醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白目的和要求掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法原理带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为电泳，其移动方向及速度取决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度以及溶液pH 等因素。
蛋白质分子在溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的可解离基团如-COOH 、-NH 2、-OH 等，因而在某种pH 值溶液中蛋白质分子带有一定的电荷。
混合蛋白样品中由于各蛋白质的等电点不同，在同一pH 溶液中所带的电荷性质及电荷数目不同，因此在电场中各种蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。
由下表可见，血清中5种蛋白质的等电点大多低于pH7.0，在pH8.6的缓冲液中都电离成负离子(羧基解离)，故在电场中均向阳极移动。
蛋白质种类等电点(pI) 相对分子量(Mr ) 清/白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白4.885.06 5.06 5.126.85~7.50 69 000 200 000 300 000 90 000~150 000 156 000~300 000在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/L NaOH 溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。
本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。
醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后于聚乙烯材料上涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后即可。
该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗透性、其厚度约为120 μm 。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点，目前已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白和同工酶的分离及测定。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质一、实验原理1、电泳是带电粒子在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的过程。
许多生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电荷或负电荷。
其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所用电泳介质的pH值。
电泳技术就是利用在电场的作用下，被分离物质中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移方向和速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
2、蛋白质是两性电解质，在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同，故可用电泳法将它们分离。
由下表知血清中五种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表 1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量3、醋酸纤维素薄膜是有一层薄薄的聚乙烯和压附在其上的醋酸纤维素酯构成的。
醋酸纤维素薄膜经透明液处理后即透明，故可获得背景为无色的电泳图谱。
二、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075mol/L）2、氨基黑10B染色液3、漂洗液：95%乙醇45mL，冰乙酸5mL，加50mL蒸馏水，混匀（临用时配制）4、透明液：冰乙酸：无水乙醇=1：3(V:V)，混匀（临用时配制）三、实验器材醋酸纤维薄膜，人血清（新鲜、无溶血现象），培养皿，点样玻片，电吹风，直流稳压电泳仪，电泳槽四、实验步骤1、准备和点样取一条2cm*8cm的醋酸纤维薄膜浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，薄膜上再放一张干净滤纸，吸去多余的缓冲液。
滴一滴血清在一片载玻片上，再用另一片宽度小于薄膜的载玻片的界面轻轻在液滴上蘸一下，然后轻轻与距纤维薄膜一端1.5cm处接触，样品即呈一条状涂于纤维膜上，注意点样量要少。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
如果在电泳结果中发现异常的蛋 白质条带，可能表明存在某些疾 病或生理异常。
结果与讨论
醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的 血清蛋白分离方法，具有操作简
便、分离效果好等优点。
通过电泳实验，可以了解血清蛋 白的组成和相对含量，为临床诊 断和生理研究提供有价值的信息。
在实验过程中，需要注意控制实 验条件，如电泳缓冲液的成分、 电场强度、温度等，以确保实验
整理实验器材，归类存放，保 持实验室整洁。
记录实验数据和结果，及时分 析并得出结论。
对实验废弃物进行妥善处理， 遵守实验室安全规定。
谢谢
THANKS
该方法对于低浓度血清蛋白的检测灵敏度较低， 可能会影响结果的准确性。
主观性较强
电泳结果的判定和解释需要一定的专业知识和经 验，主观性较强。
对样品要求较高
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳要求样品具有较高的 纯度和稳定性，对于复杂样品可能存在干扰。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的应用
临床诊断
醋酸纤维薄膜电泳在临床诊断中常用 于检测血清蛋白的异常表达，对于肝 、肾等器官疾病的诊断具有一定的参 考价值。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的优点
01
02
03
高分辨率
醋酸纤维薄膜电泳能够将 血清蛋白分离成清晰、易 于辨认的条带，具有较高 的分辨率。
快速简便
该方法操作简便，分离速 度快，适合于大量样品的 快速检测。
成本低廉
醋酸纤维薄膜价格低廉， 可重复使用，降低了实验 成本。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的局限性
灵敏度较低
生物研究
在生物研究领域，血清蛋白醋酸纤维 薄膜电泳可用于蛋白质组学和生物标 志物的研究，有助于深入了解生物体 的生理和病理过程。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理哎呀，这可是个大课题啊！不过别着急，咱们一步一步来，先来聊聊醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的原理。
其实，这个实验就是让蛋白质在醋酸纤维薄膜上“跑”起来，然后根据它们的运动速度和方向来区分不同的蛋白质。
听起来好像很高深的样子，但其实很简单，就像我们在学校里做的那些实验一样。
咱们要准备一些东西。
除了醋酸纤维薄膜、电泳仪、缓冲液等基本材料外，还需要一些血清蛋白样品。
血清蛋白是血液中的一类重要成分，它们可以帮助我们了解身体的健康状况。
这些蛋白质可不是随便取的，得是新鲜的、高质量的才行。
接下来，咱们就要开始实验了。
要把血清蛋白样品加入到缓冲液中，这样可以给它们提供一个合适的环境。
然后，把缓冲液倒入电泳仪中，让它开始工作。
这时候，醋酸纤维薄膜就会变得非常有活力，因为它上面有很多小的孔隙，可以让小分子穿过。
当电场作用在醋酸纤维薄膜上时，这些小分子就会被推着在薄膜上移动。
而血清蛋白呢？它们就像一群顽皮的孩子，总是喜欢在一起玩耍。
当电场作用在它们身上时，它们就会跟着一起跑起来。
那么问题来了，怎么才能知道这些蛋白质跑得快还是慢呢？这就需要用到电泳迁移率了。
所谓迁移率，就是指蛋白质在电场作用下移动的速度。
不同的蛋白质，它们的迁移率是不一样的。
比如说，血红蛋白的迁移率就比较低，而胰岛素的迁移率就比较高。
所以，通过观察蛋白质在醋酸纤维薄膜上的迁移情况，我们就可以判断出它们的身份了。
这个实验还有很多细节需要注意。
比如说，样品的质量、浓度、pH值等因素都会影响到实验结果。
而且，有时候还会遇到一些干扰因素，比如气泡、杂质等。
但是只要我们认真操作，仔细观察，就一定能得出准确的结果。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验是一种非常有趣且实用的方法。
它可以帮助我们了解身体内部的各种蛋白质成分，从而更好地维护我们的健康。
所以啊，大家一定要认真学习这个实验哦！。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告实验室报告
题目：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
一、实验目的
本实验旨在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白，并分析其分离效果。
二、实验原理
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种利用薄膜作为电泳载体，在交流电场中将带电微粒体分离的方法。
其分离原理在于不同电动力学直径的带电微粒体在局部电场中受到的电离流和离子机动力学的影响不同，导致粒径较小的微粒体在电场中移动的速度较快，粒径较大的微粒体则移动较慢，从而实现了分离。
三、实验步骤
1.将5μL血清样品加入凝胶载体中。
2.在醋酸纤维薄膜电泳仪中进行样品电泳分离，设置电场参数：电压300 V，电泳时间30分钟。
3.将分离后的血清蛋白样品涂在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳定
量和分析。
四、实验结果
通过电泳定量和分析，我们可以得到血清蛋白的分离效果。
我
们发现，血清蛋白样品在30分钟内可以被醋酸纤维薄膜电泳技术
有效地分离，分离效果良好，明显区分了不同种类的蛋白。
五、结论
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种非常有效的血清蛋白分离方法。
通过本次实验，我们得到了良好的分离效果和明确的蛋白种类区分。
这种技术具有高分离效率、高通量、简单易行等特点，可以
在临床医学、药物研发、生命科学等领域得到广泛应用。
此外，在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白时，需要注意控制一定的电场参数，以确保实验效果。
血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)
实验一血清蛋白电泳(醋酸纤维薄膜法)[目的]了解电泳法分离蛋白质的原理、操作方法及临床意义。
[原理]带电荷的蛋白质，在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。
血清中各种蛋白质的等电点不同，但大都在pH7以下，若将血清置于pH8.6的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。
由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同，所以在电场中向阳极泳动速度也不同。
蛋白质分子小而带电荷多者，泳动速度快；反之，则泳动速度慢。
因此可将血清蛋白质依次分为清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白和g球蛋白五条区带，经染色可计算出各血清蛋白质含量的百分数。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便及分辨率较高等优点，广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。
[仪器与材料]1．仪器：电泳仪、电泳槽、分光光度计或光密度仪。
2．材料：醋酸纤维薄膜、培养皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、剪刀等。
[试剂]1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH8.6，m=0.06)。
称取巴比妥2.21克和巴比妥钠12.36克，溶于500毫升蒸馏水中，加热溶解。
待冷至室温后，再加蒸馏水稀释至1000毫升。
2．染色液。
称取丽春红S0.4克及三氯醋酸6克；用蒸馏水溶解，并稀释至100毫升。
3．漂洗液。
3%(V／V)醋酸溶液。
4．透明液。
取无水乙醇75毫升和冰醋酸25毫升混匀备用。
5．0.4mol／L氢氧化钠溶液。
6．40%(V／V)醋酸溶液。
[操作]1．薄膜的准备：取醋纤薄膜(2厘米*8厘米)在毛面的一端约1.5厘米处，用铅笔轻划一直线，表露点样位置并编号。
然后将此薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡，待充分浸透(即膜条无白斑时)后取出，用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液。
2．点样。
取少量血清置于普通玻璃板上，用点样器的钢口蘸取血清(约3~5ml)，随后将钢口垂直“印”在点样线上，待血清渗入膜后移开点样器。
点样应注意，要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验原理1. 引言说到实验，大家第一反应是不是都觉得有点晦涩难懂？其实，科学的世界里充满了有趣的东西，就像老话说的“你不尝试一下，怎么知道好不好？”今天我们就来聊聊一个既简单又有趣的实验：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白。
听起来是不是挺高大上的？别急，让我慢慢给你道来。
2. 什么是电泳？2.1 电泳的基本概念电泳其实就是利用电场来分离带电粒子的一种技术。
想象一下，一场足球比赛，电场就是那个把球场划分成两半的白线，而带电的蛋白质就像在比赛中奔跑的球员。
通过施加电场，我们就可以让这些“球员”在球场上各显身手，分成不同的组。
是不是很有画面感？2.2 血清蛋白的角色那么，血清蛋白是什么呢？简单来说，它就是我们血液中的一种重要成分，像是身体里的小工匠，负责输送营养、抗击病菌等。
各种各样的血清蛋白，形态各异，功能各不同，就好比一支球队里有前锋、中场和后卫。
通过电泳，我们就能把这些不同“位置”的蛋白质分开，看看它们的表现。
3. 醋酸纤维薄膜的妙用3.1 醋酸纤维薄膜的特点说到醋酸纤维薄膜，这玩意儿可不是普通的材料哦。
它柔韧又耐用，能很好地与蛋白质结合。
可以说，它就像一张精美的网，能把那些不同类型的蛋白质牢牢抓住，不让它们跑掉。
就像你抓住那颗掉落的葡萄，生怕它溜走一样。
3.2 如何进行实验接下来，我们来看看实验的步骤。
首先，我们得准备好一张醋酸纤维薄膜，把它放在电泳装置中。
然后，我们将含有血清蛋白的样品涂抹在薄膜上。
接着，通上电流，哇，这时候就能看到那些小蛋白质们开始在薄膜上“奔跑”了。
它们根据大小和电荷的不同，跑得快慢也各不相同。
真是个神奇的时刻，就像看一场精彩的马拉松比赛，大家都在为了各自的目标而努力！4. 结果的解析4.1 数据分析一旦电泳结束，我们就得分析结果了。
这个时候，薄膜上会出现一些明显的条纹，每一条纹就代表了一种蛋白质。
通过观察这些条纹的数量和位置，我们就能得出血清中不同蛋白质的种类和含量。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
光密度总和T＝A+α1＋α2＋β＋γ 各部分蛋白质的分数为：
A（清蛋白）% = A / T×100
α1-球蛋白 % = α1 / T×100 α2-球蛋白 % =α2 / T×100 β-球蛋白 % = β / T×100
γ-球蛋白 % =γ / T×100
附：迁移率是胶体颗粒的一个物理常数，可用来鉴定蛋白质 等物质以及研究它们的某些理化性质．现将人血浆蛋白质 的等电点，迁移率等列于下表，供分析参考。
① 醋酸纤维素薄膜的润湿与选择
用竹夹子取一片薄膜，小心地平放在盛有缓冲液 的平皿中，若漂浮于液面的薄膜在15-30s内迅速 润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用 于电泳；若薄膜润湿缓慢，色泽深浅不一或有条 纹及斑点等，则表示薄膜厚薄不均匀应弃去，以 免影响电泳结果。
将选好的薄膜用竹子轻压，使其完全浸泡于缓冲 液中约30min后，方可用于电泳。
混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。 乙液：取冰乙酸（AR）25mL，无水乙醇（AR）75mL，
混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。 ④保存液：液体石蜡。 ⑤定量洗脱液（0.4mol/L NaOH溶液）： 称取16g氢氧化钠（AR）用少量蒸馏水溶解后定容
至1000ml。
【 实验方法与步骤】
1、仪器与薄膜的准备
2．电泳
将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时，
无光泽面(即点样面)向下，点样端置于阴极，槽
架上以四层滤纸作桥垫，膜条与滤纸需贴紧，待
平衡5 min后通电，电压为110 V，电流为0.4～
0.6 mA/cm，通电1 h左右关闭电源。
【实验方法】
1．准备与点样
(1)将薄膜切成2.5 cm×8 cm的小片。在薄膜无 光泽面(正面)的一端约2 cm处用硬铅笔划一点样 线。
(2)将薄膜无光泽面向下，置巴比妥缓冲中， 使 膜条自然浸湿 。
(3)将充分浸透的膜条取出，用滤纸吸去多余的缓 冲液，把膜条置洁净滤纸上。
(4)用载玻片点样。
点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一，以印章法加样 时，动作应轻、稳，用力不能太重，以免将薄膜弄破或印 出凹陷而影响电泳区带分离效果。
⑷ 电量的选择
电泳过程应选择合适的电流强度，一般电流强度 为0.4-0.5mA/cm宽膜为宜。
电流强度高，则热效应高，尤其在温度较高的环 境中，可引起蛋白变性或由于热效应引起缓冲液 中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。 电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。
⑸ 染色液的选择
对醋酸纤维素薄膜电泳后染色应根据样品的特点 加以选择。其原则是染料对被分离样品有较强的 着色力，背景易脱色；应尽量采用水溶性染料， 不宜选择醇溶性染料，以免引起醋酸纤维素薄膜 溶解。
应控制染色时间。时间长，薄膜底色深不易脱去； 时间太短，着色浅不易区分，或造成条带染色不 均匀，必要时可进行复染。
此步是实验的关键，点样前应在滤纸上反复练习， 掌握点样技术后再正式点样。
图3-6 醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图 （虚线处为点样位置）
3、 电泳
用竹夹子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的 滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支 架上，如图3-7所示，要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直， 中间不能下垂。如一电泳槽中同时安放几张薄膜， 则薄膜之间应相隔几毫米。盖上电泳槽盖，使薄膜 平衡10min。
②经电泳，染色之干燥膜浸于冰醋酸：95％乙醇（2:8） 溶液中20分钟，取出后将薄膜平贴于玻璃板上。干燥过 程中，薄膜渐变透明。此透明薄膜可用扫描光密度计绘 出电泳曲线，并可根据曲线的面积计算各组分的百分数。 目前国内已有自动定量的光密度计生产。此透明薄膜可 长期保存，供教学示教用。
【 注意事项】
γ-球蛋白 6.85-7.50 -1.0×10-5
156000-300000
纤维蛋白元 5.40
-3.1×10-5
正常值：白蛋白57～72%
α2球蛋白4～9％ γ球蛋白12～20％
α1球蛋白2～5％ β球蛋白6.分析血清蛋白的正常结果不同于纸上 电泳，主要是白蛋白偏高，个别正常人白蛋白仅超过70 ％。Α -，α -，和β ，γ 都偏低，个别正常人γ 球蛋臼 可低到12％左右。上述正常值仅供参考。
② 血清蛋白染色
染色液（0.5%氨基黑10B）：称取0.5g氨基黑10B， 加蒸馏水40mL，甲醇（AR）50mL，冰乙酸（AR） 10mL，混匀溶解后置具寒试剂瓶内贮存。
漂洗液：取95%乙醇（AR）45mL，冰乙酸（AR） 5mL和蒸馏水50mL，混匀置具塞试剂瓶中贮存。
③透明液：临用前配制。 甲液：取冰乙酸（AR）15mL，无水乙醇（AR）85mL，
取出薄膜放在滤纸上，用吹风机的冷风将薄膜 吹干。
图 3-8 血清蛋白与脂蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 图谱比较示意图
a.蛋白染色 b.脂蛋白染色
6、结果判断与定量
一般血清蛋白电泳经蛋白染色后，可显示5条区 带，其排列顺序见图3-8a，未经透明处理的电 泳图谱可直接用于定量测定。
可采用洗脱法或光吸收扫描法，测定各蛋白组 分相对百分含量。
血清中含有清蛋白，α -球蛋白、β -球蛋白、γ -球 蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、 立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中 迁移速度不同。分子量小、等电点低、在相同碱性 PH值缓冲体系中，带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电 场中迁移速度快。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在 PH8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条 区带。清蛋白泳动最快，其余依次为α 1-、α 2-、 β -及γ -球蛋白（如图3-5）。
【实验材料】
1．电泳仪 包括直流电源整流器和 电泳槽两个部分。
2．醋酸纤维素薄膜。
4 试剂
① 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6, 0.07mol/L, 离子强度0.06)称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g 巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约 600mL，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至 1000mL。置40C保存，备用。
蛋白质名表称3-1等2电点人血浆泳蛋动白脉质/(c的m2等·V-电1·S及-1)迁分移子率量
清蛋白
4.88
-5.9×10-5
69000
α1-球蛋白 5.06
-5.1×10-5
200000
α2-球蛋白 5.06
-4.1×10-5
300000
β-球蛋白 5.12
-2.8×10-5
9000-150000
用导线将电泳槽的正、负极与电泳仪的正、负极分 别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源 开关，用电泳仪上细调节旋扭调到每厘米膜宽电流 强度为0.3mA（8片薄膜则为4.8mA）。通电10-15min 后，将电流调节到每厘米膜宽电流强度为0.5mA（8 片共8mA），电泳时间约50-80min。电泳后调节旋扭 使电流为零，关闭电泳仪切断电源。
图3-5正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图
1为清蛋白，2，3，4，5分别α1-，α2-，β-及 γ-球蛋白，6为点样原点
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量， 也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带 吸收峰及相对百分比。
此法由于操作简单，快速，分辨率高及 重复性好等优点。它不仅可用于分离血 清蛋白，还可用于分离脂蛋白、血红蛋 白及同工酶的分离测定。
图3-7 电泳装置剖视示意图 1.纸桥 2.电泳槽 3.醋酸纤维素薄膜
4.电泳槽膜支架 5.电极室中央隔板
4、染色与漂洗（血清蛋白染色与漂洗脱色）
用解剖镊子取出电泳后的薄膜，放在含0.5%氨 基黑10B染色液的培养皿中，浸染5min，取出后 再用漂洗液浸洗脱色，每隔10min 换 漂 洗 液一次，连续数次，直至背景蓝色脱尽。
滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁，因而称为 滤纸桥。
③ 电极槽的平衡
用平衡装置（或自制平衡管）连接两个电泳槽，使两个电极 槽内的缓冲液彼此处于同一水平状态，一般需平衡15-20min。 注意，取出平衡装置时应将活塞关紧。
2、点样
取一张干净滤纸（10×10cm），在距纸边1.5cm处 用铅笔划一平行线，此线为点样标志区。
本实验不要求进行定量分析，如有需要，可采用薄层扫 描仪进行扫描定量，或采用洗脱后再进行比色的方法进 行定量。下面为后者的具体操作步骤：
取试管6支，编好号码，分别用吸管取0.4N氢氧化钠 4ml，剪开薄膜上各条蛋白色带，另于空白部位剪一平均 大小的薄膜条，将各条分别浸于上述试管内，不时摇动， 使蓝色洗出。约半小时后，用分光光度计进行比色，波 长用650nm，以空白薄膜条洗出液为空白对照，读取白蛋 白A、α 1、α 2、β 、γ 球蛋白各管的光密度。
⑴ 醋酸纤维素薄膜的预处理
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一。将干膜片 漂浮于电极缓冲液表面，其目的是选择膜片厚薄及均匀度， 如漂浮15-30s时，膜片吸水不均匀，则有白色斑点或条纹， 这提示膜片厚薄不均，应弃去不用，以免造成电泳后区带 扭曲，界线不清，背景脱色困难，结果难以重复。
点样时，应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免缓 冲液太多引起样品扩散。但也不能吸得太干，太干则样品 不易进入薄膜的网孔内，而造成电泳起始点参差不齐，影 响分离效果。吸水量以不干不湿为宜。为防止指纹污染， 取膜时，应戴指套或用夹子。
⑹透明及保存
透明液应临用前配制，以免冰乙酸及乙醇挥发而 影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明 前，薄膜应完全干燥。透明时间应掌握好，如在 透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解，太短则透 明度不佳。