讨论HPLC法测定黄连中生物碱的含量
高效液相色谱法测定黄连炮制品中6种生物碱的含量
ｏｆ ｔｈｅ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｉｎ １３．２４８ ｐ ｇ．ｍＬ。。２６４．９６¨ｇ．ｍＬ～ｗａｓ ０．９９９６．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ａｎｄ
ｉｔｓ ＲＳＤｗｅｒｅ １０２．４％（ＲＳＤ １．１７％）、１０１．８％（ＲＳＤ １．３０％）、１００．３％（ＲＳＤ １．７６％）、１００．７％（ＲＳＤ １．７５％）、
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｐｔｉｓ（ｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．ｂｙ ＲＰ—ＨＰＬＣ．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ａ Ｘｔ ｉｍａｔｅＴＭ Ｃ１８（４．６ｍｍ Ｘ ２５０ｍｍ，５ ｕ ｍ）ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｓｉｘ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ６ｂｐｔｉｓ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
Ｆｒａｎｃｈ．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ，０．１％ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（ａｄｊｕｓｔ ＰＨ ａｓ １０．０ ｗｉｔｈ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉａ）ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ Ａ：Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ Ｂ，ａｔ ｒａｔｅ ｌｍＬ．ｍｉｎ～．Ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ３０℃．ａｎｄ ｔｈｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２７０ ｎｍ．
Ａｂｓｔｒａｃｔ： ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌ ｉｓｈ ａ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｉｘ ａｌｋａｌｏｉｄｓ （ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ，ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ，ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ，ｐａｌｍａｔｉｎｅ，ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）ｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ
HPLC法测定黄连药材及其炮制品中六种生物碱的含量
（ 氨 水调 节 ｐ Ｈ ９ ． ３） （ ３ ６ ： ６ ４） 为 洗脱 剂 ， 流速 １ ｍＬ ・ ｍｉ ｎ ～， 检 测 波长 ２ ７ ０ ｎ ｍ， 柱温 ３ ５℃ 。 结 果 ： 盐 酸 药根 碱 、 盐酸 非 洲 防 己碱 、 盐 酸表 小 檗碱 、 盐酸 黄 连碱 、 盐酸 巴马 汀 、 盐 酸 小 檗碱 的线 性 范 围依 次 为 ０ ． ０ ０ ６ ９ ６ — ０ ． ２ ３ ３ 、 ０ ． ０ ０ ４ ７ ５ — ０ ． １ ５ ２ 、 ０ ． ０ ０ ３ ３ ０ — ０ ． ５ ２ ８ 、 ０ ． ０ ０ ６ ３ １ — １ ． ０ １ ０ 、 ０ ． ０ ０ ４ ７ １ — ０ ． ７ ５ ３ 、 ０ ． ０ １ ７ ８ － ２ ． ８ ８ ４ ｇ ・ ｍＬ ～； 力 口 样 回 收 率依
用 的结果 ， 如黄 连 中小檗 碱具 有较 强 的抗炎 作 用 ，
但是 ， 黄连水 提 液 的最低 抑 菌能力 要 强于小 檗 碱 ，
指 标成 分的种类 ， 更有 利于黄 连及其炮制 品 的质 量 控制 。
１ 仪器 与试 药 岛津 Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ型 液 相 色 谱 仪 ； ＫＱ ５ ２ ０ ０型超 声 波
３ ． 成都 中医药大学中药学院
成都
６ １ ０ ０ ７ ２ ；４ ． 太极集 团有限公 司 重庆
４ ０ １ １ ４ ７ ）
摘
要： 目的 ：测 定 黄 连 药材 及 其 炮 制 品 中盐 酸 药根碱 、 盐酸 非 洲 防 己碱 、 盐 酸表 小 檗碱 、 盐酸 黄 连 碱 、
黄连的鉴定实验报告心得
一、实验背景黄连，学名Coptis chinensis，是毛茛科黄连属植物，具有清热燥湿、泻火解毒的功效，是中医药中常用的药材之一。
黄连的有效成分主要为生物碱，其中小檗碱是其主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎等药理作用。
为了确保药材的质量和安全性，本实验对黄连进行了鉴定，以下是我对本次实验的心得体会。
二、实验过程1. 实验材料与仪器实验材料：黄连药材、水、乙醇、石油醚、苯、三氯甲烷、盐酸、硫酸、枸橼酸等。
实验仪器：电子天平、烧杯、锥形瓶、冷凝管、蒸馏装置、分光光度计、显微分析系统等。
2. 实验步骤（1）黄连药材的采集与处理：选取干燥的黄连根茎，除去杂质，洗净，晾干。
（2）小檗碱的提取：将黄连药材研磨成粉末，加入适量水，加热煮沸，过滤，得到黄连水提液。
（3）小檗碱的精制：将黄连水提液加入适量的硫酸，调节pH至2.5，静置，沉淀，过滤，得到小檗碱沉淀。
（4）小檗碱的鉴定：采用紫外-可见分光光度法对精制后的小檗碱进行含量测定，并与标准品进行对比。
三、实验结果与分析1. 黄连药材的性状鉴定通过观察黄连药材的性状，如颜色、气味、质地等，初步判断其品质。
本实验选取的黄连药材呈黄色，气味苦，质地坚实，符合黄连药材的特征。
2. 小檗碱的提取与精制实验中，通过加热煮沸、过滤、沉淀等步骤，成功提取并精制出小檗碱。
提取率较高，表明实验操作较为合理。
3. 小檗碱的鉴定采用紫外-可见分光光度法对精制后的小檗碱进行含量测定，结果表明，本实验提取的小檗碱含量较高，与标准品相近，证明实验操作正确。
四、实验心得1. 实验操作要严谨在实验过程中，要严格按照实验步骤进行操作，确保实验结果的准确性。
例如，在提取过程中，要控制好温度和时间，避免过度加热或加热不足，影响提取效果。
2. 注意实验安全实验过程中，要严格遵守实验室安全规定，如佩戴防护眼镜、手套、口罩等，避免意外伤害。
3. 培养团队协作精神实验过程中，团队成员要相互配合，共同完成任务。
HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量
HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量
尹清
【期刊名称】《上海中医药杂志》
【年(卷),期】2003(37)7
【摘要】为测定黄连中盐酸小檗碱含量 ,用耐酸性ZOBAXEclipseXDB -C8色谱柱 ,在较低pH下 ,以乙腈 -0 0 5mol磷酸二氢钠 (磷酸调pH为2 5 ) (30∶70 )为流动相 ,于 345nm处测定。
结果显示盐酸小檗碱平均回收率为99 31 %。
此法简便快速 ,准确稳定 ,重现性好。
【总页数】3页(P53-55)
【关键词】HPLC测定;黄连;盐酸小檗碱;含量;中药
【作者】尹清
【作者单位】上海浦东养和堂饮片厂
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.HPLC法测定额勒更口服液黄连中盐酸小檗碱含量 [J], 李雨生
2.RP-HPLC定量三乙胺法测定中药黄连中盐酸小檗碱的含量 [J], 李彩虹;彭罡;周克元
3.HPLC法测定虎黄烧伤搽剂中盐酸小檗碱的含量 [J], 赵东;郑维兵;陈志平;钟旭
4.HPLC法同时测定黄柴安胃胶囊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量 [J], 张苇苇
5.HPLC同时测定翻黄合剂中芍药苷和盐酸小檗碱含量 [J], 陆凤琪; 周海嫔; 陈文成; 甘斌艳; 王亚芳
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法鉴定不同产地黄连饮片中含生物碱的研究
HPLC法鉴定不同产地黄连饮片中含生物碱的研究摘要】目的：研究高效液相色谱法（HPLC）在不同产地黄连饮片中生物碱检测中的价值。
方法：选择HPLC法分别检测各区域黄连中生物碱情况。
结果：不同区域黄连中小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀生物碱以及总含量具有一定差别，其中四川洪雅县的黄连生物碱含量较高，而云南德钦县较低。
结论：HPLC在不同区域黄连生物碱的检验中效果显著，操作较为方便，具有一定重复性，鉴定结果的准确率较高，值得广泛推广及应用。
【关键词】生物碱；黄连；高效液相色谱法；饮片【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）21-0362-01黄连属于常见的中药饮片，具有泻火解毒、清热燥湿的功效，取得了较高的临床价值。
黄连的主要成分为生物碱，若能够准确掌握黄连中有效成分，选择疗效确切的鉴定方式在保证饮片质量中具有重要意义。
临床上常采取紫外分光光度计或者薄层扫描方式进行鉴定，虽然取得过一定检验价值，但效果并不明显[1]。
其中薄层扫描鉴定结果的准确性较低，而紫外分光光度计仅能够检出黄连中生物碱的总含量。
随着鉴定技术不断完善，临床认为采取HPLC法鉴定效果显著，不仅能够检出各生物碱含量，同时能够保证结果准确[2]。
因此本文展开研究，探讨HPLC法在不同区域黄连生物碱的检验中的价值，现作出如下报道。
1.资料与方法1.1 仪器与试剂日本日立公司生产的高效液相色谱仪器、色谱柱、超声波清洗器、电子分析天平、色谱数据工作站、乙腈色谱纯试剂、盐酸小檗碱以及双蒸水等。
1.2 方法将盐酸小檗碱判定为对照，按照HPLC法分别检测黄连中各生物碱含量。
1.3 色谱条件色谱柱为4.6mm*250mm，5um；流动相50:50的乙腈-0.1%磷酸液体，与0.1g/100ml的十二烷基磺酸钠混合，柱温设置为30℃，检验波长345nm，流速1.0ml/min。
1.4 配置溶液将100℃干燥后的盐酸小檗碱放入流动相中，浓度设置成240.6ug/ml；取0.1g黄连粉末，放置于锥形瓶中，加入流动相（80ml），采取超声处理，频率200W，功率40kHz，时间控制35min左右。
黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定
黄连五种主要生物碱的提取纯化及含量测定张纯刚;唐静雅;于琛琛;程兰;康廷国【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2018(020)009【摘要】目的:探索出黄连五种主要生物碱的最优提取纯化方法及含量测定方法,为制剂研究奠定基础.方法:采用HPLC进行生物碱的含量测定,以黄连五种主要生物碱加和得率为指标,优选黄连五种主要生物碱提取及纯化工艺.盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的浓度,分别在0.48～4.80、3.52～35.2、2.04～20.4、1.72～17.2、10.2～102μg·mL-1(r均大于0.999)范围内,与峰面积呈良好的线性关系.结果:黄连提取最优的条件为黄连饮片,加8倍量1.5％的硫酸溶液,煎煮3次,每次40 min.纯化最佳工艺为黄连提取液用Ca(OH)2调节pH 5～6,滤液加HCl调节pH 1～2,加5％NaCl,冰箱冷藏静置过夜,沉淀物干燥.结论:所建立的黄连五种主要生物碱提取纯化工艺及含量测定方法简单可靠.【总页数】5页(P1146-1149,1156)【作者】张纯刚;唐静雅;于琛琛;程兰;康廷国【作者单位】辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;大连医科大学附属第一医院药学部,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620;辽宁中医药大学药学院,辽宁大连 116620【正文语种】中文【相关文献】1.黄连总生物碱的提取纯化及含量测定 [J], 张中华;赵亚兰2.正交试验设计筛选黄连总生物碱的提取纯化工艺研究 [J], 熊玲;覃瑶;罗维早;肖坤全;王欣3.黄连生物碱的提取纯化及降脂作用 [J], 侯宏;李学刚;李平;王小华;冯平4.黄连总生物碱的提取纯化及含量测定 [J], 张中华;赵亚兰;5.正交试验设计筛选黄连总生物碱的提取纯化工艺研究 [J], 熊玲;覃瑶;罗维早;肖坤全;王欣;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定不同产地黄连中小檗碱的含量
野生资 源的过 度采挖 及 旅 游开 发 等诸 多 因素 ， 黄连 使
・ ｎ～， ｍｉ 检测波 长 ３ ５ｌ ４ ｍ。上 述 色谱 条件 下 ， ｌ 小檗 碱 与其 它各组 分离度 良好 。
２ ２ 对 照 品 溶 液 的 制备 ． ．
的 自然 环境遭 到严 重 破 坏 ， 野生 资 源状 况 堪 忧 。市场 紧缺 的需求 和随着 国家对 Ｇ Ｐ的倡 导 ， Ａ 国家 和地 方也 加大 了黄连人 工栽 培 的支 持力 度 ， 其 黄连 的资 源状 使 况得 到 了缓解 。然 而人工栽 植 品种 黄 连的 品质 如何综
流动 相 ： 乙腈 一 ０ ０ ｔ ｌ 酸二氢钠水 溶液 （ ．５ ｏ 磷 ｏ 磷
酸调 Ｐ ２ ５ ３ ：０ ， Ｈ＝ ． ）（ ０ ７ ） 柱温 ３ ℃ ， ０ 流速 ０ ８ｍ ． ｌ
抗 癌 、 放 射 及促 进 细胞 代 谢 的作 用 Ｊ 抗 。近 年 来 ， 黄 连 复方 中的药理 和 临床 研究 也 有 了新 的发 现 ， 扩大 并 了应用 范围 ， 引起 了人 们 对黄 连 的 特别 关 注 。但 由于
吴 佳
４０ ０ ） １０４ （ 长沙民政职业技术学院 ，湖南 长沙
［ 摘
要】 目的 ：对黄 连中主要成分进行全面 分析 ，评价 不 同产 地和 品种 的黄连 药材的 内在质量 ，以开发生 药资
源 。方法 ：采用色谱柱为 Ａｌｍ 。 ４ ６ｍ ２０ｎ ｎ ５ｔ ，流动相为乙腈 一０ ０ ｍ ｌ ｌｉ ａＣ８（． ｍ× ５ ｌ ， ｒ ｔ ｌ ｍ） ．５ ｏ 磷酸二氢 钠水溶液 （ 磷酸
硕士。
第 ２期
吴
佳 ：Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法测定不同产地黄连 中小檗碱 的含 量
HPLC测定不同产地黄连中6种生物碱的含量
ｆｏｕｎｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｓａｍｐｌｅＳ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ： ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ
ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ
Ｇａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ，Ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ，Ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，Ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ，Ｐａｌｍａｔｉｎｅ ａｎｄ Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．Ｉｔ
ｃａｎ
ｉｎ Ｃｏｐｔｄｓ
ｂｅｔｔｅｒ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ
ｑｕａｌ ｉ ｔｙ ｏｆ
Ｃｏｐｔｉｓ
Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］
Ｃｏｐｔｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ：
Ｇａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ：Ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ：Ｅｐｉｂｅｒｂｅｒｉｎｅ：
Ｃｏｐｔ ｉ ｓｉｎｅ：Ｐａｌｍａｔ ｉｎｅ：Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ：ＲＰ～ＨＰＬＣ
黄连为毛莨科植物黄连Ｃｏｐｔｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．、三角叶黄连￡ｄｅｌ ｔｏｉｄｅａ Ｃ．Ｙ．Ｃｈｅｎｇ ｅｔ Ｈｓｉａｏ、云南黄连Ｃｏｐｔｉｓ ｔｅｅｔａＷａｌｌ．的干燥根茎。药材依次习称“味连”、“雅连”、“云连”…。 主要有效成分为生物碱类化合物拉’，其中小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）含量最高，此外还有表小檗碱
２．３供试品溶液的制各取黄连粉末样品（过１００目筛）约０
１
ｇ，精密称定，置１５０
１２
全国第一届曲用植物化学与中药新曲研发技术创新研时会
２方法与结果
２．１色谱条件Ｘｔｉｍａｔｅ”ｃ。。色潜柱（４
６Ⅲｍ×２５０ ｍｍ，５
ｕ口）；流动柑＾相３０
ｍｍｏ
Ｊ・Ｌ。
碳酸氢铵水镕液（害有０ ７％氨水、０ １％兰乙胺），Ｂ相乙腈，线性梯度洗脱程序为０‘１５ ｍ㈨１０％’２５％Ｂ： １５、２５ ３０％、４５％Ｂ；流速１ ｍ１．・ｍ１ ｎ‘；检测渡长２７０ ｎｍ，托温为３０℃ ｕ Ｌ。 进样量１０ 在上述色谱条件下，盐酸曲根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸袁小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸Ｂ马汀、 盐酸小檗碱理论塔扳数均不低于１０ ０００。分离度投拖尾用子均苻舍音量测定要求。对照６＾及样品（峨 眉地区味连）ＩＩＰＬＣ田见图１。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
讨论HPLC法测定黄连中生物碱的含量
引言
黄连为多年生毛茛科草本植物，药用部分主要取自黄连、三角叶黄连、峨嵋山野连或云连的根茎。
野生黄连主要产于四川、云南、湖北，现今多采用荫棚栽培。
秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥。
黄连作为临床常用药物，用于治疗湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热吐衄、目赤、牙痛、消渴、痈肿疔疮;外治湿疹、湿疮、耳道流脓等。
此外，黄连还具有很多药理作用譬如：抗病毒作用、抗阿米巴作用、抗炎、抗腹泻作用、对心血管作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用、对血液系统的影响、抗溃疡作用。
由于黄连的种类与炮制方法都非常多，地理分布也比较广泛，因此作为药材它们的质量不易控制。
黄连的主要药用成份生物碱的含量的准确测定对评价不同产地黄连与质量监控具有重要意义。
黄连生物碱含量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、薄层扫描法(TLCS)与紫外分光光度法(UV)等，它也是一味具有广泛药效作用的中药，在国内外很多种疾病的治疗都用到了它，且黄连新的药效又不断被发现。
尤其是其是在抗癌、降血糖和改善心脑血管功能等方面均具有较好的药效，越来越受到人们的重视，因此，对黄连进行深入研究，对黄连中的各种生物碱进行全面的分析，以开发生药资源，扩大其药效作用，将有很大的社会效益和广泛的开发前景。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪、KQ-250DE型数控超声波清洗器、HH数显恒温水浴锅、上海博讯电热鼓风干燥箱GZX-9070MBE、BL电子分析天平FA2204N、容量瓶(10ml、25ml)、烧杯、玻璃棒、移液管、漏斗、微孔滤膜(0.45m)、移液枪;盐酸小檗碱化学对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200208)纯度为98%，黄连(味连、过120网目筛)、乙腈均为色谱纯，十二烷基硫酸钠、甲醇、磷酸二氢钾、磷酸、盐酸均为分析纯、水为蒸馏水。
1.2 对照品溶液的制备
对照品盐酸小檗碱在105℃下的烘箱中干燥至恒重，精密称取对照品约15.0mg，用甲醇溶解并定容到25.00ml，得对照品溶液的浓度为
0.06mgml-1。
1.3 供试品溶液的制备
精密称取黄连粉末样品(过120目筛，80℃干燥)约50mg，加盐酸-甲醇(1：100)溶液45ml，60℃水浴锅中温浸15min，超声处理(功率250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，用普通滤纸滤过，取滤液，用0.45m滤膜再次过滤，再定容与25ml容量瓶，即得供试品溶液。
1.4 液相色谱分析条件
液相色谱分析条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂;以乙腈、0.05molL-1磷酸二氢钾溶液(V：V=50：50;每100ml中加十
二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相;检测波长为345nm;流速：1.0mlmin-1;柱温：30℃;进样量：20L。
理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。
在此色谱分析条件下，待色谱基线走平后，分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各20L，注入液相色谱仪，测定。
1.5 阴性对照试验
按照供试品溶液的制备方法制备不含黄连提取液的空白对照溶液，在上述相同的色谱分析条件下，分别准确吸取对照品溶液、空白对照溶液、供试品溶液各20L，分别注入液相色谱仪。
1.6 提取工艺的研究实验
1.6.1 温浸时间的影响。
精密称取13份黄连粉末样品(过120目筛，80℃干燥)均约50mg，分别加入盐酸甲醇(1：100)溶液45ml，浸泡5min后，分别放入60℃水浴锅中温浸提取，温浸时间分别从0、5、10、15⋯⋯60min，然后各样品溶液进行超声处理(功率250W)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，普通滤纸滤过，取滤液，再用0.45m滤膜过滤，再用25.00ml容量瓶定容到25.00ml，即得提取样品。
测量各样品生物碱的含量，确定最佳提取时间。
1.6.2 温浸温度的影响。
精密称取5份黄连样品粉末(过120目筛，80℃干燥)重约50mg，分别加入盐酸甲醇(1：100)溶液45ml，分别在25℃、40℃、60℃、80℃、100℃水浴锅中温浸提取15min，然后各样品溶液进行超声处理(功率
250W，频率40KHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀并用普通滤纸滤过，取续滤液，再用0.45m滤膜过滤，再定容于25.00ml容量瓶，即得提取样品。
测量各样品生物碱的含量，确定最佳提取温浸温度。
2 结果与分析
2.1 色谱分析条件
在本实验选择的色谱条件下分别检测对照样品溶液与样品溶液，测得色谱图。
样品色谱图、对照品色谱图来看，结果表明该色谱条件适合黄连样品分析检测。
2.2 阴性对照实验结果
将空白溶液、供试品溶液、对照品溶液用进样器各抽取20l，分别注入液相色谱仪。
色谱分析实验。
可以看出：空白溶液对应的曲线a，在色谱图中没有出现明显的色谱峰;黄连样品曲线b中最大峰与曲线c的最大峰保留时间一致，表明，黄连样品中采用该提取方法能提取到小檗碱，且小檗碱在提取物中含量较高，且从峰形来看，其它成分对小檗碱的定量测定无干扰。
2.3 温浸时间分析结果
黄连提取液中盐酸小檗碱的含量与水浴温浸提取时间的检测结果。
随着水浴温浸提取时间的增加提取液中小檗碱的含量也快速增加，当温浸提取时间到15min时小檗碱的含量也达到最高值，温浸提取时间继续增加，提取液中小檗的含量趋平且略有下降。
因此，提取黄连中生物碱的最佳温浸提取时间确定为15min。
2.4 最佳提取温度
不同提取水浴温度下提取液中小檗碱的含量检测结果如图4所示。
结果表明：随着水浴温度升高，提取液中小檗碱的含量也快速升高，当水浴温度升高到60℃时，小檗碱的含量达到最高，继续升高水浴温度后，小檗碱的含量含量反而逐渐降低，因此，提取黄连中生物碱的最佳温浸提取温度确定为60℃。
2.5 标准曲线的绘制将配制好的浓度为0.06mgml-1盐酸小檗碱标准对照品溶液分别进样5l，8l，10l，15l，18l，20l，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(A)，绘制标准曲线，检测结果与标准曲线。
标准曲线的回归方程为y=179842x-298324，R2=0.9911。
由此可见在该检测方法下，小檗碱含量在0.3～1.2g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 标准曲线的绘制
将配制好的浓度为0.06mgml-1盐酸小檗碱标准对照品溶液分别进样5l，8l，10l，15l，18l，20l，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(A)，绘制标准曲线，检测结果与标准曲线。
标准曲线的回归方程为y=179842x-298324，R2=0.9911。
由此可见在该检测方法下，小檗碱含量在0.3～1.2g范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.6 加样回收试验结果
精密称取已测含量的黄连粉末供试品9份各50mg，按1.3供试品溶液制备方法提取液，并定容到25ml后，摇匀，各精密量取5ml，其中1、2、3号各精密加入用甲醇配置的盐酸小檗碱对照品溶液(盐酸小檗碱浓度0.06mgml-1)1ml，4、5、6号各加入上述对照品溶液2ml，。