HPLC法测定桂枝颗粒中肉桂酸的含量

HPLC法测定桂枝颗粒中肉桂酸的含量

目的：建立高效液相色谱法测定桂枝颗粒中肉桂酸的含量。方法：采用Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长285 nm，柱温：25 ℃。结果：肉桂酸在0.245 μg～1.225 μg之间峰面积与质量呈良好线性关系（r2=0.9997），且肉桂酸的提取以在水为提取溶剂的条件下超声30 min为最佳。结论：该法精密度、稳定性和重复性良好，简便易行，可有效地测定桂枝中有效活性成分肉桂酸的含量，为中药材桂枝的质量考察提供可靠的依据。

标签：桂枝;肉桂酸;高效液相色谱

一、引言

中药材桂枝采自樟科樟属植物肉桂（Cinnamomum cassia Presl）的干燥嫩枝[1]。桂枝含挥发油较高，有效成分为肉桂酸、桂皮醛、桂皮醇、香豆素及原儿茶酸，其主要活性成分为桂皮醛和肉桂酸[2]。桂枝有很强的疏肌、清热的作用，在中医上常被作为解表药使用;桂枝中含有丰富的挥发油，亦有疏通筋骨、活血化瘀及舒缓疼痛的作用[3～5]。本文建立了测定桂枝中有效成分肉桂酸含量的方法，该法简便、准确，可为桂枝的质量控制研究提供有效的依据。

二、仪器与药品

2.1 仪器大连依利特分析仪器有限公司EC2000色谱数据处理工作站，P230高压恒流泵，Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;KQ-300DE数控超声清洗器;DZF-1B电热恒温真空干燥箱。

2.2 药品肉桂酸对照品（上海源叶生物科技有限公司）;乙腈（色谱纯）;其余试剂为分析纯;桂枝饮片（市售）。

三、方法与结果

3.1 色谱条件

Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;乙腈-0.1%磷酸溶液（35：65）为流动相，流速1.0 mL·min-1;检测波长：285 nm;柱温：25 ℃，进样量：5 μL。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液的制备

精密称定肉桂酸对照品2.45 mg，置于25 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即为肉桂酸对照品溶液（浓度为0.098 g·L-1）。

3.2.2 供试品溶液的制备

称取桂枝样品50 g，置于1000 mL圆底烧瓶中，加水400 mL，于电热套上煮沸1 h，趁热抽滤。将所得滤液浓缩、干燥得到桂枝粗品。再取相同量的马铃薯淀粉，制软材，过14目筛制粒，于60 ℃干燥，即得桂枝颗粒。最后取桂枝颗粒粉末约0.5 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇10 mL，超声处理15 min，放冷，定容至刻度，摇匀。过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

3.3 定性实验

按3.1项下色谱条件测定：精密吸取5 μL肉桂酸对照品溶液、供试品溶液。对比HPLC谱图得知：肉桂酸供试品溶液色谱图的主成分为肉桂酸。HPLC谱图如下：

3.4 方法学考察

3.4.1 线性关系考察

按3.1项下色谱条件测定：精密吸取3.2.1项下的肉桂酸对照品溶液2.5 μL、5 μL、7.5 μL、10 μL、12.5 μL，进样分析。绘制肉桂酸对照品溶液的标准曲线：以峰面积积分值A为纵坐标，以换算后的肉桂酸对照品量m为横坐标。得肉桂酸对照品溶液的线性回归方程A=5965.4 m+129.47（R2=0.9997）。结果表明，肉桂酸对照品在0.245 μg ～ 1.225 μg范围内有较好的线性关系。相关色谱图的峰面积积分值及肉桂酸对照品的标准曲线如下：

3.4.2 精密度试验

按3.1项下色谱条件测定：精密吸取3.2.1项下5 μL肉桂酸对照品溶液，进样分析，重复6次，并记录HPLC谱图。经计算肉桂酸对照品峰面积的RSD为

0.07%，小于3%，符合方法学验证要求，表明仪器的精密度良好。相关色谱图的峰面积积分值记录如下：

3.4.3 重复性试验

按3.1项下色谱条件测定：精密称定0.500 g桂枝颗粒粉末六份，依3.2.2项下方法制备成六组供试品，分别测定每组肉桂酸的含量。经计算得肉桂酸供试品的峰面积的RSD为1.5%，小于3%。符合方法学验证要求，表明该法的重复性良好。相关色谱图的峰面积积分值记录如下：

3.4.4 稳定性试验

按3.1项下色谱条件测定：取3.2.1项下肉桂酸对照品溶液，于室温下放置。每隔1 h后依次进样分析。经计算肉桂酸对照品在不同时间点的峰面积的RSD 为1.8%，小于3%，符合方法学验证要求。结果表明对照品溶液在室温下6 h内稳定。相关色谱图的峰面积积分值记录如下：

3.5 提取工艺的考察

3.5.1 提取溶剂的考察

按3.1项下色谱条件测定：精密称定0.500 g桂枝颗粒粉末三份，依3.2.2项下方法制备成三组供试品，进样分析。将峰面积进行比较，结果表明在水作为提取溶剂的条件下，肉桂酸色谱峰的峰面积最大，即含量最高。不同溶剂提取的肉桂酸峰面积积分值记录如下：

3.5.2 提取时间的考察

按3.1项下色谱条件测定：精密称定0.500 g桂枝颗粒粉末五份，依3.2.2项下方法制备成五组供试品，进样分析。将峰面积进行比较，结果表明在30 min 的超声提取条件下，主峰的色谱峰面积最大，即含量最高。不同超声时间提取的肉桂酸峰面积积分值记录如下：

3.6 样品含量的测定

按3.1项下色谱条件测定：精密称定0.500 g桂枝颗粒粉末，依3.2.2项下方法制备成供试品，进样分析，平行测定3次。相关的峰面积积分值记录如下：

四、結论

本文采用了高效液相的方法测定桂枝颗粒中主要成分肉桂酸的含量，经计算本实验所用桂枝颗粒中肉桂酸的百分含量为6.26%。同时进行了以RSD大小为评判标准的方法学考察，结果重复性、精密度及稳定性的RSD均小于3%，故该法的重复性、精密度及稳定性良好;此外，本文在超声提取为提取方法的基础上，考察了提取溶剂和提取时间对肉桂酸含量提取的影响，结果表明以水作为提取溶剂，超声30 min为最佳的提取条件。因此，本文建立的高效液相法测定桂枝颗粒中活性成分肉桂酸的含量，简单可靠，可为桂枝的质量考察提供有效的参考价值，具有实际意义。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].中国医药科技出版社，2015，276.

[2]许源，宿树兰，王团结等.桂枝的化学成分与药理活性研究进展[J].中药材，2013，36，674-678.

[3]华剑，武超.HPLC法测定桂枝茯苓胶囊中肉桂酸、桂皮醛和丹皮酚的含量[J].安徽医药，2006，30-31.

[4]刘丹萍，赵惠玲，刘海燕等.HPLC法同时测定桂枝配方颗粒中肉桂酸和桂皮醛的含量[J].亚太传统医药，2015，11，11-13.

[5]王连芝，蒋维谦.HPLC法测定桂枝中桂皮醛和肉桂酸的含量[J].中医药信息，2009，26，19-20.