目的：HPLC及UV测定阿莫西林胶囊的含量对比。
方法：高效液相色谱法选择色谱柱为Agilent C18 (4.6×250mm,5μm), 流动相为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（pH=5)-乙腈（97.5:2.5）,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm,;紫外法选择254nm波长测定含量.结果:HPLC法中阿莫西林在2.56ug·mL-1 ～56.15ug·mL-1范围内线性关系良好.回归方程：Y =65257X-3244531（r=0.9996），加样回收率平均值为100.68%，RSD 1.7%。
结论：HPLC法对比紫外分光光度法测定阿莫西林含量更为准确,重复性高,专属性强.关键词：阿莫西林；高效液相色谱法；紫外分光光度法阿莫西林因其耐酸、口服吸收快、生物利用度高等特点，使其在临床上深受医生和患者的厚爱[1]。
2015版药典中推荐使用高效液相色谱法来分析本品[2]，但相对来说紫外分光光度法仪器设备要求简单，检测时间快捷，该法是否可以作为本品基层药物监测的备选方法值得考察。
本文由此出发，对比分析高效液相及紫外分光光度法测定阿莫西林含量。
1 材料1.1 仪器与试药岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；岛津UV-2450型紫外分光光度计；乙腈由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；氢氧化钾、磷酸二氢钾、N—溴代丁二酰亚胺均为色谱纯；阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130409-201011，纯度85.8%）；阿莫西林胶囊（武汉健民集团随州药业有限公司）。
2 实验方法2.1 高效液相色谱法2.1.1 色谱条件[2]色谱柱选择Agilent C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)，,流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（用2mol/LKOH调节p H值至5.0)-乙腈（97.5:2.5）,检测波长：254 nm, 进样量10μl，1.0 mL/min 流速,柱温为室温（25℃）。
糖厂化验室仪器设备介绍
糖厂化验室仪器设备介绍其中，常见的仪器设备包括高效液相色谱仪（HPLC）、气相色谱仪（GC）、质谱仪、紫外-可见分光光度计、pH计、电导率计、微量显微镜等。
这些仪器设备在糖类产品的成分分析、质量控制和研发过程中发挥着重要作用。
HPLC是一种常用的色谱分析仪器，可用于对糖的组分进行分离和检测。
GC则常用于对糖类产品中的有机成分进行分离和分析。
质谱仪可以用于对糖类分子的结构进行识别和分析。
紫外-可见分光光度计可用于测定糖类产品中的成分浓度和反映产品的质量。
pH计和电导率计则常用于糖厂生产过程中对溶液的酸碱度和电导率进行监测。
除了这些常见的仪器设备外，糖厂化验室还可能配备有显微镜、离心机、恒温箱、振荡器等辅助设备，以满足各种化验和研究需求。
综上所述，糖厂化验室的仪器设备涵盖了多种不同的技术和功能，能够为研究人员和生产人员提供全面的分析和检测支持，有助于保证糖类产品的质量和生产效率。
因此，对于糖厂化验室而言，选择和使用合适的仪器设备是至关重要的。
糖厂化验室的仪器设备在研究和生产糖类产品的过程中发挥着重要作用。
除了常见的色谱仪器、分光光度计、pH计等仪器之外，糖厂化验室还可能配备了其他一些特殊化验仪器和设备，以应对不同实验的需求。
1. 显微镜显微镜在糖厂化验室中扮演着重要的角色。
通过显微镜，实验人员可以对糖类产品中的微观结构和形态进行观察和分析。
这对于研究砂糖结晶的形态、甘蔗纤维的结构、糖浆中微小颗粒的形状等都是必不可少的。
此外，显微镜还可以用于检测异物、杂质等微小颗粒，确保产品的纯净度。
2. 离心机离心机是一种用于离心分离和沉淀实验的常用设备。
在糖厂化验室中，离心机常用于对糖浆、糖蜜等液体样品进行分离、过滤、沉淀等实验。
通过利用离心机，可以快速分离悬浮在糖浆中的颗粒，从而得到纯净的糖浆。
3. 恒温箱恒温箱在糖厂化验室中通常用于保存实验样品或者控制特定的实验环境温度。
在进行糖类产品的发酵实验、储存稀释液、维持培养基的温度等方面发挥着重要作用。
紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用[权威资料]
![紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用[权威资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/7b87624a814d2b160b4e767f5acfa1c7aa008294.png)
紫外―可见分光光度计在药品检测中的应用药品分析是保证药品安全有效的重要手段，在药品的研究、生产、流通、使用和监督管理等环节中均有举足轻重的作用，其主要内容包括性状分析、鉴别、检查和含量测定等方面。
高效液相色谱仪、气相色谱仪、紫外分光光度计等是制药生产中常用的检测仪器。
其中，紫外分光光度计由于准确度高、测定限度低、设备简便、仪器成本低、易于操作等优点，已成为制药生产中必备的检测设备之一，用于药物鉴别、检查和含量测定等。
紫外-可见分光光度法是通过测定物质在紫外-可见光区（200-760nm）产生紫外-可见吸收光谱，根据吸收光谱的特性，对该物质进行定性和定量分析的方法。
其理论基础为朗伯-比耳定律，溶液的吸光度和吸光物质含量、液层厚度乘积成正比。
对于一般的紫外分光光度法，其测量的相对误差在1%～3%。
随着大量心得显色剂的合成及应用，尤其是有关多元络合物和各种表面活性剂的应用研究，推进了元素测定的灵敏度的大幅提高。
采用预富集和示差法，适用质量分数从常量（1%～50%）到痕量（10-10～10-8）。
紫外-可见分光光度法由紫外分光光度法和可见分光光度法两种方法构成，这两种方法在测定的原理、仪器、操作等方面皆相同。
因此，统称为紫外-可见分光光度法，测定仪器一般采用紫外-可见分光光度仪。
在各国药典中，药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等很多项目中，都能见到紫外分光光度法的应用实例。
在制药生产中，紫外分光光度法应用最多的是药物含量的测定、药物杂质检测、药物稳定性考察、释放度、药物负载行为测定及物质结构鉴定等方面。
目前利用紫外分光光度计分析的药物品种有维生素、抗生素、解热药、去痛药、降血压药、安定药、镇咳药、滴眼药、磺胺类药、利尿药、某些妇科药、痢疾药、腹泻药、抗肿瘤药、抗结核药等。
1 紫外分光光度法应用于药物含量测定紫外-可见分光光度法由于灵敏度较高，不仅可用于常量组分的含量测定，也可用于测定微量组分、超微量组分以及多组分混合物同时测定等，在药物分析中主要用于原料药含量测定、制剂含量测定、含量均匀度和溶出度的检查等。
色谱分析法习题及答案
色谱分析法习题及答案1.在液相色谱法中，液固色谱法属于吸附色谱法。
2.在高效液相色谱流程中，试样混合物在色谱柱中被分离。
3.液相色谱流动相过滤必须使用0.45μm的过滤膜。
4.在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行改变流动相的种类或柱子、改变固定相的种类或柱长、改变固定相的种类和流动相的种类、改变填料的粒度和柱长的操作。
5.一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为正庚烷/异丙醇（93/7）。
6.蒸发光散射检测器不能使用梯度洗脱。
7.在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在10～30cm的范围内。
8.在液相色谱中，某组分的保留值大小实际反映了组分与固定相的分子间作用力。
9.在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行改变流动相或固定相种类的操作。
10.紫外吸收检测器是液相色谱中通用型检测器。
11.在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用荧光检测器。
12.在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是减小填料粒度。
13.在液相色谱中，改变流动相流速不会显著影响分离效果。
14.红外检测器不是高液相色谱仪中的检测器。
15.高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了液相系统和样品前处理的步骤。
16.在高效液相色谱仪中，保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是输液泵。
17.高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用国标规定的一级、二级去离子水。
18.高效液相色谱仪与普通紫外-可见分光光度计完全不同的部件是流通池。
19.高效液相色谱仪的通用检测器是紫外检测器。
20.高效液相色谱仪中高压输液系统不包括梯度洗脱装置。
21.在气相色谱分析中，用于定性分析的参数是保留值。
22.在气相色谱分析中，用于定量分析的参数是峰面积。
23.良好的气-液色谱固定液为蒸气压低、稳定性好、溶解度大，对相邻两组分有一定的分离能力。
24.使用热导池检测器时，应选用氢气作载气，其效果最好。
25.下列说法中，不正确的是气相色谱法常用的载气是氧气。
仪器分析课程考试填空题题库
仪器分析课程考试填空题题库1.原子吸收光谱是线状光谱2.热导池检测器是一种浓度型检测器3.在气固色谱中各组份在吸附剂上分离的原理是各组份的吸附能力不一样4.用原子吸收光度法分析时，灯电流太高会导致谱线变窄下降。
5.用气相色谱法定量分析样品组分时，分离度至少为：1.06.液相色谱中通用型检测器是示差折光检测器7.在原子吸收光谱法中，要求标准溶液和试液的组成尽可能相似，且在整个分析过程中操作条件应保不变的分析方法是标准曲线法8.下列因素中,对色谱分离效率最有影响的是柱温9.柱效率用理论塔板数n或理论塔板高度h表示，柱效率越高，则n越大，h越小10.下列化合物中，同时有 n→π*，π→π*，σ→σ*跃迁的化合物是丙酮11.红外吸收光谱的产生是由于分子振动-转动能级的跃迁12.可以消除原子吸收法中的物理干扰的方法是采用标准加入法13.热导池检测器的工作原理是基于各组分的热导系数不同14.荧光分析法的灵敏度通常比吸收光度法的灵敏度高15.紫外-可见吸收光谱主要决定于分子的电子能级跃迁16.在原子吸收分光光度法中，从玻兹曼分布定律可以看出温度越高，激发态原子数越多17.用电位法测定溶液的pH值时，电极系统由玻璃电极与饱和甘汞电极组成，其中玻璃电极是作为测量溶液中氢离子活度的指示电极18.原子吸收光谱法是基于气态原子对光的吸收, 其吸光度与待测元素的含量成正比，即符合朗伯-比尔定律19.原子发射光谱分析法可进行定性、半定量和定量分析。
20.质谱分析有很广泛的应用，除能测定物质的相对分子量外，还用于结构与定量分析21.可做红外分光光度计光源的为硅碳棒22.振动转动能级跃迁的能量相当于红外光23.在符合朗伯－比尔定律的范围内，有色物的浓度、最大吸收波长、吸光度，三者的关系是减小、不变、减小24.连续监测去离子水的质量，下列哪种技术最为方便？电导电极25.在中药现代化研究中，分析效率最高的仪器是LC-MS26.在气相色谱法中，用于定性的参数是保留时间27.在石墨炉原子吸收光谱法中应该选用的保护气为：氩气28.用色谱法进行定量分析时，要求混合物中每一个组分度出峰的是：归一化法29.用离子选择性电极进行测量时，需用磁力搅拌器搅拌溶液，这是为了提高电极的响应速度30.气相色谱中可以用于定性分析的检测器是质谱31.原子发射光谱定量分析中，哪种光源准确度最好?电感耦合等离子体32.在2H++2e==H2反应中，过电位最大的电极材料为滴汞电极33.化学位移是由于核外电子云的屏蔽作用所引起的共振时磁场强度的移动现象。
紫外分光光度计及液相色谱仪的原理及使用
一、紫外光谱与荧光光谱在产生原理上有何不同？荧光光谱有何特点？产生荧光光谱的先决条件是什么?1、紫外线光谱产生原理：紫外－可见吸收光谱是物质中分子吸收200-800nm光谱区内的光而产生的。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级跃迁，当这些电子吸收了外来辐射的能量就从一个能量较低的能级跃迁到一个能量较高的能级。
因此，每一跃迁都对应着吸收一定的能量辐射。
具有不同分子结构的各种物质，有对电磁辐射显示选择吸收的特性。
吸光光度法就是基于这种物质对电磁辐射的选择性吸收的特性而建立起来的，它属于分子吸收光谱。
跃迁所吸收的能量符合波尔条件。
当光照射在物质上时，其中某些光被选择性地吸收，当辐射能等于分子中的电子从低能态跃迁到高能态所需能量时，则分子对光产生吸收，即产生了分子吸收光谱。
荧光光谱产生的原理：物质分子吸收某一波长（激发波长）辐射能被激发后，电子以无辐射方式从高激发态跃迁至第一电子激发态的最低振动能级并释放部分能量，再以辐射的方式释放另一部分能量，该辐射能（光）即为荧光，其波长为发射波长，而产生的光谱即为荧光光谱。
2、荧光光谱特点：（1）以荧光强度对激发波长作图，得到激发光谱；同样以荧光强度对发射波长作图得荧光光谱。
激发光谱与发射光谱的图形几乎是镜面对称。
（2）基于物质吸收光后仅释放部分能量来发射荧光，故发射波长大于激发光波长（3）荧光波长是不变的，光谱的形状与激发波长大小无关3、产生荧光光谱的先决条件是：（1）具有较强的紫外-可见光吸收（2）具有一定的荧光效率二、1、在紫外-可见光测试中所用的比色杯与荧光测试时用的比色杯有何不同？在紫外-可见光测试中所用的比色杯为两面透光，荧光测试为四面透光2、玻璃比色杯与石英比色杯各自的适用波长范围？有一个物质的最大吸收为254nm，另一物质的最大吸收为500nm，这两种物质分别可选用哪几种比色杯？玻璃：320nm以上石英：≥210nm第二种物质两种比色杯都可以用，第一种物质则只能用石英比色杯。
食品仪器分析-高效液相色谱参考答案
高效液相色谱习题一、填空题1.高效液相色谱分析是将流动相用高压泵输送，使压力高达 5 MPa以上，并采用新型的化学键合固定相，是分离效率很高的液相色谱法。
2.高效液相色谱法的特点是分离性能高、分析速度快、检测器灵敏度高、应用范围广。
3.高效液相色谱法和气相色谱法的共同之处是分离功能、分析功能、在线分析。
4.高效液相色谱分析根据分离机理不同可分为四种类型，即液固色谱、液液色谱、键合相色谱、凝胶色谱。
5.高效液相色谱中的液一液分配色谱采用的新型固定相叫化学键合相，它是利用化学方法将固定液官能团键合在载体表面上的。
6.通常把固定相极性大于流动相极性的一类色谱称为正相色谱。
反之称为反相色谱。
7.高效液相色谱仪通常由储液器、输液泵、梯度淋洗器、进样器、色谱柱、检测器、色谱工作站七部分组成。
8.高效液相色谱仪中使用最广泛的检测器为紫外检测器，另外还有折光检测器、荧光检测器等等。
9.高效液相色谱主要用于分析沸点高的、分子量大的、受热易分解的以及具有生理活性物质的分析。
二、判断题√、√、⨯、⨯、√、√、⨯、√、⨯、√、⨯、√、√、⨯、√、⨯、⨯、√、⨯、√、√、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、√、⨯1．液一液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。
（√）2．利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。
（√）3．紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。
（×）4．检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。
（×）5．高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。
（√）6．高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。
（×）7．键合固定相具有机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。
（√）8．在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。
（×）9．正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。
生物化学实验常用仪器
生物化学实验常用仪器一、分光光度计分光光度计是生物化学实验中常用的仪器之一。
它利用可见光或紫外光的吸收特性来测量溶液中化合物的浓度。
分光光度计由光源、选择光波长的光栅、样品池和光电探测器等部分组成。
它可以用于测定溶液中物质的浓度、反应速率、酶活性等。
二、离心机离心机是生物化学实验中常用的一种设备，用于分离溶液中的固体颗粒或液体。
离心机利用离心力将样品强制沉淀，使其在离心管中沉积下来。
离心机可用于分离细胞、蛋白质、DNA等生物大分子，广泛应用于细胞生物学、分子生物学和医学研究等领域。
三、pH计pH计是生物化学实验中常用的测量溶液酸碱性的仪器。
pH计通过测量溶液中氢离子浓度来确定其酸碱性。
pH计通常由电极、电极放大器和显示器组成。
在生物化学实验中，pH计可以用于调节溶液的酸碱性，控制酶催化反应的速率，研究酸碱催化等。
四、电泳仪电泳仪是生物化学实验中常用的一种分离技术。
它利用电场将带电的生物大分子（如DNA、蛋白质）在凝胶或缓冲溶液中进行分离。
电泳仪通常由电源、电极、凝胶槽和检测系统等组成。
在生物化学实验中，电泳仪可用于分离和鉴定DNA片段、蛋白质等，用于分子生物学研究、基因工程和医学诊断等领域。
五、高效液相色谱仪高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用溶液在高压下通过填充在柱中的固定相，通过固定相与溶液中分离物之间的相互作用来分离和鉴定化合物。
HPLC通常由溶液输送系统、柱和检测器等组成。
在生物化学实验中，HPLC可用于分离和鉴定氨基酸、蛋白质、核苷酸等生物大分子，广泛应用于生物医药、食品安全和环境监测等领域。
六、质谱仪质谱仪是生物化学实验中常用的一种分析仪器。
它利用样品中化合物的质量与电荷比来进行分析和鉴定。
质谱仪通常由质谱分析部分、离子源和检测器等组成。
在生物化学实验中，质谱仪可用于鉴定未知物质、分析蛋白质结构和代谢产物等，广泛应用于药物研发、天然产物分析和环境监测等领域。
以上是生物化学实验中常用的一些仪器，它们在生物化学研究和应用中发挥着重要作用。
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药学院药物化学实验室手册分析实验室要求一使用仪器设备时，要认真阅读技术说明书，熟悉技术指标、工作性能、使用方法、注意事项，严格遵照仪器使用说明书的规定步骤进行操作。
二初次使用仪器设备人员，必须在熟练人员指导下进行操作，熟练掌握后方可进行独立操作。
三实验时使用的仪器设备及器材，要布局合理，摆放整齐，便于操作，观察及记录等。
四电子仪器设备通电前，确保供电电压符合仪器设备规定输入电压值，配有三线电源插头的仪器设备，必须插入带有保护接地供电插座中，保证安全。
五使用仪器设备时，其输入信号或外接负载应限制在规定范围之内，禁止超载运行。
六光学化学仪器及其配件，使用时要轻拿轻放，防止震动。
切勿用手触摸光学玻璃表面。
发现灰尘及脏物时，不得用手或抹布擦试，必须使用专用品或专用工具清除。
七有些仪器设备不宜在磁场或电场中操作使用，必须采取屏蔽措施，防止仪器设备损坏或降低测量精度。
八机械类仪器设备，使用前必须进行空载运转确保无故障后方可加载使用。
用前润滑，用后擦试干净，注意日常维护、保养。
九仪器设备不准随意拆改或解体使用，确因需要开发新功能或改造更新等，需按分级管理权限，履行审批手续后再实施。
十经常进行仪器设备的保养与维护，并存放在干燥通风之处，待用时间过长仪器设备，应定期通电开机，防止潮霉损坏仪器设备其零部件。
十一大型精度、贵重仪器设备技术指标定期校验和标定制度，保持应有的技术指标。
做好使用原始记录。
高效液相色谱仪的使用高效液相色谱：是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
客队样品做定性定量分析。
高效液相色谱原理：色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。
其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。
与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
高效液相色谱使用方法：一：高效液相色谱使用流程(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows xp,并运行Bootp Server程序。
2、打开液相色谱各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与液相色谱普通讯，进入的工作站。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面(如果已经在工具栏上就不用此操作了)。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭 Purge valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
单击Ok 进入下一画面。
3、泵参数设定：（以二元泵为例）在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。
在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
单击Ok进入下一画面。
4、自动进样器参数设定: 选择合适的进样方式,进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。
“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。
“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。
“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。
点击Ok进入下一画面。
5、柱温箱参数设定: 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。
点击ok进入下一画面。
6 FLD检测器参数设定:色谱条件：样品：P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。
进样体积：5ul。
柱温箱: 30℃。
EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。
响应时间=4s. 停止时间：出峰完毕。
Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。
Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。
PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。
Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。
Multi Ex ：多波长及光谱（激发）。
Multi Em：多波长及光谱（发射）。
同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。
7、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。
8、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。
9、从菜单“View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)。
10、从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。
区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。
11、从Instrument 菜单选择System on。
12、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。
（DAD, VWD色谱图如下所示：（三）、数据分析方法编辑:1、从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。
2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。
单击Ok。
3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。
从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok,或选择”Use Ranges”调整。
反复进行，直到图的比例合适为止。
4、积分:(1)、从“Integration”中选择“Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。
(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
5、打印报告:(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。
(2)、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。
(3)、单击Ok.(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。
(四)、关机: 关机前，用 100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。
[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关)2流动相的选择：高效液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
它是影响分离的一个非常重要因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
1：所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。
2：溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。
3：在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
4：溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5：从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
高香液相色谱注意事项：1：开机操作：(1)、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server(一般启动时已打开)；(2)、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时(有六行字符)，打开工作站(先打开On line)；(3)、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关(需用针捅抽)，控制流量大小，以能流出的最小流量为准；(4)注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。