染色体数目异常检测试剂盒简介
荧光原位杂交技术在自然流产或死胎中的应用
荧光原位杂交技术在自然流产或死胎中的应用冯莉;周雪原;王晓华;冀小平;董弘;周燕;朱博;王紫横【摘要】目的:利用荧光原位杂交技术(FISH)快速检测流产儿是否患有染色体疾病,为流产组织的遗传检测提供一种有效的检测方法.方法:选用13、18、21、X、Y无色探针对不明原因流产后的胎儿皮肤或绒毛等组织进行FISH检测.结果:26例标本中检测出异常染色体9例,异常率为34.6 %;其中45X 2例、46XX/46XY 1例、47XN+18 2例、47XXY 1例、47XN+21 2例、69XXY 1例.结论:荧光原位杂交技术可用于检测流产、死胎后的组织标本,为无法进行细胞培养核型分析的胎儿标本提供一种有效的检测方法.【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2013(029)002【总页数】2页(P30-31)【关键词】荧光原位杂交;自然流产;死胎;染色体疾病【作者】冯莉;周雪原;王晓华;冀小平;董弘;周燕;朱博;王紫横【作者单位】内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古妇幼保健院遗传科,内蒙古,呼和浩特,010020【正文语种】中文荧光原位杂交技术(flourescence in situ hybridization，FISH)是分子生物学与细胞遗传学相结合检测染色体异常的技术，是以荧光标记的染色体区带特异性DNA为探针，与分裂期或间期细胞染色体进行原位杂交，于荧光显微镜下观察染色体畸变引起的形态与数目异常［1-3］。
目前妊娠结局中自然流产、死胎现象普遍增多，且大部分是由遗传因素引起，胎儿染色体疾病主要表现在第13号、第18号、第21号及X、Y染色体的数目与结构异常。
Y 染色体微缺失快速检测系统 说明书
Y染色体微缺失快速检测系统说明书 ２５人份／盒z概述本试剂盒用于快速检测人（男性）Y染色体AZF座位（Azoospermia Factor）的缺失。
多项研究发现，AZF基因家族共有AZFa、AZFb、AZFc三个座位（在AZFb与AZFc之间还存在AZFd座位，中等程度的少精和精子数目正常却形态异常多会与该区域的缺失有关），其中任何一个座位的微缺失都可导致生精障碍。
本试剂盒共设计15对引物和一对内控（内部质量控制）引物，利用PCR（Polymerase Chain Reaction）技术可从Y染色体上特异性扩增出15条非多态性短片段的序列标签位点（Sequence Tagged Sites，STS）和一条内控基因片段。
这些引物对分别组合成4套多重PCR系统，在相同条件下，进行4管PCR扩增反应，通过电泳结果判定15个序列标签位点（STS）的存在与否。
主要特点：1.可对15个STS序列标签位点进行检测，这15个位点覆盖了所有的AZF区域，其中AZFa有3个位点，AZFd有2个，AZFb有6个，AZFc 有4个位点；2.高特异引物确保结果的可靠性，并具有内控（内部质量控制）基因片断的检测；3.独特的防污染设计，有效避免假阳性的产生；4.符合并超过欧洲生殖学会推荐的检测标准。
应用：胞质内单精子注射（ICSI）技术辅助生育治疗前的检测、少精症与无精症男性患者遗传学检测、精子库的入库前筛查等。
z试剂盒组成组成成分数量保存条件PCR反应液Ⅰ（紫色） 25管(每管14μL ) -20℃PCR反应液Ⅱ（无色） 25管(每管14μL) -20℃PCR反应液Ⅲ（蓝色） 25管(每管14μL) -20℃PCR反应液Ⅳ（黄色） 25管(每管14μL) -20℃纯水z有效期六个月z需自备的仪器及试剂PCR仪（推荐使用PTC-100或PTC-200, M J Research Co.或其它国际知名品牌PCR仪）DNA电泳系统z操作步骤1.基因组DNA的获取使用本公司全血DNA快速提取试剂盒从抗凝全血中抽提人（男性）基因组DNA，按操作说明进行。
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
羊水
染色体数目异常检测试剂盒羊水样本杂交仪实验流程一、样本玻片制备：1.收集羊水样本5-10ml左右，于离心管中；2.1500RPM离心10min，去上清;3.用5ml胶原酶B（0.005g⁄5ml HanK’s BSS）轻轻吹打悬浮细胞；4.37℃水浴20-40min，期间吹打2－3次；5.1200RPM离心10min，去上清，加入5ml 37℃预热的去离子水，重新吹打悬浮细胞，37℃水浴30min；6.低渗结束后，缓慢加2ml固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）于试管中，轻轻吹打混匀，预固定；7.1000RPM离心10min，去上清，室温下缓慢加入5ml固定液，轻轻吹打悬浮细胞，固定10min，进行一固定；8.1000RPM离心10min，去上清，室温下缓慢加入5ml固定液，轻轻吹打悬浮细胞，固定10min，进行二固定；9.1000RPM离心10min，去上清至适宜体积（根据所收获细胞量而定），轻轻吹打混匀后，取适量悬液滴于处理好的干燥玻片上，自然晾干后于光镜下观察细胞密度；10.室温下过夜老化玻片或56℃烤片机上烘烤30min老化备用。
二、羊水玻片FISH操作步骤：1．将老化好的玻片于室温 2×SSC（pH7.0）溶液中缓冲10min；2．将20mg/ml胃蛋白酶储存液160ul加入40ml 37℃0.01M HCL溶液中混匀，终浓度为0.08mg/ml。
玻片置于37℃上述溶液中消化10min;3．室温，2×SSC（pH7.0）溶液中漂洗玻片3-5min；4．将玻片依次置于预冷的70%乙醇、85％乙醇和100％乙醇中脱水，各3min；5．取出玻片，自然晾干；6．56℃，烤片3min；三、杂交仪变性杂交：1．探针准备：杂交液 7μl去离子水 1μl探针 2μl加入到0.5ml离心管中混匀，离心１～３秒，备用。
2．将10µl探针混合物滴加于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，避免气泡产生，用橡皮胶封盖玻片边缘；3．准备杂交仪器，共变性条件：对于18XY探针来说，最佳的变性温度为70℃ 5分钟，对于13/21探针来说，最佳的变性温度为73-78℃ 5分钟。
胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒
胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒1 范围本标准规定了胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒（测序法）的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和使用说明书、包装、运输和贮存等。
本标准适用于通过低深度高通量基因测序检测植入前胚胎是否有染色体非整倍体以及大片段缺失、重复异常，从而选择正常的胚胎进行植入的胚胎植入前检测试剂盒的质量控制。
胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒一般包括全基因组扩增、文库构建试剂组分，可包含高通量测序试剂，如胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒内，不含有高通量测序试剂组分，由制造商说明或指定配套高通量测序试剂盒。
本标准适用于应用于临床筛查的胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂盒。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191 包装储运图示标志GB/T 29791.2 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂 Preimplantation chromosomal aneuploidies detection reagents在体外受精－胚胎移植过程中，采集胚胎部分细胞，使用胚胎植入前染色体非整倍体检测试剂对获取的细胞进行全基因组扩增，对扩增产物进行文库构建、全基因组高通量测序，将测序结果进行统计学信息分析，从而判断胚胎的染色体是否为非整倍体。
3.2有效数据量Effective reads高通量测序所获得的数据通过质控、比对、去重复后比对到基因组上唯一位置，能够用于分析的有效的序列（reads）数量。
注：本标准中有效数据量的单位用M表示，1M代表1,000,000个reads。
3.3基因组覆盖率Genome coverage高通量测序获得的有效数据覆盖基因组的物理长度占参考基因组总长度的比例。
应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常
沈阳医学院学报Journal of Shenyang Medical College第13卷第3期2011年9月·159·应用荧光原位杂交技术检测停育胚胎或绒毛染色体数目异常张宁，闫素文，郝冬梅，徐斌（解放军沈阳202医院全军计划生育优生优育技术研究所，辽宁沈阳110003）［摘要］目的：使用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）对停育胚胎染色体数目异常进行快速检测并评估其临床应用价值。
方法：使用第13、18、21、X和Y5条染色体特异性的FISH探针对66例停育胚胎绒毛进行分析。
结果：13、18、21、X和Y数目异常20例，占46.97%，正常例数35例，间异例数11例。
在所有异常胚胎中性染色体异常占75%，其中Turner's Syndrome45X（TS45X）所占比例最高与其他任何一种异常的发生率相比差异显著（P＜0.05）。
结论：FISH检测停育胚胎第13、18、21、X和Y数目异常是简单、快速和准确的诊断方法。
［关键词］荧光原位杂交技术；产前诊断；染色体数目异常［中图分类号］R714.15+3［文献标识码］A［文章编号］1008－2344（2011）03－0159－03 Fluorescence in Situ Hybridization to detect Fetal Chromosome Abnormalities in Missed AbortionZHANG Ning，YAN Su-wen，HAO Dong-mei，XU Bin（Family Planning，Prenatal and Postnatal Care Institute PLA202Hospital，Shenyang110003，China）［Abstract］Objective：To study the number abnormality of embryonic chromosomes in missed abortion by fluorescence in situ hy-bridization（FISH），and its clinical application were evaluated．Methods：The uncultured villi from66women were performed FISH using specific DNA probes of13，18，21，X and Y chromosomes．Results：13，18，21，X and Y chromosomes showed number abnormal in20cases，accounting for46.97%，normal in35cases，and abnormal amniocyte cell in11cases．75%of the abnormal embryos were neutral chromosomal abnormalities，in which Turner's Syndrome45X（TS45X）made up the highest percentage than any others，presented a significant difference in the incidence（P＜0.05）．Conclusion：FISH is an effective and reliable method in rapid diagnosis of chromosome number abnormality for missed abortion．［Key words］fluorescence in situ hybridization；prenatal diagnosis；chromosome number abnormality近年来胚胎停育的发生率日益增高，成为临床的常见病和多发病。
Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准的建立
Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准的建立
于婷;黄杰
【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》
【年(卷),期】2024(16)5
【摘要】目的建立Y染色体微缺失检测试剂盒行业标准。
方法选择9个厂家的Y 染色体微缺失检测试剂盒,统一发放Y染色体微缺失检测参考品,按照拟定的行业标准,对外观、检测限、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率和重复性项目进行验证。
结果8个试剂盒的全部项目的检测结果均满足要求。
检测限和阳性参考品符合率项目中,仅试剂盒8未检出AZFa微缺失,不满足要求。
结论大部分验证结果均能满足拟定行标中的要求,表明行业标准各指标具有一定的合理性,可操作性强。
Y 染色体微缺失检测试剂盒行业标准的建立将有助于规范这类试剂盒发展,提升质量,并为监管提供技术支持。
【总页数】4页(P800-803)
【作者】于婷;黄杰
【作者单位】中国食品药品检定研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R44
【相关文献】
1.胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒(高通量测序法)行业标准的制定
2.快速检测Y染色体微缺失方法的建立
3.国企思想政治教育工作方
法的创新4.染色体微阵列分析检测不同产前诊断指征孕妇染色体微缺失/微重复的临床价值
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染色体数目异常 检测方法
染色体数目异常检测方法
染色体数目异常是一种常见的遗传异常，可以导致一系列的遗传疾病。
检测染色体数目异常的方法主要包括以下几种：
1. 细胞遗传学检测，这是最常用的染色体数目异常检测方法之一。
通过采集患者的细胞样本，如血液、羊水或者组织样本，然后在实验室中培养细胞，并对细胞进行染色体分析。
这种方法可以准确地检测染色体数目异常，如唐氏综合征（21三体）、爱德华氏综合征（18三体）和帕尔谢氏综合征（13三体）等。
2. 分子遗传学检测，这种方法主要是通过分子生物学技术，如荧光原位杂交（FISH）和基因组杂交等，来检测染色体数目异常。
FISH技术可以用来检测特定染色体区域的缺失或重复，对于一些特定的染色体异常具有很高的准确性。
3. 无创产前筛查，对于胎儿染色体异常的筛查，无创产前筛查是一种常用的方法。
通过母体血液中的游离胎儿DNA进行检测，可以筛查出21三体、18三体、13三体等染色体异常。
4. 产前诊断，对于高风险的孕妇，可以进行羊水穿刺或绒毛活
检等方法进行产前诊断，直接获取胎儿的染色体样本进行检测，以
确诊染色体数目异常。
总的来说，染色体数目异常的检测方法多样化，可以根据具体
情况选择合适的检测方法。
对于染色体数目异常的早期发现和诊断，有助于及时采取相应的干预和治疗措施，减少相关疾病的发生和发展。
基于细胞荧光原位杂交法的人类染色体异常检测试剂注册技术审查指导原则
本指原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
如果出现交叉杂交，应考虑靶序列与交叉杂交序列的同源性程度，是否存在其他相似染色体异常类型等问题。应按照下述规则报告交叉杂交的结果：
A.在靶序列之外其他位置检测到信号的细胞比例；
B.每个细胞/每份样本中不同交叉杂交染色体/区域的数量；
C.使用标准系统命名，确定所有交叉杂交的染色体位置，并描述这些非靶序列。
2.荧光染料：描述荧光染料的名称和详细特征，例如其最大发射/吸收波长，标记后持续被激发光源照射时的抗淬灭能力等。
3.杂交缓冲液：描述配方组成和质量标准，确认其可提供合适的离子和杂交环境。
4.背景信号封闭剂：描述采取的降低背景信号的方法，如果采用背景信号封闭剂（例如：人Cot-1 DNA），应确认其封闭效果。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围
本指导原则所述染色体异常的类型包括染色体数目异常、结构异常（包括异位，倒位导致的基因断裂和融合）、扩增、缺失等，例如，产前羊水细胞中的染色体数目异常，白血病患者骨髓细胞中的BCR/ABL基因融合等。
1.3玻片预处理：对预处理条件进行研究，如需蛋白酶消化，应对消化条件进行重点研究，优化蛋白酶的用量和消化时间，尽量减少消化不充分造成的非特异性结合，同时避免消化过强造成DNA损失。如产品适用不同样本或玻片类型，应分别进行研究。
胎儿染色体非整倍体21三体18三体和13三体检测试剂盒高通量
《胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）》行业标准编制说明一、工作简况1、任务来源高通量测序技术已经广泛的应用于胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测中，不同公司在不同的测序技术平台上开发了胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）。
目前尚无相关的标准对试剂盒的性能及使用进行规范。
项目名称定为：“胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）”。
标准起草由中国食品药品检定研究院发起，中国食品药品检定研究院、深圳华大生命科学研究院、广州市达瑞生物技术股份有限公司、北京市医疗器械检验所、博奥生物集团有限公司等单位共同参与撰写。
主要起草人：曲守方等。
2、工作过程本标准于2018年3月形成工作组草案，2018年4月11日在北京召开了工作组草案讨论会，5月30日召开标准研讨会，针对工作组草案和验证方案进行了讨论。
会后在2018年月至月组织企业对标准进行了验证，并形成征求意见稿。
二、标准编制原则和确定标准主要内容1、标准制定的意义、原则染色体非整倍体是指相对于人的正常的46条染色体而言，细胞中的某一条或几条染色体数目增加或减少，与婴幼儿期显著的发病率和死亡率有着密切的关系。
我国新生儿中染色体异常的发病率为1/60，其中21三体（唐氏综合征）、18三体（爱德华氏综合征）和13三体（帕陶氏综合征）是三种最主要常染色体非整倍体疾病，在新生儿中发病率分别为1/(600-800)、1/(3500-8000)和1/(7000-20000) 。
临床上对胎儿这几种病变产前诊断方法主要是通过B超引导下的羊水穿刺，再将羊水细胞培养后进行染色体核型分析。
该技术检测结果准确，但所需时间长，检测过程中还可能导致羊水量骤减而造成胎儿宫内窘迫；另外羊水细胞不易培养，不便于大规模的产前普查。
高通量测序的方法是通过检测孕妇外周静脉全血样本中的胎儿游离DNA，然后对测序信号的生物信息学分析，对21、18和13号染色体所属的DNA 片段数量进行统计，将统计的结果与大量正常样本构成的参考集合相比较，从而获得样品中所含的DNA 片段数量是否存在异常，从而实现对21、18和13三体综合征快速的产前辅助诊断。
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Trisomy Reader
13/18/21/x/y染色体数目异常检测试剂盒
背景介绍
染色体遗传病是指染色体的数目或形态、结构异常引起的疾病，是导致新生儿出生缺陷的重要因素。
染色体数目异常包括整倍性染色体异常和非整倍性染色体异常。
绝大多数整倍性染色体异常会导致流产，而非整倍性染色体异常则有很大比例可以出生能存活的胎儿。
在常染色体非整倍性异常中，发病比例最高的依次是21三体（唐氏综合征，Down Syndrome）、18三体（爱德华氏综合征，Edwards Syndrome）和13三体（帕陶氏综合征，Patau Syndrome），这三种三体疾病在新生活婴中的发病率依次约为1/650、1/2500、1/8000。
在性染色体非整倍性异常中，发病比例最高的是Klinefelter综合征、Turner综合征、XYY综合征。
这5条染色体的异常在染色体异常患儿中约占95%。
目前医学水平基本无法对染色体疾病进行治疗，只能进行及时的产前诊断、终止妊娠。
非整倍性染色体异常患者通常缺乏生活自理能力，预期寿命较短，给患者和患者家庭带来沉重负担。
因此，对这些疾病进行产前筛查和产前诊断尤为重要。
目前，包括欧美发达国家和中国在内的众多国家都已经或正在大力推展以21三体为主的各种常染色体疾病产前筛查，并在筛查基础上进行确诊。
产品简介
Trisomy Reader 三体综合征检测试剂盒采用多重QF-PCR（定量荧光PCR）结合毛细管电泳检测的技术平台，通过一个扩增检测反应同时检测27个相关STR或STS位点，对21三体、18三体、13三体及XXY、XO、XYY等性染色体数目异常进行快速准确地检测。
产品优势
1.一管式检测，可同时检测21三体、18三体、13三体和性别染色体数量异常；
2.可对21三体易位型进行有效检测；
3.对嵌合体有较好的检出率，10%以上的三体嵌合体可被有效检出；
4.检测灵敏度高，需要的样本量少，50-100μl的羊水即可达到一次检测反应需求量；
5.可清晰判断样本污染情况，有效避免母体细胞污染等常见问题；
6.周期短，获得样本后24小时内可以得到结果；
7.对人员操作要求较低，适于批量检测；
8.检测结果能够实现自动化和数字化分析，更加客观和准确。
适用样本类型
羊水、绒毛、组织、脐带血等。
与同类试剂盒的比较
检测结果实例
图1，正常男性检测结果图2，正常女性检测结果
所有位点等位基因数量及峰高比例符合预期。
所有位点等位基因数量及峰高比例符合预期。
图3，21三体样本检测结果图4，18三体样本检测结果
所有21号染色体位点表现为三峰（红箭头）、失衡双峰（绿所有18号染色体位点表现为三峰（红箭头）、失衡双峰（绿箭头）或单峰。
其他位点等位基因数量及峰高比例符合预期。
箭头）或单峰。
其他位点等位基因数量及峰高比例符合预期。
图5，13三体样本检测结果图6，XXY样本检测结果
所有13号染色体位点表现为三峰（红箭头）、失衡双峰（绿部分X-STR位点表现为双峰（红箭头），所有Y染色体位点正箭头）或单峰。
其他位点等位基因数量及峰高比例符合预期。
常，全部与X染色体相关数量相关位点偏离正常（绿箭头）。
其他位点等位基因数量及峰高比例符合预期。