HPLC法测定复方黑参颗粒中肉桂酸与哈巴俄苷含量-姚东,何静,于凤斌,等
中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定
中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定王长琴【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2016(013)012【摘要】目的:确定使用高效液相色谱法(HPLC)检测中药玄参中含有的哈巴俄苷以及肉桂酸的实际实验步骤,从而确定哈巴俄苷以及肉桂酸在中药玄参中的实际含量.方法:使用规格250mm×4.6mm产于Ultrasphere公司的ODS分析柱(5μm),使用1%醋酸水溶液以及乙腈作为提取需要的流动相,对提取物进行20min的线性梯度洗脱,从20:80的比例到50:50的比例,控制液体的流动速度在1mL·min-1,所有提取过程在室温下进行,使用278nm波长进行检测.结果:哈巴俄苷浓度与峰面积呈现良好线性关系的浓度范围为1.25~105.0μg·mL-1;肉桂酸浓度与峰面积呈现良好线性关系的浓度范围为0.80~50.00μg·mL-1.哈巴俄苷溶液以及肉桂酸溶液在4d 内可以保持浓度不变.30:70的甲醇-水溶液30min超声提取哈巴俄苷和肉桂酸效果最佳.玄参商品饮片中哈巴俄苷的含量位于0.080%~0.243%,肉桂酸的含量位于0.020%~0.052%.玄参完整药材中哈巴俄苷的含量位于0.043%~0.216%,肉桂酸的含量位于0.026%~0.067%.哈巴俄苷与肉桂酸的5次平均回收率分别为99.85%和99.80%,RSD分别为0.63%和0.62%.结论:使用高效液相色谱法检测玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的含量准确、可靠、快速、简便,玄参中哈巴俄苷含量应该高于0.04%.【总页数】2页(P3-4)【作者】王长琴【作者单位】南京中医药大学连云港附属医院连云港 222004【正文语种】中文【中图分类】R284【相关文献】1.高效液相色谱法测定玄参百贝散中哈巴俄苷含量2.HPLC测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸3.HPLC法测定不同产地微波真空干燥玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的含量4.中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定5.中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定(英文)因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC_UV波长转换法测定玄参药材及饮片中哈巴苷与哈巴俄苷的含量
［关键词］ 玄参； 哈巴苷； 哈巴俄苷； 高效液相色谱法
玄 参 来 源 于 玄 参 科 植 物 浙 玄 参 Scrophularia ningpoensis Hemsl 的干燥根，为常用中药，具有凉血 滋阴、泻火解毒的功效。玄参主要含环烯醚萜类、苯 丙素苷类成分［1］，其中哈巴苷（ harpagide） 和哈巴俄 苷（ harpagoside） 为 2 个主要环烯醚萜苷成分，本课 题组以往研究发现皮下注射哈巴俄苷能使阴虚小鼠 抑制的免疫功能恢复； 哈巴苷、哈巴俄苷均能促进阴 虚小鼠体外脾淋巴细胞增殖； 认为哈巴俄苷为玄参 特征性有效成分［2］。2005 年版《中国药典》［3］以哈 巴俄苷的含量作为玄参药材的质量控制标准。本课
分别取玄参药材及饮片 粉 末 （ 过 40 目 筛） 约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50% 甲 醇 50 mL，密塞，称定质量，浸泡 1 h 后，超 声 处 理 （ 500 W，40 kHz） 45 min（ 水温保持 20 ～ 30 ℃ ） ，放 冷，再称定质量，用 50% 甲醇补足减失的质量，摇 匀，0. 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2. 4 标准曲线绘制
黑参中7种人参皂苷含量测定
黑参中7种人参皂苷含量测定乔雪;李月茹【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2012(024)001【摘要】Purpose To establish the method for determining simultaneously seven kinds of ginsenosides Rf, Rg2, Rhl, Rc, Rb2, Rb3, Rd and their contents in black ginseng by HPLC. Methods HPLC was carried out on Agilent Echpse XDB-C18（4.6mmx250 nun, 5p.m）with acetonitrile-water, gradient elution, the volume of flow 1.0 mL .min-1 and detection wavelength 203nm Results The contents of seven kinds of ginsenosides in black ginseng were 0.06% ,0.05% .0.03% ,0.02% ,0.40% ,0.08% ,0.23%. Conclusions The contents of ginsenosides ingredients in black ginseng were detenmned in the first time. The established method can be used in determining the contents of multiple ginsenosides in herb ginseng simultanesly.%目的采用高效液相（HPLC）法测定黑参中7种人参皂苷Rf、Rg2、Rh1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的含最，并建立同时测定7种人参皂苷含量的方法。
HPLC法测定复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷
HPLC 法测定复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷刘 霞,冯玛莉,李培毅,贾力莉,牛艳艳,武玉鹏 (山西省中医药研究院,山西太原 030012)摘 要:目的 建立复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷的测定方法。
方法 采用高效液相色谱法,Irregular C 18(250mm ×416mm ,10μm );乙腈2110%醋酸(26∶74)为流动相;检测波长为278nm ;柱温为室温。
结果 哈巴俄苷在01061～11076μg 线性关系良好,r =019999,平均加样回收率为9916%,RSD 为2106%。
结论 该方法简便、快速、准确,为复方中测定哈巴俄苷提供了可靠的方法。
关键词:复方玄参止咳胶囊;哈巴俄苷;高效液相色谱中图分类号:R286102 文献标识码:A 文章编号:025322670(2009)0120069202 复方玄参止咳胶囊由玄参、知母、麦冬等10余味中药组成,具有解热润肺、化痰止嗽的功效,主治外感风热引起的咳嗽痰盛,口干舌燥,腹满便秘等症。
本品以玄参为君药,其中哈巴俄苷为玄参的有效成分。
哈巴俄苷具有抗慢性炎症、降压、镇痛、解痉、抗乙肝病毒以及免疫促进作用,且与滋阴功效密切相关[1]。
《中国药典》2005年版玄参药材中哈巴俄苷的测定采用梯度洗脱的HPL C 法测定,该方法用于复方玄参止咳胶囊中哈巴俄苷的测定时,稳定性差,哈巴俄苷色谱峰分离度、拖尾因子均达不到规定要求。
因此本实验采用H PL C 法对复方玄参止咳胶囊中的哈巴俄苷进行了测定,采用固定比例的流动相稳定性好,并经过大孔吸附树脂法进行供试品的纯化处理,方法操作简便、结果准确,可用于复方玄参止咳胶囊的质量控制,同时也为复方中测定哈巴俄苷提供了一定的参考。
1 仪器与试剂高效液相色谱仪:L C —6A 泵、SPD —6AV 紫外检测器、SIL —6A 自动进样器,日本岛津;EC2000色谱数据处理工作站,大连依利特科学仪器有限公司;B P211D 、B P310P 电子天平,德国赛多利斯。
HPLC法测定不同产地玄参的肉桂酸含量
酸含量均无显著性差异 。
玄参色谱图中可以
看出 ,保留时间在 1. 500、1. 850、3. 600m in 左右均有色谱
峰 ,这说明还有其它 3种成分 。
分析这 4种不同产地的玄参色谱图 ,发现主要色谱峰
中 华
的整体图谱基本一致 ,且肉桂酸的含量无显著性差异 。这
(图 2) 。
产地 样品平均质量 ( g) 峰面积平均值 肉桂酸平均含量 (% )
白川县 宝庆县 浙江省 广东省
0. 5002 0. 5021 0. 5014 0. 5025
2. 21892 2. 01774 2. 05796 1. 88627
0. 00674 0. 00602 0. 00582 0. 00564
工作站 , UV - 1600 (北京瑞利公司 ) 。
供试品溶液的制备 : 精密称取 35 份玄参药材粉末各
试剂 :乙 腈 为 色 谱 纯 (山 东 禹 王 实 业 有 限 公 司 ) , 经 0. 45cm尼龙膜过滤 、超声 。水为超纯水 ,经 0. 45cm 水系膜
0. 5g,于具塞三角瓶中精密加入甲醇 - 水 (30 ∶70) 50mL ,称 重 ,浸泡 1h 后超声提取 30m in,放冷 ,补足失重 ,摇匀 、过
图 1 紫外波长扫描图 10μL ,测定峰面 积 的 积 分 值 , 以 标 准 液 中 肉 桂 酸 的 含 量 (μg)为横坐标 ,以峰面积为纵坐标进行回归 ,得到肉桂酸 的回归方程为 : y = 309. 6x + 0. 1355, r = 0. 9999。肉桂酸在 峰面积处于 1. 08468 ～62. 0274范围内呈良好的线性关系
西等省 。为常用中药 ,具有凉血滋阴 、泻火解毒之功效 ,用 2 方法和结果
HPLC法测定儿童回春颗粒中哈巴苷和哈巴俄苷的含量
4讨论本研究在李淑娟等[7]建立的利奈哇胺脑脊液质量浓度测定方法的基础上，对色谱条件进行了调整，结果显示，该方法所得利奈哇胺峰形好，与内源性物 质分离完全，定量限、精密度和回收率等均能达到试验要求。
同时，我们增加了干扰性试验，将常用于中 枢神经系统感染的抗革兰阴性菌药物头孢曲松、头孢 他啶和美罗培南加人到样品溶液中，结果发现上述3 种药物对脑脊液中利奈哇胺质量浓度的测定均无影响。
因此，该方法适用于监测中枢神经系统感染患者 脑脊液中利奈哇胺的质量浓度。
本研究中8名中枢神经系统感染患者均使用了相同剂量的利奈哇胺（600 m g，q l2 h)测定谷质量浓 度。
结果表明，8名患者的脑脊液谷质量浓度范围在 0.82〜4. 52 mg .L^1之间，个体差异较大，平均质量 浓度为2. 67±1. 11 mg .L—1，与文献[8-9]结果相似。
对于产生个体差异的原因，Yogev R等[8]认为与脑膜 炎性程度、年龄关系均不大，可能与不同患者脑积水程度不同而导致与脑脊液容积差异有关，但由于他们 并未测定脑脊液容积，所以对此相关性并未确立；同时他们的数据显示，不同患者利奈哇胺在血浆中药物 质量浓度差异也非常大，因此推测其他影响利奈哇胺 组织分布的因素可能影响了脑脊液中质量浓度。
在 国内，张雷[1°]开展了利奈哇胺在中国人群的群体药代/药效动力学研究，结果表明，体质量可能是影响利 奈哇胺血药质量浓度的重要因素。
本研究中体质量 较轻的女性患者脑脊液质量浓度较其他高，原因可能 类似，但由于样本量小，暂不能得出上述结论。
另外，8名患者治疗结果均较好，其中有5例患者利奈哇胺 脑脊液中谷质量浓度均高于其对病原菌的M IC值，1名患者多次测定谷质量浓度仍低于M IC，但最终也达到了较好的效果，其原因可能是脑脊液中利奈哇胺 消除时间较血浆中长，经多次给药后脑脊液中药物蓄 积，质量浓度不断升高并最终达到有效治疗质量浓度[7]。
HPLC测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸
HPLC测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸龙澜;帅超群【摘要】建立一种检测玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的方法.采用乙腈-1%醋酸为流动相,检测波长278nm,流速1.0mL/min,柱温30℃.以30%甲醇为玄参的提取溶剂.哈巴俄添加回收率96.53%～98.74%,RSD为1.03%(n=5).肉桂酸的添加回收率97.24%～101.18%,RSD为1.49%(n=5).该方法操作简便、准确、快速、重复性好、灵敏度高,能准确检测玄参申哈巴俄苷和肉桂酸的含量.【期刊名称】《湖北民族学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(029)004【总页数】3页(P471-472,480)【关键词】玄参;哈巴俄苷;肉桂酸;HPLC【作者】龙澜;帅超群【作者单位】湖北省农业科学创新中心鄂西综合实验站,湖北,恩施,445000;恩施清江生物工程有限公司,湖北,恩施,445000【正文语种】中文【中图分类】R927.2玄参属玄参科植物玄参(Scrophularia ningpoensis Hemsl)[1]的根据《神农本草经》记载,玄参具有滋阴、降火、生津、凉血、解毒等功效.用于目赤、痈肿疮毒、热病伤阴、舌绛烦渴等症.现代医学研究表明，玄参还具有抗炎[2]、抗菌[3-4]、保肝用抗氧活性[5]、降压[6]、免疫促进[7]和镇痛[8]等作用.采用反相高效液相色谱法, 比较了不同产地玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的含量, 现将结果介绍如下.1 仪器与试药Waters高效液相2996；Waters 2996 PD二级管阵列检测器；KQ-250D型超声波清洗器；哈巴俄苷、肉桂酸对照品(成都普思生物科技有限公司，批号：Ps08060501，Ps08092502)，色谱乙腈，去离子水，甲醇、乙酸乙酯，丙酮等试剂均为分析纯，玄参样品采自湖北巴东、湖南龙山、重庆南山、贵州道真、陕西镇平.表1 流动相梯度洗脱比例Tab.1 The proportion of gradient in the mobile phase时间/min乙腈/%1%醋酸/%0-2020→5080→502 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:依利特C18色谱柱(4.6×200 mm，5 μm)，流动相:乙腈，1%醋酸溶液，按表1进行梯度洗脱.流速:1.0 mL·min-1；检测波长:278 nm；柱温:25℃，理论板数按哈巴俄苷峰计算不得低于5 000.图1 哈巴俄苷、肉桂酸对照品图2 玄参样品 Fig.1 The reference substanceof Arpagoside and cinnamic Acide Fig.2 The sample of Figwort root and Cinnamic Acid2.2 对照品溶液的制备取哈巴俄苷，肉桂酸对照品适量，用30%甲醇分别配置成含哈巴俄苷300 μg/mL，肉桂酸500 μg/mL的对照品溶液.2.3 供试品的制备精确称取玄参药材(粉碎过4号筛) 0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密称定，分别精密加入30%甲醇50 mL、超声波提取50 min，过滤，定容于50 mL容量瓶中，摇匀，作为供试品.2.4 线性关系的考察取对照品溶液,按照2.1的色谱条件, 分别进样2、5、10、20、40 μL，以峰面积(A)对浓度(C)回归分析，得哈巴俄苷标准曲线回归方程： A=15.83x+27.58,相关系数r=0.999 91；肉桂酸标准曲线回归方程： A=36.32x+8.97,相关系数r=0.999 95；结果表明,哈巴俄苷和肉桂酸在此条件下呈良好的线性关系.表2 添加回收率实验Tab.2 The adding recoveries of the expriment成分称样量/g加入量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%0．55090．596．530．50870．598．74哈巴俄苷0．51790．598．6798．381．030．52580．599．580．53740．598．390．54870．797．350．53460．798．04肉桂酸0．52730．7101．1898．641．490．52080．797．240．50430．799．41 2.5 精密度试验按照2.1的色谱条件连续进同一供试品溶液5次，测定哈巴俄苷峰面积的RSD为1.93%，肉桂酸面积的RSD为1.67%.2.6 稳定性试验取同一供试品溶液，按每2 h测定一次，供试品中哈巴俄苷峰面积的RSD为1.21%(n=7) ，肉桂酸峰面积的RSD为1.34%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定.2.7 重复性试验取玄参药材5份，按照2.3的方法平行制备5份供试品，依法测定，计算哈巴俄苷保留时间和峰面积的RSD分别为0.45%，1.32%；肉桂酸保留时间和峰面积的RSD分别为0.39%，1.48%，表明该方法的重复性较好.2.8 回收率试验取已知含量的玄参样品约0.5 g，精密称取5份，分别加入等量的对照品，按照2.3的方法进行处理，计算回收率，结果见表2.2.9 样品的测定按2.3项下方法操作制得的样品溶液,进样20 μL,在278 nm处检测,玄参样品图2的HPLC色谱图.结果5 种不同产地玄参中哈巴俄苷、肉桂酸的含量如下表3.3 讨论1)在对玄参提取溶剂的考察过程中，比较30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯得提取效果，实验发现30%甲醇的提取效果是最好的；并对超声波提取时间进行考察，结果采用超声提取50min为最佳方法.2)通过对哈巴俄苷、肉桂酸的三维扫描，在278 nm处，哈巴俄苷、肉桂酸的吸收较高，且能与杂质少.3)本实验所建立的测定玄参中哈巴俄苷、肉桂酸含量的方法，准确度高，操作简便、准确、快速、重复性好、灵敏度高，能准确检测玄参中哈巴俄苷、肉桂酸的含量. 参考文献:[1] 中华人民共和国药典委员会.中国要典2010版第一部[M].北京：化学工业出版社，2010：121.[2] Bhandari S P,Roy R,Agrawal P K.Scrokoelziside A. Atriter peneglyco side from Scropularia koelzii[J].Phytochem istry,1996,41(3):879-885.[3] Fernandez M A,Garcia M D,Saenz M Z.A ntibacterial activity of the phenolic acids fractions of Scrop hularia frutescens and Scrop hularia sambucifolia[J].J Ethnophamacol,1996,53(l) :11-19[4] Houghton P J,Hikino H.A ntihepato toxic activity of extracts and constituents of Buddleja species[J].Planta Med,1989,55(2):123-127.[5] 曾武华，李医明，贺祥，等.玄参提取物的抗炎和抗氧活性[J].第二军医大学学报，1999，20(9)：614-616.[6] Circosta C,Dcchiuto F,Ragusa S.A drug used in traditional medicine:Harpagophytum Procumbens DC Ⅱ.Cardiovascular activity[J].J Eyhnopharmarol,1984,11:259-266.[7] Garg H S,Bhandari S P S,Tripathi S C.Antihepatotoxic and immunostimulant Properities of iridoid glycoside of scrophulariakoezii[J].Phytother Res,1994,8:224-229.[8] Suh N J,Shim C K,Lee M H.Pharmacokinetic study of an iridoid glucoside:Aucubin[J].Pharm Res,1991,8(8):1059-1063.。
HPLC法测定喉喑清胶囊中哈巴俄苷的含量
［］Ｍｅ ｔ ＳＬ Ｎ． ｎ ａ ｎ ．Ｒ ｇ ｕ ｉ Ｍｏｅ ｕａ ｔ ｇ ｔ ｉ ｅｅ ｒｌ ５ ｈａ ． Ｍａ ｓ ａ ｄ Ｒ ａ ｈ ｂｒ ｈ ｌｃ ｌ ａ ｅ ｎ ｃｒｂ ｒ ｒ ｓ ａ
ｉ ｈ ｍｉ ｆ ｒ ｅ ｅ ｐｎ ｏ ｅ ｔｅａ ｅ ｔ ｓ ］ ｒｉ ｅ ｅ ， ０ ， ４ １： ｓ ｅ ａ ｏ ｖ ｌ ｉｇ ｎ ｖ ｌ ｈ ｒｐ ｕｉ ［ ． ａ Ｒ ｓＲ ｖ ０ ７ ５ （） ｃ ｄ ｏ ｃ ＪＢ ｎ ２
３．６ ４６．
（ 收稿 日期 ：２ １．４ １ ） ０ ００ ．２
删
囊
姻
（ ３ ０ ００ １
※： 倪 艳 施 施 郝旭亮 卢方晋 山西 省 中 医药研 究 院 ：
摘要 ：目的 建 立高效 液相 色谱 法测 定喉 喑清胶 囊 中哈 巴俄苷 含量 的方 法 。方 法
色 谱柱为 Ｓｎ ｅ ｒｍ Ｏ — ｐＣ１ ４ ×２ ０ ｉ ｈｏ ｏ ＤＳＢ ８（ ． ５ ｍｍ，５“ ， ６ ｍ）
脑 血 管疾 病 的治 疗 具 有 重 要 意 义 。本 实验 显 示甘 草 总黄 酮 能 明 显 增加 缺 血半 影 区 的神 经 元 Ｈ Ｐ ０表 达 ，增 高 Ｈ Ｐ ０有 助 于 减 Ｓ７ Ｓ７ 少 细胞 凋 亡 的发 生 ，有 效 保 护缺 血 半 影 区神 经 元 ，从而 改善 缺 血 损伤 引起 的各 种 神 经 功 能缺 失 。
流 动相 以 乙腈一％醋酸溶 液 一元梯 度洗 脱 ：流速 ： １ ｍＬ ｍｉ一 １ ． ・ ｎ ：检测 波长 为 ２０ ｍ。结 果 ０ ８ｎ 重 复性好 ，可用于 新 药喉喑 清胶 囊 的质量 控制 。
关键 词 ： 巴俄 苷 ；喉喑清 胶 囊； 高效 液相色 谱法 ；含 量测 定 哈 ｄ ｉ ０３ ６ ￣ｉ ｎ１ ７ ７ ９２ １ ． ．５ ｏ ：１ ．９ ９ ． ｓ ． ２ ２ ７ ． ０１ １ ９ ｓ ６ ０ ４
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55第16卷 第5期 2014 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 5 May，2014复方黑参颗粒由玄参、麦冬、天冬、射干和北豆根5味中药组成，具有清热解毒、养阴润肺、利咽消肿之功，在我院临床应用多年，安全可靠，疗效显著。
玄参作为处方中的君药，常见于治疗咽喉疾病的复方中药制剂中，如建民咽喉片、玄麦甘桔颗粒等[1]，地方中药书籍和药物志中也记载玄参对咽喉肿痛具有良好效果[2]，其有效成分肉桂酸和哈巴俄苷常被用作玄参及其复方制剂的含量测定指标[3-5]。
为了更好的控制复方黑参颗粒的产品质量，保证临床疗效，本文采用高效液相色谱法建立复方黑参颗粒中肉桂酸和哈巴俄苷的含量测定方法。
1 仪器与试药1.1 仪器Waters 2996高效液相色谱仪，LIBRORAEL-160分析天平，DK-98-1型电热恒温水浴锅。
1.2 试药肉桂酸对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号：110805-200508），哈巴俄苷对照品（供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所，批号：111730-200605），甲醇（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司，批号：20101213），甲酸（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20101213）。
复方黑参颗粒（沈阳军区总医院制剂室，批号：20120705、20120929、20121023）2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱Dikma Diamonsil-C 18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.5%甲酸水溶液（56∶44）等度洗脱，流速1.0 mL ·min -1，柱温25 ℃，检测器波长278 nm，进样量20 μL。
2.2 对照品溶液的制备分别精密称取肉桂酸2.04 mg，哈巴俄苷6.08 mg 对照品于50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，既得混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备取复方黑参颗粒，研细，取约5 g，精密称定，精密加入100%甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备按照处方工艺，制备不含玄参的阴性样品颗HPLC法测定复方黑参颗粒中肉桂酸与哈巴俄苷含量姚东，何静，于凤斌，安晔（中国人民解放军沈阳军区总医院，辽宁 沈阳 110000）摘 要：目的：建立复方黑参颗粒中肉桂酸和哈巴俄苷的含量测定方法。
方法：采用高效液相色谱法，色谱柱Dikma Diamonsil-C 18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.5%甲酸水溶液（56∶44）等度洗脱，流速1.0 mL·min -1，柱温25 ℃，检测器波长278 nm。
结果：肉桂酸和哈巴俄苷进样量分别在1.53~40.80、4.56~121.60 μg·mL -1时，线性关系良好，线性范围依次为Y=190177X-39502 （r =0.9997）；Y=55216X-21379（r =0.9996）。
平均加样回收率分别为99.6%（RSD1.0%），100.8%（RSD1.2%）。
结论：样品处理方法简便、结果准确、重复性良好，该方法可用于复方黑参颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；复方黑参颗粒；肉桂酸；哈巴俄苷中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2014) 05- 0055- 02收稿日期：2013-10-25基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题重点项目（13ZJZ02）作者简介：姚东（1986-），女，辽宁锦州人，药师，硕士，研究方向：药物分析。
通讯作者：安晔（1967-），女，辽宁沈阳人，副主任药师，硕士研究生导师，硕士，研究方向：药物制剂。
Determination of Cinnamic Acid and Harpagoside in Fufang Heishei Granules by HPLCYAO Dong，HE Jing，YU Fengbin，AN Ye（General Hospital of Shenyang Military Region，Shenyang 110000，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To establish an HPLC method for the determination of Cinnamic acid andHarpagoside in Fufang Heishei Granules. Method ：The Dikma Diamonsil-C 18 column was used with a mobile phase of methanol-0.5% ice acetic（56:44）. The flow rate was 1 mL·min -1. The column temperature was 25 ℃. The detection wavelength was at 278 nm. Result ：The calibration curves of Cinnamic acid and Harpagoside were linear in the ranges of 1.53~40.80，4.56~121.60 μg·mL -1 respectively. And the each average recoveries of the method were 99.6%（RSD1.03%），100.8%（RSD1.25%）. Conclusion ：The method is simple，accurate and repeatable. It can be used for quality control of Fufang Heishei Granules.Key words：HPLC；Fufang Heishei Granules；Cinnamic acid；Harpagoside DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.05.01856 辽宁中医药大学学报 16卷粒，再按2.3项项下方法制备阴性样品溶液，在上述色谱条件下进行测定。
结果表明，阴性无干扰，对照品、样品及阴性样品色谱图见图1。
t（min）1.肉桂酸，2.哈巴俄苷图1 对照品（A）、复方黑参颗粒（B）、阴性样品（C）色谱图2.5 线性关系考察取混合对照品溶液进行稀释，得肉桂酸浓度为1.53、3.06、6.12、10.20、20.40、40.80 μg ·mL -1；哈巴俄苷浓度为4.56、9.12、18.24、30.40、60.80、121.60 μg ·mL -1。
按2.1项下色谱条件测定，以峰面积Y 为纵坐标，浓度X（μg ·mL -1）为横坐标，进行回归分析，得肉桂酸和哈巴俄苷的回归方程依次为：Y=190177X-39502 （r =0.9997）；Y=55216X-21379 （r =0.9996）。
线性范围依次为1.53~40.80、4.56~121.60 μg ·mL -1。
2.6 精密度考察取供试品溶液（批号：20120705），在2.1项色谱条件下连续进样6次，分别计算峰面积。
肉桂酸和哈巴俄苷的RSD（n =6）分别为2.81%和2.52%，表明精密度良好。
2.7 重复性考察取同一供试样品（批号：20120705），平行制备6份供试品溶液，在2.1项色谱条件下对2种成分进行测定，分别计算峰面积。
肉桂酸和哈巴俄苷的RSD （n =6）分别为1.9%和2.4%。
2.8 稳定性考察取供试品溶液（批号：20120705），室温下放置，在2.1项色谱条件下分别于0、2、4、6、12、24 h 分别进行测定，计算峰面积。
肉桂酸和哈巴俄苷的RSD 分别为2.5%和2.4%。
2.9 回收率考察精密称取已知含量的复方黑参颗粒（批号20120705）约2.5 g，共6份，分别精密加入等同于样品含量的肉桂酸和哈巴俄苷对照品适量，按2.3项下方法制成供回收率用供试品溶液，在2.1项色谱条件下进行检测，计算各成分加样回收率，见表1。
表1 加样回收率结果（n =6）成分样品中含量（mg）加入量（mg）测定量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）肉桂酸0.1510.1530.305100.699.6 1.00.1510.1530.304100.00.1510.1530.306100.70.1510.1530.29998.30.1510.1530.23098.50.1510.1530.30399.6哈巴俄苷0.2290.3420.574100.4100.8 1.20.2290.3420.56699.10.2290.3420.579101.50.2290.3420.585102.50.2300.3420.57199.80.2300.3420.582101.72.10 样品的含量分析精密称取3批次复方黑参颗粒各3份，按2.3项下方法制备供试品溶液，在2.1项色谱条件下进行分析，根据标准曲线回归方程计算颗粒中2种成分的含量，结果见表2。
表2 复方黑参颗粒中2种成分的含量（mg ·g -1）批号肉桂酸哈巴俄苷2012070560.3591.622012092961.4991.422012102359.9590.793 讨 论3.1 样品制备方法的筛选本实验采用单因素考察法，分别对提取方式（超声提取、回流提取）、提取溶媒（甲醇、50%甲醇、水）和提取时间（30 min、1 h、1.5 h）进行考察，实验结果表明甲醇回流提取1 h，肉桂酸和哈巴俄苷色谱峰面积最大且干扰最少。
3.2 流动相系统的考察本实验分别考察了甲醇-水和乙腈-水系统，结果发现，肉桂酸和哈巴俄苷在甲醇-水系统下可得到较好分离，同时，由于肉桂酸成一定酸性，加入适量甲酸可以有效改善峰型，因此本实验最终确定采用甲醇-0.5%甲酸水（56∶44）系统进行色谱分离，肉桂酸和哈巴俄苷达到基线分离，峰形对称，保留时间适中。
3.3 检测波长的考察本实验中通过PAD 检测器于190~400 nm 进行紫外光谱扫描，结果显示，肉桂酸和哈巴俄苷在278 nm 处有较好吸收，且基线平稳，色谱峰无干扰，因此本实验选择278 nm 为检测波长。
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