实验 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
肉兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验
4522023肉兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验牛群孟庆福黄敏董旭陈小密王华*周孝琼*（龙岩学院生命科学学院福建龙岩364000）摘要为了诊断福建省龙岩市某兔场乳房炎的具体病原，试验对兔脓肿液进行细菌分离纯化培养、革兰氏染色、显微镜观察、自动微生物鉴定系统鉴定、16S rDNA序列测定以及对所分离菌株进行药敏试验和耐药性分析。
结果表明，所分离菌株为金黄色葡萄球菌。
药敏试验结果显示，分离的金黄色葡萄球菌对青霉素G、青霉素钾、氨苄西林、红霉素、庆大霉素和磺胺甲氧嘧啶高度敏感；对磺胺异亚唑中度敏感；对环丙沙星、卡那霉素、克林霉素等6种药物不敏感。
关键词肉兔金黄色葡萄球菌16S rDNA药敏试验文献标识码：A文章编号：1003-4331（2023）02-0017-04Isolation,identification and drug sensitivity test of Staphylococcus aureus from meat rabbitsNiu Qun Meng Qingfu Huang Min Dong Xu Chen Xiaomi Wang Hua*Zhou Xiaoqiong*(School of Life Sciences,Longyan University,Fujian Longyan364000)Abstract In order to diagnose the specific pathogen of mastitis in a rabbit farm in Longyan city,Fujian province,the experiment was conducted to isolate and purify the bacteria from rabbit abscess fluid,observe it with a Gram staining microscope,identify it with an automatic microbial identification system,determine the16S rDNA sequence,and analyze the drug sensitivity and drug resistance of the isolated strains.The results showed that the isolated strains were Staphylococcus aureus.The drug sensitivity test showed that the isolated strains were highly sensitive to penicillin G,penicillin potassium,ampicillin,erythromycin,gentamycin and sulfamethoxazole; moderately sensitive to sulfamethoxazole;It is insensitive to6drugs such as ciprofloxacin,kanamycin and clindamycin.Key words Meat rabbit Staphylococcus aureus16S rDNA Drug susceptibility test葡萄球菌病是由葡萄球菌属致病性葡萄球菌感染引起人和动物多种疾病的总称。
猪金黄色葡萄球菌的分离培养和药敏试验
猪金黄色葡萄球菌的分离培养和药敏试验龚岳【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】3页(P108-110)【作者】龚岳【作者单位】滨海新区塘沽动物卫生监督所,天津滨海新区 300454【正文语种】中文【中图分类】S858.282.61金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，是常见的引起食物中毒的致病菌，常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
金黄色葡萄球菌对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2 mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%~15%氯化钠（NaCl）肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应弱阳性[1]。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
在干燥环境中可存活数月；在空气中存在，但不繁殖。
耐热性强，加热70℃1 h或80℃30 min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%~66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制。
日常生活中，人之间的接触或打喷嚏，被猫、狗咬伤等，尤其是猪群大规模饲养中，如果不注意人和易感动物的交叉感染，都可感染金黄色葡萄球菌。
此外，耐药的金黄色葡萄球菌可能通过食物、水源、毛发和其他接触方式传递给人，对公共卫生造成了严重威胁[2]。
本试验采集患病猪只患处脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便等不同样品，分离培养和鉴定金黄色葡萄球菌，并进行生化试验和药敏试验，研究金黄色葡萄球菌对先锋V、庆大霉素、氯霉素、四环素、青霉素、链霉素和红霉素的耐药性。
细菌分离培养与药敏试验于2016年9月中旬至9月底在天津农学院动物医学实验室进行。
1.2.1 培养皿的准备（1）将30个培养皿清洗干净，并用蒸馏水冲洗、晾干。
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌的分离培养试验
实验金黄色葡萄球菌的分离培养一．实验目的；1．掌握Baird-Parker 培养基的配制方法2．掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法二．实验内容1 原理；Baird-Parker 培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。
但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。
利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。
2 仪器与试剂250ml 三角瓶灭菌锅量筒Baird-Parker 氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤3 操作步骤3.1 培养基配制Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml, 121 C高压灭菌15分钟,冷至50C左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml ，摇匀后倾入无菌平皿。
7.5% 氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g 蒸馏水1000mlph7.4 ）将上述成分加热溶解，调节pH,分装，每瓶225 mL, 121 C高压灭菌15 min。
3.2 增菌及分离培养3.2.1挑取金黄色葡萄球菌接种于7.5%NaCI肉汤培养基内，置于（37C）恒温箱中培养6-8h.3.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板，于36 C±1 C培养18 h〜24h 或45 h 〜48 h。
3.3 观察菌落形态4、结果判定根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类三、实验结果实验金黄色葡萄球菌的染色镜检一．实验目的; 掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。
二．实验内容1 原理; 革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。
2 仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml 将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
实验金黄色葡萄球菌的检验
实验金黄色葡萄球菌的检验实验5金黄色葡萄球菌的检验1目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA 酶。
3实验材料3.1检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4检样程序5操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。
若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
5.1.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。
金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。
3种方法分离鉴定金黄色葡萄球菌
3种方法分离鉴定金黄色葡萄球菌
沈锐;马力;严海元;肖陈;赵壮志
【期刊名称】《食品工程》
【年(卷),期】2024()1
【摘要】通过参加2023年中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-451金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)检测能力验证计划,采用3种快速分离鉴定金黄色葡萄球菌的方法,与国标方法比较,提高了检验检测效率。
分别采用国标法、全自动酶联免疫荧光分析仪法和实时荧光PCR检测法对随机人工污染样品
TC04510042、TC04510204进行金黄色葡萄球菌检验。
TC04510042、
TC04510204均检出金黄色葡萄球菌,3种方法结果一致。
金黄色葡萄球菌采用国标法,同时辅以全自动酶联免疫荧光分析仪法和实时荧光PCR检测法,不仅降低了假阳性率,也缩短了检测时间。
后2种方法可作为大量样品的前筛查及应急检验,对筛查中出现的阳性样本用国标法进行确认,提高了检验检测效率。
【总页数】5页(P84-87)
【作者】沈锐;马力;严海元;肖陈;赵壮志
【作者单位】重庆市永川食品药品检验所;重庆市黔江食品药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.5
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4.奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析
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葡萄球菌的检验实训报告
1. 掌握葡萄球菌的检验方法。
2. 了解葡萄球菌的生物学特性及致病性。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作能力。
二、实验原理葡萄球菌是一类革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界及人体皮肤、黏膜等部位。
其中，金黄色葡萄球菌是引起人类感染的重要病原菌之一，可引起多种局部和全身感染。
本实验通过对葡萄球菌的分离、培养、鉴定和计数，了解其生物学特性及致病性。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验仪器：显微镜、培养皿、培养箱、培养瓶、灭菌锅、试管、无菌水、葡萄球菌标准菌株等3. 实验试剂：葡萄球菌检验试剂盒、氯化钠、肉汤、胰酪胨大豆肉汤、兔血浆、细菌培养箱等四、实验方法1. 样品采集：取小白鼠血液、尿液、粪便等样品。
2. 样品处理：将样品进行无菌操作处理，制成1:10样品混悬液。
3. 分离培养：将样品混悬液接种于葡萄球菌检验试剂盒中的血平板和Baird-Parker平板，置于36±1℃培养箱中培养24小时。
4. 菌落观察：观察血平板和Baird-Parker平板上的菌落特征，记录金黄色、白色或柠檬色菌落。
5. 革兰氏染色：挑取金黄色、白色或柠檬色菌落进行革兰氏染色，观察菌体形态。
6. 血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌培养物与兔血浆混合，观察凝固现象。
7. 生化试验：进行触酶试验、葡萄糖发酵试验等，观察生化反应结果。
8. 计数：根据平板菌落数进行葡萄球菌计数。
1. 菌落观察：血平板和Baird-Parker平板上观察到金黄色、白色或柠檬色菌落。
2. 革兰氏染色：金黄色葡萄球菌呈革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状。
3. 血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌与兔血浆混合后，出现凝固现象。
4. 生化试验：金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，葡萄糖发酵试验阳性。
5. 计数：葡萄球菌计数为每克样品含10^6 CFU。
六、实验分析1. 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，与实验结果相符。
2. 血浆凝固酶试验阳性，表明金黄色葡萄球菌具有致病性。
金黄色葡萄球菌实训报告
一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。
2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。
3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。
二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。
该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。
实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。
三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。
2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。
3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。
四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。
（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。
（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。
2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。
（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。
3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。
（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。
4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。
（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。
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实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
一、实验目的
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害，我们要分离出它们并研究。
二、实验原理
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8um左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1—2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10—15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，V—P反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
三、实验材料和设备
1.培养基
牛肉膏蛋白胨培养基（13%NaCl）：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠130g，琼脂15g，蒸
馏水1000ml，121℃灭菌20min后倒平板。
肉汤培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。
甲苯胺兰-DNA平板
2.试剂
磺胺类药物、革兰氏染液
3.仪器和设备
显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环。
四、实验方法
金黄色葡萄球菌的分离：
1.称取5g土样，在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，再加入200ul 磺胺类药物，振荡10min，使土样充分混匀。
利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。
2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中，30℃，200rpm，24h。
3.取培养好的菌液，按梯度稀释法稀释土壤悬液，依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后，分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃培养箱中培养24h。
利用高盐培养基抑制其他细菌的生长，从而分离金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌的鉴定：
1.菌落形态：菌落较小，较湿，较透明，边缘整齐，隆起。
2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽孢、荚膜，直径0.5—1um。
3.血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。
同时做阴阳性对照。
4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。