钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧_复氧损伤的保护作用(1)
mAb2G4_ODN_lip在H9C2心肌细胞缺氧复氧模型中的保护作用
临 床 麻 醉 学 杂 志 ２０１５ 年 ６ 月 第 ３１ 卷 第 ６ 期 Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１５，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．６
·实验研究·
ｍＡｂ２Ｇ４／ＯＤＮ／ｌｉｐ 在 Ｈ９Ｃ２ 心 肌 细 胞 缺 氧 复 氧 模型中的保护作用
陈刘芳 靖国庆 杨建国 张宗泽 王焱林 吴云
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ＮＦ－κＢ；Ｈｙｐｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ；Ｈ９Ｃ２ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ
基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 （编 号 ：８１２０１４９９） 作者单位：４３００７１ 武 汉 市，武 汉 大 学 中 南 医 院 麻 醉 科 （陈 刘
Ｈ９Ｃ２心肌 细 胞 按 常 规 培 养，高 糖 ＤＭＥＭ 完 全 培养基，１０％胎牛血清，置于３７ ℃、５％ＣＯ２ 细胞培养 箱中培养，０．２５％胰 酶消化传代，选取对数生 长 期 细 胞进行实 验。将 心 肌 细 胞 置 于 厌 氧 袋 中 密 封 后，３７
临 床 麻 醉 学 杂 志 ２０１５ 年 ６ 月 第 ３１ 卷 第 ６ 期 Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１５，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．６
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ｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ２Ｇ４，ｍＡｂ２Ｇ４）能 高 效 特 异 性 地 与 受损心肌细胞结合；核转 录 因 子－κＢ（ＮＦ－κＢ）作 为 一 种广泛存在 的 诱 导 性 核 转 录 因 子，其 在 ＭＩＲＩ中 的 作用是近年来 缺 血－再 灌 注 损 伤 机 制 研 究 的 重 要 进 展［２］；转染人工合成与 ＮＦ－κＢ 结 合 位 点 具 高 度 亲 和 力 的 寡 聚 脱 氧 核 苷 酸 也 就 是 诱 骗 性 寡 核 苷 酸 （ｄｅｃｏｙ ＯＤＮ）是 近 年 来 倍 受 关 注 的 一 个 可 以 特 异 性 针 对 ＮＦ－κＢ 的新 型 基 因 治 理 策 略。 因 此 我 们 设 想 建 立 Ｈ９Ｃ２心肌细胞 缺 氧 复 氧 模 型，运 用 基 因 工 程 技 术 将 ｍＡｂ２Ｇ４和 ＮＦ－κＢ ｄｅｃｏｙ ＯＤＮ 融合成单克隆抗 体／寡 核 苷 酸／阳 离 子 脂 质 体 复 合 物 （ｍＡｂ２Ｇ４／ ＯＤＮ／ｌｉｐ），并 探 讨 不 同 剂 量 ｍＡｂ２Ｇ４／ＯＤＮ／ｌｉｐ 是 否能在 ｍＡｂ２Ｇ４引导下靶向到达缺氧心肌细胞 内， 快 速 、高 效 地 抑 制 细 胞 内 转 录 因 子 的 激 活 ，进 而 抑 制 炎性细胞因子的表 达，对 缺 氧 复 氧 心 肌 细 胞 起 到 保 护作用。
复氧损伤的保护作用的初步探讨的开题报告
HIF-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用的初步探讨的
开题报告
一、研究背景
缺氧是心肌梗死、心肌病变和其他心血管疾病的主要原因之一。
虽然缺氧激活了细胞保护性适应性反应，但过度的缺氧会导致心肌细胞死亡。
缺氧引起的线粒体损伤、氧化应激和细胞死亡是心肌缺血/再灌注损伤（IRI）的关键过程。
因此，通过调节心肌细胞对缺氧/复氧的适应性反应，可以找到新的治疗方法来减轻心脏缺氧损伤。
二、研究目的
本研究旨在探讨缺氧/复氧是否会影响心肌细胞HIF-1的表达，以及HIF-1在心
肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用。
三、研究内容和方法
本研究将采用含有心肌细胞的试管培养系统，将细胞分为3组：正常培养组、缺氧组和缺氧/复氧组。
分别使用Western blot技术、实时荧光定量PCR、细胞活性检测、细胞凋亡检测等方法来检测HIF-1与相关基因的表达，以及细胞的活性和死亡情况。
并通过药理学手段抑制或激活HIF-1的表达，观察其对缺氧/复氧相关病理分子的表达和心肌细胞凋亡的影响。
四、研究意义和预期结果
本研究将进一步研究心肌细胞缺氧/复氧的机制，探究HIF-1在缺氧/复氧过程中
的作用机制和保护作用。
同时，本研究的预期结果可能为心脏缺氧性损伤的治疗提供
新的治疗策略。
丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究
丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究毛智姚;郑继锋;赵士棋【期刊名称】《心脑血管病防治》【年(卷),期】2022(22)2【摘要】目的评估丹皮酚对H9c2细胞内活性氧(ROS)水平调节作用并探讨其潜在机制。
方法通过缺氧/复氧诱导方法建立心肌缺血/再灌注损伤细胞模型。
根据H9c2细胞是否用丹皮酚(10μmol/L)预处理分为空白对照组、模型组、治疗组;根据乳腺癌易感基因1(BRCA1)-siRNA或control-siRNA转染H9c2细胞分为实验组和阴性对照组。
通过流式细胞检测仪检测细胞内ROS水平,使用商业试剂盒检测总抗氧化能酶(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,实时荧光定量聚合酶链式反应法和蛋白质印迹评估BRCA1和Nrf 2转录因子表达水平;使用RNA干扰技术验证丹皮酚可能通过BRCA1调控细胞内ROS水平。
结果治疗组细胞中ROS的水平明显低于模型组,SOD和T-AOC水平明显高于模型组,BRCA1和Nrf 2转录因子mRNA表达水平明显高于模型组(P <0.05)。
使用siRNA阻断BRCA1表达后实验组ROS水平明显高于阴性对照组,Nrf 2转录因子、谷胱甘肽S-转移酶(GST)mRNA和T-AOC水平明显低于阴性对照组(t=5.862、7.630、5.706、5.914,P <0.05)。
结论丹皮酚可显著抑制H9c2细胞内ROS水平,提高细胞抗氧化能力,其可能作用机制是通过BRCA1基因依赖的Nrf 2抗氧化信号通路。
【总页数】4页(P19-22)【作者】毛智姚;郑继锋;赵士棋【作者单位】蚌埠医学院研究生院;浙江省嘉兴市第二医院心血管内科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究2.花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用3.茶多酚对H9C2大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制4.活血解毒中药配伍对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞自噬损伤的保护机制5.参附注射液诱导H9C2大鼠心肌细胞热休克蛋白22表达并减轻缺氧/复氧损伤的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》一、引言心肌细胞是维持心脏功能的重要组成单元，其在缺氧复氧过程中极易受到损伤。
近年来，随着医学研究的深入，丹皮酚作为一种具有多种生物活性的天然化合物，其在心血管保护方面的作用逐渐受到关注。
本研究旨在探讨丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制，以期为临床治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料实验所用H9c2心肌细胞购自ATCC细胞库，丹皮酚购自Sigma-Aldrich公司。
实验所用药品和试剂均符合实验要求。
2. 方法（1）细胞培养与处理：将H9c2心肌细胞分别进行缺氧复氧处理，同时设置丹皮酚干预组和对照组。
（2）检测指标：采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测相关蛋白表达等。
（3）数据分析：采用SPSS软件进行数据分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
三、实验结果1. 丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞活力的影响实验结果显示，丹皮酚干预组细胞活力明显高于对照组（P<0.05），说明丹皮酚对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用。
2. 丹皮酚对H9c2心肌细胞凋亡的影响流式细胞术检测结果显示，丹皮酚干预组细胞凋亡率明显低于对照组（P<0.05），进一步证实了丹皮酚对心肌细胞的保护作用。
3. 丹皮酚对相关蛋白表达的影响Western blot结果显示，丹皮酚干预组Bcl-2蛋白表达升高，而Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05），表明丹皮酚可能通过调节Bcl-2/Bax比例及Caspase-3活性来发挥其保护作用。
四、讨论本研究结果表明，丹皮酚对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有明显的保护作用。
其可能的作用机制包括以下几个方面：首先，丹皮酚可能通过提高细胞活力，降低细胞凋亡率来保护心肌细胞；其次，丹皮酚可能通过调节Bcl-2/Bax比例及Caspase-3活性来发挥其保护作用。
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》一、引言心肌细胞是维持心脏功能的重要组成单元，缺氧复氧是导致心肌细胞损伤的重要原因之一。
丹皮酚作为一种天然的生物活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种生物活性。
近年来，丹皮酚在心血管疾病治疗方面的研究逐渐增多，其对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的保护作用也受到了广泛关注。
本文旨在探讨丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制，为临床应用提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料（1）细胞：H9c2心肌细胞系（2）药物：丹皮酚（3）实验仪器与试剂：细胞培养箱、显微镜、酶标仪、Western blot试剂等。
2. 方法（1）细胞培养与处理：H9c2心肌细胞培养于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，分为对照组、模型组和丹皮酚处理组。
模型组和丹皮酚处理组进行缺氧复氧处理。
（2）指标检测：通过MTT法检测细胞活力，利用Western blot检测相关蛋白表达水平，观察细胞凋亡情况等。
（3）数据分析：采用SPSS软件进行数据分析，结果以均数±标准差表示，P<0.05表示差异有统计学意义。
三、实验结果1. 丹皮酚对H9c2心肌细胞活力的影响实验结果显示，丹皮酚处理组H9c2心肌细胞的活力较模型组明显提高，表明丹皮酚具有保护心肌细胞的作用。
2. 丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响通过Western blot检测发现，丹皮酚处理组H9c2心肌细胞的凋亡相关蛋白表达水平较模型组降低，说明丹皮酚具有抑制心肌细胞凋亡的作用。
3. 丹皮酚对H9c2心肌细胞内氧化应激的影响实验结果显示，丹皮酚处理组H9c2心肌细胞的氧化应激水平较模型组降低，表明丹皮酚具有抗氧化作用。
4. 丹皮酚对相关信号通路的影响通过Western blot检测发现，丹皮酚处理组相关信号通路（如PI3K/AKT通路）的活性较模型组增强，表明丹皮酚可能通过调节相关信号通路发挥保护作用。
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》
《丹皮酚对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究》摘要：本研究以H9c2心肌细胞为模型，探究了丹皮酚在缺氧复氧条件下对心肌细胞的保护作用机制。
实验发现丹皮酚可以有效地减少缺氧复氧导致的细胞损伤，这主要得益于其抗氧化、抗炎、调节细胞凋亡等生物效应。
本论文详细描述了丹皮酚在H9c2心肌细胞保护方面的实验设计、实验结果及结论，为丹皮酚在心血管疾病治疗中的应用提供了理论依据。
一、引言心血管疾病是全球范围内发病率和死亡率最高的疾病之一，其中缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤是心血管疾病的重要病理过程。
因此，寻找有效的药物保护心肌细胞免受缺氧复氧损伤具有重要意义。
近年来，丹皮酚作为一种天然的中药成分，因其具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种生物活性，被广泛关注。
本研究以H9c2心肌细胞为模型，探讨丹皮酚对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的保护作用机制。
二、材料与方法1. 材料：H9c2心肌细胞、丹皮酚、缺氧复氧模型等。
2. 方法：（1）建立缺氧复氧模型：采用模拟人体缺氧和复氧的环境条件，对H9c2心肌细胞进行缺氧和复氧处理。
（2）药物处理：在缺氧复氧处理前后，对H9c2心肌细胞进行丹皮酚处理。
（3）指标检测：通过检测细胞活性、细胞凋亡、氧化应激等指标，评估丹皮酚对H9c2心肌细胞的保护作用。
三、实验结果1. 丹皮酚对H9c2心肌细胞的保护作用：实验结果显示，丹皮酚可以显著提高缺氧复氧后H9c2心肌细胞的活性，降低细胞凋亡率。
2. 丹皮酚的抗氧化作用：通过检测细胞内活性氧（ROS）水平发现，丹皮酚可以有效地清除细胞内的ROS，减轻氧化应激对细胞的损伤。
3. 丹皮酚的抗炎作用：实验结果显示，丹皮酚可以抑制炎症因子的释放，减轻炎症反应对细胞的损伤。
4. 丹皮酚对细胞凋亡的调节作用：通过检测Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白的表达发现，丹皮酚可以调节细胞的凋亡过程，抑制细胞凋亡。
四、讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：丹皮酚对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤具有明显的保护作用。
中药卷柏现代化探究
中药卷柏现代化探究摘要：中药卷柏及其同属植物均为多年生草本植物，在我国分布广泛，品种繁多，植物资源丰富，全年均可采收，尽管各基原品种均属于同科同属植物，但在化学成分、药理作用及功效主治方面却不尽相同，各基原品种之间有共性，也有个性。
基于此，本文就中药卷柏现代化进行简要探讨。
关键词：中药；卷柏；现代化1 中药卷柏研究概述卷柏属于多年生草本蕨类植物,该属植物众多,外观形态也较为相似,在我国境内，江南卷柏的干燥全草,收载于湖北省、广东省中药材质量标准中,也是广泛应用的民间药和民族药。
江南卷柏具有清热利湿,活血消肿,止血等功效,常用于治疗急性黄疸胁痛,胸胁腰部挫伤,全身浮肿,肌衄等病症,还可治疗痛风性关节炎。
江南卷柏所属的卷柏科植物极其丰富,虽然只含卷柏属1属,却有约700种植物,中国分布约有60-70种,在全国各地均有分布,许多形态相似,区分难度大,使得临床应用中经常会出现同属混淆品的状况,临床主要用于经闭痛经、癥瘕痞块、跌扑损伤、吐血、崩漏、便血、脱肛等。
为了临床疗效和用药安全缺乏保障。
关于卷柏药材的鉴别方法,曾经有显微鉴别、薄层色谱鉴别和高效液相指纹图谱(HPLC)鉴别的研究报道,但未见江南卷柏与其近缘物种旱生卷柏、兖州卷柏的比较研究,也尚未发现关于江南卷柏 HPLC 色谱图较全面的成分指认报道。
但是在我国某些地方标准和民间尚有其他种基原的卷柏也供药用，并且具有很好的临床疗效。
鉴于此，本文对中药卷柏的现代研究进行综述，以期为卷柏药用植物资源的进一步开发利用提供参考。
2 化学成分关于卷柏的化学成分研究，大多数文献都集中于对药典品来源卷柏的研究，但近年来相关研究人员对其他卷柏属植物也加大了研究力度。
相关学者在对卷柏多样性的化学成分进行综述时指出，国内外学者目前已从卷柏药材中分离并鉴定的化学成分达130多种，主要有黄酮类、苯丙素类、甾体类、炔酚类、糖苷类、酚类、蒽醌类、萜类及生物碱类化合物等。
有关学者采用现代色谱和波谱相结合的技术方法从卷柏药材中分离鉴定了16个与Selaginellin结构类似的化合物，其中Selagintamarlin A、Selaginpulvilin E 等为首次从卷柏中发现的化合物。
EpacRap1信号途径介导H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及其分子机制
Epac/Rap1信号途径介导H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及其分子机制目的:研究 Epac/Rap1(exchange proteins directly activated bycAMP-Ras-related protein 1)信号通路在H9c2细胞缺氧复氧损伤中的作用及其分子机制,为临床治疗心肌缺血再灌注损伤寻求新的靶点提供理论与实验依据。
方法:1.采取体外缺氧/复氧(H/R)模拟体内心肌缺血再灌注损伤。
实验分为对照组、模型组(OGD)、OGD+Epac1 激动剂组(OGD+8-CPT)、OGD+Epac1 抑制剂组(OGD+ESI-09)、OGD+Epac1 激动剂+PKA 抑制剂组(OGD+8-CPT+H-89)、OGD+Epac1 抑制剂+PKA 抑制剂组(OGD+ESI-09+H-89)6 组。
MTT 及 LDH 检测细胞活力与损伤,钙离子荧光探针(Fluo-3AM)检测细胞内[Ca2+]i含量;Western Blot、qRT-PCR、IF观察Epac1表达及下游Rap1活性形式Rap 1-GTP的表达。
2.采取体外缺氧/复氧(H/R)模拟体内心肌缺血再灌注损伤。
实验分为对照组、模型组(OGD)、OGD+Epacl 激动剂组、OGD+Epacl 抑制剂组、Epacl-shRNA干扰组、Epac2-shRNA 干扰组、OGD+Epacl-shRNA 干扰组、OGD+Epac2-shRNA干扰组8组。
MTT检测细胞活力,钙离子荧光探针(Fluo-3 AM)检测细胞内[Ca2+]i浓度;Western Blot方法检测心肌细胞中Epac1、CaMK-II、Rap1-GTP和p-ERK蛋白变化;实时荧光定量PCR检测Epac1、Rap1的mRNA的表达变化;Co-IP检测细胞中Epac1与Rap1的相互作用。
结果:1.与正常对照组相比,OGD组心肌细胞缺氧5h复氧1h后,心肌细胞活力降低,LDH量释放增加,心肌细胞中Epac1激活,表达上调,其下游Rap1活性形式Rap 1-GTP的表达增加,促进心肌细胞损伤;Epac激动剂8-CPT不仅增强心肌细胞Epac1过表达,而且增加了 Epac下游Rap1活性形式Rap 1-GTP的表达,并导致胞内钙超载,加重心肌细胞损伤;Epac抑制剂ESI-09可抑制心肌细胞Epac1的激活与过表达,抑制下游Rap1活性形式Rap1-GTP的表达与CaMKII蛋白的表达,并增加ERK的磷酸化,抑制钙超载从而减轻心肌细胞损伤;H-89对心肌细胞Epac1的表达和下游Rap1的活化有轻度抑制作用。
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物酶标记的二抗 (北京中杉金桥 ), ECLplus和细 胞核 -胞质蛋白提取试剂盒 (北京普利莱生物制品 有限公司 ), COPP和 ATRA(Sigma), Znpp(InternationalLaboratory), BCA蛋白定量试剂盒 (杭州碧云 天生物技术有限公司 ), 其他试剂均为国产分析纯 。 1.3 H9c2心肌细胞的培养和实验分组 H9c2细 胞株在含 10%胎牛血清高糖 DMEM完全培养基中 培养 (条件为 37℃, 5% CO2 ), 2 ～ 3 d传代 1次 。实 验时取对数生长期细 胞 , 将细 胞随机分成 5 组 :① 对照组 :正常培养细胞不做任何处理 ;② 缺氧 /复氧 组 :加入饱和氮气 pH 6.8D-Hanks液培养细胞 2 h, 再用 DMEM完全培养基培养细胞 6 h。 ③ COPP预 处理组 :用含 10 μmol· L-1 COPP的 DMEM完全培 养基 预 处 理 细胞 12 h(除 检 测 HO-1 mRNA时 , COPP预处理细胞时间为 4 h), 然后进行缺氧 /复氧 处理 ;④ COPP+Znpp组 :用含 10 μmol· L-1 COPP 和 20 μmol· L-1 Znpp的 DMEM完全培养基预处理 细胞 12 h(除检测 HO-1 mRNA时 , COPP和 Znpp预 处理细胞时间为 4 h), 然后进行缺氧 /复氧处理 ;⑤ COPP+ATRA组 :用 含 10 μmol· L-1 COPP和 1 μmol· L-1 ATRA的 DMEM完全培养基预处理细胞 12 h, 然后进行缺氧 /复氧处理 。 1.4 生化指标的测定 按照试剂盒说明书 , 测定心 肌细胞上 清液 中 乳酸 脱 氢酶 (LDH)和肌 酸 激酶 (CK)活力水平 。 1.5 RT-PCR检测 HO-1 mRNA表达 用 TRIzol 试剂提取总 RNA, 紫外分光光度计测量 RNA样品 的纯度 , OD260 /280 值大 于 1.7 的样品 按两 步法 RTPCR试剂 盒说 明进 行 逆转 录 和 PCR操 作 。 其中 HO-1引 物 :上游 5′GCTCTATCGTGCTCGCATGA下 游 5′AATTCCCACTGCCA-CGGTC3′, 扩增 DNA片段 大小为 319 bp;β -actin引物 :上游 5′CCCTAAGGCCAACCGTGAA 3′, 下 游 5′CCGCTCATTGCCGATAGTGA3′, 扩增 DNA片段大小为 430 bp;PCR条件 为 :94℃预变性 2 min, 94℃变性 30 s, 56℃退火 30 s, 72℃延伸 30 s, 共进行 30个循环 , 最后再 72℃延 伸 10 min。 PCR产物以 1.2%琼脂糖凝胶电泳分离 鉴定 , 紫外凝胶成像系统进行半定量分析 。 1.6 Westernblot检测 心肌细胞 HO-1 蛋白表达 水平 收集各组细胞 , 用 PBS洗涤 3次 , 加入含有 PMSF的细胞裂解液 , 冰上作用 30 min, 4℃, 12 000 r· min-1离心 15 min, 取上清进行蛋白质定量 , 取 50 μg总蛋白样品 于 12%变性 聚丙烯酰 胺凝胶电 泳 , 随后转印至 PVDF膜 , 用 5%脱脂奶粉封闭后加 入 1 ∶1 000一抗 (β-actin, HO-1)37℃孵育 1.5 h, 二
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中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2009 Mar;25(3):352 ～ 6
钴原卟啉对 H9c2心肌细胞缺氧 /复氧损伤的保护作用
朱晓洁 , 梁 飞 , 王秀宏 , 赵炜明 , 高 旭
(哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 , 黑龙江 哈尔滨 150086)
氧 , H2O2, 紫外线照射等 。 近年人们发现 HO-1在有 害刺激和疾病条件下对机体具有保护作用 , 特别是 诱导 HO-1 过表达在抗缺血 /再灌注方面具有很好 的功效[ 2 ～ 5] 。 COPP是 至今发现 的金属卟 啉类的 最有 效的 HO-1诱导剂 , 而且在细胞内不会分解代谢生成活 性氧族 , 不会增加氧化应激 [ 6] 。 因此 , COPP是诱导
emodinunderhypoxiccondition.Conclusion Inthe hypoxicenvironment, emodincombinedwithradiotherapycaneffectivelyinhibittheexpressionofHIF-1 α andDNA double-strandbreakrepairgenes(KU70/ KU80), whichmaybeitsmechanismofradiosensitization. Keywords:emodin;hypoxia;repairgene;real-time fluorescencequantitativeRT-PCR;nasopharyngealcarcinoma
关键词 :血红素加氧酶 -1;钴原卟啉 ;缺氧 /复氧 ;Nrf2-ARE
收稿日期 :2008 -11 -05, 修回日期 :2008 -12 -28 基金项目 :黑龙江省自然科学基金资助项目 (NoD2006-09);黑龙江
省博士后启动基金 ;哈尔滨医科大学医学基础学科青年科 学基金资助项目 作者简介 :朱晓洁 (1982 -), 女 , 硕士生 , 研究 方向 :血红素代 谢及 相关 疾 病 , Tel:0451-86671684, E-mail:zhuxiaojie0070 @ ; 王秀宏 (1970 -), 女 , 副教授 , 硕士生导师 , 研究方向 :血 红素代谢 及相 关 疾病 , 通 讯作 者 , Tel:0451-86671684, Email:wangxh700417@
抗浓度为 1 ∶4 000, 37℃孵育 1 h, X线片曝光 , 显 影 。 实验结果使 用 BIORADGS-800 系统扫 描 , 并 定量分析 X线片条带的光密度 。实验重复 3次 。 1.7 H9c2心肌细胞细胞核 Nrf2蛋白表达水平的 检测 生长良好的心肌细 胞施加因素后去 除培养 液 , 按细胞核 -胞质蛋白提取试剂盒说明提取细胞 核中的 Nrf2 蛋白 。 用 BCA试 剂盒进行蛋白定 量 。 取 50 μg蛋白于 12% SDS-PAGE分离蛋白质 , 转印 至 PVDF膜 , 封闭 后 加入 1 ∶1 000一 抗 (β-actin, Nrf2), 37℃孵育 1.5 h, 二抗浓度为 1 ∶4 000, 37℃ 孵育 1 h, X线片 曝光 , 显影 。 实 验结果使 用 BIORADGS-800系统扫描 , 并定量分析 X线片条带的 光密度 。 实验重复 3次 。 1.8 统计学处理 实验数据用 x±s表示 , 统计学 处理使用 SPSS12.0 统计软件 , 采用方差分析方法 判断其差异显著性 。 2 结果 2.1 COPP预处理对 HO-1 mRNA和蛋白表达水 平的影响 对照组 HO-1 mRNA和蛋白表达水平很 低 , 缺氧 /复氧组的 HO-1 mRNA和蛋白表达水平
中 国 图 书 分 类 号 :R-332;R 322.11;R 329.2;R 342.22; R 345.41;R 542.2;R 845.22;R 977.3 文献标识码 :A 文章编号 :1001 -1978(2009)03 -0352 -05 摘要 :目 的 研究钴 原卟 啉 (COPP)预处 理在 H9c2心肌 细 胞缺氧 /复氧损伤中的作 用及分 子机 制 。 方法 建立 H9C2 心肌细胞 缺氧 /复氧 模 型 。 在 H9c2 心 肌细 胞 缺氧 /复氧 前 用 COPP预 处 理 , 并 用 锌 原 卟 啉 (Znpp), 全 反 视 黄 酸 (ATAR)分 别 抑制 HO-1 及 Nrf2-ARE。 检 测细 胞 上清 液 中 LDH、CK的水 平变化 ;用 RT-PCR法分 析 HO-1 mRNA表 达 水平 ;Westernblot分析 HO-1、Nrf2的蛋白表达水平 。 结果 与缺 氧 /复氧 组比 , COPP预处 理组 中 LDH和 CK水 平均 明 显降低 , 而 HO-1 mRNA水平 , 蛋白 水平 及细 胞核 的 Nrf2 蛋 白水平均明显增加 ;Znpp的加入阻断了 COPP预处理对心肌 细胞 的保 护作 用 ;ATAR的 加入 抑制 了 Nrf2在 细胞 核的 聚 集 , 进而抑制了 COPP对 HO-1的诱导 。 结论 COPP预处理 诱导 H9c2心肌细胞 HO-1过表 达 , 具有 抗心肌细 胞缺氧 /复 氧损伤的保护作用 ;其机制与 Nrf2-ARE信号通路 相关 。
groupsandthecontrolgroupunderhypoxiccondition wasdetectedbythereal-timefluorescencequantitative RT-PCR.Results ExpressionofHIF-1α wassignificantlyincreasedunderhypoxiacondition.HIF-1 αhad nochangeaftertreatmentwithemodinalone.TheexpressionlevelofKU70 /KU80 paredwithradiationalonegroup, radiation combinedhypoxiagroupobviouslyenhancedtheexpressionofKU70/KU80.KU70 /KU80 mRNAexpressionsignificantlyreducedafterradiationcombinedwith