链球菌检验作业指导书(副本)
微生物测试作业指导书
微生物测试作业指导书编制：岗位：理化工程师签字：日期：审核：岗位：理化主管签字：日期：批准：岗位：质量经理签字：日期：1.目的：为了对口罩产品和初包装材料的微生物限度和控制菌进行有效控制且满足相应销售区域的标准,特制定本测试作业指导书。
2.范围：适用于本公司口罩产品及初包装材料的微生物检测。
3.职责3.1 质量部负责按照本规程的要求对初包装材料的微生物限度以及口罩产品的细菌、真菌总数和控制菌（大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）进行检验，并出具判定报告。
3.2质量部负责定期对检测结果进行汇总及趋势分析。
3.3质量部负责本文件的编制、审核、批准。
4.工作程序4.1 测试标准：●YY 0469-2011医用外科口罩●GB 19083-2010 医用防护口罩技术要求●GB 15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准●EN 14683:2019 Medical face masks-Requirements and test methods●《中国药典2015版四部》4.2样品的取样数量：对于符合GB 19083-2010、YY 0469-2011和YY /T 0969-2013的口罩产品，取同一生产批的4个样品用于检测。
对于符合EN 14683:2019的口罩产品，取同一生产批的5个样品用于检测。
4.3控制标准：4.3.1产品相关控制标准医用防护口罩（GB 19083-2010）：医用外科口罩（YY 0469-2011）和一次性使用医用口罩（YY /T 0969-2013）：医用口罩（EN 14683:2019）微生物限度标准：≤30cfu/g4.3.2初包装材料微生物控制标准5.检测方法5.1 检测前准备5.1.1培养基a)需从合格供应商处购置成品培养基，作为支持微生物生长繁殖或新陈代谢产物的营养基础。
b)配置前需检查培养基名称和批号，打开后观察有无大型结块和污染。
如果出现上述现象不得使用。
车间微生物检验作业指导书
车间微生物检验作业指导书1. 引言车间微生物检验是保证产品质量和安全的重要环节。
本作业指导书旨在规范车间微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。
2. 适合范围本作业指导书适合于车间微生物检验的所有环节，包括样品采集、样品处理、菌落计数、菌种鉴定等。
3. 检验设备和试剂3.1 检验设备：- 微生物培养箱- 培养基灭菌器- 显微镜- 平板计数器- 灭菌器3.2 试剂：- 培养基- 琼脂- 细菌培养液- 生理盐水- 无菌纱布- 灭菌液4. 检验流程4.1 样品采集4.1.1 样品采集前，操作人员应穿戴好无菌手套和口罩，保持采样环境的洁净。
4.1.2 样品采集应遵循标准采样方法，使用无菌容器采集样品，并确保样品不受外界污染。
4.1.3 采集样品后，即将送至检验室进行处理。
4.2 样品处理4.2.1 样品处理前，操作人员应将工作台面、仪器设备等进行消毒处理，确保操作环境的无菌。
4.2.2 样品处理应根据不同的样品类型进行相应的处理方法，如稀释、过滤等。
4.2.3 处理后的样品应在无菌条件下进行保存，避免细菌污染。
4.3 菌落计数4.3.1 菌落计数前，操作人员应准备好所需的培养基、琼脂等试剂，并进行灭菌处理。
4.3.2 取适量的处理后样品，加入培养基中，均匀涂布在琼脂平板上。
4.3.3 将涂布好的琼脂平板放入微生物培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
4.3.4 培养结束后，使用平板计数器进行菌落计数，记录结果。
4.4 菌种鉴定4.4.1 菌落计数后，根据需要选择部份菌落进行鉴定。
4.4.2 取菌落样品，进行细菌培养液的接种。
4.4.3 将培养液接种于琼脂平板上，进行纯培养。
4.4.4 观察培养结果，根据形态、生理特性等进行菌种鉴定。
5. 结果分析与记录5.1 对菌落计数结果进行统计和分析，计算菌落形成单位（CFU）。
5.2 对菌种鉴定结果进行记录，包括菌种名称、形态特征、生理特性等。
5.3 结果记录应详细、准确，并按照规定的格式进行整理和归档。
溶血性链球菌检验
洗至冲下的水呈无色为止。
• 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，
用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流
出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20 ~
30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸
水纸吸干水分。
• 番红或沙黄复染：在涂片薄膜上滴加番红1
滴，染色1 ~ 2 min。
• 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。
菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂
成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必
须均匀。
• 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，
不可过热，以载玻片不烫手背为宜。
• 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜
上加结晶紫1滴，染色1min。
• 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。
• 碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲
谢谢！
溶血性链球菌检验
革兰氏阳性球菌
检样处理
增菌
培养
检样处理
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具 液体样品：25mL（25mL吸量管） 塞广口瓶
+
225mL生理盐水（量筒），混匀。
注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至 7.0。
增菌
取上述混合液5mL（吸量管） 50mL葡萄糖肉浸液肉汤 培养（于36℃±1℃培养24h）
革兰氏 染色
在无菌室中固定， 到微生物实训室染 色
典型菌落 （同一菌落）
血平板涂布 贴杆菌肽试纸 （2~3片）
于36℃±1℃ 培养18~24h
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结
晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒
染—— 乙醇脱色—— 水洗——
吸干—— 番红或沙黄复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检
微生物作业指导书 (2)
潍坊安食捷检测服务有限公司作业指导书编号：ASJ/ZY5041-2014主题：电位滴定与永停滴定标准操作规程第1页共1页题目：A版第0次修订起草: 王建玲审核: 韩静静批准: 刘希东2014-4-8实施一目的：规定电位滴定与永停滴定的标准操作规程，保证分析结果的准确性。
二引用标准：《中华人民共和国兽药典》（2010年版一部附录）。
三适用范围：适用于检品采用永停滴定法或电位滴定法的质量检测。
四责任者：检验员对本标准的实施负责。
五正文：1 误差要求名称法定标准原料相对偏差≤0.3%半成品、成品相对偏差≤0.8%2 仪器与用具2.1 电位滴定法与永停滴定法是容量分析中用以确定终点、选择核对指示剂变色域的方法。
选用适当的电极系统可以作氧化还原法、中和法（水溶液或非水溶液）、沉淀法、重氮化法或水分测定法等的终点指示。
电位滴定法适用2支不同的电极。
1支为指示电极，其电极电势随溶液中被分析成分的离子浓度的变化而变化；另1支为参比电极，其电极电势固定不变。
在到达滴定终点时，因被分析成分的离子浓度急剧变化而引起指示电极的电势突减或突增，此转折点称为突跃点。
2.2 永停滴定法采用2支相同的铂电极，当在电极间加一低电压（例如50mV）时，若电极在溶液中极化，则在未到滴定终点时，仅有很小或无电流通过；但当到达终点时，滴定液略有过剩，使不成电极去极化，溶液中即有电流通过，电流计指针突然偏转，不再回复。
反之，若电极由去极化变为极化，则电流计指针从有偏转回到零点，也不再变动。
2.3 仪器装置电位滴定可用电位滴定仪、酸度计或电位差计，永停滴定可用永停滴定仪或按图示装置。
电流计的灵敏度除另有规定外，测定水分时用10-6A/格，重氮化法用10-9A/格。
所用电极可按下表选择。
方法电极系统说明水溶液氧化还原法铂-饱和甘汞铂电极用加有少量三氯化铁的硝酸或用铬酸清洁液浸洗水溶液中和法玻璃-饱和甘汞非水溶液中和法玻璃-饱和甘汞饱和甘汞电极套管内装氯化钾的饱和无水甲醇溶液。
溶血性链球菌及检验
溶血性链球菌及检验一、生物学特性1、形态与染色链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。
在液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链，由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长。
多数菌株在血清肉汤中培养2-4h易形成透明质酸的荚膜，继续培养后消失。
该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬后，转为革兰氏阴性。
2、培养特征需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。
最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。
在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。
在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
3、生化反应分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。
一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶阴性。
4、抗原结构链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种：（1）核蛋白抗原或称P抗原，无特异性，各种链球菌均相同。
（2）多糖抗原或称C抗原，系群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。
（3）蛋白质抗原或称表面抗原，具有型特异性，位于C抗原外层，其中可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是M抗原。
5、分类根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类。
（1）α-溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病菌。
（2）β-溶血性链球菌：菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血，因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
B族链球菌检测的标准操作程序
B族链球菌检测的标准操作程序【目的】保证检测结果准确可靠。
【适用范围】适用于本实验室的检验人员。
【该SOP 变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【试剂】1.试剂名称：B族链球菌（GBS）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）2.生产厂家：北京现代高达生物技术有限责任公司3.包装规格：20人份/盒贮藏条件及有效期：试剂盒应置2－8℃存放12个月。
【仪器设备】1.仪器名称：2.仪器厂家：3.仪器型号：4.仪器校准：本仪器由仪器厂家工程师负责校准。
【检验原理】本试剂盒利用Taqman探针实时PCR技术，针对B族链球菌基因组特异且无高频SNP位点的序列区域cAMP因子，设计出特异性引物和探针，配以全封闭PCR体系，检测标本中的B族链球菌DNA。
体系中通过加入内参照系统排除PCR反应过程中可能的假阴性结果，并通过加入UNG避免可能的扩增污染物造成的假阳性结果。
【标本要求】1. 样本采集：采用藻酸钙、普通棉拭子或涤纶拭子采集生殖道或直肠等部位带上皮细胞的分泌物标本。
（1）妊娠34-37周孕妇生殖道分泌物：先拭去阴道过多的分泌物，采用无菌拭子插入阴道至内1/3处，沿阴道壁轻轻旋转取得分泌物，将采集的拭子置于无菌管中，密闭送检；（2）妊娠34-37周孕妇直肠分泌物：将拭子插入肛门，在肛门括约肌以上约2.5cm处，沿肠壁轻轻旋转取得标本，将采集的拭子置于无菌管中，密闭送检；（3）样本一经送检，则应尽快送至检测实验室，运输应符合当地法规。
2. 标本存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-18℃以下保存不超过4天。
样本的冻融次数：实验数据证明，样本冻融6次以内无影响，但应尽量避免冻融。
3. 样本的运输条件：冷冻（干冰运输）4天内无影响，冷藏（冰袋运输）2天内无影响。
4. 含血样本无法正常检测应避免。
5. 研究显示，常用栓剂药物“保妇康栓”会对试剂盒检测造成较大影响，因此取样前应避免该药品的使用。
β型溶血性链球菌的测定
一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃；b)冰箱：2℃~5℃；c)厌氧培养装置；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)显微镜：10×～100×；g)无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶；i)无菌培养皿：直径90mm；j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃；l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙（CaCl2）溶液5.8 3%过氧化氢（H2O2）溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g（ml），加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000 r/min均质；或加入装有225ml mTSB的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃，厌氧培养18h～24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂，36℃±1℃，厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个（如小于5个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃，培养18h～24h。
抗链球菌溶血素OASO测定胶乳凝集法作业指导书
抗链球菌溶血素OASO测定胶乳凝集法作业指导书1.原理将SLO包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的抗链球菌溶血素O（ASO）相遇时,即发生肉眼可见的凝集。
2.标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8°C保存不应超过24小时，-20°C 不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、脂血或严重溶血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1 试剂名称：抗链球菌溶血素（ASO）测定试剂6.2 试剂生产厂家：上海捷门生物技术合作公司6.3 包装规格：60Test/Kit6.4 试剂盒组成：ASO胶乳悬液，阳性对照血清，阴性对照血清。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-10°C避光保存，有效期12个月。
7.操作步骤7.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C）。
7.2 分别吸取50μl阳性对照和阴性对照血清均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
7.3 吸取50μl待测血清均匀铺加在纸卡的另一圆圈中。
7.4 加胶乳试剂50μl于上述血清中。
7.5 处分混匀后立即摇动反应板，2分钟内于直射阳光下观察。
7.6 如需定量测定，将标本用生理盐水进行对倍稀释后检测。
8.结果判断：定性：出现明显凝集者为阳性。
定量：出现明显凝集的最高稀释倍数×200IU/mL。
9.质量控制：每次测定均做阴阳对照，阴性对照不出现凝集物，阳性对照出现明显凝集。
10. 参考范围：阴性或<200IU/mL11.临床意义：成人ASO>500单位有诊断意义。
ASO 阳性常见于A族溶血性链球菌感染。
活动性风湿病人，不但ASO增高，并有血沉增快，CRP阳性及白细胞增多的特点。
急性肾小球肾炎也使增高。
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链球菌检验作业指导书1主题内容与适用范围本作业指导书规定了链球菌的检验方法。
本作业指导书适用于患者的生物样品（如：尿液、脓液、脑脊液、痰等）及医院物体表面涂抹样本及使用中消毒剂链球菌的检验。
2引用标准GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂全国临床检验操作规程（第三版）临床微生物学诊断与图解（第二版）周庭银编著3 设备和材料3.1 无菌棉拭子。
3.2 无菌5cm×5cm规格板。
3.3 温箱：36±1℃，42℃。
3.4 显微镜。
3.5 灭菌广口瓶：500mL。
3.6 灭菌三角烧瓶：500mL，250mL。
3.7 灭菌吸管：10mL、1mL。
3.8 天菌平皿：90mm×15mm。
3.9 灭菌小试管：内径3mm，长5cm。
3.10 灭菌毛细管。
3.11 无菌注射器：5mL、10mL3.12 橡皮乳头。
3.13 载玻片。
3.14 酒精灯。
3.15 灭菌金属匙或玻璃棒。
3.16 接种棒、镍铬丝。
3.17 试管架、试管篓。
4 培养基和试剂4.1 1%葡萄糖肉汤：按GB/T 4789.28中4.1规定。
4.2 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.3 SCDLP液体培养基：按卫生部《消毒技术规范》附录A.23中规定。
4.4 麦康凯琼脂：按GB 4789.24中4.4规定。
4,5 6.5%氯化钠肉汤：见附录A1。
4.6 马尿酸钠培养基：按GB/T 4789.28中3.9规定。
4.7 过氧化氢酶试验：按GB 4789.28中3.21规定。
4.8 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28中3.13规定。
4.9 氨基酸脱羧酶试验培养基：按GB 4789.28中3.12规定。
4.10 糖发酵管：按GB 4789.28中3.2规定。
4.11 溶血性检查：见附录A1。
4.12 杆菌肽敏感试验：见附录A4。
4.13 CAMP 试验：见附录A5。
4.14 胆汁-七叶苷试验：见附录A64.15 6.5%NaCl生长试验：见附录A7。
4.16 Optochin 敏感试验：见附录A34.17 吡咯烷酮芳氨酶( PYRase) 试验：见附录A9。
5 检验程序：见图1图1：链球菌检验程序18～24h6 操作步骤6.1 临床患者标本（如：尿液、脓液、痰等）可直接接种血平板置36℃±1℃18～24h进行分离培养，同时做涂片检查；对血液及脑脊液标本可以先用1%葡萄糖肉汤于36℃±1℃18～24h进行增菌培养，必要时置5%CO2环境中培养，然后用血琼脂平板进行分离培养。
如无菌生长应连续培养7天，无论是否有菌生长均应再次转种血琼脂平板进行分离培养。
6.2 涂片染色：链球菌为革兰阳性球菌，常链状排列，在琼脂平板培养基上涂片染色常呈短链或单个存在有时成对。
6.3 医院物体表面涂抹拭子及使用中消毒剂用含有相应中和剂的肉汤中和后取5mL接种50mL1%葡萄糖肉汤于36℃±1℃18～24h进行增菌培养，然后用血平板进行分离培养。
菌落形态如图16.4 菌落特征：在血琼脂平板上36℃±1℃培养18～24h，菌落呈灰白色、半透明或不透明，比葡萄球菌菌落小，凸起或扁平（肺炎链球菌），用接种环刮取菌落时，常遇颗粒状不易乳化，不能均匀涂抹。
菌落周围有三种溶血情况。
（1）α-溶血（草绿色）链球菌：菌落周围有灰绿色的狭窄α-溶血圈，红细胞不完全溶解，由于链球菌产生作用于血红蛋白毒素，在菌落周围出现绿色环。
（2）β-溶血（溶血性）链球菌：菌落周围有明显宽广的完全透明环，环内红细胞全部溶解。
在厌氧培养更能准确地判定。
（3）γ-溶血（非溶血性）链球菌：菌落周围无任何改变。
6.5 分离培养：链球菌的属内鉴别，首先观察在血液琼脂平板上的溶血环，是β溶血、α溶血还是γ溶血，根据不同溶血类型进行鉴别。
6.5.1 β-溶血链球菌的鉴定：β-溶血链球菌的鉴定，可检测特异性多糖抗原（链球菌群多糖抗原）来分群，采用商业性试剂盒，当前血清学诊断方法尚未普及之前，传统的对β-溶血链球菌的鉴定鉴别仍是需要的。
A、B、C、G群细菌，一般可用杆菌肽、CAMP、PYR、VP、及β-D-葡萄糖苷酶（BGUR）等试验区别（表1）。
表1 来自人类β-溶血链球菌的特性鉴别菌种Lancefield群抗原菌落a PYR VP b CAMP BGUR※化脓性链球菌咽峡炎链球菌群b无乳链球菌停乳链球菌马样亚种d 咽峡炎链球菌群c咽峡炎链球菌群c停乳链球菌马样亚种d 咽峡炎链球菌群e咽峡炎链球菌群fAABCCFGG未分群大小大小小大小小＋－－－－－－－－－＋NA－＋＋－＋＋－―＋－－－－－－NANANA＋－NA＋－NA注：a：＋阳性；－阴性；NA，无资料；b,VP试验，无乳链球菌无意义；c曾命名S.mellcri或称米勒链球菌；d:最近资料提示来自人类β-溶血性含C、G群抗原菌落形菌株提议命名停乳链球菌马样亚种，在种水平上相关联。
目前根据发酵海藻糖和山梨醇活性，区分其他含C群抗原菌种。
※BGU R＝β-D-葡萄糖苷酶表2 来自人类和动物含Lancefield C、G群抗原的β-溶血性小菌落形菌株的特征鉴别菌种Lancefield抗原宿主海藻糖山梨醇停乳链球菌马样亚种b 停乳链球菌马样亚种b 马链球菌马亚种马链球菌兽疫亚种狗链球菌C、G群C、LCCC人类动物动物动物动物＋＋－－－－－－＋－注：a，＋阳性；－，阴性；b，分离自人类停乳链球菌马样亚种，显示溶解人纤维蛋白和链激酶活性，而来自动物的停乳链球菌马样亚种则缺乏上述两种特性；可能出现例外；d.狗链球菌对BGUR是阴性，相反大多数β-溶血含Lancefield C、G的抗原的大菌落链球菌是阳性。
6.5.2 草绿色链球菌的鉴定：革兰氏阳性球菌，触酶阴性，草绿色溶血、胆汁溶菌阴性、Optochin 阴性，不存在B、D群抗原，6.5%NaCl肉汤不生长，PYR阴性，10℃、45℃不生长、胆汁七叶苷阴性、万古霉素敏感。
该类链球菌种类较多，首先推断性鉴定到群，参见表3、表4注：：a：＋.阳性反应；－.阴性反应；±.有些菌株阳性而另外菌株阴性；B：偶见例外。
注：＋.阳性；－.阴性；V.不定；NT.未做试验；NA.无资料；b.参考Beighton等生物型。
C.阳性菌株的百分比可能不定，取代于应用正确试验。
d.试验结果有怀疑为“变异菌株”，变异菌株亦是对葡萄糖苷酶“变异”，不产生细胞外酶。
6.5.3 与链球菌属相关菌属的鉴别6.5.3.1 乳球菌属：原链球菌属中乳链球菌现成为乳球菌属。
乳酸球菌（ctis）和乳脂球菌（L.cremoris）在制乳酪和粮食工业生产中使用。
临床标本（血液、尿、眼、人工瓣膜心内膜炎）中也常见到。
该属菌种与肠球菌相似，唯一不同点是45℃不生长。
6.5.3.2 孪生球菌属：原麻疹链球菌（S.morbillorum）现转入孪生球菌属，另一种是溶血孪生球菌（G.haemolysans）。
该属菌种曾从临床标本中检到，见于临床感染如心内膜炎。
其特点是生长缓慢，可能被误认为营养缺陷链球菌，应用“卫星现象”试验区别开来。
菌种鉴定参照表5注：＋，阳性；－，阴性；6.5.3.3 片球菌属：该属菌种对万古霉素，PYR阴性，发酵葡萄糖不产气，胆汁七叶苷、精氨酸阳性，含有D群抗原，不发酵乳糖，在含盐肉汤中生长缓慢，属内鉴别见表6。
乳酸片球菌（P.acidilactici）和戊糖片球菌（P.pentosaceus）曾从临床标本中分离到。
附录AA1 触酶试验(过氧化氢酶试验)原理：触酶2H2O22H2O+ O2试剂：3% H2 O2 溶液，置棕色瓶内于4℃C阴暗处保存。
方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢1～2滴。
静置，1min内产生大量气泡为阳性，不产生气泡为阴性。
附注：1. 过氧化氢为3%，应用30%浓的H2 O2，用时稀释10倍。
放置时间较久的30%浓的H2 O2使用时应重新测定浓度，以实际浓度进行稀释。
2. 不应在培养基上做试验。
挑取菌落时不可刮到培养基。
3. 每次试验时，应以阳性和阴性菌株做对照。
A2溶血性检查溶血性是鉴定链球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。
材料:羊血琼脂平板。
方法:将标本接种于手血平板t，用接种针在已接种过的血平板上扎2-3处，使细菌被接种到琼脂层深处，35℃孵育过夜。
观察结果:在接种针穿刺过处，羊红细胞完全榕解，形成无色透明区，为β-溶血。
羊红细胞部分溶解或不溶解呈草绿色的环，为α-溶血。
不溶解无溶血环为γ-溶血。
注意点:甲型溶血链球菌与A 群链球菌不是同一概念，前者是指细菌生长血琼脂平板上对羊血球溶血性试验，而后者是指根据Lancefield 血清学分群。
A3 Optochin 敏感试验材料:Optochin( 乙基氧化羟基奎宁EthylhydrocupreineHCL)纸片(直径6 mm) ，每片5μg；血琼脂平板。
方法:挑取被检菌落，涂在血平板上，贴Optochin纸片于接种处，35℃，烛缸孵育18 h。
观察结果:抑菌环直径> 14 mm 为敏感，推断为肺炎链球雨。
抑菌环直径< 14 mm 时参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。
A4杆菌肽敏感试验材料:每片含0.04 U 的杆菌肤纸片，血琼脂平板。
方法:挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，接种量应大，以免出现假阳性。
贴上杆菌肤纸片，35℃过夜。
观察结果:形成抑菌环为敏感，则推断被检菌为A 群链球菌。
A5 CAMP 试验材料:血平板，金黄色葡萄球菌ATCC 25923。
方法:在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种4条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌接种线3 mm 处呈直角接种一短线。
用同样方法接种阴性和阳性对照菌。
35 "c孵育过夜。
观察结果：在被检菌接种线与金葡菌接种线之间有一个矢形(半月形)加强溶溶区，此即CAMP 试验阳性，否则为阴性。
A6 胆汁-七叶苷试验培养基：牛肉膏3g 七叶苷1g 蛋白胨5g枸橼酸铁0.5g 胆盐10g 蒸馏水1000mL 将各成分溶于蒸馏水中调pH至7.2～7.4。
分装试管，每管3mL于108℃20min灭菌备用。
方法：接种被检菌1～3个菌落，置36℃培养24～48h。
观察结果：生长并使培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。
A7 6.5%NaCl生长试验培养基：NaCl 6.5g 蛋白胨 1g 牛肉膏 0.3g葡萄糖 0.1g 蒸馏水 100mL调pH至7.4 分装小试管，每管2～3mL高压蒸汽121℃15min灭菌后备用。
方法：接种被检菌，36℃培养过夜，培养基混浊有菌生长为阳性，接种菌应注意不可接种量过多使培养基未经培养液即显混浊，出现假阳性。