抗体介绍

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简述抗体的类型及功能

简述抗体的类型及功能

简述抗体的类型及功能引言:抗体是人类免疫系统中的重要组成部分,它们具有多种类型和功能。

本文将简要介绍几种常见的抗体类型及其功能,以加深对抗体的了解。

一、IgM抗体IgM抗体是最早产生的抗体类型,通常在感染初期生成。

它是一种巨大的五聚体抗体,由五个单体抗体链组成。

IgM抗体在免疫系统的早期阶段起到重要作用,能够迅速识别和结合病原体表面的抗原,从而触发其他免疫细胞的活化。

此外,IgM抗体还可以激活补体系统,促进病原体的消除。

二、IgG抗体IgG抗体是免疫系统中最常见的抗体类型,约占总抗体数量的75-80%。

它是一种二聚体抗体,由两个单体抗体链组成。

IgG抗体具有多种功能,包括中和病原体毒素、促进病原体的吞噬和消化、激活补体系统等。

此外,IgG抗体还可以穿过胎盘屏障,提供胎儿早期的免疫保护。

三、IgA抗体IgA抗体是存在于体液中的主要抗体类型,主要分布在黏膜表面和分泌物中。

它是一种二聚体抗体,由两个单体抗体链组成。

IgA抗体在黏膜表面起到重要作用,能够阻止病原体侵入黏膜组织,从而保护身体免受感染。

此外,IgA抗体还能够中和病原体毒素,促进病原体的清除。

四、IgE抗体IgE抗体是一种特殊的抗体类型,它主要参与过敏反应和寄生虫感染。

IgE抗体的产生通常与过敏原接触有关,如花粉、食物等。

一旦与过敏原结合,IgE抗体会激活肥大细胞和嗜碱性粒细胞,释放组织胺等炎症介质,导致过敏症状的出现。

此外,IgE抗体还能够参与抗寄生虫免疫反应,通过激活嗜碱性粒细胞来消灭寄生虫。

五、IgD抗体IgD抗体是一种相对较少见的抗体类型,其功能尚不完全清楚。

它主要存在于B淋巴细胞的表面,并参与B淋巴细胞的激活和抗原识别。

研究表明,IgD抗体可能在免疫记忆和免疫调节中发挥一定作用。

结论:抗体是人类免疫系统中起着重要作用的分子。

不同类型的抗体具有不同的结构和功能,包括中和病原体毒素、促进病原体的吞噬和消化、激活补体系统等。

通过了解抗体的类型和功能,我们可以更好地理解免疫系统的工作原理,为疾病的预防和治疗提供指导。

抗体结合表位

抗体结合表位

抗体结合表位一、介绍1.1 抗体的作用和结构抗体(antibody)是一种特殊的蛋白质,主要存在于脊椎动物的免疫系统中,负责识别和结合外来物质(如病原体)。

它们是由免疫细胞(B淋巴细胞)产生,并具有高度的特异性和亲和力。

抗体通过结合到目标物质的特定位置(表位),来中和、沉淀或激活免疫系统,从而起到抵御病原体侵入的作用。

抗体的结构是由两对重链(heavy chain)和轻链(light chain)组成,每对链都包含恒定区和变异区。

变异区决定了抗体的特异性,因为它包含了不同的氨基酸序列,能够识别和结合不同的表位。

而恒定区则决定了抗体的功能,如是否可以激活免疫细胞。

1.2 抗体结合表位的定义和重要性抗体结合表位(epitope)是指抗原(antigen)分子上特定的、能够被抗体识别的部分。

一个抗原通常会有多个表位,而抗体则只能与其中一个表位结合。

抗体与表位之间的结合是高度特异的,就好像锁和钥匙的关系一样,只有特定的抗体才能与特定的表位结合。

抗体结合表位的研究对于了解抗体底物识别、疫苗设计以及抗体药物研发等具有重要意义。

通过确定抗体与表位之间的结合方式和相互作用,可以揭示免疫系统的工作原理,有助于开发更有效的疫苗和药物。

二、抗体结合表位的决定因素2.1 表位的结构特征表位通常是抗原分子表面上的一段多肽链或糖链。

它具有一定的序列和空间结构特征,包括柔性区域和刚性区域。

柔性区域容易变化,是抗体识别的主要部分,而刚性区域则形成了表位的核心,为抗体结合提供了稳定的基础。

2.2 抗体的亲和力和特异性抗体与表位之间的结合由抗体的亲和力和特异性决定。

亲和力是指抗体与表位结合的强度,而特异性则是指抗体只能与特定的表位结合,而不与其他表位产生结合。

抗体的亲和力和特异性是由抗体的变异区决定的。

变异区中的亲和力决定序列可以通过亲和度成熟(affinity maturation)来改变,从而提高亲和力。

特异性则是由变异区的序列和立体构象决定的。

简述抗体的免疫学功能

简述抗体的免疫学功能

简述抗体的免疫学功能抗体是一种生物分子,是机体免疫系统中的重要组成部分。

它们通过识别和结合病原体、异物或自身抗原,发挥着重要的免疫学功能。

在本文中,将详细介绍抗体的免疫学功能。

1. 识别和结合抗原抗体最基本的免疫学功能是识别和结合抗原。

当机体感染病原体时,免疫系统会识别并产生与其相应的抗体。

抗体通过其可变区域与病原体表面的特定抗原结合,从而促进病原体的清除。

此外,抗体也能与体内的自身抗原结合,从而防止自身免疫反应。

2. 促进病原体的清除抗体通过与病原体结合后,可以促进其清除。

一方面,抗体可与病原体表面结合,从而直接中和病原体的毒性;另一方面,抗体也可以激活细胞免疫反应。

例如,抗体可与巨噬细胞的Fc受体结合,从而激活细胞吞噬和破坏病原体的功能;抗体还可与NK细胞结合,从而激活其杀伤病原体的能力。

3. 介导ADCC抗体介导的细胞依赖性细胞毒性(ADCC)是一种重要的免疫学功能。

当抗体与病原体结合后,可与NK细胞的Fc受体结合,从而激活NK细胞的杀伤病原体能力。

此外,抗体也可以与其他免疫细胞(如巨噬细胞、中性粒细胞等)结合,从而介导ADCC。

4. 活化补体系统抗体还可以活化补体系统,从而促进病原体的清除。

当抗体与病原体结合后,可激活免疫球蛋白M(IgM)或IgG的经典途径,从而引发补体激活。

激活后的补体可直接破坏病原体,也可通过补体受体介导的机制促进巨噬细胞吞噬病原体。

5. 调节免疫反应抗体还可以调节免疫反应。

例如,IgM和IgG抗体可激活B细胞,从而促进其增殖和分化;一些抗体还可以与T细胞结合,从而影响其活化和功能等。

抗体是机体免疫系统中不可或缺的重要组成部分。

它们通过识别和结合抗原,促进病原体的清除,介导ADCC,活化补体系统和调节免疫反应,发挥着重要的免疫学功能。

抗体的研究不仅有助于深入了解机体的免疫反应机制,还为疾病的诊断和治疗提供了新的思路和方法。

抗体相关基本知识

抗体相关基本知识

抗体相关基本知识抗体相关基本知识抗体(antibody)是⽣物体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产⽣的、可与相应抗原发⽣特异性结合反应的免疫球蛋⽩(Ig)。

按抗体的来源,可将其分为天然抗体和⼈⼯制备的抗体,是通过对特定⽣物体免疫接种特定抗原物质后⽽获得。

⼈⼯免疫动物制备的抗体应⽤甚为⼴泛,既可以⽤于科学研究,也可以⽤于疾病的预防、诊断和治疗。

体⼀、抗体的基本结构的基本结构经x线晶体衍射结构分析发现,抗体Ig由四条多肽链组成,各肽链之间由数量不等的链间⼆硫键连接。

Ig可形成“Y”字型结构,称为I g 单体,是构成抗体的基本单位。

(⼀)重链和轻链天然Ig分⼦含有四条异源性多肽链,其中,分⼦量较⼤的两条链称为重链(heavy chain,H),⽽分⼦量较⼩的两条链称为轻链(Light chain,L)。

同⼀Ig分⼦中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。

1.重链分⼦量为50000~75000,由450~550个氨基酸残基组成。

重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同,其抗原性也不同。

据此,可将抗体Ig分为5类(class),即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相应的重链分别为µ链、δ链、γ链、α链和ε链,商品化的抗体绝⼤部分都是IgG。

不同类的Ig具有不同的特征,如链内和链间⼆硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。

即使是同⼀类的Ig,其铰链区氨基酸组成和重链⼆硫键的数量、位置也不同,据此⼜可将同类Ig分为不同的亚类(subclass)。

IgG的亚类利⽤不同种属动物制备的IgG存在不同的亚类,常见的不同种属IgG亚类如下:兔:IgG(⽆亚类)⼩⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgG3⼤⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgM⼭⽺:IgG1,IgG2在进⾏某些抗体相关实验(如IF和FCM)的时候,我们常常需要仔细看⼀下所订购商品化抗体的IgG亚类,以⽅便我们选择同型对照(isotype control)IgG(即与⽬的蛋⽩抗体相同来源种属的相同类型正常IgG)作为抗体的阴性对照进⾏平⾏实验,以排除可能的⾮特异性染⾊结果。

简述抗体的作用

简述抗体的作用

简述抗体的作用
抗体是由免疫系统产生的一种特殊的蛋白质,也被称为免疫球蛋白。

它们在保护我们的身体免受病原体(如细菌、病毒、真菌等)侵害方面发挥了重要的作用。

下面将介绍抗体的几个主要作用。

1. 标记和中和病原体
抗体能够通过结合到病原体表面的特定抗原上来标记病原体,形成抗原-抗体复合物。

这样一来,免疫系统就能更容易地识别和清除这些病原体。

此外,抗体还可以阻止病原体附着在细胞表面,从而中和病原体的活性。

2. 促进免疫反应
抗体在免疫反应中起到桥梁的作用。

它们能够结合在抗原和特定的免疫细胞之间,促进免疫细胞的活化和增殖。

这样一来,免疫细胞就能更有效地抵御病原体的侵袭,并加强身体的免疫防御能力。

3. 触发炎症反应
当抗体与抗原结合时,它们还可以触发炎症反应。

炎症反应是免疫系统的一种防御机制,通过增加血液流动、吸引免疫细胞和释放溶解病原体的物质等方式来清除病原体。

抗体的作用可以加速炎症反应的过程,帮助身体更快地对抗感染。

4. 免疫记忆
抗体不仅能够立即对抗当前的病原体,还能够激发免疫系统建立长期免疫记忆。

当我们再次遇到同一种病原体时,免疫系统会迅速产生大量相应的抗体,从而更快地清除病原体,使我们不易被感染。

总结来说,抗体在免疫系统中起到了标记和中和病原体、促进免疫反应、触发炎症反应以及建立免疫记忆的重要作用。

它们是我们身体抵御疾病侵袭的关键保护因子。

自身抗体谱11项

自身抗体谱11项

自身抗体谱11项自身抗体谱11项是一项重要的检测项目,用于评估自身免疫性疾病的风险和诊断。

自身抗体是指针对自身组织、器官、细胞的抗体,在正常情况下,人体内只存在微量的自身抗体,但当这些抗体增多时,就可能引发自身免疫性疾病。

以下是关于自身抗体谱11项的详细介绍:1.抗核抗体(ANA):ANA是一组抗细胞核成分的抗体,是自身免疫性疾病的筛选试验。

ANA阳性可见于多种疾病,如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等。

2.抗平滑肌抗体(ASMA):ASMA是针对平滑肌细胞的自身抗体,主要见于自身免疫性肝炎和肝硬化等。

3.抗线粒体抗体(AMA):AMA是针对线粒体成分的抗体,主要见于原发性胆汁性肝硬化。

4.抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA):ANCA是针对中性粒细胞胞质的抗体,主要见于血管炎、炎症性肠病等。

5.抗内皮细胞抗体(AECA):AECA是针对内皮细胞的自身抗体,主要与免疫性血管炎相关。

6.抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOA):这些抗体主要见于自身免疫性甲状腺疾病,如Graves病和桥本氏甲状腺炎。

7.抗胰岛细胞抗体(ICA):ICA是针对胰岛细胞的自身抗体,主要见于1型糖尿病等。

8.抗肾小球基底膜抗体(GBM-Ab):GBM-Ab是针对肾小球基底膜的抗体,主要见于急进性肾小球肾炎等。

9.抗心磷脂抗体(ACA):ACA是一组针对心磷脂的自身抗体,主要与血栓形成、习惯性流产、血小板减少等自身免疫性疾病相关。

10.抗神经节苷脂抗体(GMI-Ab)和抗髓鞘碱性蛋白抗体(MBP-Ab):这些抗体主要与神经系统自身免疫性疾病相关,如多发性硬化症等。

通过检测这些自身抗体,可以帮助医生评估患者自身免疫性疾病的风险和诊断。

在检测过程中,通常采用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法等检测方法,根据抗体的滴度、阳性或阴性等进行判断。

需要注意的是,这些自身抗体阳性并不一定意味着患有某种特定的自身免疫性疾病。

抗体的作用生理学

抗体的作用生理学

抗体的作用生理学抗体是机体免疫系统中的一种重要免疫分子,广泛存在于血液和其他体液中。

抗体通过特定的结构和功能,参与机体免疫应答,对抵御病原体感染和维护机体健康起着重要作用。

下面将从多个方面介绍抗体的作用。

1.中和病原体:抗体可以与病原体表面的抗原结合,阻止病原体进入宿主细胞,从而抑制或中和病原体的活性。

抗体中和作用常见于病毒感染,病毒被特异性抗体结合后,无法与宿主细胞表面受体结合,从而防止病毒入侵和感染。

2.促进病原体清除:抗体与病原体结合后,在机体血液和淋巴循环中能够增加病原体的大小和疏水性,从而被巨噬细胞等免疫细胞识别和吞噬。

这个过程被称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。

3.激活免疫细胞:抗体通过其Fc区域与免疫细胞表面的Fc受体结合,激活免疫细胞。

激活后,免疫细胞会释放溶酶体酶和细胞因子,进一步清除感染源。

此外,抗体还可以激活补体系统,通过免疫系统的信号放大机制,增强机体对病原体的清除能力。

4.识别和破坏自身异常细胞:抗体可以结合异常细胞表面的特定抗原,如癌细胞或自身免疫疾病中的受损细胞。

这种结合会诱导免疫细胞对这些细胞进行破坏,从而起到治疗癌症和自身免疫疾病的作用。

5.调节免疫应答:抗体通过与特定的受体相互作用,调节免疫应答的强度和类型。

有些抗体可以增强炎症反应和细胞毒性,而另一些抗体则可以抑制炎症反应和调节免疫细胞的功能。

此外,抗体还具有其他重要的生理学作用,如:-运载免疫复合物:抗体可以结合多种抗原形成免疫复合物,通过血液循环将抗原和抗体运送到淋巴结或脾脏,进而激活免疫细胞对其进行清除。

-传递被动免疫:母体通过胎盘传递或乳汁中的抗体,为新生儿提供保护性免疫,这被称为被动免疫。

-诊断和治疗:抗体被广泛应用于临床诊断和治疗。

通过检测体液中的特定抗体,可以帮助确定感染、免疫病和肿瘤等疾病。

此外,抗体基因工程技术的发展使得人工合成和改造特定抗体成为可能,用于治疗各种疾病,例如抗体药物治疗癌症、自身免疫疾病和传染病等。

抗体的生物学功能

抗体的生物学功能

抗体的生物学功能抗体是一种由机体免疫系统产生的蛋白质分子,具有广泛的生物学功能。

它主要通过识别和结合外来抗原来保护机体免受病原体的侵害。

以下将详细介绍抗体的主要生物学功能。

首先,抗体具有识别和结合抗原的功能。

抗原是激发机体免疫系统产生抗体的分子,可以是病原体(如细菌、病毒)、肿瘤细胞或其他外来物质。

抗体通过其特异性的抗原结合位点与抗原相互作用,形成稳定的抗原-抗体复合物。

这种特异性识别和结合的能力使得抗体可以区分不同种类的抗原,并调控机体免疫反应。

其次,抗体参与免疫应答的调节。

抗体可以激活多种效应器机制,调节免疫应答的强度和性质。

一方面,抗体可以通过与免疫细胞表面的Fc受体结合来激活细胞介导的免疫反应,如通过NK细胞介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和巨噬细胞介导的抗体依赖性吞噬作用(ADCP)。

另一方面,抗体还可以调节细胞因子的产生和释放,如促炎性细胞因子的产生,从而影响免疫细胞的功能和相互作用。

除了直接参与免疫应答的调节,抗体还具有清除抗原及其复合物的功能。

一旦抗体与抗原结合形成复合物,这些复合物可以通过多种机制被清除,如沉淀、中性化和巨噬细胞的吞噬。

抗体在此过程中起到桥梁的作用,促使抗原被机体清除,从而减少病毒或细菌的感染和复制。

此外,抗体还参与调控机体自身免疫反应的平衡。

机体免疫系统往往能够识别并清除自身异常细胞,从而维持自身免疫平衡。

然而,有时机体免疫系统会出现对自身组织的攻击,导致自身免疫性疾病的发生。

在这种情况下,抗体可以调控免疫细胞的活性,抑制自身免疫反应,从而减轻或抑制自身免疫疾病的发展。

总结起来,抗体作为免疫系统的重要组成部分,在机体的免疫应答中发挥多种生物学功能。

它们能够识别和结合特定的抗原,参与免疫应答的调节和调控,清除抗原及其复合物,并参与机体自身免疫平衡的维持。

抗体的生物学功能不仅对机体抵御病原体的感染至关重要,还对治疗免疫性疾病、促进器官移植等领域具有广泛的临床应用潜力。

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抗体它是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。

抗体通常存在于血清合淋巴(组织液)中。

单克隆抗体及多克隆抗体:由单一克隆的细胞(通常是单一克隆的杂交瘤细胞)所产生的识别某一抗原表位的单一抗体;多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和,多克隆抗体抗原识别抗原的多个表位。

抗体分类抗体分类:根据重链恒定区的血清学类型,可将抗体分为IgM,IgG,IgA,IgD,IgE五类,它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。

在上述每一类别中,按重链构造上的变异又可分为几个亚类,例如人的IgG可分为IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四个亚类。

轻链分为两种类型,kappa链和lambda链,但每种抗体中只存在一种类型的轻链。

第一抗体第一抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。

第一抗体的选择1.分析自己实验应用的实验方法是哪种?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等。

2.分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种动物或人的标本,如:可以用于rat、mouse、human、pig、goat等动物的标本的实验。

也就是说应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高。

3.分析样本中的蛋白质的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

样本的提取或处理过程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。

4.抗体宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。

如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大。

第二抗体第二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。

二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质,对异种动物进行免疫,由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。

如用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。

由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛,如western blot(通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质),ELISA(以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质,尤其是相应的抗原或抗体),免疫组织化学(检测组织中的特异性抗原),免疫细胞化学(通过免疫学方法检测细胞的抗原组成),流式细胞术(通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞)及免疫沉淀(通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原)。

二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体均具有特异性,因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。

第二抗体的选择1. 一抗的物种来源一抗是在什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。

例如,如果一抗是在小鼠体内制备的,那么你就应当选择抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔体内制备的,那么二抗就应当是抗兔的抗体。

至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。

一抗是属于哪个类或亚类二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体.单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗体。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。

如果你不知道一抗是哪一类别或亚类,那么抗小鼠IgG是一个不错的选择,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

下面总结了几种具有不同特异性的二抗:针对整个抗体分子(H+L)具有特异性:如抗IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的Fc,F(ab’)2/Fab部分(见图5)均可反应,抗IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应(如IgM和IgA),因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链(kappa链或lambda链)。

针对Fab片段具有特异性:这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。

这对Fc片段或重链具有特异性:这类抗体和重链的Fc部分反应,一次它们是类别特异性的(即gamma 链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推)。

轻链(kappa,labmda)特异性:与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。

经过吸附处理的二抗:不同来源的免疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景。

例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。

但是此种抗体识别表位的数量被大大减少。

选择哪种形式的二抗,是整个IgG分子,F(ab’)2片段,还是Fab片段?整个IgG分子:此种抗体适用于多数情况。

F(ab’)2片段:该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成,这些抗体用在特定的情况中,如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。

Fab片段:它们只有一个结合位点,一般用来封闭内源性免疫球蛋白。

选用耦联有哪种探针的二抗?一般来讲,耦联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),荧光基团(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。

选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。

对于western blot 和ELISA,最常用的二抗是酶标二抗,而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。

如果想要更大程度的放大检测信号,可以使用biotin/avidin检测系统。

抗体的纯度:亲和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎,因为这些产品的纯度最高,产生的非特异性背景最少。

但是有些情况下也要考虑到纯化过程中损失的IgG部分,因为其中含有亲和力很高的抗体,尤其是当目的抗原存在的量很小的时候,高亲和性的IgG部分就显得尤为重要。

下面简单介绍几种二抗探针的优缺点及其适用的实验:酶:主要有两种不同的酶耦联物,HRP和AP。

比较而言,前者更经济、快速、稳定,而后者较前者更为灵敏,通常情况下,HRP广泛应用于免疫组化,western blot和ELISA中,而碱性磷酸酶(AP)更适合于固相的免疫检测实验,如ELISA和western blot.荧光基团:1. FITC:FITC是广泛使用的荧光基团,但其最大的缺点是淬灭快,使用抗淬灭剂可以减轻。

2. AMCA:常用在多标记实验中,如免疫荧光、流式细胞术。

其缺点是,淬灭快,且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光,因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。

3. 花青染料(Cy2,Cy3,Cy5):Cy2比FITC更稳定,且在表面荧光显微镜下,Cy2的荧光FITC更强。

Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮,更稳定,背景更弱。

二者常在共聚焦显微实验中作多标记。

但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察,因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。

4. TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中,也可以使用RRX或TR,但TR会产生较高的背景。

在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间,且和这两者的重叠很少。

5. PE:常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。

6. 生物素:生物素(biotin)可以和抗生素蛋白(avidin)发生不可逆反应而紧密结合在一起。

首先加入生物素标记的二抗,在加入耦联有酶或荧光集团的avidin、ExtrAvidin或streptavidin,后者能够结合于二抗表面的多个位点上,从而极大的放大检测信号。

常用抗体综述二抗应用实例分析为分析二抗的使用情况,我们随机抽取了100篇2007年或2008年发表于Science 或Journal of Biological Chemistry杂志上的文章(英文),这些文章涵盖了来自于16个国家的约80个研究机构。

收集的数据显示二抗的使用非常广泛,可以应用到几乎所有类型的免疫检测中,尤其是Western blot、免疫组织化学和免疫细胞化学。

事实上,二抗在ELISA及流式细胞术中应用也很广泛,不仅用于科学研究,而且广泛的应用于临床分析和疾病诊断。

比较而言,二抗在免疫沉淀中的应用相对较少。

以下内容是基于对所收集的二抗信息进行统计分析后得出的一些结论,对于您在具体的实验中如何选择最适合的抗体具有借鉴作用。

选择二抗时,您必须考虑到以下因素,如一抗的物种、产生二抗的宿主、一抗的类别或亚类、二抗所耦联的探针类型及二抗的形式(如整个IgG分子,F (ab’) 2片段,或Fab片段)等等。

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