质粒小提试剂盒说明书-索莱宝
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书
而载体构建的方法有多种：
常规克隆（分子克隆你不知道的那些事）
TA克隆（这么简单的TA克隆来领走吧）
同源重组（秒杀分子克隆！同源重组快人一步）
而经转化（DH5α感受态制备及转化）、菌落PCR（菌落PCR）验证得到阳性克隆后，就需要提取质粒了。
构载体是分子生物学中最基本的实验了，而提质粒可以说是最简单的实验了，完全不经过大脑，照着说明书就是“机械”操作，因为这个有现成的试剂盒嘛。
嗯，虽然简单，但是也不能不想啊，要不然提质粒是按什么原理来的你都不知道，这不，当你还在傻傻用试剂盒提质粒的时候，我已经开始自己配buffer了。
加灭菌水补足到1 L。
这个溶液的主要作用是细胞裂解，氢氧化钠会破坏细胞膜的结构，同时会使基因组变性成单链，而对质粒无影响。
在这一步，试剂盒的说明书上会说时间不能过长，因为时间长了对质粒也是有影响的。
而SDS可以和蛋白结合，使变性蛋白质将溶解在溶液中，从而多肽链更好地与基因组DNA缠绕。
这个溶液一看就是酸，用来中和碱的，同时还能清除掉蛋白质等细胞内的杂质，此时基因组也会复性沉淀下来。
另外醋酸钾会与Solution Ⅱ中的SDS发生作用，反应生成的十二烷基硫酸钾，而十二烷基硫酸钾不溶于水，会迅速发生沉淀，也就是我们提质粒时经常看到的沉淀。
好了，到这一步后，试剂盒法一般是要先离心，取上清去过柱，有的剂盒有一个柱的平衡液：。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。
III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。
室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
质粒提取试剂盒说明书
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中. 室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书质粒提取的质量和得率受多种因素影响，既和质粒本身的性质以及拷贝有关，也和菌液的状态及实验操作有关，因此在质粒提取中的一些实验要点显得就极为重要了。
质粒提取这看似简单的实验，却暗藏杀机，下面我们来看一下在质粒提取过程中那些习以为常的实验操作中的“误会“。
通常我们会认为越多的菌液或是越浓的菌液提取的质粒会越多，但实际实验中结果并非如此。
良好菌液的标准：按1：1000的比例将菌液接种至培养基中，摇菌时间在8-12个小时，不超过16个小时。
菌液均匀悬浮于培养基中，无凝块、无沉淀，菌液的OD600吸光值在0.8-1.0之间，不超过1.2。
在提取质粒后进行凝胶电泳，如果在在超螺旋质粒的下方出现弥散条带，则是由于忘记加入RNaseA或RNaseA消化不充分，不完全降解的RNA与质粒共同被提取出来。
加入RNaseA的两个阶段：在使用试剂盒提取质粒时，菌液重悬时在P1溶液中加入RNaseA提取质粒后，在质粒溶液中加入RNaseA（试剂盒或溶液法）RNaseA的使用方法：RNaseA在质粒中的使用终浓度为20μg/ml经RNaseA孵育的质粒，需要进行纯化去除残留的RNaseA如何判断我们所使用的菌体量是否合适呢？在裂解时经几次颠倒混匀后，裂解液仍然为浑浊状态，说明未被裂解的菌体仍然悬浮在裂解液中，而充分裂解的菌体，溶液于裂解液中，裂解液呈现为澄清，质粒充分释放。
质粒小提试剂盒适合1-5 ml菌体的提取小提中量试剂盒适合5-15 ml菌液的提取中量提取试剂盒适合50-100 ml菌液的提取大量提取试剂盒适合100-200 ml菌液的提取如果我们想要增加提取的菌体量，也要相应提高所加入的裂解液体积。
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【运输条件】2~25℃；【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其它组分室温保存；【试剂盒组成】1. 使用前将RNase A溶液（组分⑦）全部加入菌体悬浮液（组分①）中，4℃保存备用；2. 使用前检查菌体裂解液（组分②）是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清；3. 实验前质粒复性液（组分③）需提前置于4℃冷却充分；4. 菌体裂解液（组分②）和质粒复性液（组分③）使用后应请立即盖紧盖子；5. 磁珠悬浮液（组分④）严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；6. 所有离心步骤均为室温下进行，其中加入质粒复性液（组分③）后低温离心效果更佳；7. RNase A溶液（组分⑦）长期不使用于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；8. 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；9. 本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作。
磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。
试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。
磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。
整个操作过程简便、快速。
本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作（单人同时操作1~6块96孔板，可同步实现96~576份样本抽提工作）、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号：HS0101)产品包装（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ，在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。
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质粒小提试剂盒说明书
试剂盒组成50次100次
RNase A 300ul 600ul
溶液Ⅰ15ml 30ml
溶液Ⅱ15ml 30ml
溶液Ⅲ20ml 40ml
漂洗液15ml 15ml×2
洗脱液15ml 30ml
吸附柱50个100个
收集管50个100个
说明书1份1份
注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品简介：
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的试验，以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离
心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液
器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定
要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色
絮状沉淀。
12000rpm离心10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置2分钟，12000rpm
离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分
钟，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中
残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的
无内毒素洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
10、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置5min，
12000rpm离心1min。
注意事项：
1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分
钟，待溶液恢复澄清后再使用。
2、洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有
影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
3、如果所提质粒为低拷贝质粒或大质粒10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10ml
过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。
4、DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的
剪切力等因素有关。
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。