沃氏葡萄球菌的分离与鉴定
牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定
摘要：采用金黄色葡萄球菌检测方法从牙膏中分离出一种葡萄球菌，应用VITEK 2全自动微生物分析系统鉴定为沃氏葡萄球菌，通过对其形态和生化特性进行鉴定，以期为今后沃氏葡萄球菌的深入研究提供参考依据。
关键词：葡萄球菌；分离；鉴定；生化鉴定
葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。
1.2 仪器和设备
所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。
1.2 方法
检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为：
1.2.1 样品的制备称取10g样品，加到装有玻璃珠及90ml灭菌生理盐水的三角烧瓶中，充分振荡均匀，静置15min。用其上清液作为1：10的检液。
1.2.2 增菌取1：10稀释的样品接种到90ml SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。
1.2.3 分离从增菌液中取1-2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，置36℃±1℃培养24h-48h。
1.2.4 纯化挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。
1.2.5 染色镜检挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。
2 结果与分析
2.1 菌落观察
菌落在Baird Parker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。
2.2 革兰氏染色镜检
将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。
2.3 甘露醇发酵试验
将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。
2.4 血浆凝固酶试验
血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。
2.5 VITEK 2生化鉴定
将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK 2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。生化编码为000004010060271，判定为沃氏葡萄球菌（可能性为94%），具体生化结果见表1。
表1 沃氏葡萄球菌VITEK 2鉴定结果
生化名称结果生化名称结果AMY 苦杏仁苷- URE 尿素酶+
PIPLC 磷脂酰磷脂酶C + POLYB 多粘菌素B耐受性
dXYL D-木糖- dGAL D-半乳糖-
ADH1 精氨酸双水解酶1 - dRIB D-核酸-
BGAL β-D-半乳糖苷酶- ILATK L-乳糖盐产碱-
AGLU α-葡萄糖苷酶- LAC 乳糖-
APPA 丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸
芳胺酶
- NAG N-乙酰-D-氨基葡萄糖-
CDEX 环式糊精- dMAL D-麦芽糖-
AspA L-天冬氨酸芳胺酶- BACI 杆菌肽耐受-
BGAR β-半乳糖吡喃糖苷酶- NOVO 新生霉素耐受-
AMAN α-甘露糖苷酶- NC6.5 6.5%NaCl生长+
PHOS 磷酸酶- dMAN D-甘露醇+
LeuA 亮氨酸芳胺酶- dMNE D-甘露糖-
ProA L-脯氨酸芳胺酶- MBdG 甲基-B-D葡萄糖吡喃苷-
BGURr β-葡萄糖醛酸酶+ PUL 支链淀粉-
AGAL α-半乳糖苷酶- dRAF D-棉子糖-
PyrA 焦谷氨酸芳胺酶- O129R O/129耐受+
BGUR β-D-葡萄糖醛酸酶- SAL 水杨素-
AlaA 丙氨酸芳胺酶- SAC 蔗糖+
TyrA 酪氨酸芳胺酶- dTRE D-海藻糖+
dSOR D-山梨酸- ADH2s 精氨酸双水解酶2 +
OPTO 奥普托欣耐受+
3 讨论
葡萄球菌属主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是医院感染中的重要病原菌。在牙膏卫生指标中，金黄色葡萄球菌是必检项目之一，对沃氏葡萄球菌还没有相应的检测要求。沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，且其治病机制可能与该菌分解唾液和龈沟液中的尿素产生氨，增加龈下牙石的沉积，以及对牙周成纤维细胞的抑制作用有关。本研究在牙膏中检出沃氏葡萄球菌，且经VITEK 2全自动微生物鉴定系统鉴定为尿素酶反应阳性，牙膏中沃氏葡萄球菌污染是否可直接导致口腔疾病还有待进一步研究。
牙膏是人们生活中不可缺少的日用品之一，而宾馆用小牙膏的需求也随着旅游业的飞速发展而快速加大。在牙膏的生产过程中，往往会添加一定量的防腐剂，从而抑制牙膏原料中残留微生物的增殖和防止牙膏在使用过程中的细菌污染。但是，防腐剂添加不当或不均匀不能起到很好的抑菌作用，这给人们在使用过程中带来极大的安全隐患。因此，牙膏生产企业应加强安全卫生意识，提高自身生产质量和管理水平，避免因产品质量问题而影响到人们的身体健康。
葡萄球菌属检验
1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡
萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名 凝固 酶触酶溶血 硝酸 盐 海藻 糖 半乳糖 苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚 种 +++++- 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+--- 施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND 中间葡萄球菌++d+++ 海豚葡萄球菌++++-ND S.lutrae++++++ 猪葡萄球菌d+-++- 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
链球菌和葡萄球菌分离鉴定
青岛农业大学 兽医微生物学课程论文 题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定 姓名： 学院：动物科技学院 班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新 二0一四年四月十二日
链球菌和葡萄球菌分离鉴定 班 2012 指导教师温建新 摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。 关键词：葡萄球菌；链球菌 引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇. 链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。
儿童金黄色葡萄球菌肺炎的临床治疗分析
儿童金黄色葡萄球菌肺炎的临床治疗分析 发表时间：2016-05-12T09:59:07.450Z 来源：《心理医生》2015年17期供稿作者：李世红 [导读] 黑龙江省双鸭山煤炭总医院金黄色葡萄球菌肺炎是金黄色葡萄球菌引起的急性肺部感染，其病情重，病死率高。 李世红 （黑龙江省双鸭山煤炭总医院黑龙江双鸭山 155100） 【摘要】目的：探讨儿童金黄色葡萄球菌肺炎的临床治疗。方法：对20例金黄色葡萄球菌肺炎患儿临床治疗资料进行分析。结果：20例患儿经治疗痊愈19例，自动出院1例。结论：金黄色葡萄球菌肺炎应用敏感抗菌素治疗，本病容易出现并发症，积极治疗并发症。 【关键词】儿童；金黄色葡萄球菌肺炎；抗菌素治疗 【中图分类号】R720.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）17-0069-02 金黄色葡萄球菌肺炎是金黄色葡萄球菌引起的急性肺部感染，其病情重，病死率高。多见于婴幼儿及新生儿。占社区获得性肺炎的5%以下；占院内获得性肺炎的10%～30%，仅次于铜绿假单胞菌，特别是在有气管插管和机械通气及近期胸腹部手术的患者。对2012年1月～2015年6月收治的确认断金黄色葡萄球菌肺炎患儿20例临床治疗方法分析如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 本组收治的20例金黄色葡萄球菌肺炎患儿，其中男12例，女8例。年龄最小3个月，最大14岁，平均年龄7岁。临床表现：发热19例，其中高热10例，中度发热9例；寒颤5例，呼吸困难5例，咳嗽20例，胸痛4例，肝肿大4例。周围血白细胞计数明显增高，可达(15～30)×109/L，中性粒细胞增加，白细胞内可见中毒颗粒。白细胞总数减低甚至<1.0×109/L提示预后严重。血沉增快，前降钙素、C反应蛋白增高。合格痰涂片行革兰染色可见大量成堆的革兰阳性球菌和脓细胞。痰、胸腔穿刺液、支气管镜灌洗液培养，或血培养可获金黄色葡萄球菌而确诊。 1.2 方法 约90%的金葡菌株产β-内酰胺酶，对甲氧西林敏感的金葡菌(MSSA)治疗首选耐青霉素酶青霉素如苯唑西林，无并发症者疗程为2～3周，有肺脓肿或脓胸并发症者治疗4～6周，继发心内膜炎者疗程为6周或6周以上。对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)肺炎，首选糖肽类抗生素如万古霉素或去甲万古霉素治疗：前者10mg/kg，6小时静滴一次；或20mg/kg，每12小时一次。后者剂量为16～32mg/kg，分2次静滴[1]。糖肽类抗生素存在潜在性耳肾毒性，据文献报道万古霉素引起的肾毒性的发生率在5%～25%，故疗程中应监测血药浓度，定期复查血肌酐、肌酐清除率，并注意平衡功能和听力监测。重症MRSA肺炎合并肾功损害者，应根据肾功能调整糖肽类剂量。 2.结果 20例金黄色葡萄球菌肺炎患儿经治疗痊愈19例，自动出院1例。并发肺脓肿、脓气胸者1例预后较好，经3～6个月可基本治愈。 3.讨论 金黄色葡萄球菌是定植在人皮肤表面的革兰阳性菌，存在于25%～30%健康人群的鼻前庭。作为条件致病菌，金葡菌可以引起广泛的感染，从轻微的皮肤感染到术后伤口感染、严重的肺炎和败血症等。金葡菌含有血浆凝固酶，它是致病性的重要标志。该酶使血浆中纤维蛋白沉积于菌体表面，阻碍机体吞噬细胞的吞噬，即使被吞噬后细菌也不易被杀死，并有利于感染性血栓形成。金葡菌常寄居于正常人的鼻前庭和皮肤等处，在寄居部位营共生生活[2]。经吸入或血行途径分别引起原发性支气管源性金葡肺炎和血源性金葡肺炎。支气管源性金葡肺炎炎症开始于支气管，向下蔓延到毛细支气管周围的腺泡形成按肺段分布的实变，4日左右液化成脓肿，由于细支气管壁破坏引起活瓣作用，可发展而形成肺大疱。胸膜下小囊肿破裂则诱发脓气胸。血源性金葡肺炎经常由静脉系统感染性血栓或三尖瓣感染性心内膜炎赘生物脱落引起肺部感染性栓塞以后形成多发性小脓肿而致。金葡菌致病特点之一是引起化脓，造成组织坏死和脓肿。因此，无论是吸入或血行性金葡肺炎均可并发肺脓肿和脓胸。 社区获得性金葡菌肺炎因感染途径而异，主要为吸入性和血源性。院内获得性金葡菌肺炎与气管插管或呼吸机辅助呼吸相关。多见于婴幼儿及新生儿，在出现上呼吸道感染后1～2日，突然寒战、高热、咳嗽，伴黏稠黄脓痰或脓血痰、呼吸困难、胸痛和发绀等。有时可有猩红热样皮疹及消化道症状及呕吐、腹泻、腹胀等明显感染中毒症状甚至休克[3]。肺部体征出现早，有散在湿性啰音，并发脓胸或脓气胸时，呼吸音减弱或消失。感染性栓子脱落引起肺栓塞可伴胸痛和咯血。由心内膜炎引起者体检可有三尖瓣区收缩期杂音、皮肤淤点、脾大。 本病起病急，病情严重，进展快。一般先有数天的上呼吸道感染症状，然后突起高热，多呈弛张热型，但新生儿和体弱儿可低热或无热。咳嗽，痰呈黏液脓性，不易咳出。呼吸困难，缺氧明显，可见鼻翼扇动，青紫及三凹征。中毒症状显著，患者面色苍白、嗜睡或烦躁不安，重症可出现面色发灰、皮肤发花、肢端冰凉、心音低钝、心率快、血压下降等休克表现。肺部体征出现早，早期即有呼吸音减弱和中细湿啰音。病变进展迅速，极易发展成肺脓肿、脓胸、脓气胸、肺大泡等。皮肤可出现各种类型皮疹如猩红热样或荨麻疹样皮疹等。周围血白细胞总数多明显增高，中性粒细胞增高伴核左移和中毒颗粒。婴幼儿和重症患儿可出现外周血白细胞降低，但中性粒细胞百分比仍较高。X线检查早期可见肺纹理增粗或小片状浸润影，病变发展迅速，甚至数小时内出现脓胸、脓气胸、肺大泡等相应的征象，因此在短期内应重复摄片。 根据临床症状、体征和X线胸片或CT扫描检查可确立肺炎诊断。当肺炎进展迅速，很快出现肺大疱、肺脓肿和脓胸，有助于诊断[4]。积极进行各种途径的病原学检测十分重要。利奈唑胺为恶唑酮类抗革兰阳性球菌的新型合成抗菌药，对耐药球菌包括MRSA在内有良好抗菌活性，CA-MRSA肺炎也可选用利奈唑胺。替考拉宁对多重耐药的革兰阳性球菌具有显著的抗菌活性，严重不良反应罕见。其他治疗根据病情而异，止咳化痰、拍背排痰以保持呼吸道通畅、吸氧和对症支持治疗等。金葡菌肺炎应识别其潜在病因和并发症，积极治疗并发症，有脓胸并发症者应行胸腔穿刺，多数病例需胸腔闭式引流。部分需胸腔镜行胸膜剥脱。 【参考文献】 [1]齐晓红，叶惠芬，张燕青.医院内获得性金黄色葡萄球菌肺炎危险因素病例对照研究[J].中华医院感染学杂志， 2001，11(5).10. [2]邹海瑞，洪旭初.医院内获得性耐甲氧西林黄色葡萄球菌肺炎的诊断与治疗[J].实用诊断与治疗杂志，2004.18（6）：525-527. [3]肖小六.万古霉素联合用药治疗金葡菌肺炎并败血症临床分析[J].中国现代医生，2009.47（4）：100-101.
金色葡萄菌培养
由于病原性球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌（pyogenic coccus）。化脓性球菌分为G+球菌和G-球菌。前者有葡萄球菌、链球菌和肺炎球菌；后者有淋球菌和脑膜炎球菌等。 葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是人体正常菌群。 三种葡萄球菌的主要性状区别 ————————————————————————————————— 主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生性葡萄球菌—————————————————————————————————色素金黄色白色白色或柠檬色 血浆凝固酶+(-) - - 甘露醇发酵+ - - 溶血+ - - 耐热核酸酶活性+ - - 磷壁酸核糖醇型+ - + 磷壁酸甘油型- + + 蛋白A（SPA）+ - - 致病性强弱或无无————————————————————————————————— 一、生物学性状 （一）形态与染色 葡萄球菌直径约0.8～1.0μm，呈葡萄串状排列，革兰染色阳性。 （二）培养和生化反应 普通培养基上生长良好，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色。表皮葡萄球菌呈白色。腐生性葡萄球菌呈白色或柠檬色。于血液琼脂平板上培养，致病性葡萄球菌菌落周围可形成完全透明溶血环（β溶血），在液体培养基中呈混浊生长。葡萄球菌分解甘露醇产酸在鉴定葡萄球菌致病性方面有一定意义。 （三）抗原构造 1．葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A, SPA）：SPA是存在于90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁表面的一种蛋白质，为完全抗原，能与人及多种哺乳动物的IgG1、IgG2和IgG4分子的Fc段非特异性结合，而结合后的IgG分子
实验 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定 一、实验目的 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害，我们要分离出它们并研究。 二、实验原理 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8um左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1—2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10—15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，V—P反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 三、实验材料和设备 1.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（13%NaCl）：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠130g，琼脂15g，蒸 馏水1000ml，121℃灭菌20min后倒平板。 肉汤培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。 甲苯胺兰-DNA平板 2.试剂 磺胺类药物、革兰氏染液 3.仪器和设备 显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环。 四、实验方法 金黄色葡萄球菌的分离： 1.称取5g土样，在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，再加入200ul 磺胺类药物，振荡10min，使土样充分混匀。利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。 2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中，30℃，200rpm，24h。 3.取培养好的菌液，按梯度稀释法稀释土壤悬液，依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后，分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃培养箱中培养24h。利用高盐培养基抑制其他细菌的生长，从而分离金黄色葡萄球菌。 金黄色葡萄球菌的鉴定： 1.菌落形态：菌落较小，较湿，较透明，边缘整齐，隆起。
葡萄球菌属检验
文件页码：1/3 1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖半乳糖苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚种+ + + + + - 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+ - + - - - 施氏葡萄球菌聚集亚种+ + + + - ND 中间葡萄球菌+ + d + + + 海豚葡萄球菌+ + + + - ND S.lutrae + + + + + + 猪葡萄球菌 d + - + + - 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制
第一节 葡萄球菌
第三篇主要的病原微生物 第十三章病原细菌 [ 第一节葡萄球菌 葡萄球菌（StapHylococcus）广泛分布于自然界，如空气、水、土壤及动物的体表，是最常见的化脓性细菌之一，80%以上的化脓性疾病由本菌引起，主要引起动物的组织、器官和创伤的感染和化脓，严重时可引起败血症或脓毒败血症。 一、生物学特性 （一）形态与构造葡萄球菌呈球形，排列成堆，如葡萄串状(图13-1)。在脓汁或液体培养基中，常排列成双球或短链状。本菌无鞭毛，一般不形成荚膜，革兰氏染色呈阳性。 （二）培养本菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，若加入血液或葡萄糖，生长更为繁茂；在肉汤培养基中呈均匀浑浊生长。在普通琼脂平板上形成圆形、隆起、湿润、边缘整齐、表面光滑、有光泽、不透明的菌落，不同型菌株能产生不同的脂溶性色素，使菌落呈不同的颜色，据此过去把本菌分为金黄色、白色和柠檬色葡萄球菌。多数致病性葡萄球菌产生溶血素，在血液琼脂平板上形成明显的溶血环，非致病性的葡萄球菌则无溶血现象。 葡萄球菌的生化反应并不恒定，常因菌株及培养条件而异。多数能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。致病菌株多能分解甘露醇，还原硝酸盐，不产生靛基质。 （三）抗原构造与分类葡萄球菌抗原构造复杂，已发现有30种以上。较重要的有蛋白质抗原和多糖类抗原两类。蛋白质抗原主要为A蛋白（SPA），是大多数金黄色葡萄球菌共有的一种特异的表面抗原，存在于细胞壁的表面，具有与人和各种动物血清IgG分子的Fc段牢固结合的特性。此种结合是非特异性的，这一性质已被广泛应用于免疫诊断技术（如第十一章第二节中的协同凝集试验）。多糖类抗原可用于葡萄球菌的定型。 根据产生的色素和生化反应，本菌可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌三种。其中金黄色葡萄球菌多为致病菌，表皮葡萄球菌偶尔致病，而腐生葡萄球菌一般不致病。致病的金黄色葡萄球菌能产生金黄色色素、溶血素、甘露醇分解酶及血浆凝固酶（图13-2）。一般来说，凝固酶阴性者无致病性。 （四）抵抗力葡萄球菌对外界环境的抵抗力强于其他无芽孢细菌，在干燥的脓汁中可存活15～20d，80℃30min才被杀死，在5%的石炭酸、0.1%升汞中10～15min死亡。对碱性染料较敏感，如1∶100000～200000稀释的龙胆紫能抑制其生长。对青霉素、庆大霉素高度敏感，由于广泛使用抗生素，其耐药菌株不断增加。 二、致病性 葡萄球菌的致病力主要是毒素和酶，致病性菌株能产生溶血毒素、杀白细胞毒素、肠毒素、血浆凝固酶等。所致的疾病为畜禽的化脓性疾病，如创伤感染、
基本常规医疗流程答案
太原九龙泌尿外科医院基本医疗流程 基本医疗流程 本流程根据医疗常规接诊程序设计，适用于医院日常规范化医疗服务培训、运作、指导。 一、医疗行为准则 ·以病人为中心，医患合作，“一对一”平等交流； ·以主诊为中心，首诊负责，各科配合，流程运作，规范医疗； ·仁爱行医，诚信待人，真诚服务，体贴关爱。 ·交流“五不”：与患者交谈中，不讲不文明的生硬话、不讲与病无关的题外话、不讲不留余地的过头话、不讲不顾后果的刺激话、不讲不负责任的议论话。 ·三个“留意”：留意患者及亲属的情绪变化、留意他们对疾病认识和治疗的期望、留意自我情绪控制和态度。 ·“六心”服务：听主诉及解释耐心；观察、检查细心；语言上贴心；主动帮热心；询问上爱心；行为表达责任心。 二、医疗服务模式 ·链式服务：建立环环相扣的“健康产业”医疗服务链，全程导医，全程陪护，链式服务。 ·行为模式：如图示（附1） 三、医疗责任与义务 1、责任：所有医护人员在医疗服务过程中，均负有医疗质量安全责任；负有医院文化 传播、医疗服务宣传、品牌形象维护与推广责任；负有维护医院及社会大局利益和患者合法权益之责任。 2、义务：所有医护人员在医疗服务过程中必须对患者履行“观察、注意、告知”等法律义 务，为患者提供满意的人文关怀服务。其中： ·观察：认真观察患者生命体征和病情变化；详细记录病情变化与病历，及时分析处置。 ·注意：医师不能只限于常规项目检查，同时必须注意患者特殊症状、体征的专项检查。 不能仅仅只听主诉，只限于单病种诊断，要提高对疾病鉴别诊断水平。 ·告知：常规检查、治疗、手术预先告知；病情变化、特殊处置、治疗方式预先告知；危重病人抢救治疗要事先告知患者家属确认、签字。 3、岗位责任分工
几种常见葡萄球菌的性状比较
几种常见葡萄球菌的性状比较 葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。葡萄球菌在自然界中分布比较广泛，在空气、水、土壤及物体表面均存在，是最常见的化脓性球菌，也是医院交叉感染的重要来源。 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一种重要的食源性致病菌，是造成人类食物中毒的重要致病菌之一，在历年的食物中毒调查中，该菌占整个细菌性食物中毒的第1位或第2位[1-2]。金黄色葡萄球菌是食品检测中一个重要的检测项目，但由于葡萄球菌属具有很多共同的特性，在检验工作中难以迅速识别。本文就日常检验工作中检出的3种葡萄球菌（金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌和中间葡萄球菌）的部分生物性状进行比较，旨在为金黄色葡萄球菌的检验工作提供一定的参考。 1 试验菌株 3种菌株均为检验过程中分离的菌株，且经VITEK 2 全自动微生物分析系统鉴定，分别为金黄色葡萄球菌（生化编码分别为050402022761231，可能性为99%）、沃氏葡萄球菌（生化编码分别为000004010060271，可能性为94%）和中间葡萄球菌（生化编码分别为030412147723231，可能性为99%）。 2 试验方法 将3种菌株分别划线接种于营养琼脂、Baird-Parker平板、血平板和科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上，同时进行革兰氏染色镜检和血浆凝固酶试验。 3 结果 3种菌株部分生物性状结果见下表： 表1 3种菌株的部分生物性状 营养琼脂金黄色菌落白色菌落白色菌落 Baird-Parker平板黑色菌落，圆润， 周围有晕圈 黑色菌落，圆润， 周围有晕圈 黑色菌落，圆润， 周围有晕圈 血平板黄色菌落，圆润， 溶血 灰白色菌落，圆润， 不溶血 白色菌落，圆润， 溶血 革兰氏染色镜检G+，葡萄样球菌G+，葡萄样球菌G+，葡萄样球菌血浆凝固酶试验阳性阴性阴性 科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板紫红色菌落，周围 有晕圈 蓝绿色菌落蓝色菌落 3.1 营养琼脂平板 葡萄球菌对营养要求不高，在营养琼脂平板上生长良好，形成圆形凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的菌落。金黄色葡萄球菌在营养琼脂上基本为金黄色菌落，但有时金黄色不是很明显，其余葡萄球菌为白色菌落。 3.2 Baird-Parker平板 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上为圆形，直径2mm-3mm，颜色呈灰色或黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样
葡萄球菌属检验
精心整理1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2.标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌 O/F试 ”为3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。
精心整理 应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。 6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。 7.临床意义 金黄等， 等。 MRSA 物。 8. [1] [2] [3]
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定(4)
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定（食品检验） 1.金黄色葡萄球菌检验程序： 2.金黄色葡萄球菌鉴定程序： （1）：金黄色葡萄球菌在Baird-parker平板上菌落直径为2mm-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一周浑浊带，外围有一层透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 （2）：染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。
（3）：血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。取 新鲜配置血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。 （4）：结果判定：符合（1）、（2）、（3），可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌肺炎CT征象
金黄色葡萄球菌肺炎CT征象 金黄色葡萄球菌肺炎是金黄色葡萄球菌引起肺部急性炎症。临床病情严重，细菌耐药率高，预后多较风险。 【发病机理和病理】金黄色葡萄球菌肺炎可发生于任何年龄，以5~15岁儿童和50~80岁的老年人多见。常年发病，以冬、春季最多。正常人群体内和体表多处有葡萄球菌存在而不引起疾病。 1、吸入性感染:鼻腔是最上要的带菌部位。当人体的免疫力下降，吸入含有大量的定植于鼻咽部或气道的葡萄球菌，使细菌在肺部繁殖，产生化脓性病变。吸入性葡萄球肺炎常呈大叶性分布或广泛的、融合性的细支气管肺炎。张力性肺气囊肿，尤多见儿童、青少年。位于表浅的肺气囊肿若张力过高，可破入胸膜腔形成气胸、脓气胸。成人患者有20%~30%呈单发或多发性脓肿，内含大量的葡萄球菌、红细胞、白细胞及坏死组织。 2、血源性感染：血源性葡萄球菌肺炎继发于葡萄球菌菌血症或败血症由细菌栓子经血循环至肺而引起。原发感染常为皮肤疖痈、毛囊炎、骨髓炎、蜂窝炎、伤口等。病变以多发性、周围性肺浸润为特征。菌拴引起多发性肺小动脉栓，导致双肺多发性化脓性炎症，进而组织坏死形成多发性肺脓肿，并可累及胸膜产生脓胸或脓气胸。少数病例则由血行播散直接引起脓胸。 【临床表现】起病急骤，病情的发展迅速。寒战、高热，体温高达39℃~40℃，呈稽留热型。大汗淋漓，并可现胸痛、呼吸困难和发绀。有显著的毒血症状，全身肌肉、关节酸痛，体质衰弱，精神萎靡，甚至神志模糊，呼吸脉搏增快。常并发循环衰竭。咳嗽于初期时多较轻微，以后咳黄色粘稠痰，随即转为脓性痰或脓血性痰。 老年病人及患慢性疾病的患者及某些不典型病例。呈亚急性经过，起病较缓慢，症状较轻，低热、咳少量脓性痰。有时甚至无临床症状。 早期可无特殊体征，常与严重的中毒症状和呼吸道症状不平行，其后可出现双肺散在湿啰音。病变融合则呈肺实变体征:叩诊浊音，呼吸音减弱或消失。脓胸时可出现胸腔积液的体征。 【影像表现】疾病早期CT改变不明显。仅有小片状肺部浸润。病变发展极快。出现大叶性炎症改变或肺段性浸润，常以双下肺野多见。随后病灶内或其周围出现空腔或蜂窝状透亮区，并可发展为肺脓肿。 肺浸润、肺脓肿、肺气囊肿和脓胸或脓气胸为金黄色葡萄球菌肺炎的四大影像征象，在不同类型后不同病期以不同的组合表现（图3-135）。多发性小脓肿、肺气囊肿和脓胸或脓气胸为婴幼儿金黄色葡萄球菌肺炎的特征。且早期临床表现与胸部CT表现不一致，即临床症状已很严重，而肺部CT表现不明显（图3-136）（图3-137）。但病变发展极快，可于数小时发展为多发性肺脓肿、肺气囊肿、脓胸，并可产生张力性气胸、纵隔气肿。金黄色葡萄球菌肺炎的另一特征呈迁徙性，当临床表现已明显缓解时肺气囊肿仍可存在数月，最后可自然痊愈。（图3-138）（图3-139）（图3-140） 血源性葡萄球菌肺炎早期在双肺的周边部出现大小不一的斑片状或团块状阴影，边缘模糊，直径为1~3cm，有时类似于转移性肺癌，随病变发展，病灶周围出现肺气囊肿，并迅速发展成肺脓肿。 【鉴别诊断】血源性金黄色葡萄球菌性肺炎具有一些临床和影像学特征：1.起病急。临床症状重。2.表现多样，多种影像表现可同时出现，如斑片状影、小点状影、结节影、肺气囊等可在CT片上同时见到；3.病灶比较广泛，多个肺野出现同时受累；4.容易在短期内出现散在的肺气囊或多发的脓肿病灶；5.病灶易变，短期内复查CT可见病灶的形态、部位、大小发生变化。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 生物学特性： 1.球菌，直径0.8-1.0μm左右，显微镜下排列成葡萄串状 2.无芽胞、鞭毛，无荚膜 3.革兰氏染色阳性 4.化能异养菌，呼吸代谢和发酵代谢 5.高度的耐盐性（10-15%NaCl肉汤中生长） 培养特性： 1.营养要求不高 2.需氧或兼性厌氧，在好氧环境下生长最好 3.最适生长温度37°C，干燥环境下可存活数周 4.最适生长pH 7.4 5.菌落光滑、低凸、闪光、奶油状、并且有完整的边缘。 6.血平板菌落周围形成透明的溶血环 生化特性： （1）可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 （2）金黄色葡萄球菌在厌氧条件下分解甘露醇产酸（非致病性菌则无此现象） （3）许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
（4）具有较强的抵抗力，磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素 等高度敏感 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶 体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素可破坏人的白细胞和巨噬细胞 c.血浆凝固酶当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维 蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡 萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来 作为依据鉴定金黄色葡萄球菌 e.肠毒素金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠 毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。 培养基菌落形态 甘露醇氯化钠琼脂 金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有黄色环，菌落直径0. 7?lmm 卵黄氯化钠琼脂 金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有卵磷脂分解的乳浊圈，菌落直径l?2mm
葡萄球菌属检验
蒈1．概述 蒅葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 芀2.标本类型 袈血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 薈3.鉴定 袆3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 羂3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 袁3.3生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 蚈3.4鉴别要点 羃3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 蚄3.4.2与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 蚀3.4.3与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 螈3.4.4凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 莄表1凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 膂菌名葿凝固 酶 袇触 酶 螅溶 血 袄硝酸 盐 膈海藻 糖 羇半乳糖 苷酶 膆金黄色葡萄球菌金黄色亚种莂+ 芁+ 肇+ 莃+ 肄+ 羀- 肇金黄色葡萄球菌厌氧亚种螄+ 蒁- 蝿+ 膇- 膄- 芃- 螁施氏葡萄球菌聚集亚种芇+ 薅+ 蚁+ 薀+ 莇- 羆ND 莃中间葡萄球菌荿+ 蒇+ 肃d 袁+ 膈+ 薆+ + - ND
金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别
品种名称：金黄色葡萄球菌显色培养基 品种编号：CRM012 英译名称：Chromogenic Staph. aureus Agar 金黄色葡萄球菌显色培养基用途：用于金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别。 金黄色葡萄球菌显色培养基使用原理： 蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;显色剂与金黄色葡萄球菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在无色透明平板上，金黄色葡萄球菌产生粉红-紫红的边缘整齐菌落;抑菌剂可抑制杂菌的生长。 操作步骤： 1、称取67.4g培养基干粉，加入1L蒸馏水或去离子水(可按比例扩大增或缩小)，搅拌加热煮沸至完全溶解(避免过度加热)，无需高压灭菌，冷至50℃左右倾注平板备用; 2、待检样品按照相应的标准(GB、SN、FDA等)进行取样及前增菌，挑取一环增菌液划线接种于制备好的该培养基平板上，于36±1℃培养18～24 h，观察结果，挑取典型可疑菌落进行鉴定试验。 结果判断： 菌属菌落特征 金黄色葡萄球菌粉红-紫红色菌落 其它菌蓝绿色或无色或受抑制 金黄色葡萄球菌显色培养基质量控制： 外观：流动性良好的淡黄色粉末，制备好的平板呈浅黄色透明固体培养基。 生物学：下列菌株接种后于36±1℃培养24h生长情况如下表： 质控菌菌落特征 金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长良好，粉红-紫红色 单核增生李斯特菌ATCC19115 蓝绿色 表皮葡萄球菌(CMCC(B)26069 受抑制
粪肠球菌ATCC29212 受抑制 普通变形杆菌CMCC(B)49027 受抑制 规格：67.4克 /瓶，可配置1L的培养基。 贮存： 脱水培养基：2～8℃，在标签上注明的保质期内使用。制备好平板：2～8℃，最多保存一周。
葡萄球菌属鉴定
葡萄球菌属鉴定 一、目的 对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定 治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系； （4）进行学术交流。 二、原理 根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等 将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。 三、标本 不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、 血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。四、试剂及器材 革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接 种针（环）、酒精灯等。 五、鉴定程序 标本 涂片、染色 痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物
平皿 可凝菌落 纯培养 涂片、染色、触酶实验 葡萄状（G+）、触酶（+） 血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验 甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—） 厌O2均+） 血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—） 新生霉素 S R 表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌 六、质量控制 每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。 七、实验室解释及临床意义
1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为院 内交叉感染的重要因素。 2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。 3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。 八、安全防护措施 在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼 罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实 验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。 九、标本处理 废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。 十、参考文献 诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程： 取一环标本四区划线接种平板（如为粪便标本接种SS,MAC平板） 培养18-24小时后取一区菌落革兰染色，报告为革兰阳性球菌/革兰阴性球菌/革兰阳性杆菌/革兰阴性杆菌，注意区分细菌和真菌 一般情况下不会给你们做革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌 革兰阳性球菌鉴定流程： 先做3%触酶试验：阳性的为葡萄球菌或微球菌，阴性为链球菌或肠球菌 葡萄球菌和微球菌的区别：葡萄糖OF试验，葡萄球菌为F型，微球菌为O型 所以如果做到一个触酶阳性的革兰阳性球菌都要做下葡萄糖OF试验，DNA酶试验，新生霉素试验，血浆凝固酶试验 链球菌和肠球菌的区别：链球菌高盐和胆汁七叶苷试剂均为阴性，而肠球菌都为阳性。 链球菌属内区别：本来可以通过溶血来区分一些的，但是由于实验室的平板αβ溶血比较难区分 所以如果做到一个触酶阴性的革兰阳性球菌都要做下高盐，胆汁七叶苷，杆菌肽，奥普托欣，CAMP 如果做到一个奥普托欣敏感的革兰阳性球菌再加做胆汁溶菌试验和菊糖试验（阳性为变红）可判定为肺炎链球菌 革兰阴性杆菌鉴定流程： 先做氧化酶试验： 氧化酶阴性的革兰阴性杆菌都要做下KIA，MIU，葡磷两支(做MR，VP)，苯丙，枸橼酸盐，硝还，蛋白胨水（做吲哚试验），赖氨酸，鸟氨酸，氨对 如果KIA结果为A/A或者K/A的应为肠杆菌科细菌，如上面向个反应还不能区分细菌到种根据教科书307页加做试验。 一般情况下只会给你们做大肠埃希菌，志贺菌属（四种），沙门菌属（甲副，乙副，伤寒），弗劳地枸橼酸杆菌，肺炎克雷伯，产酸克雷伯，产气肠杆菌，阴沟肠杆菌，普通变形杆菌，奇异变形杆菌，沙雷菌属，摩根菌属，普罗威登斯菌属。 如果KIA结果为K/K应怀疑为不动杆菌属或者嗜麦芽窄食单胞菌：这两个菌区分可通过麦芽糖和赖氨酸试验区分， 如为氧化酶阳性，要做葡萄糖的OF试验（用非发酵），硝还产气，精氨酸双水解酶，一般情况下只有两种菌给你们做一个是铜绿假单胞菌，一个是粪产碱杆菌， 真菌给你们做的一般情况只有白色念珠菌和新生隐球菌，通过墨汁负染，芽管试验，厚膜孢
沃氏葡萄球菌的分离与鉴定
牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定 摘要：采用金黄色葡萄球菌检测方法从牙膏中分离出一种葡萄球菌，应用VITEK 2全自动微生物分析系统鉴定为沃氏葡萄球菌，通过对其形态和生化特性进行鉴定，以期为今后沃氏葡萄球菌的深入研究提供参考依据。 关键词：葡萄球菌；分离；鉴定；生化鉴定 葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。 1.2 仪器和设备 所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。 1.2 方法 检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为： 1.2.1 样品的制备称取10g样品，加到装有玻璃珠及90ml灭菌生理盐水的三角烧瓶中，充分振荡均匀，静置15min。用其上清液作为1：10的检液。 1.2.2 增菌取1：10稀释的样品接种到90ml SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。 1.2.3 分离从增菌液中取1-2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，置36℃±1℃培养24h-48h。 1.2.4 纯化挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。 1.2.5 染色镜检挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。 2 结果与分析 2.1 菌落观察 菌落在Baird Parker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。 2.2 革兰氏染色镜检 将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。 2.3 甘露醇发酵试验 将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。 2.4 血浆凝固酶试验 血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。