ABO血型系统交叉配血实验操作规程
ABO血型系统交叉配血实验操作规程
（盐水试管法）
1 严格认真核对用血申请单与血样上患者姓名，科别，床号，病历号，血型是否相符，并对照检查供血者血型，血液成分及血袋编号，观察血液外观质量，如血袋是否破损，是否溶血使混浊，起泡，血浆是否有乳糜、絮状物、红细胞层呈紫红色是否超过保存期限等。
2 将受血者血样放置在试管架上（靠左侧）将离心后的供血者血样放置在右侧。
3 取一次性试管两支各加生理盐水1ml,然后一支中加入受血者红细胞1滴，另一支加入供血者红细胞1滴，各自制成3-5%的红细胞悬液备用（分别置于各自血样后面）。
4 取透明的一次性硬塑试管两支，分别标上主次侧及配血序号主侧试管排列在受血者血样后面，次侧试管排列在供血者血样后面。
5 用一次性滴管，将受血者血清1滴加入主侧试管内再将受血者红细胞悬液1滴加入次侧试管内，再取一支滴管将供血者血清1滴加入次侧试管内将供血者红细胞悬液1滴加入主侧试管内。
6 将主，次侧两支试管轻轻混匀置离心机以1000miml分钟，取出试管在白色背景下观察上清液有无溶血，若无溶血时，再轻摇试管观察红细胞有无凝集，若有可疑情况应进一步加做聚凝胺配血。
7 正确规范的书写配血报告单，再仔细与用血申请单受血者血样标签，血袋上供血者姓名，血型，编号等核查无误后做好登记。
8 交叉配血试管排列图示如下：。
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO、RH血型检测(试管法)标准操作规程
ABO、RH血型检测（试管法）标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】ABO、RH血型检测的手工操作。
【标本采集和处理】由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号，并按日期索引进行登记。
将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【检查项目】一、ABO血型（一）原理根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O 型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B 抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B 红细胞来测定血清中有无相应的抗-A 或（和）抗-B。
（二）试剂和材料1．抗-A（B 型血）、抗-B（A 型血）。
2．5％A 、B 试剂红细胞盐水悬液。
3．受检者血浆。
4．受检者5％红细胞悬液。
试剂可在室温2～8℃下避光保存至有效期。
（三）操作步骤1．试管法(1)正向定型a．取试管2支，分别标上A、B字样。
b．向A管滴加抗A分型试剂1滴，向B管滴加抗B分型试剂1滴。
c．向A、B管各滴加5％的待检红细胞悬液各1滴。
d．混匀（天冷时试管架置370C水浴箱15分钟）后配平衡，在离心机内1000转/min离心1分钟。
将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。
交叉配血操作规程
1.目的：检查受血者与献血者的抗原及抗体成分是否相容,以保证安全输血;
2.要求：
要求全科人员能够熟练掌握原理及操作;
3.
,
4.
4.1
4.2
4.3
4.4
5.
5.1 首先查看输血申请单,核对姓名、科室、床号等内容,无误后方可进行配血;★5.2盐水介质配血法
1首先对患者血样充分离心后,吸出血清于另一试管中并标记;
2取试管12支,分别标记患者细胞、患者抗A、抗B、抗D、A C、BC、O C、主侧、次侧、献血者抗A、抗B、献血者细胞管;对患者血样进行ABO血型正反定性和Rh血型检定,主侧管加受血者血清2滴,献血者2%~5%红细胞悬液1滴；次侧管加献血者血清2滴,受血者2%~5%红细胞悬液1滴,对献血者血辫进行ABO血型复查,以
1000g离心15秒,观察结果
6.结果判断
ABO同型配血,主侧和次侧均无凝集及溶血现象;为盐水介质配血结果阴性,可将原标本接着做聚凝胺法或抗人球蛋白法配血;
6.1聚凝胺法：具体方法见聚凝胺法;
6.2 抗人球蛋白法：具体方法见抗人球法;
7.
7.1
7.2
7.3,然后再离心;
7.4
误,,37℃或7.5
7.6 各医院前来配血时,要有输血申请单方可配血;
8.相关文件
8.1中国输血技术操作规程
9.相关表单
9.1 CB—004血型参比室实验记录单
9.2 CB—005青海省血液中心交叉配血报告单
起草人：批准人：审核人：。
ABO血型鉴定操作规程
1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。
2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。
4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。
【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。
【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。
【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。
2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。
交叉配血操作规范(微柱凝胶法)
交叉配血操作规范（微柱凝胶法）【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】BYZ型血库血清学多用离心机，2002-2型血库专用离心机,FYQ免疫微柱孵育器。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】交叉配血微柱凝胶法检测的操作。
【原理、方法、用途】本品采用抗人球蛋白微柱凝胶免疫检测技术，用于交叉配血试验。
在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体结合后（致敏红细胞），凝胶中抗人球蛋白形成凝集块，离心后仍滞留在胶上或胶中，而未和抗体结合的红细胞则完全沉于凝胶底部。
该方法使试验更简单，更规范，结果更易判定。
本品系由聚丙烯塑料透明卡片的六支微柱型管中充满葡聚糖凝胶和抗人球蛋白，制成抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。
【标本采集和处理】1．由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
备血使用的受血者标本必须是输血前2天之内的血样。
采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时），在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。
2．非急症病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写申请单配血单上，以便核对。
急症抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求由专人核对、贴标签、采取血标本送检。
3. 检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。
并按日期索引进行登记。
4. 将标本置于2002-2型血库专用离心机内，放置保证平衡，以1500转/min 离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【试剂】抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡。
【操作步骤】1．取出抗人球蛋白微柱凝胶试剂卡，应注明病人姓名、科室和床号。
血型鉴定及交叉配血
一、盐水介质法
原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC
抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉 眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断 是否有血型不合的情况
（一）盐水介质法
操作： 1、取两只小试管，标明主和次侧 2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴
次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴 3、混匀，离心，1000r/min,离心1min 4、观察结果：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC
中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减 轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作 用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝
集。低离子液可降低可增强抗原、抗体间的吸引
力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。
离心后加入再悬液（枸橼酸钠），可中和聚凝胺
的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷， 使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合 引起的凝集仍然存在。
Rh（D）血型鉴定
原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
浮起，观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
（二）聚凝胺介质法
原理：聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体
血液交叉配血试验标准操作规程
血液交叉配血试验标准操作规程血液交叉配血试验标准操作程序交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供血者红细胞相配的一管称为“主侧”;供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。
交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作规程应包括:?查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因;?对收到的受血者血样应作ABO正反定型，Rh血型和其他血型检查以及血型抗体检测和鉴定;?选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。
一、配血要求1( 受血者配血试验的血样(血型复查)必须是输血前三天之内的;2(核对病人资料:核对输血申请单、受血者血样、病历三者，其内容包括:患者姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型(原始血常规血型和血型复查中血型)、用血品种、用血量等，必须正确无误;3(核对血液:血液完整性、血液标签、血液质量;4(核对取血凭证:按临床(取血凭证)实际用血品种、量进行配发血;5(配血前，先复查受血者和供血者ABO血型(正、反定型)、Rh(D)血型和抗筛，并报告其结果;6(在电子病历或急诊医生工作站中，检查临床输血五项的执行情况;7(输注全血、浓缩红细胞、洗涤红细胞、浓缩白细胞等患者应进行交叉配血试验，其方法:采用盐水配血试验、凝聚胺法。
二、盐水配血试验标准操作程序【方法原理】本法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO不配合性。
当受血者血清(浆)和供血者红细胞经混合并离心后，如有ABO不配合问题，就会很快显示出来。
【标本采集和处理】1(标本采集:常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
2(标本采取时间:要求受检者血样一定要在输血前48h(抗筛是48h)内采集，血样必须是新近的，无溶血现象。
【试剂】1(抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体长春博德)2(Anti-D (IgM) Biotest。
血型鉴定、交叉配血操作规程
⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。
5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。
备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。
⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。
【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。
【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。
【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。
实验三血型鉴定(交叉配血)
盐水介质法
原理及目的
交叉配血试验是指受血者血清加供血者红细胞悬液;供血 者血清加受血者红细胞悬液，同时进行凝集试验。前者称 主试验，后者称副试验。其目的是验证供者与受者ABO血 型鉴定是否正确，防范引起溶血性输血反应。此外，也可 检出ABO血型系统的不规则凝集素以及发现ABO系统以外 的其他血型抗体。
3.分别混匀，低速离心约2 分钟，轻轻摇匀，观察结果。 4.结果判定： 同型配血，主测、次测均不凝集，表示无配血禁忌，可以
输血； 异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给 少量。输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新 复查血型或追查其原因。
患 者
献 血 者
交叉配血试验
主侧配血用患者血清与供试剂和器材生理盐水 小试管、尖嘴滴管、离心机、试管架、显微镜等
操作步骤
1.取受血者和供血者血液各2ml，注入一清洁干燥试管内， 按常规方法分离血清。同时留数滴滴加于含少量生理盐水 的小试管内，制成5％的红细胞生理盐水悬液。注意要分 别标明供血者与受血者的血液管、血清管、红细胞悬液管 的姓名。 2.另取清洁试管2支，标明主测和次测。主测：受血者血清 1 滴加供血者红细胞悬液1滴。次测：供血者血清1滴加受 血者红细胞悬液1滴。
主
者红细胞进行试验
侧
次
次测配血
侧
供血者血清与患
者红细胞进行试验
交叉配血的要求
主侧配血要求：
绝对不可以有凝集或溶血
凝
现象。
集
次测配血要求：
供血者血清加受血者红细
胞在允许范围内，可以有 凝集现象，但不可以有溶
不
血。
凝
集
交叉配血试验结果图例
无溶血 无凝集
交叉配血标准操作规程
交叉配血标准操作规程（抗人球蛋白法）一、目的：为规范交叉配血试验的技术操作,保证临床输血安全有效，特制定本规程。
二、适用范围适用于输血科进行交叉配血试验。
三、职责输血科技术人员负责交叉配血试验。
四、试剂及材料（一）试剂:抗人球蛋白检测卡（西班牙Diagnostic Grifols,S。
A公司生产）(二）设备：戴安娜专用离心机(型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器（5—50ul）、普通离心机、玻璃试管、生理盐水等五、标本要求：（一)抽取受血者抗凝(抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml, 在3000r/min条件下离心5分钟备用。
（二）标本保存:血液样本必须密封,2—8℃保存7天。
（三）用于交叉配血必须是2-8℃保存3天以内的标本。
六、操作步骤：（一)交叉配血前，先复检患者和献血者ABO和Rh血型.（二)实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于DG SPIN专用离心机离心9分钟左右,取出待用。
（三）在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名或住院号、主侧和次侧,撕掉配血卡上的封条.（四)取试管两支，分别配制患者和献血者红细胞悬液（浓度为1％）待用。
）RN36837 8FE5 迥532903 8087 肇(五）交叉配血：主侧：用定量加样器加入献血者1％的红细胞悬液50ul +患者血清或血浆25ul ；次侧：用定量加样器加入患者1％的红细胞悬液50ul + 献血者血浆25ul。
（六)将卡放入DG THERM孵育箱15分钟,移出放入离心机9分钟，取出观察结果.七、结果观察：(一)主侧和次侧均不凝集，细胞沉于反应卡的底部,配血相合，可以输血(二)主侧或次侧出现凝集,细胞悬挂于卡的中间或上部，配血不相合，不可以输血（三)若输注血液为红细胞，则只需主侧配血相合。
微柱卡式法凝集强度描述。