食品中铁的测定-二氮杂菲分光光度法(学生用)
实验三 邻二氮杂菲分光光度法测定
实验二邻二氮杂菲分光光度法测定铁含量
一、原理：利用分光光度法找出吸光度A与物质含量之间的定量关
系。
二、实验内容
1、吸收曲线的测绘
(1)、实验数据
(2)、吸收曲线
结论：最大吸收波长为510nm 2、工作曲线测绘
（1）、实验数据
(2)、工作曲线
结论：在λmax=510nm做出标准工作曲线如上图所示，拟合出直线方程为：y=0.0018x+0.0082
已知：未知液的吸光度为0.090
带入线性关系式中可求的铁含量:y=45.44μg
所以，未知液的浓度：
C= = =9.089μg /L
三、实验讨论
1、问题：在吸收曲线的测绘中所用的溶液铁含量为80μg，在λ=510nm时吸光度为0.103；在工作曲线测绘中（在λmax=510nm的条件下），溶液铁含量为80μg的吸光度为0.017，两次测量值相差较大。
原因：由于溶液配制完后立刻进行了吸收曲线的测绘，溶液可能未完全均匀混合，导致吸光度测量值偏小。
验证:实验结束，发现问题后，对该溶液在其他波长下的吸光度也进行了测量，发现吸光度值均偏大，说明猜测应该正确。
2、注意事项：①.再吸收曲线测绘时，每改变一次光的波长就要用参比溶液进行调零。
②.标准曲线测绘时，只有第一个点需要用参比溶液调零。
蛋黄中铁含量的测定
一、论文题目蔬菜、食品中铁的测定二、论文摘要随着社会的发展，人们的生活水平有了很大提高，营养成了一个普遍的话题。
人们每天需要摄入多种营养物质，其中蔬菜、食品（如蛋制品）都是非常重要的。
本实验采用邻二氮杂菲分光光度法直接对芹菜、油菜、青椒等几种蔬菜以及蛋黄中铁的含量进行测定。
实验中要分析测定邻二氮杂菲、盐酸羟胺等试剂以及pH对实验的影响，从而在实际生活生产中为指导人们合理饮食补铁提供理论依据。
本篇论文仅讲解蛋黄中铁含量的测定。
三、关键词蛋黄；干法；条件试验；铁元素的测定；分光光度法；回收实验；标准曲线四、实验目的1、学习样品的预处理方法；2、综合运用所学知识，学会仪器分析法（如分光光度法）测定物质含量的一般条件及其选定方法；3、掌握邻二氮杂菲分光光度法对铁的测定；4、练习灵活运用各种基本操作的能力和查阅资料的能力。
五、实验原理食品中的金属元素，由于常与蛋白质、维生素等有机物结合成难溶或难于解离的物质，因此在测定前破坏有机结合体，释放出被测组分。
通常采取有机物破坏法，该法是在高温条件下加入氧化剂，使有机物质分解。
其中碳、氢、氧等元素生成二氧化碳和水呈气态逸出，而被测的金属元素则会以氧化物或无机盐的形式残留下来。
有机物破坏法又分干法和湿法两种，本实验采用的是干法灰化。
常量组分的测定可采用滴定分析法，微量和痕量组分的测定不宜采用滴定法，而应采用仪器分析法，本实验蛋黄中微量铁的测定可采用分光光度法。
根据比耳定律A=εbc，用标准曲线法测定铁的含量。
在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色配合物，此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510nm=1.1×104L·mol-1·cm-1。
在显色前，首先用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2↑+2H20+4H++2Cl-测定时，控制溶液酸度在pH为5左右较为适宜。
化学探究实验报告食物中微量铁的测定
西安电子科技大学化学探究实验课程实验报告实验名称食物中微量铁的测定学院班Array姓名学号同作者实验序号实验日期2020 年7 月16日一、实验目的了解分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
掌握朗伯－比耳定律及其应用。
掌握吸收曲线及标准曲线的概念及其应用。
二、实验原理葡萄、大枣、味精及酱油等食品中铁含量的测定可以采用邻菲罗啉可见分光光度法，通过这种测定方法，可以对铁进行定量测定。
分光光度法测定物质含量是应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。
显色反应的条件有显色剂的用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物的消除方法等。
测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。
本实验主要选用邻二氮菲光度法测铁在入射光波长、络合物溶液的稳定性、显色剂浓度、溶液pH 值的影响等几个方面确定实验的最佳条件。
三、仪器、药品及实验装置仪器721 型分光光度计，1 cm 吸收池，2 mL ,1 mL, 10 mL 吸量管，50 mL 比色管等试剂1.0×10 -3 mol·L -1 铁标准溶液，100μg·mL-1 铁标准溶液，0.15%邻二氮菲水溶液，10% 盐酸羟胺溶液，乙酸钠溶液，四、实验步骤1.吸收曲线的制作和测量波长的选择在50ml 比色管中按次序准确加入以下溶液，10μg/ml 铁标准溶液5ml，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲3ml。
用水稀释至刻度。
在分光光度计上，用1cm 比色皿以水为参比溶液，从440~580nm 之间测定吸光度（A）。
每隔20nm 测定一次，其中从480~540nm，每隔10nm 测定一次。
最后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。
从吸收曲线上找出最大吸收的波长，用以进行铁的标定。
2.铁含量的测定（1）标准曲线的制作在6 个50ml 比色管中，用吸管分别加入0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml 10μg/ml 铁标准溶液，10%盐酸羟胺1ml，再加入1mol/LNaAc5ml，0.15%邻二氮菲2ml。
邻二氮菲分光光度法测定铁的实验报告
邻二氮菲分光光度法测定铁的实验报告
实验名称：邻二氮菲分光光度法测定铁
一、实验目的
本实验以邻二氮菲分光光度法，测定水样中含铁量的量。
二、实验原理
邻二氮菲分光光度法是一种基于反应物之间形成有效络合的可逆的配位反应，利用反应产物的吸收光谱率，在指定波长处测定样品中某物质的浓度，从而计算出样品中含量。
三、实验器材
此实验所用仪器为分光光度计和移液器，其他耗材为吸管、量筒、大瓶、过滤器等。
四、试剂
含氧水，硅砂，邻二氮菲溶液，硫酸铁标准溶液，柠檬酸水行。
五、步骤
（1）在清洁明了的200mL大瓶中加入含氧水生成调节液，并加入硅砂使其混合均匀；
（2）将样品滴入到移液器中，并且加入适量的邻二氮菲溶液；
（3）将步骤（2）中的混合物滴入200ml大瓶中，然后加入柠檬酸水行；
（4）在分光光度计的520nm处，根据标准曲线法测定样品中的铁量，再根据标准曲线求出样品中铁浓度。
六、实验结果
实验按照步骤进行，通过标准曲线法测出样品中的铁量，结果如下表所示：
样品编号 | 样品中铁量/μg/g
A | 0.25
B | 0.17
C | 0.23
七、实验结论
本次实验通过分光光度法，测试了三个样品中铁量的含量，结果表明样品A中的铁量为0.25μg/g，样品B中的铁量为0.17μg/g，样品C中的铁量为0.23μg/g。
通过本次的实验，说明邻二氮菲分光光度法是一种可靠的测定铁含量的方法。
食品中铁含量的测定
• 3.实验步骤
• 3.1铁标准溶液的配制
• 5.计算ຫໍສະໝຸດ 因此，分光光度法测定试样中的微量铁实 验时常用盐酸羟胺(NH2OH· HCl)将Fe3+还 原为Fe2+，用邻二氮菲测定试样中铁的总 量（控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜）。 该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性 好，干扰易消除等优点。
•
1.2.根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波
长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色 物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要 绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标 准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲 线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
食品中铁含量的测定
（分光光度法）
• 目前，国家标准规定食品中铁的测定方法 为分光光度法和原子吸收光谱法。 • 此次试验采用分光光度法。 • 该方法具有准确度高、选择性好、适用范 围广、测定快速便捷、可测定多种元素等 优点。
• 1.实验原理
• 1.1.邻二氮菲：即“1,10-邻二氮杂菲”，也 称邻菲罗啉、邻菲咯啉，是一种常用的氧 化还原指示剂。
• 在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲 (phen)生成稳定的桔红色配合物
此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数 ε510 = 1.1×104 L· mol-1· cm-1，而Fe3+ 能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色， lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺 (NH2OH· HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反 应式如下：
邻二氮杂菲分光光度法测定铁
0.25 0.2
吸光度
0.15 吸光度A 0.1 0.05 0 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 波长
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标准曲线的测绘
V标样 (mL)
吸光度
0.45 0.4 0.35 0.3
2.0 0.097
4.0 0.181
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Fe3+与邻二氮杂菲也能生成3∶1淡蓝色配合物， 其lgk稳 =14.1 。因此，在显色之前应预先用盐 3+ 2+ 酸羟胺将Fe 还原成Fe ,其反应式如下：
2Fe3 2NH2OH HCl 2Fe2 N2 2H2O 4H 2Cl
测定时，控制溶液的酸度在pH=5左右比较合适。 酸度高，反应进行较慢；酸度太低则水解，影 响显色。
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（2）未知液中铁含量的测定：吸取 10mL未知液代替标准溶液，其他步骤均 同上，测定吸光度。由未知液的吸光度 在标准曲线上查出10mL未知液中铁的含 量，以mg/L表示结果。
注意：（1）、（2）两项的溶液配制和吸光 度测定宜同时进行。
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数据处理
1、吸收曲线的描绘
波长 430 (nm) 吸光 度 450 470 490 500 510 520 530 550 570
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(3) 显 2.5mL1mol/LNaOAc溶液 色 剂 100g/L盐酸羟胺 不同体积1g/L 浓 2 溶液0.5mL 邻二氮杂菲溶液 度 试 验： 3 1 2.5mL10μg/mL的铁 标准溶液于容量瓶中
取样于比色皿
最大波长处 测定吸光度A
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（4）溶液酸度对配合物的影响：
5mL2mol/LHCl溶液和 10mL100g/L盐酸羟胺溶液
光学实验 邻二氮杂菲分光光度法测定铁 实验目的：
3.在最大吸收波长下测定标准溶液系列所对应的吸光度， 绘制标准曲线。 4.移取5.00mL未知铁溶液，配制方法同上，在同条件下测 定未知物的吸光度，由标准曲线查得未知物铁含量，结果 以g·L－1表示。
结果讨论： 思考题：
1.邻二氮杂菲测定铁的条件是什么？ 2.显色时加入还原剂、缓冲剂、显色剂的顺序是否可以 颠倒？为什么？ 3.溶液酸度对邻二氮杂菲亚铁的吸光度影响如何？
其它：
仪器试剂：
721型分光光度计，50mL容量瓶， 1g·L－1邻二氮杂菲溶 液，100mg·L－1 标准铁溶液， 1mol·L－1NaOAc， 100g·L－1盐 酸羟胺溶液。
实验步骤：
1.标准溶液配制 移取标准铁溶液0.00mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL， 4.00mL，5.00mL分别于0＃∼5＃的50mL容量瓶中，分别加入 1mL盐酸羟胺，5mLNaOAc，2mL邻二氮杂菲溶液，定容、摇 匀。 2.吸收曲线测定 以0＃为空白溶液，3＃溶液测定不同波长下的吸光度， 找出最大ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ收波长。（430nm∼570nm）
光学实验 邻二氮杂菲分光光度法测定铁 实验目的：
了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方 法。了解721分光光度计的构造和使用方法。
预习要点：
掌握邻二氮杂菲分光光度法测铁的原理和方法
实验原理：
在pH＝2∼9的条件下，Fe2＋离子与邻二氮杂菲生成极稳 定的橘红色配合物，反应式如下： 3phen ＋ Fe2＋ ＝ [Fe(phen)3]2+ 该配合物最大吸收波长为510nm，摩尔吸光系数κ510＝ 1.1*104L·mol-1·cm-1,Fe3＋与phen生成淡蓝色配合物，因此显 色前要加入盐酸羟胺，将Fe3＋还原成 Fe2＋。
食品中铁含量的测定
食品中铁含量的测定食品安全检验技术(理化部分)食品中铁的测定有火焰原子吸收光谱法,二硫腙比色法(邻菲啰啉,磺基水杨酸,硫氰酸盐比色法等)两种国家标准方法.下面对原子吸收分光光度法,分光光度法(邻二氮菲法)进行详细阐述.(一)原子吸收分光光度法1,原理经湿法消化样品测定液后,导入原子吸收分光光度计,经火焰原子化后,吸收波长248.3nm的共振线,其吸收量与铁的含量成正比,与标准系列比较定量.2,主要试剂:(1)高氯酸-硝酸消化液:1+4(体积比)(2)0.5mol/LHNO3溶液(3)铁标准储备液:每毫升相当于1mg铁.(4)铁标准使用液:取10.0mL(3)液于100mL容量瓶中,加入0.5mol/L硝酸溶液,定容.3,主要仪器原子吸收分光光度计(铁空心阴极灯)4,操作方法:样品处理品系列标准溶液的配制仪器参考条件的选择标准曲线的绘制样品测定仪器参考条件的选择:波长248.3nm;光源为紫外;火焰:空气-乙炔;其它条件按仪器说明调至最佳状态. 5,结果计算:式中 X----样品的铁含量,mg/100g(或μg/100mL);ρ----测定用样品液中铁的浓度, μg/mL;ρ0----试剂空白液中铁的浓度,μg/mL;m----样品的质量或体积,g或mL;V----样品处理液总体积,mL; f----稀释倍数.6,说明(1)所用玻璃仪器均经硫酸-重铬酸钾洗液浸泡数小时,再以洗衣粉充分洗刷,其后用水反复冲洗,再用去离子水冲洗烘干.(2)本方法最低检出浓度为0.2μg/mL.(二),分光光度法(邻二氮菲法)1,原理:在pH为2～9的溶液中,二价铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙红色配合物,在510nm有最大吸收,其吸光度与铁的含量成正比,故可比色测定.2,试剂①盐酸羟胺溶液:10%②邻二氮菲水溶液(新鲜配制):0.12%③醋酸钠溶液:10%④盐酸:1mol/L⑤铁标准溶液:3,测定方法:①样品处理:干法灰化②标准曲线绘制:吸取10g/mL铁标准溶液0.0mL,1.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL,分别置于50mL容量瓶中,加入1mol/L盐酸溶液1mL,10%盐酸羟胺1mL,0.12%邻二氮菲1mL.然后加入10%醋酸钠5mL,用水稀释至刻度,摇匀,以不加铁的试剂空白溶液作参比液,在510nm波长处,用1比色皿测吸光度,绘制标准曲线.③样品测定:准确吸取样液5~10mL于50mL容量瓶中,以下按标准曲线绘制操作,测定吸光度,在标准曲线上查出相对应的含铁量(μg).(4)结果计算式中 m----样品质量,g ;V1----测定用样液体积,mLV2----样液总体积,mLX----从标准曲线上查得测定用样液相当的铁含量, μg.。
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实验食品中铁的测定——二氮杂菲分光光度法
【原理】
样品经过无机化处理后，在pH3～9条件下，亚铁离子与二氮杂菲生成稳定的橙红色配合物。
溶液颜色的深浅与亚铁离子的含量呈正相关。
通过比色，可对食品中的铁进行定量分析。
【仪器与试剂】
1.锥形瓶（150ml）、具塞比色管（50ml）、分光光度计、天平、电炉，瓷坩埚，50ml塑料容量瓶。
2.盐酸（20%）：取20ml盐酸，用水稀释至100ml。
3.硝酸溶液（50%）：取50ml硝酸，用水稀释至100ml。
4.盐酸溶液（1+1）
5.乙酸铵缓冲溶液（pH=4.2）：称取250g乙酸铵，溶于150ml纯水中，再加入700ml冰乙酸，混匀备用。
6.盐酸羟胺溶液（100g/L）：称取10g盐酸羟胺，溶于纯水中，并稀释至100ml。
7. 二氮杂菲溶液（1.0 g/L）：称取0.1g二氮杂菲，溶解于加有2滴盐酸的纯水中，并稀释至100ml。
此溶液1ml可与100ug的亚铁形成红色螯合物。
8.铁标准储备液[ρ（Fe=0.10mg/ml）]：称取0.7022g硫酸亚铁铵溶于少量纯水，加3ml盐酸于容量瓶中，用纯水定容至1000ml。
9.铁标准使用液[ρ（Fe=10ug/ml）]：吸取10.00ml铁标准储备液，移入容量瓶中，用纯水定容至100ml。
10.实验用水为三级水。
【操作步骤】
1.样品预处理：准确称取混匀的奶粉样品约5g（精确到0.0001g）于瓷坩埚中，在电炉上微火炭化至无烟，再移入马弗炉中，（490±5）℃灰化5小时。
若有黑色炭粒出现，待冷却后，滴加少许50%硝酸溶液湿润，在电炉上小火蒸干后，再移入马弗炉中，继续灰化成白色灰烬。
冷却至室温后取出，加入20%盐酸5ml，在电炉上加热使灰烬充分溶解。
冷却至室温后，转入50ml容量瓶中，用纯水定容至刻度。
同时处理空白试样。
2.标准曲线的绘制及样品测定：另取7个150ml锥形瓶，作标准系列、空白及样品，按下表加入试剂和操作，表中体积单位为ml。
于510nm波长处，用2cm比色皿，以蒸馏水为参比测量吸光度。
用excel绘制标准曲线，写出线性回归方程及R2值，从曲线上查出样品管中铁的含量。
【数据处理】
线性回归方程：
R2=
计算样品中铁的质量浓度（结果保留三位有效数字，单位用mg/kg表示，）。