经口急性毒性试验
Dept. of Toxicology School of Public Health Xinjiang Medical University
目的要求
掌握实验动物的常用染毒途径和方法。 掌握半数致死浓度的测定方法和结果评定。
小鼠（Mouse）
大鼠（Rat）
实验动物的称重
大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。 同一组内、同性别动物体重差异应
小于平均体重的10%。
不同组间同性别动物体重均值差异
应小于5%。
急性毒性实验一般使用体重为18-
22g的小鼠或/和180-220g大鼠。
实验动物编号的标记方法
颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银
出的各种实验动物灌胃量的极限是：小鼠O.5～1ml，大鼠
4～5m1。
分组成表3所示。雌性动物也按上法分组，然后将雌、雄动物合组进行试验。
表3 调配后30只动物随机分组
组别 A 1 14 鼠号 17 19 23 组别 D 4 9 鼠号 25 26 27
B
C
5
7
8
16
10
20
13
22
15
29
E
F
2
3
6
11
12
18
24
21
28
30
实验动物染毒途径和方法（示教）
常用的染毒途径： 经口染毒 经呼吸道染毒
皮毛 眼睛
其他
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
表4
受试物名称: 实验日期: 实验动物种系： 组别 剂量(mg/m3) 动物编号 性别
急性毒性症状记录表
结构式： 室 温： 体重(g) 症状出现时间 死亡时间
LD50的计算—寇氏法
其中：
计算公式:
m : 1ogLD50; Sm: 标准差; Σp : 各组死亡率总和; p : 各组死亡率; q : 1－p i ：相邻两组对数值之差 n ： 每组动物数;
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐
缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
正式试验
经预试验求出受试化学物的致死剂量范围(即死亡率10%90%的剂量范围)，再以下式求出正式试验的剂量组距(i) 值。
logLD90 - logLD10 i n -1
i—表示相邻的两个剂量组，剂量对数之差或相邻两组剂 量比值的对数值；
面向自己,沿着门牙左 边滑入
气管
By LASCO
食道
经皮染毒
注射途径染毒
吸收速率：
静脉注射>吸入染毒>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射> 经口染毒>皮内注射>其他染毒途径如经皮等
受试物的配制
1、受试化学物的量取
(1)、称量法--固体化学物
(2)、吸量法--液体化学物
2、受试化学物的稀释
(1)、等浓度稀释法
n—为设计的剂量组数；
求得值后以最低剂量组的剂量值加上一个即是第二个剂 量组的对数剂量，依次推至最高剂量组，查各自反对数 及得出各组剂量的真实值。
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （1）
系统器官 中枢神经系统及神经肌肉系统 观察及检查项目 行为 动作 对各种刺激的反应 大脑及脊髓反射 肌肉紧张力 瞳孔大小 分泌 呼吸系统 鼻孔 呼吸性质和速率 流鼻涕 弛缓、困难、潮式呼吸 中毒后一般表现 改变姿态、叫声异常、不安、安静 震颤、运动失调、麻痹、惊撅、强制性动作 易兴奋、被动、缺乏知觉、知觉过敏 减弱、缺乏 强直、弛缓 扩大或缩小 流泪、出汗
黑色：煤焦油的酒精溶液
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时，
我们规定顺时针旋转，
后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12，
13，14……19，但不能
编10，11，20，21，22， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 大能编89号。
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
(三) 试剂
受试化学物为氟化钠(NaF，分析纯)，苦味酸酒精饱和液 或其它染色剂。
实验动物的选择(提问)
实验动物的性别鉴定
♀
♂
植物神经系统
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （2）
系统器官 泌尿生殖系统 观察及检查项目 阴户、乳腺 阴茎 会阴部 颜色、张力、完整性 眼硷 眼球 透明度 直肠或皮肤温度 一般情况 中毒后一般表现 肿胀 脱垂、遗精 污秽、有分泌物 皮肤充血、紫组、皮毛松弛、污秽 上睑下垂 突出，充血，震颤 混浊 降低、升高 姿态不正常、消瘦
lgLD50 及其95%可信限为1.3521±1.96×0.0213＝1.3521±0.0417 lgLD50 及其95%可信区间范围为22.50mg/kg(20.44~24.76mg/kg)
举例：LD50的计算——寇氏法
外源化学物急性毒性分级（WHO）
6 只大鼠吸入 大鼠一次经口 兔经皮 4hr，死亡 2～4 LD50(mg/kg) LD50） （mg/kg） 只的浓度 （ppm） <1 1～ 50～ 500～ 5000～ <10 10～ 100～ 1000～ 10000～ <5 5～ 44～ 350～ 2180～ 对人可能致死的估计量 g/kg <0.05 0.05～ 0.5～ 5～ >15 总量（g/60kg） 0.1 3 30 250 >1000
毒性分级 剧毒 高毒 中毒 低毒 微毒
1mg/kg < 22.50mg/kg < 50mg/kg 该化合物大鼠急性经口毒性为高毒
注意事项
灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食
（不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。 油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所 不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的 剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。 通常灌胃体积以体重的1%～2%计算，最多不超过3%，即 每100g体重溜胃l～2m1，最多不超过3ml。根据实际经验得
(2)、等容量稀释法
寇氏法
Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型
曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量；
此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动
物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最 低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。
预实验
目的是为了确定正式实验的剂量范围。
3
4 5
21.7
26.1 31.3
1.3361
1.4161 1.4961
10
10 10
5
7 9
0.5
0.7 0.9
0.5
0.3 0.1
0.25
0.21 0.09
i=0.08
Σp=2.3
举例：LD50的计算——寇氏法
lg LD50 1.4961 0.08(2.3 0.5) 1.3521 0.16 0.25 0.21 0.09 S m 0.08 0.0213 10
《动物毒理实验》课件：实验一 小鼠经口急性毒性试验
四、实验步骤
1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值；
预试验，求出受试化学物的0～100%或 10～90%大致致死范围，设计正式试验的剂 量和分组。
体重增加：低水平的化学毒物促进动物 生长，动物体重增长率大于对照组。
观察指标（3）
死亡数和死亡时间 十分重要的中毒机理研究信息；重
点观察和记录各个剂量组动物的死亡数； 每只动物死亡的时间（尤其是最早出现 死亡的时间）。
观察指标（4）
病理学检查及其他指标
及时剖检：对死亡动物的主要脏器进行肉眼观察， 重点检查主要脏器的大小、外观、色泽、有无充血、 出血、水肿等；
（2） 配制方法的选择：等浓度稀释法和等 容量稀释法。
等浓度稀释法：将受试化学物配制成一 种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给 受试化学物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。
等容量稀释法
将受试化学物配制成不同浓度，不同剂量 组实验动物单位体重所给受试化学物的体 积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓 度越高。
为避免操作误差，等容量稀释的传统方法 常用1︰K系列稀释法（K=各组剂量比值）。
根据实验设计要求确定最高剂量组所需受 试化学物的浓度和总体积，配制母液。
（3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液
➢ 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂
量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL ➢ 求公比r
《食品毒理学》经口急性毒性试验
《食品毒理学》经口急性毒性试验一、实验目的和要求掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。
二、主要仪器设备实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。
器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。
试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。
三、实验原理氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。
四、实验内容1．健康动物的选择和性别鉴定。
2．实验动物称重、编号和随机分组。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠灌胃操作技术。
（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。
（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。
小鼠灌胃法：将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。
注意使动物的上消化道固定成一直线。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。
若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
经口急性毒性试验.
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
硫酸铜经口急性毒性实验设计
硫酸铜经口急性毒性实验设计一、实验目的1.测定硫酸铜的致死剂量，学会LD50等急性毒性参数的计算方法。
2.熟悉实验动物的饲喂技术及基本操作，掌握实验动物灌胃的技能。
3.通过观察动物中毒表现，毒作用强度和死亡情况，描述实验过程中实验动物的各种反应及可能的靶器官，为重复剂量、亚慢性和慢性毒性研究及其他毒性实验提供接触剂量的设计依据，并为观察指标的选择提出建议。
二、实验原理1.急性毒性实验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反应和死亡情况。
药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。
致死量的测定也较准确。
在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、大小便失禁等不良反应。
2.致死量的测定常以半数致死量为标准。
半数致死量是指能够引起实验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值,用符号LD50表示。
由于LD50的测定较简便、可靠，而稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。
LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。
3.本次实验采用改良寇氏法，实验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。
三、实验器材与试剂实验试剂：3%-5%苦味酸、0.5%酸性品红、蒸馏水、无水硫酸铜、水、动物饲料实验动物：健康成年大鼠（60只）实验仪器：灌胃针（16号）、电子天平、动物体重秤、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、吸耳球、胶头滴管、手术剪、托盘、镊子、药匙等四、实验步骤1. 实验动物的选择：选择50只2-3月龄，体重在180～240g的健康大鼠，大鼠体重相差不超过10%（±18-24g）。
2. 实验管理：实验前动物先适应环境和饲料5天。
急性经口毒性试验 上下增减剂量法
附件12急性经口毒性试验上下增减剂量法Acute Oral Toxicity Test Up-and Down Procedure1 范围本方法规定了急性经口毒性试验上下增减剂量法（上下法）的基本原则、要求和方法。
本方法适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。
3 定义3.1 急性经口毒性acute oral toxicity一次或在24 h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
3.2 经口半数致死量（LD50）oral medium lethal dose经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。
3.3 延迟死亡delayed death设定的给药间隔（通常为48 h）内不引起受试动物死亡或出现濒死状态，但在14 d的观察期间内出现死亡。
3.4 剂量级数因子dose progression factor也称为剂量步进因子。
是指主试验中，当前剂量的一只动物存活或死亡时，下一只动物染毒剂量增加或降低倍数。
剂量级数因子建议为1/（估计的剂量-反应曲线斜率）的反对数。
默认的剂量级数因子为3.2，即0.5（1/2）的反对数。
3.5 限值剂量limit dose受试动物进行急性经口毒性试验的上限剂量（2000 mg/kg或5000 mg/kg）。
3.6 逆转reversal是指在某个染毒剂量下观察动物无反应，在下一个染毒剂量下观察动物有反应的现象，反之亦然（也就是前一个动物发生反应，后一个动物无反应）。
因此，一对不同的动物染毒反应情况产生一个逆转。
3.7 名义受试动物量nominal sample size是指受试动物的总数量按下列规则减去一定量动物数：（1）减去染毒序列开始时出现相同反应的最后1只动物之前的受试动物数量，（2）或减去第一次发生逆转的一对动物之前受试动物的数量。
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
《动物毒理实验》课件：实验一 小鼠经口急性毒性试验
根据实验设计要求确定最高剂量组所需受 试化学物的浓度和总体积，配制母液。
（3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液
➢ 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂
量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL ➢ 求公比r
三、实验试剂和材料
1. 药物与试剂 盐酸二甲硝咪唑、苦味酸酒精 饱和溶液和中性红溶液、记号笔
2. 设备与器械 吸管、烧杯、灌胃器、电子天 平（感量0.1 g）、外科手术剪、5 mL注射器、 10 mL注射器、干棉球 3. 实验动物 成年健康小鼠，18-22g，雌雄 各半
四、实验步骤
1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值；
式中，K：各组剂量的比值，K＝1/r。 取母液m mL置一容器中，供最高剂量组染毒用；加入
m mL溶剂，稀释后的浓度为C2，C1︰C2＝1︰K，取出 m mL供第二组动物染毒用；再加入m mL溶剂，稀释后的 浓度为C3，C2︰C3＝1︰K，取出m mL供第三组动物染 毒用。依次类推，配制其它不同剂量组的试液。
可能的中毒表现： 兴奋，活动增加、骚动、窜跑、跳跃、呼吸加深加快； 抑制，活动减少、呆立、静卧、步态不稳、呼吸困难等； 刺激症状：搔鼻、尖叫、出汗、流涎、眼耳鼻等的出血。
观察指标（2）
体重 观察期间的体重变化可以反映动物中毒
后的整体变化，应3-5天测量一次； 体重减轻：可能是动物食欲下降、摄食
量减少；也可能是化合物干扰代谢系统，影 响食物吸收、利用；
（1） 动物的禁食和复食：灌胃前禁食6～10h，使 动物保持空腹状态，且不至因禁食时间过长影响肝 脏，进而影响实验结果。灌胃后至少2～3h后才能 复食，灌服油剂比水剂要求复食时间更长； （2） 灌胃体积：小鼠每10g体重灌胃0.1～0.2mL， 最多不超过0.4mL。小鼠灌胃量的极限是0.5～1mL； （3） 灌胃方法和注意事项。
经口急性毒性试验
实验动物编号标记方法
① ○ ⑧ ②
⑦ ⑨ ③
● ⑥ ⑤ ④
标记部位和对应 的号码
48号鼠标记方法 48号鼠标记方法 ●表示十位 ○表示个位
实 验 步 骤
实验动物 预实验
确定大致的 LD0和LD100
秤体重
编号
分组
组数和剂量 （随机数字表法） 随机数字表法）
灌胃操作
中毒症状观察和死亡纪录
计算LD 计算LD50
体重记录(g)
组 染毒剂量 动物编 性 体重 染毒 别 (mg/kg) 号 别 (g) 时间
……
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
计算LD 计算LD50
（寇氏法） 寇氏法）
lgLD50=1/2Σ(Xi + Xi+1)(Pi+1 - Pi) Σ(X i+1 i+1
式中: 式中:（Xi + Xi+1）为相邻两个试验组剂量之和 为相邻两组死亡率之差。 (Pi+1 - Pi)为相邻两组死亡率之差。
确定组距的方法 确定组距的方法
lgLD100 – lgLD0 d = n-1 式中： 式中： d：为组距 n：为设计时确定的剂量组数
急性毒性实验记录
受试物 名称： 提供单位： 动物种属品系： 动物来源： 相对湿度： 染毒剂量： mg/kg 合格证号：
症状 死亡 及出现时间 时间
染毒途径： 室温：
实验目的
1.掌握化学物毒性评价试验方法 1.掌握化学物毒性评价试验方法 2.掌握经口灌胃技术 2.掌握经口灌胃技术 3.学习中毒症状观察方法。 3.学习中毒症状观察方法。 学习中毒症状观察方法
材料和试剂
•实验动物：健康小鼠 实验动物： 实验动物 •器 器 材： 小鼠灌胃针、 小鼠灌胃针、电子天平 动物体重计、 动物体重计、外科剪刀和镊子 •试 试 剂：受试物
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验经口急性毒性试验是一种广泛使用的实验室动物毒性试验，它通常用于评价新化合物、生物制品等物质的毒性，以及评估安全使用剂量的潜在结果。
这篇文章将介绍经口急性毒性试验的背景、方法、注意事项和限制。
背景方法经口急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物，动物必须年龄相似、体重相当且健康状态良好。
实验中使用不同剂量的测试物质来确定它们在动物体内的毒性。
通常，实验中使用的剂量量较低，但有时也会使用较高的剂量以便观察更加严重的毒性反应。
其实验流程如下：1.选取合适且健康的实验动物，检查其体内和体外健康状况；2.确定实验剂量，并将物质以食物、水、灌胃管等方式交予动物口服；3.观察动物的外观、行为和症状，记录观察结果；4.在一定时间后继续观察动物，在必要时应用适当的护理；5.按照实验协议的规则处理动物，以确保其安全。
注意事项在进行经口急性毒性试验时，需要注意以下几点：1.确定剂量：需要选择适当的实验剂量，以确保所测试的物质不会对动物造成过度毒性反应，且可以解释毒性的分级。
2.采取恰当的动物保护措施：对于实验过程可能造成疼痛或不适的情况，应采取适当的保护措施，例如提供充足的饮水、合适的饲料和温度环境。
3.保证实验数据质量：为了确保实验数据质量，需要在实验过程中跟踪记录、分析数据，并确定实验的有效性以及物质毒性分级的准确性。
限制虽然经口急性毒性试验是一种有效的毒性评估方法，但它有一定的局限性。
经口急性毒性试验只能评估物质对动物的急性毒性反应，而对于慢性毒性、免疫毒性或生殖毒性等长期影响，它并不能提供完整的信息。
此外，每种动物特征不同，对物质的敏感程度也会不同，因此难以将实验结果适用于不同品种的动物和不同的物质评估。
因此，除经口急性毒性试验外，还需要完善其他的毒性评估方法以更准确地评估药物、化学物质和其他物质的毒性。
急性经口毒性实验
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管
正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤
防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。
五、注意事项：
实验动物的种属。
01
实验动物体重和随机分组情况。
02
受试物的名称、性状等情况。
03
受试物的配制和溶剂。
04
描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。
LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
结果评价：
根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的LD50及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本 215页--农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。
灌入量计算和操作要准确，否则影响结果
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急性经口毒性实验 （Acute Oral Toxicity Test）
通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
一、实验目的：
二、测定方法：
本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量（LD50）。